人类细胞凋亡芯片筛选骨肉瘤凋亡相关蛋白

目的通过人类细胞凋亡芯片筛选骨肉瘤中表达异常的凋亡相关蛋白,为近一步深入功能机制研究奠定基础。方法应用人类细胞凋亡芯片,筛选骨肉瘤组织及癌旁组织中表达有差异的凋亡相关蛋白。应用ImageJ1.42图片处理软件求出每个孔的灰度值,进行统计分析。结果凋亡相关蛋白Bcl-2、cIAP-2、Clusterin、HSP27、Survivin在骨肉瘤组织中和癌旁组织中都有表达,且其在骨肉瘤组织中的表达水平大于癌旁组织（P〈0.05）。结论凋亡蛋白Bcl-2、cIAP-2、Clusterin、HSP27、Survivin在骨肉瘤组织中表达上调,可能参与骨肉瘤的发病机制。     

凋亡抑制蛋白存活素及其在膀胱癌临床应用研究的进展

存活素(Survivin)是1997年发现的一种抗凋亡蛋白，是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein)家族成员。Survivin具有特殊的结构和组织分布及明显的抗凋亡作用。因此，自从Survivin被发现以来，一直是肿瘤研究工作者研究的热点问题。近来研究发现，Survivin在抗凋亡、细胞周期调节中具有重要作用。本文就Survivin的分子生物学特性、组织分布、抗凋亡机制、细胞周期调节作用及其在膀胱癌应用研究中的进展做一综述。     

凋亡素基因重组腺病毒的构建

目的构建携凋亡素基因的腺病毒载体,为进一步研究凋亡素基因功能及其作用机制建立基础。方法Pmel酶切线性化已经构建好的含凋亡素基因的穿梭质粒pAdTrack-CMV-VP3,然后电转化到BJ5183-AD-1细胞中进行同源重组。PacⅠ酶切出含凋亡素基因的腺病毒DNA,然后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒,运用RT-PCR鉴定重组腺病毒。用氯化铯梯度离心纯化病毒。用物理和生物方法确定病毒的滴度。结果PacⅠ酶切证实同源重组成功。绿色荧光观察证实病毒包装成功并且具有感染力,RT-PCR证实了重组腺病毒具有凋亡素蛋白的编码。重组腺病毒的浓度为84.52×109VP/ml,滴度为6.561×109PFU/ml。结论成功构建含凋亡素基因的重组腺病毒,它的滴度足以满足体内外实验。     

凋亡抑带蛋白存活素及其在膀胱癌临床应用研究的进展

存活素(Survivin)是1997年发现的一种抗凋亡蛋白,是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein)家族成员.Survivin具有特殊的结构和组织分布及明显的抗凋亡作用.因此,自从Survivin被发现以来,一直是肿瘤研究工作者研究的热点问题.近来研究发现,Survivin在抗凋亡、细胞周期调节中具有重要作用.本文就Survivin的分子生物学特性、组织分布、抗凋亡机制、细胞周期调节作用及其在膀胱癌应用研究中的进展做一综述.     

大鼠心脏移植后心肌细胞凋亡的研究

目的观察大鼠同种异体心脏移植后心肌细胞凋亡的情况。方法SD大鼠80只,建立同种腹腔异位心脏移植模型,术后1、3、7、10 d取移植心脏组织,进行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下进行Stanford病例诊断分级,原位末端标记(TUNEL)技术检测凋亡细胞,免疫组织化学测定心肌bcl-2、bax蛋白的表达,观察移植后不同时期心肌细胞病理变化与细胞凋亡情况。结果移植后各期均出现心肌细胞凋亡现象,术后7 d达到高峰,凋亡指数随病变程度的严重而升高,同时bax蛋白表达上调,而bcl-2蛋白表达上调时,凋亡指数较低。结论心脏移植后心肌细胞凋亡是心肌损伤的主要机制之一,凋亡指数可作为判断移植后损伤程度的指标。     

