siRNA沉默巨噬细胞移动抑制因子基因对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是最早发现的炎症因子之一[1].近年来的研究结果显示MIF在多种肿瘤细胞中过表达[3],参与肿瘤的发生及进展.     

巨噬细胞表达分泌的抗菌肽在卵巢癌发展中的作用及调控机制

目的探讨巨噬细胞表达分泌的抗菌肽Hcap18/LL37在卵巢癌发展中的作用及调控机制。方法构建卵巢癌细胞株OVCAR-3与巨噬细胞共培养模型,采用Matrigel小室检测巨噬细胞对OVCAR-3侵袭力的影响;Western印迹法和qRT-PCR检测Hcap18/LL37和Versican V1蛋白和mRNA的表达水平。使用干扰质粒抑制OVCAR-3细胞中Versican V1的表达,分析巨噬细胞中Hcap18/LL37表达和OVCAR-3细胞的侵袭力。结果共培养组侵袭穿膜细胞数明显多于OVCAR-3单独培养组(P<0.05);Hcap18/LL37抗体共培养组侵袭穿膜细胞数明显少于对照Ig G共培养组(P<0.05)。共培养后巨噬细胞中Hcap18/LL37蛋白和mRNA相对表达量高于单独培养(P<0.01);OVCAR-3细胞中Hcap18/LL37蛋白和mRNA相对表达量与单独培养之间差异无统计学意义(P>0.05)。Versican V1转染卵巢OVCAR-3细胞与巨噬细胞共培养24 h后,Versican V1蛋白相对表达量高于OVCAR-3细胞单独培养时(P<0.01)。巨噬细胞与Versican V1沉默OVCAR-3细胞共培养组侵袭穿膜细胞数低于Versican V1高表达OVCAR-3细胞共培养组(P<0.01)。结论卵巢癌内环境中巨噬细胞分泌的抗菌肽Hcap18/LL37促进癌细胞侵袭,其表达受肿瘤细胞分泌的Versican V1蛋白调控。     

酰基化Ghrelin在体外拮抗巨噬细胞介导的炎症反应对胰岛β细胞功能影响的研究

目的 采用Transwell小室构建的小鼠胰岛细胞株MIN6和巨噬细胞株RAW264.7共培养系统,探讨酰基化Ghrelin能否保护胰岛β细胞免遭巨噬细胞介导的炎症损伤. 方法 实验分为单独RAW264.7巨噬细胞组、单独MIN6胰岛细胞组、共培养组和Ghrelin干预组.RT-PCR和Western blot 检测巨噬细胞上Toll样受体4(TLR4)和脂肪酸结合蛋白(A-FABP)的表达;ELISA检测细胞上清液IL-1β、TNF-α的浓度,以及葡萄糖刺激后MIN6细胞上清液的胰岛素浓度. 结果 (1)共培养系统中,巨噬细胞TLR4[mRNA及蛋白水平分别为(1.35±0.13),(0.93±0.03)],A-FABP[(1.99±0.10)vs(0.91±o.01)]的表达],细胞上清液IL-1β[(10.47±1.11) pg/ml]、TNF-α[(917.54±9.09) pg/ml]蛋白水平较单独RAW264.7巨噬细胞组高(P＜0.05);(2)高糖刺激下,共培养系统中胰岛β细胞的胰岛素分泌水平较单独MIN6胰岛细胞组低(P＜0.05);(3)与共培养组比较,酰基化Ghrelin干预后共培养,巨噬细胞TLR4表达水平和TNF-α均降低(P＜0.05),且呈剂量依赖性,但胰岛β细胞的胰岛素分泌水平与共培养组比较,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 巨噬细胞与胰岛β细胞共培养后,炎症通路活化,炎症因子释放,胰岛β细胞的胰岛素分泌功能受损;酰基化Ghrelin可剂量依赖性削弱巨噬细胞和胰岛β细胞共培养后炎症通路的活化和炎症因子的释放,但不能完全阻止胰岛β细胞胰岛素分泌功能的降低.     

swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中的表达及对巨噬细胞凋亡和炎症因子表达影响

目的探讨swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中的表达及对巨噬细胞凋亡和炎症因子表达的影响。方法构建动脉粥样硬化小鼠模型,RT-PCR和Western blot检测动脉粥样硬化组织中swiprosin-1的表达水平。用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理巨噬细胞THP-1、平滑肌细胞VSMC、内皮细胞EC-304,RT-PCR和Western blot检测swiprosin-1的表达水平。巨噬细胞THP-1转染swiprosin-1 siRNA和siRNA control,经ox-LDL处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达,ELISA检测培养液上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量。结果 swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中的表达水平明显高于正常组织。swiprosin-1在ox-LDL处理后的巨噬细胞THP-1中表达水平最高,而在平滑肌细胞VSMC、内皮细胞EC-304中表达水平极低。ox-LDL处理后巨噬细胞THP-1凋亡率高达21.64%±1.88%,细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达水平升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6含量也明显升高。干扰swiprosin-1表达后的巨噬细胞THP-1经ox-LDL处理后凋亡率下降为15.25%±1.10%,细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达水平降低,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6含量也明显下降。结论 swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中表达升高,降低swiprosin-1表达能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡和巨噬细胞炎症因子分泌。     

血浆脂蛋白(a)对巨噬细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白的影响

目的　研究血浆脂蛋白 (a) [lipoprotein(a) ,Lp(a) ]对巨噬细胞结合 ,摄入及降解乙酰化低密度脂蛋白 (acetylatedlowdensitylipoprotein ,Ac LDL) ,清道夫受体 A (scavengerreceptor A ,ScR A)和ScR B的影响。方法　利用人类单核细胞株 (THP 1细胞 )源的巨噬细胞培养 ,受体摄取配体及Northern印迹方法 ,观察Lp(a)对巨噬细胞受体摄取Ac LDL以及对巨噬细胞ScR A和ScR BmRNA表达的影响。结果　THP 1细胞源的巨噬细胞对Ac LDL的结合量随Lp(a)浓度 (0 ,10 ,2 5 ,5 0及 10 0 μg/ml)的增加而增加 ,而天然LDL对此无影响。与对照组比较 [Lp(a)非投用组 ],投用 5 0μg/mlLp(a)时 ,巨噬细胞对Ac LDL结合量 (binding)增加 2 6 9.2 5 %(P <0 .0 1) ,对Ac LDL的摄入量 (uptake)增加5 9.46 %(P <0 .0 1) ,对Ac LDL的降解量 (degradation)增加 5 5 .77%(P<0 .0 1) ,且巨噬细胞ScR AmRNA表达明显增强 ,与对照组 [Lp(a)非投用组 ]比较增强 43.5 6 %,而Lp(a)并不影响ScR BmRNA的表达。结论　Lp(a)可增加THP 1细胞源的巨噬细胞结合、摄入及降解Ac LDL ,这种作用可能通过Lp(a)增强巨噬细胞ScR A基因的表达来实现。     

肾移植术后患者Toll样受体4的表达及意义

天然免疫相关分子Toll样受体（toll like receptor, TLR）是Medzzhitor和Janewary等[1]在1997年发现的人类模式识别受体,最近研究显示[2],TLR4等分子可能通过调控单核/巨噬细胞、树突状细胞等抗原呈递细胞的活化,CD80等第二信号的表达,在移植免疫中发挥重要角色.为了解TLR4在肾脏移植免疫反应中的作用,我们对肾移植术后患者TLR4和其下游分子CD80＋的表达情况进行了研究.     

