基于蛋白免疫印迹的水蛭抗凝活性成分研究

目的：建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法：本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western blot检测凝血酶-活性多肽复合体。结果：研究发现两种水蛭Native-PAGE-WB均检测到凝血酶-活性多肽复合体,且SDS-PAGE-WB检测到复合体变性后产生凝血酶条带。结论：建立的Native-PAGE-WB法可有效检出水蛭活性多肽和凝血酶相互作用产物,且发现同水蛭素类似,宽体金线蛭活性抗凝多肽与凝血酶在体外也能形成稳定的蛋白复合体。     

土鳖虫提取物体外抗凝血活性研究

目的：比较土鳖虫不同提取物对人血浆的抗凝血活性,探讨其抗凝血机制。方法：测定土鳖虫提取物不同萃取部位对凝血酶原时间（PT）,凝斑酶时间（TT）,活化的部分凝血活酶时间（APTT）,纤维蛋白原凝固时间（FCT）的影响。结果：土鳖虫的乙酸乙酯部位显著地延长人门,APTT,下下和FCT;石油醚部位、正丁醇部位也有抗凝活性,作用较弱。结论：土鳖虫乙酸乙酯提取部分抗凝作用最强,能直接抑制凝血酶催化的纤维蛋白原凝固。     

生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究

 目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法。方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算。结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的。结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义。生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充。     

七种水蛭抗血小板聚集与抗凝血研究

七种水蛭体外抗血小板聚集与抗凝血实验研究结果表明，日本医蛭、菲牛蛭、湖北牛蛭在两方均有明显的作用。尖细金线蛭与宽体金线蛭的水煎提取物具有较强的抗血小板聚集作用，尖细金线蛭与光润金线蛭抗凝血作用较好，而宽体金线蛭、尖细金线蛭和光润金线蛭的超声提取物则表现促血小板聚集的作用。     

日本医蛭抗凝活性研究

目的:研究分析人工养殖条件下日本医蛭活体、干品的抗凝活性,为日本医蛭合理入药提供参考。方法:根据中国药典规定,采用凝血酶滴定法对不同处理的日本医蛭样品进行测试。结果:发现日本医蛭抗凝活性依次为超低温冻干品、鲜品、晒干品。结论:保证日本医蛭最佳抗凝活性的方法为超低温冻干。     

日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究

目的研究日本医蛭不同萃取部位的抗凝活性,为日本医蛭的新药开发提供依据。方法SD大鼠腹主脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）和活化的部分凝血活酶时间（APTT）。结果日本医蛭的总提物能使大鼠PT,TT,APTT时间显著延长;石油醚部位能使大鼠PT,APTT延长。结论中药日本医蛭的低极性小分子具有抗凝活性。     

日本医蛭的研究进展

日本医蛭是中国药典收载的唯一吸食动物血液的水蛭药材品种,具有极强的抗凝血酶活性和抗血小板聚集作用。现阶段对日本医蛭的研究十分匮乏,不利于日本医蛭资源繁育及开发利用。本研究综合国内外日本医蛭的研究现状进行了分析,并阐述了日本医蛭产业发展存在的问题,旨在为更好地保护利用中药材资源提供数据和参考。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

两种水蛭抗凝血作用的初步研究

本文比较了国内最常见的两种水蛭品种的不同提取工艺处理后的抗凝血酶活性,发现非高温处理的日本医蛭抗凝血酶活性明显强于宽体金线蛭。     

抗凝血酶效价测定法综合考察水蛭的提取工艺

目的:通过考察水蛭提取物的抗凝血生物活性,确定水蛭的最佳提取工艺,保证水蛭抗凝血活性成分获得最大保留。方法:选择浸泡时间、煎煮次数、煎煮时间、水与水蛭质量比为考察因素,按L9(34)正交设计因素水平表排列,考察水蛭提取物得率和提取物的凝血酶效价。结果:水蛭的最佳提取工艺为水蛭药材先用10倍量的水浸泡4h,加水煎煮3次,每次煎煮1.5h。结论:水蛭经水提、乙醇精制后凝血酶活性依然保留完好,得率与凝血酶效价呈正相关。此工艺对水蛭提取物的生产简便可行。     

HPLC法测定10种动物药中尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、脲苷的含量

目的：对１０种动物药中的尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、脲苷进行了含量测定,以对动物药中的水溶性成分做进一步研究。方法：我们采用ＨＰＬＣ法测定了这１０种动物药中４种化合物的含量。色谱柱为Ｓｈｉｍ-ｐａｃｋＣＬＣ-ＯＤＳ柱;流动相：０．０５ｍｏｌ／Ｌ的磷酸氢二铵溶液;流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ;检测波长：２５４ｎｍ。结果：相关系数：ｒ＝０．９９９３～０．９９９８;回收率：９８．３％～１００．５％。结论：各动物药中这几种化合物的含量和ＨＰＬＣ图谱差异较大。我们认为具有一定的鉴别意义。     