失神经骨骼肌萎缩与凋亡

骨骼肌细胞进行性凋亡已成为失神经骨骼肌萎缩机制之一。由于具有特殊的结构和功能,骨骼肌凋亡形态学变化与经典凋亡有所不同,特征之一为骨骼肌细胞核凋亡。各种已知细胞凋亡信号转导途径在骨骼肌细胞凋亡过程中均有发现,但具体调节机制尚存争议。一部分关键调节蛋白的作用较之经典凋亡过程中所起作用有所差异,骨骼肌细胞凋亡与蛋白水解合成的关系有待进一步明确。探索失神经骨骼肌细胞凋亡机制对于维持骨骼肌细胞正常生理功能,阻止失神经骨骼肌萎缩具有十分重要的意义。     

失神经骨骼肌萎缩与凋亡

骨骼肌细胞进行性凋亡已成为失神经骨骼肌萎缩机制之一。由于具有特殊的结构和功能,骨骼肌凋亡形态学变化与经典凋亡有所不同,特征之一为骨骼肌细胞核凋亡。各种已知细胞凋亡信号转导途径在骨骼肌细胞凋亡过程中均有发现,但具体调节机制尚存争议。一部分关键调节蛋白的作用较之经典凋亡过程中所起作用有所差异,骨骼肌细胞凋亡与蛋白水解合成的关系有待进一步明确。探索失神经骨骼肌细胞凋亡机制对于维持骨骼肌细胞正常生理功能,阻止失神经骨骼肌萎缩具有十分重要的意义。     

Smac/Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 研究线粒体蛋白Smac/Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制。 方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成,再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复,诱导肾小管上皮细胞凋亡。应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生。用间接免疫荧光检测Smac/Diablo在细胞内的分布。分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白,以Western印迹检测胞质中Smac/Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平。 结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成;间接免疫荧光可见Smac/Diablo由线粒体释放至胞质;Western印迹可见胞质内Smac/Diablo的含量增多( P < 0.01);XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P < 0.05)。 结论 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Smac/Diablo释放至胞质,XIAP蛋白水平降低,进而激活caspase 3,介导肾小管上皮细胞凋亡。     

男性抗生育药与细胞凋亡

男性抗生育药可通过干扰生精达到避孕效果,其作用机制与生精细胞的凋亡有关。本文对近几年来睾酮、棉酚、三苯氧胺、雷公藤甲素等男性抗生育药在细胞凋亡及其中关键基因及蛋白的表达方面的作用及调节机制的研究进展进行了综述,并展望对其深入研究的意义。     

男性抗生育药与细胞凋亡

男性抗生育药可通过干扰生精达到避孕效果，其作用机制与生精细胞的凋亡有关。本文对近几年来睾酮、棉酚、三苯氧胺、雷公藤甲素等男性抗生育药在细胞凋亡及其中关键基因及蛋白的表达方面的作用及调节机制的研究进展进行了综述，并展望对其深入研究的意义。     

凋亡素联合不同化疗药物体外抗膀胱癌效应观察

目的 观察凋亡素联合化疗药物吉西他滨及多西紫杉醇的体外抗膀胱癌效果,评价该蛋白的临床应用前景.方法 将原核表达载体pBV220/Apoptin中的Apoptin基因克隆入真核表达载体PCDNA3后,转染人膀胱尿路上皮癌细胞株EJ,利用RT-PCR观察基因表达情况,MTT法和流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率,并行统计分析.结果 成功构建真核表达载体PCDNA3/Apoptin并转染膀胱癌细胞株EJ,并于转染后不同时段观察到联合用药组肿瘤细胞的抑制率与凋亡率明显高于对照组(P<0.05).结论 凋亡素与吉西他滨或多西紫杉醇联合应用可发挥协同抗膀胱癌效应,凋亡素具有良好的临床应用前景.     

槲皮素诱导TRAMP-C2细胞凋亡的实验研究

目的：探讨槲皮素对转基因前列腺腺癌小鼠c2细胞系（TRAMP-C2）凋亡影响及其作用机制。方法：采用不同浓度的槲皮素处理体外培养的TRAMP-C2细胞，应用MTT法检测槲皮素对TRAMP-C2细胞增殖的影响；采用流式细胞仪检测TRAMP-C2细胞的凋亡率，并应用基因芯片技术筛选槲皮素作用前后TRAMP-C2细胞差异性表达基因。结果：槲皮素能抑制TRAMP-C2细胞生长，诱导TRAMP-C2细胞凋亡，呈剂量及时间依赖性；基因芯片分析发现，应用5&#215;10^-5mol／L浓度槲皮素处理48h后的TRAMP—C2细胞有69个基因表达下调，94个基因表达上调，其中血小板反应素表达明显上调，为对照组的36倍。结论：槲皮素能诱导TRAMP-C2细胞凋亡，具有直接抗肿瘤作用，其作用机制可能与上调TRAMP-C2细胞血小板反应素l的表达有关。     

