云南省2009年至2014年B型流感毒株血凝素基因进化分析

目的 了解云南省2009年至2014年B型流感病毒血凝素(HA1)基因突变及其抗原变异情况.方法将云南省2009年至2014年流感哨点监测医院采集的流感样病例咽拭子进行病毒分离,随机抽取12株B型流感病毒进行HA1基因序列测定,并对测序产物进行分析,通过MEGA软件进行同源性比对、构建HA基因进化树.结果 云南省流感毒株血清型和基因型鉴定有差异,可能是由于基因变异后量的积累量不够引起.在HA1蛋白的抗原决定簇的3个重要区域120环,150环和160环都有氨基酸的变异.云南省流感毒株在120环的131位置氨基酸变异为N131K,137位置B-Victoria系氨基酸发生了N137H的变异,187位置有2株发生了P187S的变异.结论 云南省的B型流感毒株在血凝素基因重要位置发生了多处变异,有和疫苗株相同的变异,也有不同于疫苗株的变异.     

A型流感病毒HA（H1N1）基因真核表达载体的构建及序列分析

【目的】构建A型流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)基因真核表达载体，研究其作为DNA疫苗的免疫效果。【方法】从流感病人体内分离流感病毒(A／Guangdong／376／2001／HlNl)，提取RNA，用特异引物进行RT-PCR，扩增HA基因，先将其克隆到pMDl8-T Vector，进行序列测定和分析；然后将HA基因亚克隆到真核表达载体(pCI-neo)，进行鉴定。【结果】获得一个核苷酸长度为l698bp的基因，编码565个氨基酸；同源性比较结果表明：和A／Hong Kong／113l／98((GenBank／NCBI：AF386775)有98％同源，序列分析表明有10个氨基酸出现变异；酶切和序列测定表明肌基因正确插入pCI-neo载体(HA-pCIN)。【结论】 HA基因真核表达载体的成功构建，可以进一步研究其免疫功能。     

A型流感病毒HA(H1N1)基因真核表达载体的构建及序列分析

[目的]构建A型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因真核表达载体,研究其作为DNA疫苗的免疫效果。[方法]从流感病人体内分离流感病毒(A/Guangdong/376/2001/H1N1),提取RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增HA基因,先将其克隆到pMD18-T Vector,进行序列测定和分析;然后将HA基因亚克隆到真核表达载体(pCI-neo),进行鉴定。[结果]获得一个核苷酸长度为1698bp的基因,编码565个氨基酸;同源性比较结果表明:和A/Hong Kong/1131/98(GenBank/NCBI:AF386775)有98％同源,序列分析表明有10个氨基酸出现变异;酶切和序列测定表明HA基因正确插入pCI-neo载体(HA-pCIN)。[结论]HA基因真核表达载体的成功构建,可以进一步研究其免疫功能。     

新型甲型H7N9流感病毒血凝素基因进化分析

目的探讨2013年4月流行的新型甲型H7N9禽流感病毒的表面蛋白血凝素(HA)基因的进化,以及氨基酸的变异情况。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)和全球禽流感基因共享数据库(GISAID)中下载H7N9流感病毒以及有代表性的H7N2、H7N3、H7N7亚型流感病毒的HA基因序列,运用Molecular Evolutionary Genetics Analysis(MEGA)version 5.05软件进行序列分析,用邻接法构建基因进化树;通过氨基酸序列分析HA蛋白受体结合位点、糖基化位点和裂解位点的变化。结果 2013年新型甲型H7N9流感病毒与2011年浙江禽类H7N3流感病毒株(JQ906573.1)的相似性达到95.3%～95.6%;受体结合位点氨基酸发生变异,为Q226L,5个糖基化位点高度保守;HA裂解位点位于aa339和aa340之间,仅有1个碱性氨基酸:R。结论 2013年新型甲型H7N9流感病毒HA基因是由中国禽类H7亚型进化而来,Q226L变异导致的受体结合位点的变化可能是新型流感病毒具有人感染性的原因。     

2004-2005年宁夏A(H1N1)亚型流感病毒基因特性研究

目的了解宁夏流行的A(H1N1)亚型流感病毒血凝素基因变异情况。方法对分离的A(H1N1)亚型毒株随机选取5株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因进化特性分析。结果HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明,宁夏2004年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异,35 D>N、152 G>R、182 P>S、221 D>G,其中152、221位氨基酸位于抗原决定簇;2005年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异,82 T>K、94 Y>H、119 K>N、145 R>K、165 V>A、208 R>K、251W>R、266 T>N,其中165位氨基酸位于抗原决定簇。结论宁夏2004-2005年分离的A(H lN1)亚型流感毒株基因特性和抗原性已开始发生变异。     

