LncRNA PCAT1对结直肠癌Colo320细胞的影响及作用机制研究

目的：探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录本1(PCAT1)对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法：实时荧光定量PCR检测LncRNA PCAT1、miR-145-5p和肌动蛋白结合蛋白1(FSCN1)在结直肠癌组织、Colo320和5-Fu耐药细胞株中的表达;分析LncRNA PCAT1和miR-145-5p、miR-145-5p和FSCN1之间的作用靶点。检测下调PCAT1、miR-145-5p、FSCN1对Colo320细胞增殖和侵袭的影响;检测5-Fu耐药细胞株细胞活力和凋亡率的变化;检测上调LncRNA PCAT1对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响。结果：结直肠癌组织和Colo320细胞中LncRNA PCAT1和FSCN1表达上调,miR-145-5p表达下调;5-Fu耐药细胞株中LncRNA PCAT1和FSCN1表达下调,miR-145-5p表达上调。LncRNA PCAT1靶向miR-145-5p;miR-145-5p靶向FSCN1。上调LncRNA PCAT1通过miR-145-5p促进Colo320细胞增殖...     

LncRNA SNHG1下调miR-195-5p改善软骨细胞凋亡和炎症微环境

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1（LncRNA SNHG1）和miR-195-5p在OA凋亡和炎症微环境中的作用及相关性。方法 先检测OA患者与大鼠模型软骨组织和正常软骨组织中SNHG1和miR-195-5p的表达情况。再对体外软骨细胞进行培养，转染，建立OA细胞模型。建立大鼠OA模型，将大鼠分为对照组（n=10）、模型组（n=10）、模型组+SNHG 1干预（SNHG 1，n=10）、模型组+inhibitor干预（inhibitor，n=10）。最后收集软骨组织进行一系列细胞功能实验，研究SNHG1、miR-195-5p对OA软骨细胞凋亡、炎症、增殖的影响，并与体外实验比较。研究SNHG1和miR-195-5p的关系。注射SNHG1过表达质粒、miR-195-5p抑制剂探究对OA大鼠模型的体内影响。结果 在OA组织中SNHG1的表达下调，而miR-195-5p的表达上调（P<0.001）。调高SNHG1或敲低miR-195-5p的表达可降低OA细胞凋亡率，改善炎性微环境，恢复细胞增殖能力（P<0.05）。得出SNHG1可充当miR-195-5p的分子海绵。SNHG1促进剂、miR-195-5p抑制剂能够减弱OA大鼠模型的凋亡与炎症反应。结论 通过调节SNHG1-miR-195-5p轴，调高SNHG1或敲低miR-195-5p有利于改善软骨细胞的凋亡与炎症微环境，为OA进展机理提供了新见解。     

LncRNA NUTM2A-AS1调控miR-183-5p/TGFα影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的研究

目的 探讨LncRNA NUTM2A-AS1对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的软骨细胞损伤的影响及分子机制。方法 将软骨细胞随机分为对照组、模型组（5 μg/L的IL-1β）、miR-183-5p+模型组、miR-NC+模型组、si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、si-TGFα+模型组、si-NC+模型组、pcDNA-TGFα+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、pcDNA+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组;运用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测LncRNA NUTM2A-AS1、miR-183-5p和TGFα mRNA的表达水平;运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活性;运用流式细胞术检测软骨细胞凋亡情况;通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α、IL-6水平;通过双荧光素酶报告实验检测NUTM2A-AS1、miR-183-5p、TGFα之间的靶向关系。结果 IL-1β诱导的软骨细胞中LncRNA NUTM2A-AS1和TGFα表达升高,miR-183-5p表达降低,软骨细胞活性降低,而凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高。低表达LncRNA NUTM2A-AS1、低表达TGFα或过表达miR-183-5p后可促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎症反应。结论 低表达LncRNA NUTM2A-AS1通过调控miR-183-5p/TGFα抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症反应,促进细胞存活。     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