葛根总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病变内细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的 探讨葛根总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷（apoE-／-）小鼠主动脉窦动脉粥样硬化斑块抑制作用的分子机制。方法 采用电镜观察、缺口末端标记（TUNEL）法检测apoE-／-小鼠动脉粥样硬化斑块内的细胞凋亡。免疫组化方法检测平滑肌细胞、巨噬细胞及Caspase一3蛋白的表达。结果 电镜观察到凋亡细胞核形不规则,胞核内染色质浓集、边聚,附着在核膜周边,线粒体肿胀,内质网扩张,超微结构形态符合巨噬细胞早期凋亡,并可见典型凋亡小体形成。TUNEL结果表明,凋亡细胞主要分布在粥样斑块脂质核心处,模型组动脉粥样硬化斑块内凋亡细胞数较多,而葛根总黄酮干预组凋亡细胞数明显减少,葛根高、低剂量组细胞凋亡率明显低于模型组[分别为（0．38±0．17）ok,（1．95±1．02）％,（10．50±5．89）％,P〈0．01],葛根高剂量组细胞凋亡率明显低于葛根低剂量组。抗CD68抗体免疫组化染色证实在动脉粥样硬化斑块脂质坏死核心内细胞CD68强阳性表达。葛根高、低剂量治疗组Caspase-3蛋白免疫表达低于模型组,葛根高剂量治疗组低于葛根低剂量治疗组。结论 葛根总黄酮可能通过下调apoE-／-小鼠主动脉窦动脉粥样硬化病变内Caspases-3蛋白的表达,显著降低了动脉粥样硬化病变内巨噬细胞凋亡,从而抑制了动脉粥样硬化斑块的进展。     

CXCR3 CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液和外周血中的表达

目的 在单细胞水平上，研究类风湿关节炎（RA）患者滑液及外周血中单核/巨噬细胞，T淋巴细胞上趋化因子受体CCR5及ＣＸＣＲ３的表达。并测定CCR5的配体MIP-1β。激活正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）及T细胞亚群，探讨其在RA发病中的作用机制。方法 分离RA患者滑液单个核细胞（SFMC），外周血单个核细胞（PBMC）及正常人PBMC（对照），以三色荧光素标记物进行流式细胞术分析CD14^ ,CD3^ 细胞膜表面趋化因子受体CCR5，CCR3及细胞内趋化因子MIP-1β，RANTES和细胞因子白细胞介素（IL）-4，干扰素（IFN）-γ的表达率。结果 与PBMC相比，RA患者SFMC中的单核/巨噬细胞，T细胞上趋化因子受体CCR4及CEXR3表达显著增高；且单核/巨噬细胞分泌趋化因子MIP-1β，RANTES的百分比较高；SFMC中Th1细胞亚群（即IFN-γ^ T细胞）的表达率与滑液及外周血中T淋巴细胞上趋化因子受体CCR4及CXCR3的表达率显著相关。结论 趋化因子受体CCR5^ ,CXCR3^ 的单核/巨噬细胞，T细胞积聚在RA患者的病变关节内，且单核/巨噬细胞分泌较多趋化因子；CCR5，CXCR3可能参与调节细胞移动。与Th1细胞亚群及其“伙伴”细胞在RA关节内积聚有关；可能与RA的发病相关。     

普伐他汀对血管平滑肌细胞CX3CR1表达及其介导的趋化作用的影响

目的探讨普伐他汀对体外培养大鼠血管平滑肌细胞趋化因子受体CX3CR1表达及其介导的趋化作用的影响。方法分别以γ干扰素（IFN-γ）和氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作用于体外培养的大鼠血管平滑肌细胞,以免疫组化法观察CX3CR1表达。用普伐他汀进行干预,通过免疫组织化学法、ELISA法观察其是否会抑制IFN-γ诱导的CX3CR1表达。利用Transwell细胞趋化试验观察Fractalkine对体外培养平滑肌细胞的趋化作用,及普伐他汀对趋化作用的影响。结果 IFN-γ和ox-LDL均可诱导血管平滑肌细胞CX3CR1表达,与对照组比较有统计学差异。以普伐他汀对血管平滑肌细胞预作用一段时间后I,FN-γ诱导的CX3CR1表达受到显著抑制。Fractalkine对血管平滑肌细胞具有趋化作用,普伐他汀可显著抑制Fractalkine对血管平滑肌细胞的趋化作用。结论普伐他汀可抑制血管平滑肌细胞CX3CR1表达及其介导的趋化作用。     

氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导人血单核细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α

探讨巨噬细胞炎性蛋白 1α在动脉粥样硬化病变中的表达以及天然和氧化型低密度及极低密度脂蛋白是否诱导人外周血单核细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,用原位杂交检测兔食饵性动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA的表达。用逆转录聚合酶链式反应研究上述脂蛋白对人单核细胞巨噬细胞炎性蛋白 1α表达的影响 ,用细胞酶联免疫吸附实验检测脂蛋白对人血单核细胞巨噬细胞炎性蛋白 1α的蛋白表达。结果原位杂交显示 ,兔主动脉粥样硬化斑块中的泡沫细胞及内皮细胞的胞浆均被染成棕紫色 ,而胞浆内的脂质不着色 ,以致整个泡沫细胞区呈网架状构象。逆转录聚合酶链式反应显示 ,氧化型低密度及极低密度脂蛋白能显著诱导人单核细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA ,分别为对照组的 2 .4倍和 1.6倍。细胞酶联免疫吸附实验亦显示 ,氧化型低密度及极低密度脂蛋白能明显诱导人单核细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白 ,分别为对照组的 2 .3倍和 2 .0倍 ,而天然低密度及极低密度脂蛋白的作用则不明显。由此可见 ,动脉粥样硬化斑块中的泡沫细胞和内皮细胞能表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,氧化型低密度及极低密度脂蛋白可诱导人单核细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,从而可招募更多的单核细胞迁入动脉内膜而促进动脉粥样硬化病     

冠心病患者巨噬细胞胆固醇流出的变化

目的研究冠心病患者血液中单核细胞分化为巨噬细胞并荷脂后胆固醇流出的影响机制。方法分离冠心病患者(试验组)和正常人群(对照组)外周静脉血中单核细胞,并用佛波酯诱导为巨噬细胞,收集分离血清,检测各项血脂指标并备用。细胞用[3H]胆固醇处理24 h使其荷脂,然后分为四组:对照组+正常血清、对照组+高脂血清、试验组+正常血清及试验组+高脂血清。分别检测ABCA1、ABCG1表达及胆固醇流出率。结果与对照组比较,试验组单核/巨噬细胞胆固醇流出能力受损,油红O染色显示细胞内脂质蓄积增加,细胞内胆固醇流出减少,但ABCA1和ABCG1的表达改变不明显。与正常血清比较,试验组及对照组中高脂血清明显影响胆固醇流出能力,细胞内脂质蓄积增加,细胞内胆固醇流出减少,但不影响ABCA1和ABCG1的表达。结论冠心病患者巨噬细胞胆固醇流出能力受损,可能与动脉粥样硬化性血管疾病的发生相关。     

Tim-3通过胆固醇酯水解酶影响巨噬细胞泡沫化过程的机制

目的观察Tim-3是否通过调节巨噬细胞内胆固醇脂水解酶(CEH)的表达干扰泡沫化细胞的形成,进而影响动脉粥样硬化的发生发展。方法 Western印迹检测CEH蛋白的表达;液体闪烁计数测定THP-1巨噬细胞内胆固醇流出情况;HPLC检测胞内脂质含量;油红O染色显示胞内脂滴情况;ELISA检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、MIF、白细胞介素(IL)-10的分泌情况。结果 Ad-Tim-3组细胞中CEH的表达被明显抑制,胞内胆固醇流出减少,胞内总胆固醇(TC)、胆固醇酯(CE)及游离胆固醇(FC)的含量明显增加,TNF-α和MIF分泌增多,IL-10的分泌减少;Ad-CEH组和Ad-Tim-3+Ad-CEH组细胞中CEH的表达水平被明显增强,胞内胆固醇流出增加,胞内TC、CE及FC的含量明显减少,TNF-α和MIF分泌减少,IL-10分泌增多。结论 Tim-3可以通过增强巨噬细胞内CEH的活性抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化。     