流感病毒A HA(H3N2)基因真核表达载体的构建及序列分析

目的：获得血凝素基因（HA）基因，将其克隆到真核表达载体，为研究流感DNA疫苗奠定基础。方法：从当年流感病人体内分离病毒（A／Guangdong/448/2001)，鉴定型别（H3N2）后，提取RNA，用特异引物进行RT－PCR,扩增HA，并将其克隆到pMD18-T Vector，进行序列测定和分析；然后将HA基因亚克隆到真核表达载体（pCI-neo)，进行鉴定。结果：获得一个核苷酸长度为1698bp的基因，编码565个氨基酸；与A／Beijing/32/92(Genbank/NCBI:U26830)基因序列有98％同源，有15个碱基和／或10个氨基酸出现变异，且在212缺失一个氨基酸V；酶切和序列测定表明HA基因正确插入pCI-neo载体（HA－pCIN)。结论：成功构建了HA基因真核表达载体，可以进一步研究其免疫功能。     

福州2009-2014年甲型H1N1流感病毒株HA基因进化分析

目的:分析福州地区2009-2014年甲型H1N1流感病毒株的HA基因序列和遗传特征。方法:采集流感样病例的咽拭子标本,用MDCK细胞培养法和Real-time RT-PCR法对6株分别来自2009-2014年的病毒株进行病毒分离、鉴定,HA基因片段通过RT-PCR法进行扩增后克隆到p MD18-T载体上,并测定6株病毒株的HA基因序列。通过生物软件Bio Edit对该分离株和Gen Bank中相关毒株的序列进行基因进化树分析。结果:6株分离株的HA基因推导氨基酸序列与参考株A/California/04/2009相比,2009-2014年HA1区氨基酸发生了突变,主要是位于136、145、188、189、192和193位点。结论:近几年,福州地区H1N1流感的HA基因序列与世界流行的病毒参考株具有高度同源性,并多处氨基酸发生替换而产生抗原性漂移。     

成都某部一起感染Yamagata系乙型流感病毒血凝素基因分析

目的 分析成都某部感染乙型流感病毒遗传进化与血凝素（HA）基因突变位点。方法 通过犬肾上皮细胞（MDCK细胞）体外分离患者咽拭子标本流感病毒毒株,用PCR获取乙型流感病毒HA基因并测序,与NCBI数据库在线比对并利用MEGA 6.06软件构建系统发育进化树,分析突变位点。结果 通过MDCK细胞接种,分离出1株乙型流感病毒株,以感染病例咽拭子核酸及分离毒株的核酸为模板进行PCR扩增得到1 755 bp全长HA基因,获得的序列提交至GenBank数据库,获得基因登录号为MH236281。通过在线比对及系统发育树构建,该病例感染的病毒为Yamagata系乙型流感病毒。与乙型流感病毒Yamagata系的代表毒株Influenza B/Yamagata/16/88（GenBank No.M36105）相比,HA基因点突变碱基为57个;与世界卫生组织（WHO）推荐的疫苗株Influenza B/Utah/08/2014（GenBank No.KU592766）相比,突变碱基数为20个。进一步对HA1氨基酸突变位点进行分析,与四川地区往年流行株相比均发生了不同程度的突变,其中与2010年四川温江的分离株（GenBank No.KP461138）相比突变位点较少,仅有4处点突变;与WHO推荐的疫苗株Influenza B/Utah/08/2014相比,有2个氨基酸位点发生了变异,分别为L176Q和M255V,但突变没有处于HA1上的抗原决定簇区域。其中176位点是一个全新的突变,以往四川流行毒株、Yamagata系的代表毒株Influenza B/Yamagata/16/88及WHO推荐的疫苗株Influenza B/Utah/08/2014的HA1 176位点均为亮氨酸（L）,而本研究病例感染的乙型流感毒株HA1 176位点突变为谷氨酰胺（Q）。结论 成都地区驻地部队2017-2018流行季感染的乙型流感病毒HA基因已发生一些突变,但突变尚未造成抗原性的改变。     

流行性出血热病毒SR-11株在Vero-E6细胞上制备血凝素

本文报道了流行性出血热病毒SR-11株在Vero-E6细胞上制备的血凝素滴度可达1:16～1:64。并发现鹅红细胞对血凝素的敏感性有显著个体差异。制备的血凝素用于血凝抑制试验结果满意。     

中国甲型流感病毒血凝素基因进化分析

目的 探索甲型流感的暴发规律及毒株血凝素（hemagglutinin,HA）基因的进化.方法 通过分析中国采集并公布的甲型流感病毒基因数据,对中国大陆所有宿主为人、禽类和哺乳动物的HA基因氨基酸序列进行多序列比对,并用于构建HA的系统发育树,同时对中国香港地区的HA基因蛋白序列同样处理;分析不同宿主的HA基因的受选择压力.结果 选择中国大陆1 252个HA基因和香港485个HA基因,对其分析发现,自2002年以来,禽流感的暴发次数和频率多于历史记录;系统发育树结果显示中国大陆和香港地的HA基因邻接树的拓扑结构一致;宿主为人的HA基因受选择大于禽类宿主的HA基因.结论 不同宿主的HA基因受选择有差异,提示HA基因的快速进化可能会对人类健康产生潜在威胁.     