瘢痕疙瘩microRNA表达谱的筛选及miR-199a-5p生物功能的初步研究

目的 探讨并筛选出瘢痕疙瘩相关微小RNAs(miRNAs),检测其对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)增殖的影响.方法 收集手术切除瘢痕疙瘩及正常皮肤组织标本各8例,采用基因芯片检测瘢痕疙瘩与正常皮肤组织差异表达的miRNA,并采用qRT-PCR验证,在瘢痕疙瘩成纤维细胞株中转染miRNA模拟物,模拟细胞中成熟miRNA的高表达,用EdU检测方法检测其对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响.结果 ①通过芯片检测发现包括miR-199a-5p在内的17个差异表达的miRNAs.②qRT-PCR验证结果显示miR-199a-5p表达下调,与芯片检测结果相一致.③miR-199a-5p模拟物转染组与阴性对照组EdU的阳性率分别为(20.72±2.50)％和(27.68±4.92)％,miR-199a-5p模拟物转染组瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖率下降(t=2.183,P=0.047).同时,细胞的生长周期分布也发生改变,MiR-199a-5p模拟物转染组S期与G2/M期细胞百分比分别为(33.93±1.30)％和(10.87±0.80)％,阴性对照组分别为(31.39±0.79)％和(9.27±0.46)％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ①瘢痕疙瘩中miRNA的差异表达有组织特异性;②miR-199a-5p在瘢痕疙瘩中的显著低表达,可影响瘢痕疙瘩成纤维细胞周期分布,抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,提示miR-199a-5p可能参与了瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的调控.     

重楼皂苷Ⅰ对去势抵抗性前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞株DU145细胞增殖的影响及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测PPⅠ对CRPC细胞株DU145细胞增殖能力的影响,使用流式细胞仪检测DU145细胞的凋亡率,同时应用Western blot检测PPⅠ对DU145细胞p-ERK1/2、ERK1/2、特异性蛋白1(SP1)及Zeste基因增强子同源物2(EZH2)蛋白表达的影响;通过加入ERK1/2抑制剂(PD98059)检测PPⅠ对SP1表达的影响,通过转染SP1、EZH2过表达质粒分别检测PPⅠ对SP1、EZH2表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测EZH2启动子活性,并探讨ERK1/2、SP1和EZH2之间的关系。设未加药组为空白组。结果MTT法检测结果显示,PPⅠ能抑制DU145细胞体外生长,与空白组相比,细胞存活率从给药浓度0.4μmol·L-1开始明显下降,且呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,PPⅠ能诱导DU145细胞早期凋亡,与空白组相比,细胞早期凋亡率从给药浓度0.4μmol·L-1开始明显增加,差...     

miR-31-5p靶向Notch1调节骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的作用

目的明确miR-31-5p在骨关节炎软骨细胞中的作用。方法采用Hulth法进行大鼠骨关节炎造模,并分离原代软骨细胞,白细胞介素(interleukin,IL)-1β诱导体外模型,检测miR-31-5p的表达变化;进一步通过在线数据库预测miR-31-5p靶点并验证,细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术检测miR-31-5p对原代软骨细胞增殖和凋亡的影响。结果骨关节炎大鼠中miR-31-5p表达下调;miR-31-5p mimics促进软骨细胞增殖,而miR-31-5p inhibitor诱导软骨细胞凋亡增加;此外,miR-31-5p inhibitor促进IL-6和基质金属蛋白酶13(matrix metalloprotein,MMP-13)表达增加;荧光素酶报告基因实验证实Notch1是miR-31-5p的直接靶点,Notch1过表达质粒会部分抵消miR-31-5p mimics对软骨细胞的增殖保护作用。结论miR-31-5p下调表达介导骨关节炎软骨细胞增殖受限和凋亡发生,可能参与骨关节炎的发病。     

miR-195-5p通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨miR-195-5p对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法通过转染miR-195-5p mimics或inhibitors分别过表达或抑制肾癌细胞中miR-195-5p的表达,转染靶向Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的小干扰RNA敲低肾癌细胞中ROCK1的表达量,利用细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测肾癌细胞的迁移和侵袭能力。通过双荧光素酶报告实验验证miR-195-5p对ROCK1的靶向调控作用,利用免疫印迹试验检测ROCK1及上皮-间质转化相关蛋白的表达水平。结果过表达miR-195-5p可显著抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化,而抑制miR-195-5p的表达可明显促进肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(P<0.05)。miR-195-5p可通过靶向ROCK1调控其在肾癌细胞中表达。敲低ROCK1后可部分抵消miR-195-5p inhibitors对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。结论miR-195-5p可通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

circDUSP16调节miR-126-5p/SHH轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究circDUSP16对结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:qRT-PCR检测circDUSP16、miR-126-5p、SHH表达水平,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测SHH、PCNA、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达,荧光素酶实验检测circDUSP16和miR-126-5p/SHH的靶向关系。结果:沉默circDUSP16组SW480细胞circDUSP16、SHH mRNA表达、OD450值(24 h、48 h、72 h)、Bcl-2和N-cadherin蛋白表达降低,miR-126-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05);下调miR-126-5p减弱了沉默circDUSP16对SW480细胞的增殖、EMT发生的抑制,降低了细胞的凋亡能力;circDUSP16靶向负调控miR-126-5p表达,miR-126-5p靶向负调控SHH表达。结论:沉默circDUSP16可能通过上调miR-126-5p并下调SHH抑制SW480细胞增殖和EMT发生,促进凋亡。     

