hsa-miR-23a-3p靶向TGFβ2对急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞骨架重组的影响

目的:探究hsa-miR-23a-3p靶向转化生长因子β2(TGFβ2)对急性淋巴细胞白血病细胞株CEM/C1增殖、凋亡、侵袭及细胞骨架重组的影响.方法:将CEM/C1细胞随机分为4组:Control组、mimic组、pcDNA-TGFβ2组和mimic+TGFβ2组,采用Li-pofectamine 2000分别转染mimic对照、miR-23a-3p mimic、TGFβ2过表达质粒及共转染miR-23a-3p mimic+TGFβ2过表达质粒.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-23a-3p、TGFβ2表达;荧光素酶报告实验验证miR-23a-3p与TGFβ2的靶向关系;克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭;微管形成实验检测细胞微管形成的结节数;Western blotting法检测 Ki67、Survivin、Caspase-3、Bax、Bcl-2、VEGF 蛋白表达.结果:与 Control 组相比,mimic 组miR-23a-3p表达、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量和Bax/Bcl-2比值升高,TGFβ2mRNA表达、克隆形成率、微管形成结节数及Ki67、Survivin、VEGF蛋白表达量降低,侵袭细胞数减少(均P＜0.05),pcDNA-TGFβ2组与mimic组各指标变化相反(均P＜0.05);与pcDNA-TGFβ2组比较,mimic+TGFβ2组克隆形成率、微管形成结节数和Ki67、Survivin、VEGF蛋白表达量降低,细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量及Bax/Bcl-2比值升高,侵袭细胞数减少(均P＜0.05).荧光素酶报告实验证实miR-23a-3p和TGFβ2存在靶向关系.结论:hsa-miR-23a-3p通过靶向下调TGFβ2表达抑制人白血病细胞增殖、侵袭、细胞骨架重组,促进细胞凋亡.     

miR-34a-5p过表达靶向抑制MET对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响

目的探究miR-34a-5p过表达对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响。方法荧光素酶实验检测miR-34a-5p与MET靶向关系。构建MET pcDNA载体过表达MET,将miR-34a-5p与pcDNA-MET单独或联合转染HepG2,将细胞随机分为4组:Control、mimic、MET和mimic+MET组进行后续实验。克隆形成法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell检测细胞侵袭、Western blot检测Ki67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平;构建肝癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为Control组和mimic组,检测裸鼠30 d肿瘤体积变化和第30天肿瘤重量,通过免疫组化方法检测Ki67阳性表达率、TUNEL染色细胞凋亡。结果结果表明,miR-34a-5p和MET存在直接靶向作用关系。与Control组相比较,mimic组细胞克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、PCNA蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Ca...     

调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在H...     

环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)通过调控miR⁃181d⁃5p/miR⁃199a⁃5p促进口腔鳞状细胞癌进展

目的：探讨环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞生物学功能中的作用及机制。方法：收集 30 例 OSCC 患者的临床组织,采用实时定量 PCR 检测 circ- FAT1、miR-181d-5p及miR-199a-5p在OSCC组织和细胞中的表达。通过StarBase和双荧光素酶报告基因实验验证 miR-181d- 5p/miR-199a-5p与circFAT1的靶向关系。利用CCK-8、Transwell、流式细胞术检测 circFAT1-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴对于 OSCC细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和周期的影响。采用免疫印迹法结合LY294002处理检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果：在OSCC中circFAT1表达升高,miR-181d-5p、miR-199a-5p表达下降(P ＜ 0.001)。circFAT1可以同时靶向miR- 181d-5p和miR-199a-5p(P ＜ 0.01)。沉默circFAT1、过表达miR-181d及miR-199a-5p抑制了OSCC细胞活力、迁移、侵袭和周期进展、诱导凋亡,同时抑制PI3K/Akt/mTOR 通路的激活;过表达circFAT1、抑制miR-181d-5p及miR-199a-5p则发挥相反作用 (P ＜ 0.05)。miR-181d-5p、miR-199a-5p可部分逆转circFAT1对OSCC细胞生物学功能的影响(P＜0.05)。LY294002预处理逆转了过表达circFAT1对PI3K/Akt/mTOR通路和细胞活力的影响(P ＜ 0.05)。结论：circFAT1通过调控miR-181d-5p和miR-199a-5p 促进OSCC细胞恶性进展。     

miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路调节滋 养层细胞的增殖、浸润和凋亡

目的 探讨miR-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法 培养滋养 层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqPCR法检测3种细胞中miR-34a-5p的表达差 异。根据对HTR-8/Svneo细胞的不同处理进行如下分组：无处理的HTR-8/Svneo细胞（对照组）;miR-34a-5p拟似物mimic转染 细胞（mimic组）,pcDNA-CDK6和mimic共转染HTR-8/Svneo细胞（pcDNA-CDK6+mimic组）,miR-34a-5p抑制剂inhibitor转 染HTR-8/Svneo细胞（inhibitor组）。MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定caspase 3活性检测细胞凋亡水平,Transwell实验检 测细胞浸润能力;Western blot 检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK6,凋亡标记物cleaved-caspase 3,浸润标记物MMP-9的表达; 荧光素酶报告基因实验确认miR-34a-5p对CDK-6的直接靶向关系。结果 过表达miR-34a-5p抑制HTR-8/Svneo细胞的增 殖活性（P=0.000）和浸润能力（P=0.049）,下调细胞中MMP-9（P=0.004）和CDK6（P=0.014）的表达水平,上调caspase 3活性 （P=0.018）和cleaved caspase 3的表达水平（P=0.003）;CDK6是miR-34a-5p的靶基因,过表达CDK6削弱miR-34a-5p对细胞 增殖（P=0.000）、凋亡（P=0.015）和浸润（P=0.046）的作用;使用IFG-1激活PI3K/AKT通路部分逆转miR-34a-5p对细胞增殖 （P=0.011）、凋亡（P=0.004）和浸润（P=0.002）的作用。结论 miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路激活调节滋 养层细胞的增殖,浸润和凋亡。     

微RNA-133a-3p靶向调控转化生长因子-β1/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微RNA(miR)-133a-3p靶向调控转化生长因子-β₁(TGF-β₁)/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 选择2020年2月至2021年2月焦作市人民医院皮肤科收治的瘢痕疙瘩患者29例为研究对象,手术切取瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤组织,分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NF)。取对数生长期KF细胞,随机分为空白对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-133a-3p组、miR-133a-3p+pcDNA3.1组、miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β₁组;空白对照组细胞不做任何转染,miR-NC组细胞转染miR-NC,miR-133a-3p组细胞转染miR-133a-3p mimic, miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1,miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β₁组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1-TGF...     

异丙酚通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞增殖、迁移及凋亡

目的:探讨异丙酚是否通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞的增殖、迁移及凋亡。方法:将胃癌MKN-28细胞系分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、异丙酚组、miR-NC组、miR-133a-3p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-133a-3p组、si-NC组、si-FTL组、异丙酚+anti-miR-NC+si-NC组、PBS+anti-miR-NC+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-FTL组。应用RT-qPCR检测miR-133a-3p和铁蛋白轻链(FTL)mRNA的表达水平;应用MTT法与克隆形成实验测细胞增殖;应用流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡及蛋白表达水平;应用双荧光素酶报告实验检测miR-133a-3p与FTL的靶向关系;应用划痕实验与Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与PBS组比较,异丙酚组细胞活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、迁移、侵袭细胞数均减少(P<0.05);细胞凋亡率、p53、Bcl-2相...     

miR-30a-5p靶向URGCP调控胃癌细胞凋亡和糖酵解的机制研究

目的:探究miR-30a-5p通过靶向细胞增殖调控基因4(Up-regulated gene 4/Up-regulator of cell proliferation,URG4/URGCP)对胃癌(Gastric cancer,GC)细胞凋亡和糖酵解的影响,并阐明其潜在调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-30a-5p和URGCP在正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和GC细胞(AGS、HGC-27和SGC-7901)中的表达。选用HGC-27细胞作为后续实验研究对象并随机分为六组,除Control组外,其他组细胞分别转染miR-NC、miR-30a-5p mimic、pcDNANC、pcDNA-URGCP和pcDNA-URGCP+miR-30a-5p mimic。CCK-8实验用于检测各组细胞增殖活力,流式细胞术用于检测各组细胞凋亡水平。三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)和乳酸检测试剂盒检测各组细胞乳酸生成和ATP水平。此外,双荧光酶素报告实验用于验证miR-30a-5p和URGCP之间的靶向关系。结果:相比较正常胃黏膜上皮细胞...     

