白血病患者多向造血祖细胞培养后的透射电镜观察

本文运用透射电镜证明,所运用的极限稀释多向造血祖细胞(CFu—Mix)微量培养体系是体外研究造血细胞分化的重要方法。在加入一系列生长因子后,正常人骨髓细胞可向红、粒、巨核细胞系方向分化,而白血病细胞却不能,其集落细胞仍带有明显的白血病性质,提示白血病可能为多向造血祖细胞阶段的恶性变。     

5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的 探讨IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响。方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、1000u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落。结果 IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、250u/ml。峰值浓度下,对CFU－E、BFU－Em、BFU－Eim、CFU－GM形成的作用强度不同,PIXY321条件下所形成的集落数最多。结论 这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著。     

不同血型脐血造血祖细胞混含培养的研究

采用单层琼脂法对脐血造血祖细胞培养进行了研究。结果：２０份新生儿脐血粒单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）为９５．６±３６．５／１０￣６ＭＮＣ；两份不同血型的新生儿脐血细胞混合培养与单个新生儿脐血细胞培养比较，两者在祖细胞生成数量和生长特征方面无明显差别。本研究为临床混合不同血型的脐血造血祖细胞移植提供了一定的理论依据。     

5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的探讨IL-3、IL-6、GM-CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响.方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、10 00 u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落.结果 IL-3、IL-6、GM-CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、25 0 u/ml.峰值浓度下,对CFU-E、BFU-Em、BFU-Eim、CFU-GM形成的作用强度不同,PIXY321 条件下所形成的集落数最多.结论这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著.     

造血祖细胞体外培养在研究病毒与骨髓衰竭关系中的意义

临床上已肯定病毒感染可引起严重的骨髓造血功能衰竭。近年造血祖细胞体外培养体系,即造血祖细胞集落形成分析法(CFUASSay)的建立,为研究病毒与造血衰竭的关系提供了重要的实验室依据,揭开了认识和研究病毒与骨髓造血功能衰竭关系的新篇章。1　肝炎病毒病毒性肝炎患者常伴有骨髓造血功能抑制。甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)均与再生障碍性贫血有关。近年应用造血祖细胞体外培养证实,肝炎病毒对造血祖细胞有直接作用。ZeldiS等[1]用HAV、HBV体外感染人骨髓单核细胞(MNC),将不同类型肝炎患者血清与正常…     

商陆素－脾细胞条件培养基对小鼠骨髓造血祖细胞作用的研究

目的研究商陆素-脾细胞条件培养基(PWM-SCM)对小白鼠骨髓造血祖细胞的作用.方法用micro-ELISA方法测定PWM-SCM中IL-2、IL-3、IL-4和IL-6的含量,在CFU-GM和CFU-E培养体系中加入PWM-SCM,观察其对造血祖细胞的作用.结果PWM-SCM中4种细胞因子的含量IL-2为72.5±1.1 pg/ml,IL-3为433.3±11.6 pg/ml,IL-4为28.9±0.4pg/ml,IL-6为143.3pg/ml,其测定值均高于对照组RPMI-1640完全培养基中测定的含量(P＜0.05～0.01).骨髓造血祖细胞培养显示,PWM-SCM对CFU-GM无影响,但CFU-E的集落数由6.2±1.4增加到34.0±2.5,有非常显著性差异(P＜0.001).结论PWM-SCM中含有多种细胞因子,对小白鼠骨髓造血祖细胞有集落刺激活性,对CFU-E的形成有协同促进作用.     

人参总皂甙对小鼠造血祖细胞的刺激增殖作用

目的 观察人参总皂甙对小鼠骨髓造血祖细胞的刺激增殖作用。方法 采用造血祖细胞体外培养技术,在加造血生长因子和不加造血生长因子的情况下,观察小鼠造血祖细胞对不同浓度人参总皂甙的敏感性。结果 无论是否存在造血血生长在子,４ｍｇ／Ｌ和２０ｍｇ／Ｌ人参总皂甙均能增加ＣＦＵ－Ｍｇ,ＣＦＵ－ＧＥＭＭ和ＣＦＵ－Ｆ集落数,集落提高率达３７．７％、３８．５％、１８．３％。结论 颂总皂甙在体外对小鼠造血祖细胞有刺激增     