LncRNA MIR205HG靶向miR-299-3p调控肺癌细胞增殖、凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA MIR205HG(LncRNA MIR205HG)与微小RNA-299-3p(miR-299-3p)的相互关系及其影响肺癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 检测肺癌组织和细胞中MIR205HG、miR-299-3p的表达。H1299细胞分为si-MIR205HG组、si-NC组、miR-299-3p组、miR-NC组、si-MIR205HG+anti-miR-299-3p组、si-MIR205HG+anti-miR-NC组。MIR205HG与miR-299-3p的相互作用；检测增殖、凋亡及蛋白表达。结果 肺癌组织和细胞系中MIR205HG表达水平升高(P<0.05),miR-299-3p表达水平降低(P<0.05)。MIR205HG能与miR-299-3p特异性结合，可调控miR-299-3p的表达。干扰MIR205HG表达或miR-299-3p过表达后可降低肺癌细胞增殖能力，促进细胞凋亡，且CyclinD1、p21表达降低，Bcl-2、Bax表达增高(P<0.05)。抑制miR-299-3p可逆转干扰MIR205HG表达对肺癌细胞增殖及凋亡...     

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/m L)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pc DNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系; Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05); FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P0.05),降低细胞凋亡率(P0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P0.05); miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P0.05)。结论 LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。     

MiR-194-3p对成纤维细胞的增殖作用研究

目的 研究瘢痕疙瘩中miR-194-3p对成纤维细胞增殖作用的影响,为瘢痕疙瘩的治疗提供理论基础。方法 对瘢痕疙瘩标本应用基因芯片筛选出与正常组织差异表达的miRNA,并通过real-time PCR技术来验证miR-194-3p表达;采用Western-blot和real-time PCR分析miR-194-3p对其靶蛋白RUNX2的调节作用。在成纤维细胞中过表达或抑制miR-194-3p后,通过MTT实验观察其对成纤维细胞增殖的作用。通过Western-blot和real-time PCR探讨其对RUNX2及其增殖相关蛋白CDK4的调控作用。结果 miR-194-3p在瘢痕疙瘩中呈下调表达,其能够抑制RUNX2的表达;miR-194-3p可以通过抑制增殖相关蛋白CDK4来抑制成纤维细胞的增殖。结论 miR-194-3p可以抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖。     

重楼皂苷Ⅰ通过ERK/P65/DNMT1通路抑制前列腺癌PC3细胞生长的分子机制

目的:研究重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性人前列腺癌PC3细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法:体外培养PC3细胞,予不同浓度(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4μmol/L)的PPⅠ处理24、48、72 h,另设对照组,MTT法观察PPⅠ对PC3细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹检测PPⅠ对磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、核转录因子kappa B(NF-κB)/p65以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白表达的影响,并加入ERK1/2抑制剂(PD98059)后检测PPⅠ对NF-κB/p65表达的影响。结果:MTT结果显示,PPⅠ能抑制PC3细胞的体外增殖,与对照组相比,PC3细胞从给药浓度0.4μmol/L(0.85±0.05 vs 1.00±0.00,P0.01)开始明显下降,且呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测显示,PPⅠ能明显诱导PC3细胞早期凋亡,与对照组相比,PC3细胞早期凋亡率从给药浓度0.8μmol/L(13.83±2.97 vs 4.83±0.95)开始明显增加(P均0.01),且呈剂量依赖性;Western印迹显示,PPⅠ以时间依赖性上调p-ERK1/2和ERK1/2蛋白的激活与表达,与对照组相比,给药时间从2 h(1.73±0.17 vs 1.00±0.00,P0.01)开始,p-ERK1/2明显被激活表达,PPⅠ以剂量依赖性下调NF-κB/p65、DNMT1蛋白的表达,与对照组相比,给药浓度分别从1.6μmol/L(0.67±0.11 vs 1.00,P0.01)与1.2μmol/L(0.63±0.06 vs 1.00±0.00,P0.01)开始,NF-κB/p65、DNMT1表达明显下调;抑制ERK1/2磷酸化能逆转重楼皂苷Ⅰ对NF-κB/p65蛋白表达的下调,与PPⅠ组相比,PD98059+PPⅠ组NF-κB/p65蛋白表达(0.86±0.18 vs 0.43±0.09,P0.05)明显上调。结论:PPⅠ可能通过介导ERK1/2通路抑制NF-κB/p65和DNMT1蛋白表达,诱导PC3细胞早期凋亡,进而抑制细胞增殖。     

