Sorafenib对前列腺癌DU145细胞的抑制作用的研究

目的 观察索拉非尼(Sorafenib)对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的抑制作用.方法 用不同浓度Sorafenib处理前列腺癌DU145细胞24、48和72 h后,MTT法检测Sorafenib对DU145细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Western blot检测不同浓度Sorafenib处理72 h后DU145细胞内ERK和Bcl-2的表达.结果 Sorafenib能显著抑制DU145细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性.DU145细胞凋亡率随着Sorafenib剂量的增加而增大,具有良好的量效关系(P<0.01);Sorafenib处理DU145细胞72 h后,ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论 Sorafenib抑制DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡,可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长.     

雷公藤内酯醇抑制人前列腺癌DU145细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对人雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 以不同浓度的雷公藤内酯醇作用于体外培养的DU145细胞不同的时间,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的情况,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化.结果 20 ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml TP作用DU145细胞24h、48h、72h后对DU145细胞均有抑制作用,各组间有显著差异(P＜0.05);24h、48h、72h IC50分别为117.95 ng/ml、47.60 ng/ml、14.43 ng/ml,TP作用DU145细胞72min后,DU145细胞被阻滞于S期,并且随浓度的加大,阻滞效果越显著;凋亡率逐渐增加.结论 TP能抑制DU145细胞的增殖,阻滞DU145细胞于S期,诱导DU145细胞调亡.     

雌激素受体β（ERβ）及其前列腺癌细胞增殖抑制作用：DU145细胞增殖抑制的可能机制研究

雌激素受体β（ERβ）在抑制不可控的细胞增殖中有积极作用。在前列腺癌进程中ERβ的丢失意味着在疾病过程中参与抑制细胞作用。然而此效应的分子机制目前尚未阐明。在仅仅表达ERβ的细胞系DU145中，研究者评估了ERβ下游可能的靶分子。从第一天至第九天，用不同剂量的雌二醇或DPN（ERβ选择性激动剂）处理细胞，细胞会表现出时间依赖性的增殖抑制作用。被抑制的增殖率受ERβ表达及升高的周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21影响。研究者指出，雌激素的作用增强了诸如p21等控制细胞周期的分子合成，ERβ表达自身调节的增殖效应。研究观察表明，当前列腺癌表达功能性ERβ时，它可能对雌激素的抗增殖作用较敏感，然而，ERβ特异性激动剂或许可成为治疗此类疾病的药物。     

薄荷醇抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和迁移

目的探讨薄荷醇对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖和迁移能力的影响。方法通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和TRPA1的表达;MTT和划痕试验检测薄荷醇对DU145细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TRPM8对DU145细胞周期和凋亡的影响。结果 RT-PCR、免疫组织化学和Western blot提示TRPM8在DU145细胞中高表达而TRPA1在DU145细胞中不表达;薄荷醇能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与未经薄荷醇处理的细胞相比,经100μmol/L薄荷醇处理的细胞培养24、48和72h后,G0/G1期细胞显著增加(49.12%±1.92%vs61.71%±2.70%、77.65%±1.63%、71.81%±2.46%,P<0.05,P<0.01),进而抑制细胞增殖(P<0.05),并抑制细胞迁移(P<0.05),流式细胞术检测显示薄荷醇并不引起细胞凋亡。结论 TRPM8可能成为前列腺癌治疗的一个新靶点,对于高表达TRPM8的雄激素非依赖性前列腺癌针对TRPM8通道的药物治疗可能比TRPM8基因治疗更为实用,因此,薄荷醇作为一个潜在的抗肿瘤药物也拥有很大的发展前景。     

芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的作用机制研究

目的:观察芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以DU145细胞为研究对象,通过观察不同浓度芪蓝方组(400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0μg/ml)细胞形态变化,筛选出高、中、低浓度应用于后续实验,并采用CCK-8法检测DU145细胞增殖,流式细胞术检测DU145细胞周期、凋亡情况,Western印迹检测DU145细胞中细胞周期、凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase 3的表达。结果:筛选结果显示100、200、400μg/ml浓度的芪蓝方均能显著抑制DU145细胞的生长、降低轮廓清晰度和贴壁能力,且200、400μg/ml浓度的芪蓝方可显著降低DU145细胞活力,故确定高中低浓度为400、200、100μg/ml,并用于后续实验研究。与空白组比较,G2期各浓度组DU145细胞数显著增加(P<0.01),而S期高、中浓度组细胞数显著下降(P<0.01、P<0.05);与空白对照组相比,芪蓝方各组DU145细胞总凋亡数均显著增高(P<0.0...     