腺病毒介导凋亡素基因对人胆管癌细胞凋亡的研究

目的探讨凋亡素基因转染对人胆管癌细胞凋亡的影响,为胆管癌的治疗探索新方法。方法采用含凋亡素基因的重组腺病毒感染胆管癌细胞株QBC939,在确定其感染复数后通过光镜、荧光观察其凋亡情况,同时通过TUNEL染色统计凋亡率。结果胆管癌细胞株QBC939的重组腺病毒的感染复数为65,在感染后第3天凋亡素基因能引发胆管癌细胞株QBC939的凋亡,并且随着时间的推移其作用越明显,在第7天凋亡率达到61.9%。结论凋亡素能明显引发人胆管癌细胞的凋亡,在胆管癌的治疗上具有较大潜力。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡及其机制

目的 观察矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)在体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的生物学效应,并初步探讨其分子机制.方法 分别采用不同浓度梯度的C3G处理SGC7901胃癌细胞,MTT比色法检测细胞生长率;激光共聚焦显微镜观察细胞形态改变;TUNEL法分析细胞凋亡率;Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、ICAD蛋白表达的情况.结果 C3G在体外能明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长增殖,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.01).激光共聚焦显微镜下可见Hoechst33258荧光染色细胞呈凋亡特征性改变;TUNEL法检测实验组细胞凋亡率均明显高于阴性对照组(P＜0.01);C3G可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax蛋白的比值,促使Caspase-3酶原蛋白活化,下调ICAD蛋白表达(P＜0.01).结论 C3G具有在体外抑制胃癌细胞增殖的作用,并能诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax降低导致Caspase-3活化、ICAD蛋白表达下降相关.     

冬凌草甲素诱导胃癌细胞MKN45凋亡的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45生长及调亡的影响及其机制。方法MTT法检测冬凌草甲素对MKN45细胞生长抑制作用：AO／EB和Hoechest33258荧光染色法及倒置显微镜观察细胞形态学变化：单细胞分析系统PI单染检测细胞周期变化：采用单细胞分析系统Annexinv—PE和7-AAD双染色法检测细胞凋亡率：Western blot检测凋亡相关蛋白Bel-2、Bax和caspase-3的表达改变。结果冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的生长抑制作用,普通形态学、AO／EB及Hoechest33258荧光染色均可见典型的细胞凋亡改变。冬凌草甲素作用MKN45细胞12h后的细胞凋亡率为8．7％～17．9％,24h后的细胞凋亡率为13．9％．29．3％,与未加药对照组（12h：3．3％;24h：4．8％）比较,差异具有统计学意义（P〈0．01）。细胞周期分析显示冬凌草甲素使MKN45细胞增殖阻滞于G2-M期。Western blot检测显示．冬凌草甲素作用MKN45细胞后,Bax和caspase-3蛋白的表达随着药物作用浓度增高而增加．而Bcl-2蛋白表达无明显变化．Bcl-2／Bax比值减低。结论冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的增殖抑制作用：冬凌草甲素可能通过增加Bax蛋白表达．改变Bcl-2／Bax比率．继而启动caspase途径诱导胃癌细胞MKN45凋亡。     

蛇床子素诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的 研究蛇床子素在体外实验中诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制.方法 体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于FB,应用MTT法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响.Hoechst 33342荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核的变化.以DNA ladder和流式细胞仪进行凋亡检测.采用RT-PCR法检测蛇床子素对FB相关凋亡基因Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响.结果 在蛇床子素作用下,人增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制,MTT法检测的IC50为(15.5±2.2)μmol/L.荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNA ladder法检测到细胞凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪观察到细胞周期的变化.蛇床子素作用于成纤维细胞后可上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调抑凋亡基因Bcl-2的表达.结论 蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以诱导其凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关.     