circ＿0001982靶向miR-578对乳腺癌细胞自噬、增殖及细胞周期影响的机制研究

目的：探讨环状RNA0001982(circ＿0001982)对乳腺癌细胞自噬、增殖和细胞周期的影响及分子机制。方法：RT-qPCR检测乳腺癌患者癌组织和癌旁组织circ＿0001982和miR-578表达水平。将乳腺癌细胞MCF-7分为NC组、si-NC组、si-circ＿0001982组、pc DNA-circ＿0001982组、miR-578组和pc DNA-circ＿0001982+miR-578组。RT-qPCR检测circ＿0001982和miR-578表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）和流式细胞术检测细胞增殖和周期;Western blot法检测Cyclin D1、p21、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circ＿0001982和miR-578的关系。结果：乳腺癌组织和MCF-7细胞中circ＿0001982表达水平升高,miR-578表达水平降低（P<0.05）。敲低MCF-7细胞circ＿0001982可降低细胞活性和G2/M期细胞比例,减少Cyclin D1、LC3-Ⅰ蛋白表达,升高G0/G1期细胞比例,促进p21、LC3-Ⅱ蛋白表...     

微RNA-129-5p靶向Fas相关死亡功能域蛋白基因对体外培养人椎间盘髓核细胞凋亡的影响

目的研究微RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向Fas相关死亡功能域蛋白(FADD)基因对人椎间盘髓核细胞(hNPC)凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法运用脂质体法将miR-219-5p抑制子转染至hNPC中抑制miR-219-5p表达,将pcDNA-FADD转染至hNPC中使FADD过表达,将miR-219-5p抑制子和FADD siRNA共转染至hNPC中抑制miR-219-5p和FADD表达。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测抑制miR-219-5p表达后hNPC细胞中FADD、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和Bax蛋白表达量。通过Targetscan软件预测miR-129-5p和FADD靶向结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验检测二者的靶向关系。结果抑制miR-219-5p、过表达FADD均可明显促进hNPC凋亡。Targetscan软件预测发现FADD 3′-UTR上存在miR-219-5p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实miR-129-5p和FADD具有靶向结合关系。抑制miR-219-5p的表达后,hNPC中FADD表达上调,同时促凋亡蛋白Caspase-3表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调。抑制FADD可逆转miR-219-5p低表达对hNPC凋亡的促进作用。结论低表达miR-219-5p可促进hNPC凋亡,其机制可能与miR-129-5p靶向FADD有关。     

miR-7-5p通过靶向抑制成纤维生长因子受体 4影响胆囊癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-7-5p对胆囊癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:选取胆囊癌细胞GBC-SD，检测miR7-5p和成纤维生长因子受体4(FGFR4)表达情况；通过TargetScan数据库检索调控FGFR4的miRNA，并用双重荧光素酶基因检测系统检测FGFR4与miR-7-5p结合情况；通过慢病毒将miR-7-5p转染GBC-SD细胞，检测FGFR4、miR-7-5p mRNA和FGFR4蛋白表达，MTT检测细胞活性，Transwell检测细胞侵袭。结果:在GBC-SD细胞中miR-7-5p低表达且FGFR4高表达(P＜0.05)；TargetScan预测FGFR4特异结合miR-7-5p，并在双重荧光素酶基因检测系统得到验证；GBCSD细胞慢病毒转染miR-7-5p后，FGFR4 mRNA和蛋白表达水平下调，细胞增殖率下降，穿膜细胞数减少，差异有统计学意义(P＜0.05)；沉默miR-7-5p后，FGFR4 mRNA和蛋白表达水平上升，细胞增殖率升高，穿膜细胞数增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论: miR-7-5p通过靶向抑制FGFR4而抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移。     