lncRNA TUG1靶向调控miR-199a-3p对高糖诱导的足细胞损伤的作用与机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)是否通过靶向miR-199a-3p调控高糖诱导的足细胞损伤.方法:将MPC5细胞分为NG 组(正常对照)、HG 组(高糖)、HG+pcDNA-NC 组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-199a-3p组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-NC组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-199a-3p组.RT-qPCR检测TUG1、miR-199a-3p表达,CCK-8法测定细胞增殖,Western blotting分析Podocin、Nephrin表达,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒测定IL-1β、TNF-α、MDA、LDH水平.结果:与HG+pcDNA-NC组或HG+anti-miR-NC组比较,HG+pcDNA-lncRNATUG1 组或HG+anti-miR-199a-3p组MPC5细胞增殖率、Podocin、Nephrin表达量升高,凋亡率、IL-1β、TNF-α、MDA、LDH 水平降低(P＜0.05).TUG1 靶向调控miR-199a-3p 的表达.与 HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-NC组相比,HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-199a-3p组减少MPC5细胞增殖率、Podocin、Nephrin 表达量,增加 miR-199a-3p、凋亡率、IL-1β、TNF-α、MDA、LDH水平(P＜0.05).结论:TUG1通过靶向miR-199a-3p,促进高糖诱导的足细胞的增殖,减轻细胞凋亡、炎症和氧化应激.     

MiR-125b-5p抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase(http://starbase. sysu.edu.cn/)生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcD...     

青藤碱对胃癌细胞SGC-7901生物学行为的影响及机制

目的探究青藤碱(SIN)对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其机制。方法正常培养人胃正常黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌细胞SGC-7901作对照组(Control),分别用0.5、1.0、2.5 mmol/L SIN处理细胞48 h,并设立阳性对照(50μmol/L塞来昔布),采用CCK-8法检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;经在线预测软件分析miR-33a-5p和乳酸脱氢酶A(LDHA)靶向关系,并通过双荧光素酶报告确认;将miR-33a-5p mimics转染SGC-7901细胞,采用RT-qPCR检测miR-33a-5p和LDHA mRNA的表达;重组构建过表达LDHA载体转染SGC-7901细胞,用0.5、1、2.5 mmol/L SIN处理细胞48 h,检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况。结果与Control组相比,SIN可提高SGC-7901细...     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的 探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法 将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果 与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G₀/G₁周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P &...     

上调miR-378a-3p对血管瘤内皮细胞生长和侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-378a-3p（miR-378a-3p）对血管瘤内皮细胞（HemECs）增殖、侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法 HemECs细胞随机分为对照组、miR-NC组及miR-378a-3p组;对照组为常规培养HemECs细胞,miR NC组和miR-378a-3p组HemECs细胞分别在脂质体（Lipofectamine RNAIMAX）的介导下转染阴性对照以及miR-378a-3p模拟物。荧光定量PCR（qPCR）检测miR-378a-3p的表达量,细胞计数（CCK 8）检测各组细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移;在线数据库TargetScan预测以及双荧光素酶报告基因验证miR-378a-3p与驱动蛋白超家族2A（KIF2A）的靶向关系。 〖HTH〗结果〓〖HTK〗与对照组相比,miR-378a-3p模拟物能明显上调HemECs细胞中miR-378a-3p的表达量（P＜0.05）;上调miR-378a-3p的表达量抑制HemECs细胞增殖,降低其侵袭、迁移的能力（P＜0.05）;KIF2A是miR-378a-3p下游靶基因之一。结论 miR-378a-3p可能通过靶向KIF2A抑制HemECs细胞的增殖、侵袭及迁移。     