类风湿关节炎患者HLA-DR4/1表型与流感病毒血凝素特异性T细胞增殖及其抗体的关系

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者人类白细胞抗原(HLA)-DR4/1表型与流感病毒血凝素(HA)308-317多肽特异性T细胞增殖和血清抗HA308-317抗体之间的关系.方法 将HA308-317多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5 d,3H掺入法测定T细胞增殖.用ELISA法检测RA患者血清HA308-317抗体水平.以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR.SSP)技术对RA患者进行HLA-DR分型.结果 在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性.其中,HA308-317多肽可刺激T细胞增殖的RA患者有17例(62.9%),10例无反应性;15例(55.6%)HLA-DR4/阳性RA患者抗HA308-317抗体阳性.在HLA.DR4/I表型阴性的RA患者中,T细胞对HA308.317多肽有反应性者10例(23.3%),无反应性者33例;25例(58.1%)患者抗HA308-317抗体阳性.HLA-DR4/1表型阳性组HA308-317特异性细胞增殖高于HLA-DR4/1表型阴性组(P＜0.01),但两组血清中HA308-317抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者HA308-317特异性T细胞增殖与HLA-DR4/1表型有关,HA308-317抗体生成与HLA-DR4/l亚型无明显关系;HA308-317多肽可能通过诱导HLA-DR4/1特异性T细胞活化参与RA的发病.     

成人H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎的CT表现与动态变化

目的 探讨成人高致病性H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎的CT表现及动态变化。方法 2006年6月所确诊的H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎成人男性患者于发病第7天、30天、40天、50天、65天及95天分别行螺旋CT及HRCT扫描。回顾性分析其CT资料并结合文献复习。结果 病情严重时,CT显示肺叶或肺段大片状实变影伴支气管充气征、小淡片影及胸腔积液。病情稳定后,表现为多肺叶斑片状实变影、磨玻璃影,病灶内仍见支气管充气征。同时部分肺叶体积缩小,小叶间隔增厚、胸膜下细弧线影,相邻胸膜增厚。临床治愈出院以及近期复查时,大部分病灶消失,肺间质病灶吸收缓慢,以中叶、下叶为著。两肺散在多处条索状影,肺纹理聚集,胸膜下小叶间隔增厚,间隔旁小气肿,支气管扩张、扭曲。结论 成人高致病性H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎的CT表现为早期肺叶实变影,逐渐发展肺实质与间质病变并存,恢复期则以肺间质病变为主。CT动态观察能较客观的反映本病的病理改变过程。     

中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因特性

目的研究中国南方地区H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因分子特征。方法从Genebank中下载中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒和其他国家或地区的16株代表性H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因序列，利用生物信息学软件DNASTAR5．0进行核酸同源性分析，用MEGA3．1进行核酸和氨基酸序列比对和进化树分析。结果中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA蛋白的重链区和轻链区连接肽的序列为LRERRR—KR，与动物分离的高致病性H5N1亚型禽流感病毒和东南亚地区人禽流感病毒的连接肽相比，减少1个碱性氨基酸；共有8个潜在的糖基化位点，抗原决定簇位点有其独特的特征。基因进化树表明中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因位于单一的进化簇，与动物来源的高致病性禽流感病毒HA基因同源性高。结论中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因分子特征一致，有其显著的独有特点。提示候鸟或其他扩散因素在高致病性H5N1亚型流感病毒HA基因的重配方面扮演了重要的作用。     

甲型流感病毒H3N2诱导狗肾传代细胞凋亡的研究

目的探讨甲型流感病毒对体外培养的狗肾传代细胞系(MDCK)的凋亡诱导作用.方法用不同血凝单位的甲型流感病毒感染MDCK细胞,经HE染色、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞术等方法检测凋亡情况.结果甲型流感病毒感染MDCK后,在细胞形态上呈现凋亡特有变化;电泳出现典型梯状条带;Annexin-V染色流式细胞仪检测出在一定范围内,细胞凋亡率与病毒的浓度呈正相关.结论甲型流感病毒能够诱导体外培养的MD-CK细胞凋亡,且在一定范围内,细胞凋亡率与病毒的浓度呈正相关.     