miR-485-5p靶向EGFR对卵巢癌顺铂耐药细胞系的影响

目的探讨miR-485-5p对顺铂耐药卵巢癌细胞的影响及其机制。方法 RT-qPCR检测人正常卵巢上皮细胞株(IOSE-80)及卵巢癌细胞株(A2780、SKOV3、OVCAR3、OVCA433)中miR-485-5p的表达。构建顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞并检测miR-485-5p与EGFR的表达。CCK8法检测各组细胞增殖能力, 流式细胞术测定细胞凋亡。结果相对于IOSE-80细胞, 各卵巢癌细胞株中miR-485-5p的表达显著下降, EGFR表达上升(均P<0.05)。SKOV3/DDP细胞株(0.17±0.02)中miR-485-5p表达较SKOV3细胞(0.32±0.04)进一步下降(t=5.81,P=0.004)。而SKOV3/DDP细胞中EGFR表达则较SKVO3进一步上升(P<0.05)。SKOV3/DDP细胞转染miR-485-5p mimic能抑制细胞增殖活力、诱导细胞凋亡, 转染miR-485-5p inhibitor则相反(均P<0.05)。SKOV3/DDP细胞转染EGFR能促进细胞增殖并抑制细胞凋亡, 该作用被miR-485-5p mim...     

hsa_circ_0005105靶向miR-508-3p对关节炎软骨细胞的影响

目的 探讨hsa_circ_0005105对关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响及机制。方法 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测软骨细胞中hsa_circ_0005105和miR-508-3p的表达水平;将软骨细胞分为NC组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105组、IL-1β+miR-NC组、IL-1β+miR-508-3p组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105+anti-miR-NC组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105+anti-miR-508-3p组;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白表达;流式细胞术检测凋亡;CCK-8与平板克隆形成能力检测细胞增殖能力;酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0005105和miR-508-3p的靶向关系。结果 IL-1β诱导的软骨细胞中hsa_circ_0005105表达水平升高,miR-508-3p表达水平降低（P<0.05）。低表达hsa_circ_0005105或过表达miR-508-3p可降低IL-1β诱导的软骨细胞Bax、Cleaved-caspase-9、Cleaved-caspase-3相对表达水平、细胞凋亡率,升高Bcl-2蛋白水平、细胞活性,细胞克隆形成数增多,TNF-α和IL-6水平降低（P<0.05）。hsa_circ_0005105靶向调控miR-508-3p;低表达miR-508-3p可以逆转hsa_circ_0005105低表达对IL-1β诱导的软骨细胞损伤及炎症因子分泌的影响。结论 低表达hsa_circ_0005105通过靶向上调miR-508-3p抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症因子分泌,促进细胞增殖。     

滇重楼皂苷对前列腺癌细胞周期与凋亡的影响

目的探讨滇重楼皂苷对前列腺癌细胞增殖、周期和促凋亡的作用,以及对磷酸化CDK2表达的影响。方法使用不同浓度(0.1、0.3、1.0、3.0、10.0μmol/L)的滇重楼皂苷处理前列腺癌细胞株PC-3和Du145,应用MTT和流式细胞技术检测细胞增殖、周期分布和凋亡的改变,进一步运用免疫印迹法检测细胞周期及凋亡相关蛋白表达的改变。结果滇重楼皂苷明显抑制前列腺癌细胞株(PC-3及Du145)的增殖,使细胞在G0/G1期发生阻滞,并诱导细胞显著凋亡,抑制效果呈时间剂量梯度依赖关系;p21蛋白与Cleaved-Caspase-3表达水平明显上调,磷酸化CDK2、磷酸化RB蛋白下调。结论滇重楼皂苷增加p21蛋白水平,抑制细胞周期关键调控因子CDK2及RB的磷酸化,并且激活Caspase-3参与的细胞凋亡信号通路,从而抑制前列腺癌细胞增殖、阻断细胞周期,并诱导细胞凋亡,具有抗肿瘤活性。     

几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用

目的:探讨几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用。方法:用组织块法进行瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的体外培养;MTT比色法和流式细胞仪检测法分别检测不同浓度几丁糖对不同来源成纤维细胞生长增殖和细胞周期的影响。结果:各组成纤维细胞增殖明显受抑制,几丁糖的浓度和细胞OD值改变之间存在剂量-效应关系,各组成纤维细胞G_0 G_1期的细胞百分比增多,S期G_2 M期的细胞百分比减少,减少率各组无显著差异(P>0.05),S期G_2 M期的细胞百分比减少率有显著差异(P<0.05)。结论:几丁糖对正常皮肤及增生性瘢痕和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生长增殖均有抑制作用,有望在瘢痕的防治中发挥重要作用。