低氧经miR-130a-3p靶向Sirt7对人滋养细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的 探究低氧条件下miR-130a-3p靶向去乙酰化酶7(Sirt7)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 以HTR-8/SVneo细胞为研究对象，将miR-130a-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor-NC转染至细胞中或联合Sirt7抑制剂97491干预，采用低氧(1%O₂)处理48 h, qRT-PCR检测细胞中miR-130a-3p及Sirt7 mRNA表达水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot检测细胞中Sirt7、HIF-1α、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平；TargetScan Human 7.1在线软件和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-130a-3p与Sirt7的靶向关系。结果 低氧可上调HTR-8/SVneo细胞中miR-130a-3p表达水平，下调Sirt7 mRNA和蛋白表达水平；miR-130a-3p低表达可升高Sirt7 mRNA表达水平；提高细胞迁...     

MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨microRNA-199a-3p (miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响?方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照?转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析?结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡?     

MiR-148a-3p通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞转移

目的:MicroRNA (miRNA/miR)参与结肠癌各种生物学过程。目前,miR-148a-3p在结肠癌中的作用还不完全清楚。本研究旨在探讨miR-148a-3p对结肠癌细胞转移及侵袭能力的影响及机制。方法:实时定量PCR （qRT-PCR）检测结肠癌细胞系中miR-148a-3p及SRPK2 mRNA的表达,Western blot检测SRPK2 蛋白的表达。使用miR-148a-3p mimic, miR-148a-3p inhibitor调节HCT-116及SW480细胞中miR-148a-3p的水平。通过划痕及transwell实验检测miR-148a-3p对结肠癌细胞迁移及侵袭能力的影响。生物信息学分析预测miR-148a-3p的靶点,荧光素酶报告实验验证。Western blot及qRT-PCR检测miR-148a-3p对结肠癌细胞上皮-间质转化及SRPK2表达的影响。结果:与正常结直肠粘膜细胞FHC相比,结肠癌细胞系中miR-148a-3p水平降低（P<0.05）。结肠癌细胞中miR-148a-3p过表达可以明显抑制结肠癌细胞转移及侵袭能力（P<0.05）。相反的,敲低miR-148a-3p结肠癌细胞转移及侵袭能力增强（P<0.05）。荧光素酶报告系统结果提示SRPK2是miR-148a-3p的直接作用靶点。过表达miR-148a-3p可以抑制SRPK2在结肠癌中的表达（P<0.05）,但是敲低miR-148a-3p时SRPK2表达明显增高（P<0.05）。结论:MiR-148a-3p可能通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞的转移及侵袭能力。MiR-148a-3p可能成为诊断和治疗结肠癌的靶点之一。     

miR-125a-3p靶向作用P2RX7抑制糖尿病肾病小鼠肾纤维化发展

目的探究miR-125a-3p靶向作用P2RX7对糖尿病肾病(DN)小鼠肾纤维化发展的影响。 方法60只小鼠均分为对照组、模型组、miR-125a-3p NC组和miR-125a-3p mimic组,构建DN小鼠模型,腹腔注射miR-125a-3p NC或mimic。qRT-PCR检测肾组织miR-125a-3p表达,Western blotting检测P2RX7、Col-I、α-SMA蛋白表达,ELISA检测血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN),HE染色和Masson染色检测肾脏病理改变和胶原蛋白体积分数(CVF),双荧光素酶报告检测miR-125a-3p与P2RX7的靶向关系。 结果与对照组比较,模型组和miR-125a-3p NC组P2RX7、Cr、BUN和CVF、Col-I和α-SMA蛋白升高,miR-125a-3p表达降低(P＜0.05);与模型组和miR-125a-3p NC组比较,miR-125a-3p mimic组上述趋势得到逆转(P＜0.05)。miR-125a-3p可与P2RX7靶向结合(P＜0.05)。 结论miR-125a-3p高表达靶向抑制P2RX7蛋白,缓解DN小鼠的肾纤维化,保护肾功能。     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。