巨噬细胞对单侧输尿管结扎小鼠肾纤维化的影响

目的检测不同亚型巨噬细胞在单侧输尿管结扎(UUO)模型小鼠肾组织中的表达及其对肾纤维化的影响。方法雄性C57/BL小鼠39只,完全随机分为4组:假手术组(sham,行单侧输尿管分离术,n=9)、模型-3d组(UUO-3d,行单侧输尿管结扎术,n=10)、模型-7d组(UUO-7d,n=10)、模型-14d组(UUO-14d,n=10)。分别于UUO术后3、7、14 d收取小鼠肾脏。病理染色观察假手术组及3个模型组小鼠肾间质纤维化及炎性细胞浸润变化。免疫荧光观察假手术组及3个模型组小鼠肾间质巨噬细胞浸润程度。流式细胞术检测肾脏巨噬细胞亚群(CD86和CD206)的比例变化。采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析。组间比较采用完全随机设计的单因素方差分析及SNK-q检验。结果假手术组小鼠肾小管结构完整,肾间质清晰无炎性细胞浸润,无胶原蛋白沉积,巨噬细胞浸润数量少。与假手术组相比,模型组-3d、模型组-7d、模型组-14d小鼠肾间质胶原蛋白沉积面积[(7.8±1.5)%vs(14.1±2.7)%,(27.4±3.1)%,(39.3±2.7)%]及炎性细胞浸润[(169±16)vs(1 068±164),(2 159±432),(3 536±318)]均增加(P0.05)。随着UUO时间延长,巨噬细胞浸润显著增多[(20.8±2.7)%,(31.1±1.3)%,(49.5±2.1)%,(69.6±1.8)%;P0.05],M2型巨噬细胞标志物(CD206)表达增高[(3.2±1.9)%,(34.1±2.1)%,(52.6±1.6)%,(76.7±2.3)%;P0.05],而各组M1型巨噬细胞标志物(CD86)表达无明显差异[(76.4±3.6)%,(81.8±2.8)%,(80.6±4.4)%,(85.5±2.6)%;P0.05]。结论在肾纤维化发展过程中,M2型巨噬细胞浸润增加可能促进单侧输尿管结扎小鼠肾纤维化。     

泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其LXRα和ABCA1表达的影响

目的 以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,经ox-LDL（50 mg/L）诱导后建立巨噬细胞泡沫化模型,观察泽泻汤对细胞LXRα 和ABCA1表达的影响。 方法 分别采用ox-LDL（50 mg/L）和Dil-ox-LDL（10 mg/L）处理大鼠腹腔巨噬细胞24 h,同时20%泽泻汤血清干预后,油红O染色和荧光显微镜观察细胞内脂质沉积情况;蛋白免疫印迹检测细胞LXRα 和ABCA1的表达情况。结果 ox-LDL（50 mg/L）和Dil-ox-LDL（10 mg/L）处理巨噬细胞成功建立巨噬细胞泡沫化模型;与空白组的巨噬细胞比较,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞内脂质沉积明显减少。空白组巨噬细胞和模型组巨噬细胞LXRα呈低水平表达,泽泻汤血清干预组细胞LXRα表达明显增加;与空白组比较,模型组巨噬细胞ABCA1表达明显增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞中ABCA1亦呈高表达,但较模型组略低。结论 ox-LDL（50 mg/L）和Dil-ox-LDL（10 mg/L）处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型;泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,可能通过上调LXRα表达来实现的。     