卡氮芥联合全反式维甲酸诱导脑胶质瘤的凋亡及其分子机制

C6、U251细胞G1期比例分别由(42.18±2.52)%至(63.04±4.05)%、(57.14±2.52)%至(69.50±4.05)%,C6、U251细胞凋亡率2.46±1.02至17.43±2.03、10.36±1.76至21.32±2.03;Cyclin E、CDK2 mRNA表达下调,p27Kip1 mRNA表达上调.结论 BCNU与ATRA协同应用诱导脑胶质瘤细胞的凋亡,其诱导凋亡的分子机制可能是通过改变相关细胞周期蛋白导致细胞周期改变.     

水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系(Anip973)细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系Anip973细胞凋亡的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜和电子显微镜等形态学检测、流式细胞仪(FCM)技术检测、DNA Ladder分析、PARP的表达分析以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达活性分析.结果 水飞蓟素对人高转移表型肺癌细胞系Anip973细胞的增殖有显著抑制作用.随着浓度的增加,倒置显微镜下可见细胞数目减少,胞体变小、变圆,到高浓度时出现较多的死亡细胞.扫描电镜观察发现,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征.流式细胞仪检测显示G1期细胞比例增多,S期细胞明显减少,G2期细胞略有减少,并出现明显的凋亡峰.水飞蓟素作用后的Anip973细胞出现明显的DNA Lad-der和PARP降解增加等凋亡特征.凋亡相关蛋白Bax表达增加、caspase-3和caspase-9酶活性增加,而Bd-2表达降低.结论 水飞蓟素可以在体外抑制人肺腺癌细胞Anip973的增殖作用,并通过激活线粒体依赖的caspase凋亡通路,诱导其凋亡.     

ARC磷酸化是麻醉预处理抗细胞凋亡作用的关键因素

背景在心肌缺血一再灌注（ischemia／reperfusion,I／R）之前短暂暴露于挥发性麻醉剂中,被称为麻醉预处理,它可限制心肌损伤并抑制凋亡。半胱天冬酶募集域细胞凋亡抑制剂（apoptosisrepressorwithcaspaserecruitmentdomain,ARC）是一种可保护I／Rgf起的心肌凋亡的新型蛋白,可被磷酸化调控。因此我们假设麻醉预处理的抗凋亡作用可tt部分与ARC的磷酸化有关。方法实验中我们采用I／R的大鼠心脏模型进行七氟醚麻醉预处理。除了测定左室功能,也测定了给予和不给予麻醉预处理的ARC磷酸化水平。因为ARC的磷酸化状态是由钙神经素和蛋白激酶CK2所决定,所以通过钙神经素活性以及应用钙神经素抑制剂FK506和ARC磷酸化抑制剂4,5,6,7．四溴苯并三唑（TBB）来测定。结果无麻醉预处理的I／R组钙神经素增加,ARC磷酸化水平降低,而麻醉预处理可显著改善功能恢复、减少缺血损伤、限制钙神经素活性的增加、增加ARC磷酸化水平、减少细胞色素c释放以及阻止I／R后半胱天冬酶-8的增加。麻醉预处理的作用与FK506相似,可被TBB消除。结论本研究证实了一种麻醉预处理预防I／R后钙神经素增加的新途径,通过增加ARC的磷酸化水平减少凋亡标记物。     

线粒体融合素基因-2对肝癌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨外源性线粒体融合素基因-2(mfn2)对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响及其机制。 方法:利用脂质体2000将质粒mfn2转染HepG2细胞。RT-PCR检测转染后细胞mfn2 mRNA的表达水平;Weastern Blot法检测mfn2蛋白的表达;MTT检测mfn2对HepG2细胞增殖的影响;Annnexin-V/PI双标记法检测转染前后细胞凋亡的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因的表达;电镜观察超微结构的变化。 结果: 转染mfn2基因的HepG2细胞可以稳定表达Mfn2蛋白;MTT实验提示转染mfn2基因后，HepG2细胞增殖受到抑制;转染组与转染空质粒组和空白对照组相比前者可促进细胞凋亡(P<0.05);电镜示mfn2转染后HepG2细胞线粒体嵴断裂、消失、基质疏松;RT-PCR结果示Bcl-2和survivin基因表达下调。结论:外源性mfn2基因可抑制HepG2细胞的增殖，诱导其凋亡。凋亡相关基因的表达下调可能是其诱导凋亡的机制。