miR-155表达对人前列腺癌DU145细胞增殖及细胞周期的影响

目的 检测前列腺癌组织及细胞中微小RNA-155(miR-155)的表达水平,探讨其对前列腺癌细胞增殖与细胞周期的影响.方法 采用qRT-PCR检测前列腺癌组织及细胞中miR-155的表达水平;上调miR-155或加入miR-155抑制剂,体外细胞功能实验检测miR-155对前列腺癌细胞株DU145细胞增殖能力和细胞周...     

重楼皂苷Ⅰ对去势抵抗性前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞株DU145细胞增殖的影响及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测PPⅠ对CRPC细胞株DU145细胞增殖能力的影响,使用流式细胞仪检测DU145细胞的凋亡率,同时应用Western blot检测PPⅠ对DU145细胞p-ERK1/2、ERK1/2、特异性蛋白1(SP1)及Zeste基因增强子同源物2(EZH2)蛋白表达的影响;通过加入ERK1/2抑制剂(PD98059)检测PPⅠ对SP1表达的影响,通过转染SP1、EZH2过表达质粒分别检测PPⅠ对SP1、EZH2表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测EZH2启动子活性,并探讨ERK1/2、SP1和EZH2之间的关系。设未加药组为空白组。结果MTT法检测结果显示,PPⅠ能抑制DU145细胞体外生长,与空白组相比,细胞存活率从给药浓度0.4μmol·L-1开始明显下降,且呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,PPⅠ能诱导DU145细胞早期凋亡,与空白组相比,细胞早期凋亡率从给药浓度0.4μmol·L-1开始明显增加,差...     

茶多酚对前列腺癌细胞DU145生长的影响

目的:探讨茶多酚对前列腺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:选取激素非依赖性前列腺癌细胞系DU145为研究对象,在药物组的培养基中加入茶多酚使其终浓度分别为50、100、250、500μg/ml,对照组加入正常细胞培养基。各组细胞培养48 h后,采用MTT比色法检测细胞生存率,然后通过Western印迹分析和荧光定量RT-PCR法检测各组细胞survivin基因表达情况。结果:加入茶多酚溶液48 h后,各药物组细胞存活率分别为0.97±0.12、0.71±0.07、0.20±0.03和0.08±0.01,与对照组相比,除50μg/ml组(P=0.42)外,其余3个药物组细胞存活率均明显低于对照组(P﹤0.01)。随茶多酚作用时间增加,各组细胞存活率呈现下降趋势,到96 h时,除50μg/ml组,其余3组细胞存活率均在5%以下。加药48 h后,对照组、100、250、500μg/ml药物组的sur-vivin表达条带灰度值分别为15 075±48、13 425±31、2 017±24、1 274±22,与对照组相比,3个药物组survivin蛋白表达均明显减少(P均﹤0.01)。另外,50、100、250、500μg/ml药物组给药48 h时的survivin mRNA量分别为0.74±0.03、0.64±0.02、0.52±0.01、0.21±0.02,均明显少于对照组(P均﹤0.01)。结论:茶多酚可以抑制前列腺癌DU145细胞的生长,且这种作用可能与survivin基因表达减少有关。     

前列腺癌DU145细胞增殖和克隆形成与延伸因子1α基因表达的关系

目的 探讨延伸因子1α(EF-1α)基因表达与前列腺癌细胞株DU145细胞增殖、克隆形成等功能的关系. 方法 DU145细胞株分3组:对照组(未转染siRNA),转染对照组(转染随机siRNA)和实验组(转染EF-1α-siRNA).应用RNA干扰技术特异性调低DU145细胞株EF-1α蛋白质水平,并通过蛋白质印迹法验证.应用体外细胞功能分析技术,比较EF-1α蛋白质水平调低后DU145细胞增殖、克隆形成能力的变化和差异. 结果 应用RNA干扰技术实现了特异性调低前列腺癌细胞株DU145中EF-1α的水平.转染随机siRNA不影响DU145细胞中EF-1α蛋白质水平.调低DU145细胞EF-1α蛋白质水平后,实验组DU145细胞第4～7天增殖率较对照组下降45.9%、53.5%、35.3%和38.1%(P<0.05).实验组DU145细胞形成克隆数较对照组减少67.0%(P<0.01). 结论 调低EF-1α表达水平对前列腺癌细胞增殖、克隆形成等肿瘤相关生物学行为产生负面影响.EF-1α基因在前列腺癌靶向治疗中可能成为适当的靶基因.     