普罗布考干预后小鼠血清对巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的 观察普罗布考处理后小鼠血清及不同浓度普罗布考体外干预对巨噬细胞胆固醇流出的影响,探讨普罗布考调节细胞胆固醇流出的可能机制.方法 16只健康雄性C57 BL/6J小鼠随机分为两组,分别给予普通饮食或添加普罗布考饲料饲养4周后,收集血清,酶法测定血清脂质;以乙酰化低密度脂蛋白和3H-胆固醇标记巨噬细胞,并以不同浓度普罗布考干预细胞,然后以上述血清介导,测定细胞胆固醇流出;收集干预后的细胞,提取mRNA及膜蛋白,分别检测ATP结合盒转运子A1和G1、B族Ⅰ型清道夫受体的表达.结果 普罗布考干预4周后小鼠血清较对照组介导更多的胆固醇从巨噬细胞流出,普罗布考呈剂量依赖性地增加巨噬细胞ATP结合盒转运子G1基因和蛋白的表达,并加速血清诱导的胆固醇流出率,而对B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1基因和蛋白表达无明显影响.结论 普罗布考干预后的小鼠血清显著促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能是通过增加ATP结合盒转运子G1的表达,而与细胞膜B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1的表达无关.     

弓形虫P~(30)的克隆表达及其对巨噬细胞凋亡的影响

目的　获得能表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆并观察内源性表达的P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响。方法　通过PCR扩增获得P3 0 基因片段 ,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(- )中 ,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆 ,采用脂质体将重组质粒转染到RAW 2 6 4 .7巨噬细胞中 ,通过Hygromycin筛选和PCR、免疫组化鉴定 ,用流式细胞术DNA倍体分析计算稳定转染和瞬时转染P3 0 基因的巨噬细胞的凋亡率。结果　 1.PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定 ,均与预期设计相符合 ,DNA序列分析发现重组质粒中的目的基因序列与文献报道相符。2 .PCR和免疫组化鉴定发现转染P3 0 重组质粒的巨噬细胞能稳定地复制质粒并表达弓形虫P3 0 蛋白。 3.P3 0 稳定转染的细胞凋亡率均在 2 %左右 ,不同细胞之间没有区别。 4 .瞬时转染空载体和P3 0 重组质粒的巨噬细胞其凋亡率均在 6 %左右 ,没有区别。结论　 1.获得了含P3 0 基因的重组质粒以及能稳定表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆。2 .无论是稳定转染还是瞬时转染 ,均不能引起巨噬细胞的凋亡 ,说明内源性表达的弓形虫P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞的凋亡没有影响。     

糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体蛋白表达的影响

目的　研究诱导分化及糖基化终产物 (AGEs)对人单核 /巨噬细胞 (U937细胞 )高密度脂蛋白受体 (SR BI)蛋白表达的影响 ,探讨AGEs和巨噬细胞SR BI在动脉粥样硬化中的作用。方法　U937细胞经PMA诱导分化 ,并将不同浓度或同一浓度AGEs与诱导分化 48h后的U937细胞共同孵育 ,用免疫细胞化学法和Western印迹法检测SR BI蛋白的表达。结果　诱导分化后U937细胞SR BI表达在 2 4、48h逐渐升高 ,72h下降 ;1 0 0、2 0 0和 40 0 μg/mlAGEs刺激后细胞表面SR BI蛋白表达量分别是BSA组的 1 44、2 38和 2 77倍 (P <0 0 5) ;40 0 μg/ml的AGEs作用 6、1 2、2 4、48h后 ,U937巨噬细胞SR BI蛋白表达量分别为 0h的 1 38、2 49、3 76和 4 2 5倍 (P <0 0 5)。结论　AGEs可增加U937巨噬细胞SR BI蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。     