龟肌肽对甲型流感病毒感染鼠模型疗效的观察

目的：观察龟肌肽注射液对甲型流感病毒感染鼠模型的疗效。方法：用甲型流感病毒PR－8株（H3N2）建立NIH小鼠呼吸道病毒感染模型，其中50只作病毒毒力试验，另70只随机分成5组，每组14只，前3组分别用浓度5mg/ml和2．5mg/ml的龟肌肽、三氮唑核苷作尾静脉注射，第4组为感染对照组，第5组为不感染病毒的空白对照组，观察各组14d内的每天死亡数。结果：高浓度龟肌肽组和低浓度龟肌肽组的存活率分别为64．3％和42．9％，三氮唑核苷对照组的存活率为85．7％，感染对照组小鼠7d内均死亡，而空白对照组小鼠均存活14d以上。高浓度龟肌肽存活率接近三氮唑核苷对照组（χ^2=1.71,P＞0．05）。结论：龟肌肽具有体内抗甲型流感病毒感染的作用，高浓度的龟肌肽疗效较佳。     

樟脑气味嗅觉条件刺激诱发小鼠条件反射性抗体增强的实验研究

目的 对流感疫苗(流感病毒血凝素表面抗原)的接种,观察条件反射性免疫反应.方法 采用36只BALB/c小鼠肌肉注射流感疫苗抗原(3 μg/每只动物)为非条件性刺激,与樟脑气味嗅觉条件刺激一次性结合.第6周末再次给予条件刺激,观察条件反射性流感疫苗的抗体反应.结果 条件刺激组在一次性条件刺激后,抗流感疫苗的抗体水平OD值增高(第9周0.68±0.06;第10周0.60±0.06),与非条件刺激组(第9周0.53±0.06;第10周0.48±0.04)比较差异有显著性( P <0.01).与条件训练对照组和非条件训练对照组比较差异有显著性( P <0.05).结论 经过一次樟脑气味嗅觉条件刺激与流感疫苗非条件刺激的结合训练后,单独条件刺激能够诱导动物出现条件反射性抗体增强反应.     

广西2004～2007年流行性感冒监测分析

目的了解广西流感的流行病学特征,评价流感监测工作方法并为流感防治提供科学依据。方法对广西2004～2007年哨点医院流感样病例监测数据、流感样病例暴发疫情监测数据、实验室病原学监测数据进行分析。结果2004～2005年度监测医院流感样病例每周平均为291．72例,就诊百分比为18．39％;2005～2006年度监测医院流感样病例每周平均为158．59例,就诊百分比为8．16％,2006—2007年度监测医院流感样病例每周平均为213．45例,就诊百分比为9．21％。2004～2005年度检测流感样病例标本280份,分离出15株毒株,阳性率5．36％,其中H1N1亚型13株（86．67％）,H3N2亚型2株（13．33％）;2005～2006年度检测流感样病例标本3115份,分离出381株毒株,阳性率12．23％,其中H1N1亚型40株（10．50％）,H3N2亚型115株（30．18％）,B型为226株（59．32％）。2006～2007年度检测流感样病例标本2815份,分离出213株毒株,阳性率7．57％,其中HIN1亚型150株（70．41％0,H3N2亚型7株（3．3％）,B型56株（26-29％）。结论流感监测工作应重点关注新型流感毒株的出现,同时加强学校暴发监测。敏感的新型综合性监测方法与手段有待探索。     

甲型肝炎病毒野毒株基因分型的研究(英文)

目的　了解甲型肝炎病毒 (HAV)在中国几个城市的基因型分布 ,为HAV的分子流行病学追踪调查提供方法和依据。方法　 17株HAV代表株分别来自不同城市的甲型肝炎病人粪便或血清 ,病毒RNA经蛋白酶K消化、酚 /氯仿提取和乙醇沉淀后 ,以逆转录 套式聚合酶链反应 (RT PCR)扩增合成HAVVP1/ 2A交接区基因区 ,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果　VP1/ 2A交接区核苷酸序列分析表明 ,所有病毒株均从属于基因Ⅰ型 ;约 53%为ⅠB亚型 ,亚型间差异小于6 % ;约 4 7%为ⅠA亚型 ,亚型间差异小于 5 3% ;ⅠA与ⅠB亚型间的同源性为 88 7% - 92 3%。结论　中国流行或散发的HAV株可能有基因ⅠA、ⅠB亚型同时存在 ,流行病学相关的病毒株核苷酸序列相同或相近。