PPARa激动剂非诺贝特诱导前列腺癌DU145细胞氧化损伤和凋亡的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特诱导雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞氧化损伤和凋亡的作用及可能机制。方法用0、50、100μmol/L浓度的非诺贝特作用于DU145细胞,24h后利用荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞中活性氧、超氧化物阴离子、一氧化氮含量和细胞凋亡率的变化。Westernblot检测细胞内凋亡相关蛋白BCL-2和BAX的表达变化。结果不同浓度非诺贝特作用细胞后细胞凋亡率显著上调,活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量较对照组明显上升并呈剂量依赖性(P<0.05)。50μmol/L非诺贝特作用后,DU145细胞内BCL-2表达明显下调,BAX表达升高。结论非诺贝特能诱导前列腺癌细胞DU145氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与氧化应激增强及抗凋亡蛋白表达下降有关。     

环巴胺对DU145细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究Hedgehog信号通路阻断剂(环巴胺)对DU145细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度(1、10、50、100μmol/L)环巴胺干预DU145细胞,分别在24、48、72h后采用噻唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测环巴胺对细胞周期的影响;RT-PCR检测50μmol/L环巴胺作用48h后实验组和对照组细胞周期蛋白E(cyclinE)mRNA表达水平的差异。结果:环巴胺对DU145细胞的抑制作用呈时效和量效依赖关系,当浓度>10μmol/L作用24h后会显著抑制细胞增殖,10、50、100μmol/L浓度组对细胞的抑制率分别为7.42%、12.70%和59.15%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测发现,当环巴胺浓度达10μmol/L以上,干预48h后G1期细胞比例明显升高。对照组、10、50μmol/L浓度组的G1期细胞百分比分别为:(52.17±2.21)%、(60.13±2.75)%和(74.30±3.52)%,差异有统计学意义(P<0.01);凋亡峰也随环巴胺浓度增加而逐渐增高。50μmol/L环巴胺作用48h后DU145细胞cyclinEmRNA表达显著降低,与空白对照组相比降低61.90%(P<0.01)。结论:环巴胺可以抑制DU145细胞的增殖能力,其机制可能与下调DU145细胞cyc-linEmRNA表达水平,从而将DU145细胞阻滞于G1期有关。环巴胺亦可以诱导DU145细胞凋亡。     

Gli-1基因的RNAi对前列腺癌DU145细胞的影响

目的研究胶质瘤相关癌基因1(Gli-1)对前列腺癌DU145细胞的生物学影响。方法通过脂质体介导的方法将Gli-1 SiRNA转染前列腺癌DU145细胞,RT-PCR检测Gli-1 mRNA变化,Western Blot法检测其蛋白的表达,CCK-8法检测转染后细胞增殖,运用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果转染Gli-1SiRNA的细胞Gli-1的表达明显低于阴性对照组(NC)与空白组(P﹤0.05),Gli-1SiRNA抑制细胞增殖并降低细胞的侵袭能力。结论 Gli-1 SiRNA可抑制前列腺癌DU145细胞中Gli-1的表达,降低细胞增殖率和侵袭能力,提示Gli-1可能在前列腺癌的恶性进展中起着重要作用。     