HPLC determination of uracil xanthine, hypoxanthine and uridine in species of animal drugs]

OBJECTIVE: To make further studies on the water-soluble components in animal drugs by determining the contents of uracil, xanthine, hypoxanthine and uridine from ten species of animal drugs. METHOD: The determination was affected by RP-HPLC, using Shim-pack CLC-ODS column(150 mm x 6 mm), 0.05 mol/L dibasic ammonium phosphate solution as mobile phase, flow rate 0.8 ml/min and detection at 254 nm. RESULTS: This method is accurate, rapid and reproducible. Analytical data for Hirudo nipponia, Eupolyphaga sinensis, Scolopendra subspinipes mutilans, Buthus martensii, Bombyx mori, Mylabris cicorri, Aspongopus chinensis, Lytta caraganae, Tabanus bivittatus and Huechys sanguinea are given. CONCLUSION: There are marked discrepancies in the contents of the four components as shown on the chromatograms, a point that may be helpful in identifying the above-cited ten species of animal drugs.     

水蛭土元粉联用硝苯吡啶治疗高血压并左室肥厚的临床研究

本研究选择经超声心动图检查有左室肥厚的高血压病患者，随机分为观察组和对照组。两组均给予硝苯吡啶治疗，观察组加用水蛭土元粉胶囊。结果表明：观察组心肌重量指数由１３６．８±７．５ｇ／ｍ＾２降至１３０．５±６．４ｇ／ｍ＾２，部分有早期脑血管病症状的患者症状改善。     

活血止痛胶囊中土鳖虫的分子鉴定研究

 目的 建立活血止痛胶囊中土鳖虫的一种分子鉴定方法。方法 采用蛋白酶K法结合吸附柱法提取活血止痛胶囊中土鳖虫基因组DNA,使用蜚蠊目昆虫通用引物扩增其线粒体16S rRNA 片段并测序。结果 土鳖虫能扩增出475 bp左右的片段,本实验成功从自制活血止痛胶囊中扩增出该片段。结论 该方法灵敏度高,可靠性强,可以做为活血止痛胶囊中土鳖虫的一种鉴定方法。     

水蛭炮制前后质量比较

目的:讨论炮制方法对水蛭的影响。方法:以热浸法测定水溶性浸出物与醇溶性浸出物的含量;以凝血酶法测定水蛭素的含量;以HPLC测定次黄嘌呤的含量。结果:生水蛭的含水量,水溶性浸出物含量,醇溶性浸出物含量,水蛭素含量,均高于制水蛭的含量,而制水蛭的次黄嘌呤含量则高于生水蛭的次黄嘌呤含量。结论:滑石粉炒水蛭使水蛭药性峻烈的活性成分含量降低,从而降低毒性,缓和其破血通经之性。     

地鳖虫药理作用研究概况

就最近几年地鳖虫的药理药效研究作一综述,以期为深入研究和开发地鳖虫提供一定依据。地鳖虫作为一种传统的中药材,富含多种活性蛋白、氨基酸、不饱和脂肪酸、甾醇、黄酮及生物碱等生物活性成分,具有广泛的药理作用。     

水蛭不同提取物抗凝活性的体外实验研究

目的:研究水蛭不同提取物的抗凝活性,为水蛭的新药开发提供实验依据.方法:Wistar大鼠腹静脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血活酶时间(APTT).结果:水蛭的乙酸乙酯部分能使大鼠的PT、TT、APTT显著延长.正己烷部分、水溶液部分能使大鼠的PT显著延长,正丁醇部分能使大鼠的APTT显著延长.结论:水蛭各提取物均有抗凝活性,水蛭中存在不同于水蛭素的新的抗凝血成分.     

Chemical constituents of Eupolyphaga sinensis Walker]

Five compounds were isolated from the n-hexane extract and n-butanol of extract Eupolyphaga sinensis. These compounds were identified as octacosanol, beta-sitosterol, batyl alcohol, 2,4-pyrimidinedione and allantoin.     

地鳖虫纤溶成分的分离纯化和活性测定

本文通过硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素柱和非变性PAGE制备电泳等方法从雌性地鳖虫EupolyphagesinensisW alker活体内分离纯化得到三种纤溶活性成分:EFF-1、EFF-2和EFF-3,分子量分别为41 kd、32.9 kd和30.6 kd,比活力分别为171.3 U/mgpr、234.0 U/mgpr和148.5 U/mgpr,其中EFF-2和EFF-3兼有纤溶酶激活物和纤溶酶活性。