采用多克隆与单克隆辣根过氧化酶抗体制备多种系性PAP的初步研究

本文研制出一种新的多种系性PAP复合物。采用双扩、参比扩散及免疫沉淀试验证实辣根过氧化酶(HRP)、兔抗HRP及鼠单克隆抗HRP三者同存于一分子PAP复合物中。将其用于ELISA及免疫病理染色,效果与普通兔PAP及鼠单克隆PAP相近,但可通过两种不同桥抗体,与作为第一抗体的兔IgG及鼠(单克隆)IgG连接,代替兔PAP与鼠单克隆PAP进行染色,在不改变反应方式的情况下,能部分克服PAP复合物在应用中的种系限制。     

恶性组织细胞增生症铁蛋白免疫组织化学研究

30例恶性组织细胞增生症尸检病例,采用双PAP法对瘤细胞内铁蛋白的分布进行了研究。同时还对S-100蛋白、α1-胰蛋白酶、α1-胰糜蛋白酶作了免疫组织化学观察。初步结果表明:大多数病例中的瘤细胞铁蛋白阳性。这是研究恶性组织细胞增生症瘤细胞生物学行为的一个尚未见报道的所见。     

加压素神经元在下丘脑的分布及其与垂体后叶的关系——辣根过氧化物酶(HRP)与免疫组化双重标记法研究

本文应用HRP与免疫组化结合的方法研究加压素神经元在下丘脑的分布及其与垂体后叶的关系,结果表明:下丘脑视上核、室旁核、视上核后部、视交叉上核、前连合核、终纹床核、环形核、穹窿核、视前区、下丘脑内、外侧区、室周灰质、室管膜层及下丘脑一些血管周围均有加压素神经元分布。室管膜层、视上核的软膜面及一些大血管周围有丰富的神经元突起,有些甚至接触到脑脊液或游离到血管腔中。除视交叉上核外,上述其余核区均有发纤维投射到垂体后叶。本文结果提示:加压素可能通过三种途经释放:①释放到垂体后叶;②直接释放到脑脊液;③直接释放到下丘脑的血管腔内。     

PAP─ELISA法测定乙型肝炎病毒X基因

ＰＡＰ┐ＥＬＩＳＡ法测定乙型肝炎病毒Ｘ基因冯志华周永兴姚志强李光玉焦建中（第四军医大学唐都医院传染科西安７１００３８）关键词乙肝病毒Ｘ抗原ＥＬＩＳＡ辣根过氧化物酶抗体测定中图号Ｒ５１２．６我们用乙型肝炎病毒Ｘ基因抗体（ＨＢｘＡｂ）和辣根过氧化物酶抗体...     

大鼠心内P物质免疫反应阳性神经元——PAP法和IGSS法研究

应用Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ ＰＡＰ法和Ｄａｎｓｃｈｅｒ免疫金银法（ＩＧＳＳ法），在ＳＤ大鼠心脏石蜡切片，对心内Ｐ物质（ＳＰ）神经节细胞进行了免疫细胞化学研究。结果发现：在大鼠心内存在许多ＳＰ免疫反应阳性神经纤维，在心房后壁存在少数ＳＰ免疫反应阳性神经细胞。ＳＰ免疫反应阳性神经细胞通常多为椭圆形中小细胞，与感觉传导有关，ＩＧＳＳ法比ＰＡＰ法更为敏感。     

抗人间充质干细胞单克隆抗体的制备及生物学特性研究

目的:制备抗人间充质干细胞(hM SC s)的单克隆抗体,为鉴定、分选hM SC s奠定基础。方法:以多供体hM SC s免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并以间接免疫荧光法、免疫组织化学法和流式细胞术等检测单克隆抗体在细胞及组织中的表达。结果:建立了5个能分泌抗人间充质干细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该组单抗能与人间充质干细胞特异性结合,而对所检测的人间充质和非间充质来源的组织和细胞均未见交叉反应,5个单抗的相对亲和力分别为:ZUB1 1×106、ZUB4 1×105、ZUC 3 1×106、ZUE 12 1×105、ZUF10 1×105;表位分析:ZUB1、ZUE 12、ZUF10针对相同的表位,ZUC 3和ZUB4则分别针对不同的表位。流式细胞分析显示分离培养的hM SC s阳性表达率为ZUB1 87.39%、ZUB4 88.07%、ZUC 3 88.12%、ZUE 12 69.89%和ZUF10 83.67%。结论:5株杂交瘤分泌的单克隆抗体均能与人间充质干细胞发生特异性结合,为深入研究hM SC s的生物学功能奠定了基础。     

几种免疫组化显色系统的选用与比较

目的:比较不同显色系统对免疫组织化学结果的影响.方法:免疫组化SP法,显色剂分别为3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethy1-carbazole,AEC)、二氨基联苯氨(Diaminobenzidin,DAB)和四氯萘酚(4-Choro-Naphthol,4-CN);复染剂分别为苏木素(hematoxylin)、甲基绿(methy green)和核快红(nuclear fast red).结果:在抗体浓度、孵育时间等条件完全相同的情况下,AEC 苏木素和4-CN 核快红显色系统灵敏度最高、背景清晰,DAB 苏木素系统背景有非特异性着色,效果最差.结论:在常规免疫组化DAB显色系统难以显示抗原或背景干扰严重时,应考虑选用AEC、4-CN系统中的一种.     