雷帕霉素抑制人前列腺癌细胞增殖及其作用机制

目的 观察雷帕霉素(Rapamycin)对体外培养的人前列腺癌PC-3M-2B4细胞增殖及凋亡的影响,探讨其机制.方法 分别用不同浓度的雷帕霉素(100、200、400、800μg/L)对细胞进行干预后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot 法检测凋亡相关蛋白bcl-2及bax表达的变化.结果 雷帕霉素能明显抑制PC-3M-2B4细胞的增殖活性,此作用呈现量-效、时-效关系.雷帕霉素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡.雷帕霉素作用PC-3M-2B4细胞后,细胞内凋亡抑制蛋白bcl-2的表达明显降低,bax蛋白的表达明显增加.结论 雷帕霉素能够通过调节凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达比例,诱导前列腺癌细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Rapamycin on the growth and apoptosis of human prostate carcinoma cell line PC-3M-2B4. Methods The inhibitory effect of Rapamycin was observed at 100,200,400,800μg/L on the growth of human prostate carcinoma cell line PC-3M-2B4 in serum-free medium for different concentrations by methyl thiazol tetrazolium (MTF) assays. Flow cytometry (FCM)analysis was used to study the changes of cell apoptosis. The expression level of bcl-2 and bax was determined by Western blotting. Results Rapamycin caused dose-dependent inhibition on the growth of human prostate carcinoma cell line PC-3M-2B4 in a concentration-and time dependent manner. Rapamycin induced the apoptosis of PC-3M-2B4 cells in a concentration-dependent manner. The levels of bcl-2 protein were reduced gradually with the increase of concentration or action time. Conclusion Rapamycin, a mTOR inhibitor, inhibits the growth of human prostate cancer cell and induces apoptosis of human prostate cancer cell. mTOR might be a potential target for anti-prostate cancer.     

番茄红素抑制前列腺癌LnCaP细胞增殖

目的:探讨人体血清中番茄红素(1ycopene)水平与前列腺癌发病相关性.方法:将在加入0.5μmol/L,5 μmol/L,10μmol/L,15 μmol/L不同浓度番茄红素溶液的培养基中生长48 h后的LnCaP细胞,与在相对应浓度番茄红素溶剂-四氢叶酸酯中以及RPMI1640培养基中生长的各组细胞增殖率进行比较.观察体外培养条件下不同浓度番茄红素对前列腺癌LnCaP细胞系增殖的影响.结果:与在相对应浓度溶剂中生长的细胞相比,番茄红素溶液的培养基中生长的LnCaP细胞,细胞增殖分别减少了2.66%,4.29%,3.73%,13.66%(P＜0.05).与在RPMI培养基中生长的细胞相比,在加入5μmol/L,10μmol/L,15 μmol/L番茄红素溶液的培养基中生长的LnCaP细胞,细胞增殖分别减少了8.12%,6.33%,12.00%(P＜0.05).结论:番茄红素在体外培养条件下对前列腺癌LnCaP细胞的增殖有显著的抑制作用.     

全反式维甲酸诱导前列腺癌DU145细胞凋亡中caspase-3及其细胞骨架蛋白F-actin的变化

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导雄激素非依赖型前列腺癌细胞系DU145凋亡过程中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)3及其细胞骨架蛋白F-actin的变化。方法应用吖碇橙(AO)染色,荧光显微镜观察细胞凋亡形态,流式细胞术(FACScan)测定ATRA对DU145细胞凋亡峰的形成,应用Westernblot测定ATRA在DU145细胞凋亡过程中caspase-3表达的变化,免疫荧光染色观察F-actin纤丝的形态。结果荧光显微镜观察细胞凋亡数目增多,48h时凋亡细胞比例为85.0%,流式细胞术检测可观察到凋亡峰,Westernblot检测显示裂解的caspase-3表达增多,免疫荧光染色可见F-actin的正常结构被破坏。结论ATRA诱导DU145细胞凋亡可能通过caspase-3介导,并导致细胞骨架蛋白破坏。     

曲古菌素A抑制乳腺癌细胞增殖的分子机制

目的研究组蛋白去乙酰酶抑制剂—曲古菌素A（TSA）对乳腺癌T47D细胞增殖的影响和机制。方法不同浓度的TSA作用乳腺癌T47D细胞5d,噻唑蓝（MTr）法检测药物作用前后细胞增殖的情况。流式细胞仪检测TSA作用36h后细胞周期的改变。逆转录·聚合酶链反应（RT-PCR）检测TSA作用36h后Maspin mRNA的表达。结果TSA在20μg/L浓度以上可以明显抑制乳腺癌T47D细胞的增殖,并呈现剂量和时间的依赖性。细胞周期检测发现100μg／LTSA可导致细胞G1期阻滞,并诱导细胞凋亡;而500μg／LTSA可显著的诱导细胞凋亡。RT-PCR显示100μg／LTSA作用36h后Maspin mRNA的表达增强,但在20μgL时其表达与对照组差异无统计学意义。结论TSA可以抑制乳腺癌T47D细胞的生长,可能通过诱导细胞凋亡和Maspin基因的重新表达发挥抑癌作用。TSA可能是乳腺癌治疗的潜在靶点。     

隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞中异黏蛋白表达的影响

目的:探讨隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞增殖及细胞凋亡的作用,并初步探讨隐丹参酮对DU145细胞中异黏蛋白(MTDH)表达及下游PI3K/AKT信号通路的影响。方法:四氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度隐丹参酮分别作用DU145细胞24、48、72 h后对细胞的生长抑制作用;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况;Western印迹检测不同浓度隐丹参酮及作用不同时间对DU145细胞中MTDH蛋白的表达影响;RT-PCR技术检测隐丹参酮分别作用DU145细胞12、24、48 h后细胞中MTDH mRNA的表达情况;Western印迹检测隐丹参酮作用DU145细胞48 h后细胞中MTDH、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:隐丹参酮能够明显抑制DU145细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P0.05);以10μmol/L隐丹参酮作用DU145细胞24、48、72 h后细胞凋亡率分别为(29.42±4.51)%、(55.07±5.67)%和(70.84±4.66)%,明显高于对照组(3.1±2.48)%(P0.05)。Western印迹和RT-PCR结果显示,隐丹参酮可在转录和翻译水平下调MTDH的表达(P0.05),抑制AKT信号通路和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P0.05)。结论:隐丹参酮可抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调MTDH表达,抑制其下游PI3K/AKT信号通路。     

雄激素受体在人前列腺癌LNCaP细胞和DU145细胞中的表达

目的 探讨雄激素受体(AR)在前列腺癌激素依赖特性转变过程中的可能作用.方法 分别应用Western Blot和RT-PCR法检测人前列腺癌LNCaP和DU145细胞株的AR蛋白表达差异和转录活性差异状况,并初步分析其在前列腺癌雄激素依赖特性转化过程中所发挥的作用.结果 与雄激素依赖的低转移性细胞株LNCaP细胞相比,AR在雄激素非依赖的高转移性细胞株DU145细胞株中的蛋白表达和转录活性下调.结论 结合我们前期研究,可能存在多重机制引起前列腺癌激素依赖特性改变.     

核小体结合蛋白调控Survivin基因对前列腺癌DU145凋亡的作用

目的探讨抑制人核小体结合蛋白1（NSBP1）基因后促进非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制。方法通过慢病毒lentivirus-NSBP1转染非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145后,MTT法观察细胞活性变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,应用Western-blot技术检测NSBP1、Survivin蛋白的变化情况。结果抑制NSBP1表达水平后非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145细胞活性降低,凋亡增加,同时Survivin蛋白的表达也随之降低。结论通过慢病毒转染抑制NSBP1的表达可以促进非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145凋亡,NSBP1可能是通过调控Survivin基因的变化影响细胞的增值凋亡。     

iNOS基因转染对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145生长的影响

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145生物学行为的影响。方法:将iNOS基因转染到DU145细胞并筛选出阳性细胞进行扩增,并设空载体组和对照组。观察细胞的形态变化,MTT法绘制生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡率;了解NOS抑制剂对转染细胞的影响。结果:转染iNOS后,DU145细胞分泌的NO[(272.50±15.82)μmol/L]显著高于空载体组[(122.00±18.93)μmol/L]和对照组[(121.00±6.98)μmol/L](P<0.05)。流式细胞术检测结果提示转染iNOS组细胞凋亡率[(42.78±2.01)%]明显高于空载体组[(30.65±1.46)%]和对照组[(28.96±1.50)%](P<0.05)。MTT测定结果提示转染组细胞生长较空载体组和对照组减慢(P<0.05),NOS抑制剂可以加快其生长,但无显著性差异(P>0.05)。结论:iNOS基因转染可以使DU145细胞分泌较高浓度的NO,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长,为晚期雄激素非依赖性前列腺癌的基因治疗提供一个有效的靶点。