中晚孕期与足月胎儿脐血干/祖细胞功能特性研究

目的　对比研究中、晚孕期和足月胎儿脐血造血干 /祖细胞的表型及功能特性 ,为造血干细胞宫内移植和基因治疗先天性疾病提供新的思路。方法　采用免疫磁珠分离法、流式细胞术、液体培养、半固体甲基纤维素培养等对中、晚妊期及足月胎儿脐血造血干 /祖细胞比例、对细胞因子的反应性、体外增殖及自我更新能力进行了测定。结果　未足月脐血中CD34+ 、CD34+ CD38- 细胞及CD34+ 细胞中CD34+ HLL DR+ 、CD34+ CD38- 细胞比例较足月脐血高 (平均 3 1 4 %、0 76 %比 0 78%、0 1 8%及 9 8%、2 0 4%比 3 9%、1 4 6 % ) ,产生的集落形成单位量 (CFU)较足月脐血高 ,且与CD34+ 细胞比例成正相关 (r =0 83) ,长期培养启动细胞 (LTC IC)约是足月脐血的 3倍 (5 7± 1 2 / 1 0 5细胞比1 7± 0 8/ 1 0 5细胞 ,P <0 0 5)。在短期液体培养体系中 ,不同胎龄脐血干 /祖细胞具有相似的扩增潜能 ,体外细胞因子支持下培养 7天 ,CFU C、细胞总数、CD34+ 细胞数、CD34+ CD38- 细胞数达高峰 ,之后逐渐下降 ,其中以SCF +FL +TPO +IL 3 +IL 6组合条件下效果最显著。结论　未足月胎儿 (尤其是中妊期 )脐血与足月胎儿脐血相比 ,含有较高的造血干 /祖细胞 ,有较强的集落形成能力 ,对细胞生长因子刺激敏感 ,在体外能有效地扩增和     

白血病红系、粒系造血祖细胞集落测定及血清调控作用研究

本文报告了应用我们已建立的红系造血细胞体外培养方法,并配合粒系造血祖细胞体外培养方法,观察了慢性粒细胞白血病(简称慢粒)红系和粒系造血祖细胞集落细胞的体外增殖特性、集落产率、集落细胞染色体核型变化,以及慢粒集落细胞对刺激因子反应特性。此     

卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞的定向诱导分化

目的：观察卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞（CFU-GM）的定向诱导分化,稳定和优化检测卵黄囊CFU-GM的方法。方法：应用体外琼脂培养法,观察多种因素对小鼠卵黄囊干细胞形成粒-单系造血祖细胞集落形成单位的影响;应用染色压片法对所生成的集落性质作鉴定。结果：植入不同数量的E7.5~8.5 d的卵黄囊干细胞与CFU-GM生成数量之间呈高度正相关;在接种相同数量的卵黄囊细胞数的情况下,DMEM培养体系生成的CFU-GM数明显多于IMDM培养体系生成的集落数（P<0.01）;马血清（HS）组优于胎牛血清（FBS）组（P<0.01）;与GM-CSF相比,WEHI-3条件培养液（W3-CM）能明显促进卵黄囊CFU-GM的生成（P<0.01）。采用完整琼脂凝块压片法对卵黄囊细胞所形成的集落进行鉴定表明为粒-单系细胞集落。结论：卵黄囊干细胞具有向CFU-GM分化的能力;卵黄囊干细胞CFU-GM诱导体系中各组分变化均可影响CFU-GM的集落生成率;以DMEM,GM-CSF或W3-CM,HS为组分的体系可稳定地检测卵黄囊细胞CFU-GM的集落生成率。     

造血基质祖细胞在机体局部照射后迁徙规律——2.外周血含量的变化

应用局部照射法对小鼠造血基质祖细胞(CFU-F)在循环血中迁徙规律进行了研究。小鼠在局部照射20Gy后6小时循环血中能检到CFU-F,24小时达到高峰,之后下降,到96小时出现第二高峰,以后逐渐下降,6天趋于消失。正常情况下,循环血中未见CFU-F?;全身大剂量照射后,基质破坏,无再生来源,外周血中也未见CFU-F存在。可见,小鼠在局部照射后,其屏蔽部位造血基质祖细胞很快向受照部位迁徙参与造血重建。     