人红细胞膜胆碱酯酶的分离、纯化及其单克隆抗体的制备

胆碱酯酶(AChE)分为真性胆碱酯酶(EC3·1·1·7)和假性胆碱酯酶(EC3·1·1·8)。两者在底物专一性、组织分布、生理功能等方面皆不相同。我们从人红细胞膜上提取、分离和部分纯化了 AChE 作为抗原,免疫小鼠,经细胞融合,筛选出了几株分泌抗AChE 的杂交瘤株,拟建立人乙酰胆碱酯酶的免疫测定法。现总结如下。     

抗结直肠癌缺陷蛋白合成肽单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备针对结直肠癌缺陷（ｄｅｌｅｔｅｄ ｃｏｌｏｒｅｃｔａ ｃａｒｅｉｎｏｍａ,ＤＣＣ）蛋白抗原决定簇多肽的单克隆抗体。方法 用合成的ＤＣＣ蛋白抗原决定簇多肽（氨基酸序列从１９５～２０４）为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经细胞融合,有限稀释法筛选出能分泌抗ＤＣＣ合成肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体进行了初步鉴定。结果 细胞融合率７５％,经３次亚克隆,最后保留一株能稳定分泌抗ＤＣＣ民肽单     

抗人IgA单克隆抗体在免疫单扩散中的应用

本实验应用杂交瘤技术建立两株抗人IgA单克隆抗体(McAbs),即AlA10和AlC9。此两株mcAbs针对人IgA的两个不同抗原决定簇,经等量混合后,在含有2％的聚乙二醇6000(PEG 6000)的1.5％琼脂糖免疫单扩散试验中,与多克隆抗体(PcAb)同时检测40份未经稀释的人血清样品,两者的相关性好(r=0.9493、P<0.001)。说明AlA10和AlC9混合后可替代PcAb在免疫单扩散中应用。     

抗宫颈癌单克隆抗体AU_（14－1）的辣根过氧化物酶标记

应用过碘酸钠氧化改良法成功地将辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记抗宫颈癌单克隆抗体ＡＵ＿（１４－１），其质量经鉴定符合要求，适用于建立ＡＵ＿（１４－１）－ＥＬＩＳＡ，以测定人血清宫颈癌抗原。     

关节手术病人血浆凝血酶-抗凝血酶复合物、纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物的研究

目的 探讨髋、膝关节手术病人血栓前状态和血液中凝血-纤溶系统的变化.方法 每组病人术前及术后1、4、7、10天检测TAT、PAP、血凝常规等指标;术前及术后第7天～10天应用彩色多普勒超声仪监测DVT.结果 ①手术组共有18例(40.9%)术后并发DVT,保守组共有9例(22.0%)并发DVT,对照组无DVT发生;②手术组术后并发DVT者术前及术后TAT均显著升高,而PAP水平较低;③术后并发DVT者与术前PAP/FB比值相关.结论 ①术前TAT检测可作为术后是否并发DVT的一项较有意义的预测指标.②术前较低的纤溶水平可能成为髋、膝关节置换术后DVT发病率高的原因之一.③术前血浆PAP/FB比值有望成为预测术后DVT的有用指标.     

一组抗肺癌单克隆抗体的产生及其鉴定

以肺癌细胞株和组织为免疫原制备4株抗肺癌McAbs,其中LC86a H8和LC86bD7可分别识别肺鳞癌不同亚类抗原,LC86a C5可识别肺腺癌某一亚类抗原,LC86a E4可识别某些肺鳞癌和肺腺癌的共同抗原。将这4株McAbs组成一组使用,可提高肺癌的检出率。     

抗乳腺癌人单克隆抗体的制备及其应用的实验研究

用乳腺癌术后腋下淋巴结淋巴细胞与人鼠骨髓瘤细胞ＳＨＭ－Ｄ_（３３）融合，获得分泌抗乳腺癌人单克隆抗体杂交瘤细胞株ＣＭ－１。用ＰＡＰ免疫组化法分析，ＣＭ－１与被检乳腺癌均呈阳性反应，但与乳腺纤维瘤和被检其他肿瘤组织及正常组织均无反应。ＣＭ－１用于裸鼠移植瘤放免显像（ＲＩＩ）能进行肿瘤定位。ＲＩＩ对乳腺癌志愿者能初步达到乳腺癌腋下淋巴结转移灶定位。ＣＭ－１－药物（平阳霉素；ＰＹＭ）偶联物对裸鼠移植乳腺癌生长的抑瘤率为９５％，而同等剂量的游离药物为５８％。显示了抗乳腺癌人单抗ＣＭ－１的特异性及其在临床诊断和治疗乳腺癌中的光明前景。     

雷公藤巴布剂对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用

用Ｆｒｅｕｎｄ＇ｓ完全佐剂诱发大鼠产生佐剂性关节炎（ＡＡ）,以继发性反应左后足跖的肿胀度、前肢、耳和尾部病变的发生率以及免疫器官胸腺、脾脏指数为指标,观察了雷公藤巴布剂对大鼠ＡＡ的治疗作用。结果表明,雷公藤巴布剂对ＡＡ有明显的治疗作用,其效果较等剂量口服的片剂及浸膏剂显著。     

抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。