CX3CL1/CCL26-CX3CR1通路在原发性胆汁性胆管炎免疫机制中的作用

目的探究CX3CL1/CCL26-CX3CR1通路在原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis, PBC)免疫机制中的作用。方法收集PBC患者和健康对照者外周血及肝脏病理标本,采用ELISA检测血浆CX3CL1及CCL26水平,流式细胞术检测外周血单个核细胞各亚群中CX3CR1~+细胞比例。使用免疫组化分析肝活检组织中CX3CL1和CCL26表达情况。采用ELISA和流式细胞术检测不同细胞因子及LPS刺激下,体外培养的人肝内胆管上皮细胞中CX3CL1/CCL26-CX3CR1通路表达水平变化。结果共纳入PBC患者40例、健康对照者18例。PBC患者血浆CX3CL1水平[(0.690±0.271)ng/mL]较健康对照者[(0.540±0.101)ng/ml]显著升高(P=0.044)。PBC患者血浆CCL26浓度[(8.94±4.09)pg/mL]较健康对照者[(6.75±1.86)pg/mL]有升高趋势,但无统计学差异(P=0.104)。与健康对照者相比,PBC患者CX3CR1表达水平在NKT-like细胞[(63.5±25.4)%vs.(78.6±18.0)%,P=0.026]和CD4~+ T细胞[(5.5±5.4)%vs.(13.7±9.0)%,P=0.003]中显著增高,且后者这一差异在其CD28~+和CD28~-亚群中均显著。PBC患者肝脏胆管上皮细胞同时高表达CX3CL1和CCL26,健康对照者则弱表达CX3CL1,无CCL26表达。人肝内胆管上皮细胞CX3CL1表达水平在IFN-γ刺激下显著增加,CCL26表达在IL-4、IL-13刺激下显著增加;在IFN-γ刺激下,CX3CR1表达显著升高。结论 PBC患者肝内胆管上皮细胞可能在IFN-γ刺激下CX3CL1表达增加,在IL-4和IL-13刺激下CCL26表达增加,其受体CX3CR1在外周血NKT-like细胞和CD4~+ T细胞中表达上调。CX3CL1和CCL26可能通过CX3CR1协同介导PBC胆管上皮损伤。     

氧化低密度脂蛋白、荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

目的：了解不同浓度氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响。方法：用佛波酯（PMA）诱导THP-1源性单核细胞分化为巨噬细胞：以不同浓度的ox-LDL孵育其24h;50mg/L的ox-LDL孵育使该细胞成为泡沫细胞,再以不同浓度荷叶生物碱对其进行干预24h。以PCR和蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测不同浓度ox-LDL及荷叶生物碱干预下各组细胞ABCA1的表达。以油红O染色观察各组细胞。结果：镜下：ox-LDL处理组细胞内脂滴的大小与多少随着ox-LDL的浓度的增加而增加;随荷叶生物碱浓度的升高而减少。ABCA1mRNA表达量：ox-LDL各组的表达量均较空白对照组明显升高[25mg/L组：（1.4677±0.0907）,50mg/L组：（2.0510±0.1065）,100 mg/L组：（1.5356±0.0903）比0mg/L组：（1.00）,P均〈0.05],荷叶生物碱各组细胞的表达量[荷叶生物碱25mg/L：（1.0460±0.0580）,50mg/L：（0.8391±0.0661）,100mg/L：（1.1003±0.0752）]表达量均较单纯50mg/L ox-LDL干预组（0.5136±0.0632）明显升高（P均〈0.05）。ABCA1蛋白的表达与ABCA1mRNA表达水平改变相一致。结论：ox-LDL可上调PMA诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞内ABCA1的表达,使其细胞内脂质蓄积。荷叶生物碱既使上述细胞内ABCA1表达上调,又使其细胞内脂质蓄积减少。     

黄杆菌裂解产物对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用及机制研究

目的:探讨黄杆菌裂解产物对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用及可能的机制。方法:将黄杆菌裂解产物与THP-1细胞进行共培养,观察其对THP-1巨噬细胞及泡沫细胞形成的影响,并检测CD14、TLR4、LDLr三个受体mRNA的表达水平。结果:黄杆菌裂解产物促进THP-1单核细胞向巨噬细胞分化,并促进巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,上调CD14、TLR4、LDLr三个受体mRNA的表达水平。结论:黄杆菌裂解产物促进单核巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,这可能与其上调LDLr表达有关。