猪诱导多能干细胞可定向分化为前脑GABA能神经元前体

目的 探讨猪诱导多能干细胞（iPSCs）体外定向分化为GABA能神经元前体的方法体系。方法 猪iPSCs诱导分化为GABA能神经元前体遵循两个阶段,第1阶段,猪iPSCs悬浮培养,第3天时形成类胚体,采用神经诱导培养基NIM（SB431542、DMH1、FGF2）继续诱导,第12天分化为原始神经上皮细胞。第2阶段,使用含Pur、B27的NIM培养基悬浮培养形成神经球,至第21天时形成GABA能神经元前体。CM-DiI标记后,定向移植帕金森（PD）模型大鼠黑质纹状体,检测其在宿主脑内存活、迁移及分化状况。结果 猪iPSCs在饲养层细胞上稳定传代,表达多能性标记OCT4、Nanog、SSEA1和TRA-160,并且核型分析显示没有其他物种来源细胞污染。第12天经诱导分化获得原始神经上皮细胞能够形成玫瑰花环结构,并表达其表面标记物（PAX6、SOX2 和 Nestin）与神经微管蛋白标志物 Tuj1。第 21 天诱导细胞高表达 GABA 能神经元前体的表面特异性抗原NKX2.1和前脑标志物FOXG1。移植8周后,体内可分化为GABA能神经元与多巴胺能神经元,明显改善PD大鼠运动行为。结论 结合无血清培养基筛选法逐步定向诱导猪iPSCs高效分化为前脑GABA能神经元前体,移植后能够显著改善PD大鼠的运动功能障碍,为诱导GABA能神经元前体移植治疗神经损伤疾病奠定基础。     

豚鼠基质祖细胞在造血放射损伤修复中的作用——对辐射损伤后输注骨髓细胞的影响

经心腔给受照4.5Gy豚鼠混输CFU=F和BMC后1、2周,检查股骨骨髓细胞数、CFU-E和CFU-F等指标,发现混输CFU=F组均较只输BMC组者明显增高。认为附加基质输注后,经血循环向受体骨髓迁徙,定居并能迅速增殖,创建适宜的造血微环境,从而促进了造血辐射损伤的再建。     

Isolation of neural progenitors from midbrain of newborn rats

Abstract Objective:To isolate neural progenitors from midbrain of new born rats.Mehtods:Cell groups with cloning capability were obtained from midbrain of new-born rats by using serum-free and floating cell culture.Immunocytochemistry was applied to detect antigens such as BrdU, Nestin and specific markers for mature neural cells.Results:Cell groups isolated from midbrain propagated in succession and shaped neuro-spheres‘.Nestin antigen was expressed in the course of proliferation.After differentiation, epitopes of neu-ron, astrocyte and oligodendrocyte were all found in the neural progenitors-derived cells, the most majority were astrocyte-epitoped cells.Conclusion:Cell groups expressing Nestin isolated from midbrain of new-born rats have properties of propagating, multi-protency differentiating and self-renewal.It is demonstrated that the cell groups are stem-like neural progenitors in the central nervous system, which are qualified for cell therapy of diseases in central nervous system.     

造血基质祖细胞在机体局部照射后迁移规律的研究(1)骨髓基质祖细胞含量的变化

最近发现,造血基质祖细胞是构成造血微环境的主要成分,具有调节造血机能、促进造血再建的重要功能。但对其能否经血循环迁移尚有争论,以至影响到造血疾病的有效治疗。为此,本文观察了造血基质祖细胞在局部照射后骨髓中含量变化的规律及其与血液中含量变化的关系。得出结论为,造血基质祖细胞是可经血循环向造血组织中迁移的。本实验为广泛利用造血基质促进造血功能的恢复创造了条件。     

新生大鼠大脑O-2A细胞系的分离纯化和双向分化培养

目的在体外培养条件下获取纯度较高的O-2A细胞系细胞并探索其分化规律。方法根据星形胶质细胞、O-2A祖细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同，采用振荡法和差速贴壁法，结合1型星形胶质细胞条件培养液，培养、分离纯化O-2A祖细胞。结果纯化的O-2A祖细胞胞体呈椭圆形，具有典型的双极突起；经免疫细胞化学染色鉴定，细胞的纯度达90％。在有血清的情况下，O-2A祖细胞定向分化为2型星形胶质细胞；在无血清的情况下，定向分化为少突胶质细胞。结论通过振荡法和差速贴壁法，结合1型星形胶质细胞条件培养液分离纯化培养的O-2A祖细胞具有双分化潜能。     

人胚胎干细胞体外定向诱导分化胰腺前体细胞及胰岛细胞移植治疗NOD/SCID糖尿病小鼠

目的 探讨人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,hESCs）体外定向诱导分化胰腺前体细胞及胰岛细胞移植治疗非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷（non-obese diabetic/severe combined immunodeficient,NOD/SCID）小鼠的可行性.方法 体外分4阶段诱导hESCs定向分化为胰岛细胞：①诱导分化形成定型内胚层;②诱导胰腺细胞定向分化;③扩增胰腺前体细胞;④促进胰岛细胞成熟.观察诱导各阶段细胞形态变化、免疫荧光鉴定胰十二指肠同源异型盒基因（PDX-1）、胰高糖素（glucagon）、胰岛素（insulin）、C肽（C-peptide）、葡萄糖转运子2（Glut-2）的表达.3阶段及4阶段分化形成的细胞分别植入链脲菌素（streptozotocin,STZ）诱导形成的NOD/SCID糖尿病小鼠一侧附睾脂肪垫内,观察血糖变化.结果 hESCs诱导4阶段细胞表达胰高血糖素、胰岛素、Glut-2;共表达PDX-1和C肽;流式鉴定诱导4阶段胰岛素阳性细胞为17.1％;体外检测有葡萄糖刺激的胰岛素释放反应;3阶段及4阶段分化形成的细胞分别植入NOD/SCID 糖尿病小鼠体内可逆转其高血糖至少12周.结论 体外定向诱导hESCs分化形成的胰腺前体细胞及胰岛细胞分别植入NOD/SCID小鼠可逆转其高血糖.     

脐血浆对正常骨髓造血刺激活性的研究

为探讨脐血浆中造血活性物质的作用,用半固体培养法对混合脐血浆、重组人造血生长因子及正常成人混合血清在体外对正常骨髓造血祖细胞集落形成的情况进行了比较.结果显示,成人混合血清对粒单祖细胞及红系祖细胞的集落形成无明显的刺激活性,而混合脐血浆对粒单祖细胞及红系祖细胞的集落形成具有较高水平的刺激活性,其作用与小牛血清加人重组GM-CSF相当(P>005,差异无显著性).以上结果提示脐血浆中含有较高水平的造血活性物质     

不同方法对未成熟树突状细胞体外诱生的研究

目的筛选最佳体外诱生大鼠未成熟树突状细胞(imDC)的方法。方法用低剂量(0.2ng/mL)粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombination rat GM-CSF,rrGM-CSF)体外诱导imDC;用常规剂量(5ng/mL)的GM-CSF加大鼠白细胞介素-4(recombinationratIL-4,rrIL-4)(5ng/L)体外诱导imDC;rrGM-CSF rrIL-4再加大鼠白细胞介素-10(recombination rat IL-10,rrIL-10)(10ng/mL)体外诱导imDC;第13天收获细胞,观察形态;流式细胞仪检测表面抗原;混合淋巴细胞培养(MLR)检测DC刺激同种异体T淋巴细胞的能力,培养上清白细胞介素-12(IL-12)的浓度和细胞增殖情况等方面进行考察,对比筛选。结果低剂量GM-CSF组和IL-10组DC与GM-CSF IL-4组DC相比,符合imDC的特点;GM-CSF IL-4组DC表现成熟DC的特点,但细胞增殖情况低剂量GM-CSF组明显低于GM-CSF IL-4 IL-10组,两组相比差别具有显著性。结论GM-CSF IL-4 IL-10组是最佳诱导imDC的方法。     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞增殖及成熟状态的研究

目的:观察CITP患者骨髓巨核祖细胞增殖及成熟状态。方法:采用血浆凝块法进行培养,经SZ-21单抗和免疫组化染色后计数巨核祖细胞集落数,用电子计算机图像分析仪测定巨核细胞直径、面积。结果:CITP患者巨核祖细胞集落数与对照组无明显差异,但面积直径值低于对照组;分组比较,骨髓涂片巨核细胞数正常组巨核祖细胞集落数低于对照组。相关性分析,巨核祖细胞集落数与骨髓涂片巨核细胞数呈正相关,而与外周血小板计数、病程长短无相关。结论:(CITP患者巨核祖细胞存在成熟障碍,部分患者存在增殖障碍,集落数与骨髓涂片巨核细胞数多少呈正相关,与血小板计数、病程长短无相关。