半巢式聚合酶链反应扩增全血中梅毒螺旋体polA基因

目的探讨半巢式聚合酶链反应（PCR）扩增梅毒螺旋体（Tp）的DNA多聚酶Ⅰ基因（polA）以探讨检测全血标本中微量Tp的可行性。方法应用半巢式PCR和常规PCR分别扩增165例可疑梅毒及非梅毒患者全血中Tp的polA,与血清学方法比较,探讨半巢式PCR方法在扩增全血中Tp DNA的意义。结果待测的165例标本中,与血清学方法比较,半巢式PCR检测Tp的敏感性和特异性分别为62.7%和95.9%,两者符合率为82.4%;两种PCR方法检测结果差异有显著性（P〈0.01）,半巢式PCR敏感性远高于常规PCR。结论半巢式polA PCR检测全血中Tp较常规PCR灵敏,是血清学方法诊断梅毒的有效补充,但其检测的灵敏度仍有待进一步提高。     

从微量血中快速制备线粒体DNA片段

目的 建立从微量血中快速制备线粒体DNA(mtDNA)片段。方法取50μl抗凝血和常规酶解法提取的血DNA,同时扩增核DNA(nDNA)上的基因片段和mtDNA上的基因片段,华美公司生产的RedyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统进行比较,PCR相对定量分析比较这3种方法提取的mtDNA片段的纯度。结果RedyrPCR(tm)微量全血DNA纯化系统得到的mtDNA和常规酶解法提取的mtDNA有nDNA污染,而作者建立的方法获得的mtDNA纯度较高。结论同时与该法简便快捷地排除了nDNA的污染,适合于对mtDNA进行PCR分析和研究。     

嗜人T细胞白血病病毒Ⅰ型的PCR检测方法研究

目的 建立嗜人T细胞白血病病毒I型(HTLV-I) PCR检测方法.方法采集成人T淋巴细胞白血病(ALT)病人全血,分离外周血单核细胞(PBMCs),并与健康人PBMCs共培养分离HTLV-I;针对HTLV-I的gag和tax基因设计引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测HTLV-I.结果 凝胶电泳检测到HTLV-I前病毒DNA的gag和tax片断.结论 PCR法可快速、准确检测嗜人T细胞白血病病毒.     

数字PCR在肿瘤诊疗中的应用进展

数字PCR是一种新兴的核酸检测技术,具有灵敏度高、可定量分析的特点。基于数字PCR的液态活检,可用于极微量核酸样本及稀有突变位点的检测,尤其适用于肿瘤治疗过程中需多次反复取样的情况,实现动态监测,为肿瘤诊断、复发提供及时的基因信息。     

快速血糖仪与全自动生化分析仪检测血糖的对比分析

目的:评估末稍血及静脉血血糖仪检测与全自动生化分析仪血清葡萄糖氧化酶法血糖检测的相关性。方法:对120例成年来自我院正常健康体检者和确诊糖尿病人,年龄性别不限,用京都GT640型血糖测试仪测定末梢血微量法、静脉全血微量法,同时用全自动生化分析仪静脉血葡萄糖氧化酶法对血糖进行测定。结果:末梢血微量法、静脉全血微量法、全自动生化仪结果分别为(9.7±4.0)mmol/L、(9.9±3.9)mmol/L、(11.5±4.1)mmol/L,京都血糖仪测定末梢血微量法、静脉全血微量法两组结果间无显著差异(P0.05),而两组血糖仪结果和静脉血清在生化仪上血糖结果均有一定的差异(P0.05),存在着方法学误差[1]。结论:快速血糖仪体积小、操作简单、血糖检测速度快、而且用血量少、痛苦小,适用于已确诊糖尿病患者血糖水平的监测。     

检测弓形虫的PCR法和ELISA法的比较

目的:建立快速、敏感、特异的PCR方法,用于检测弓形虫感染。方法:选择弓形虫B1基因194bp片段作为扩增模板,优化反应条件,并测定其敏感性和特异性;以104弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠,用PCR法检测感染动物全血DNA,并与ELISA法检测血清IgM进行比较。结果:本实验中,PCR方法的检测阈值为0.2pg弓形虫DNA,并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。用PCR法检测感染动物全血DNA,感染后第2d即可测出阳性,总阳性数为1(313/15);而ELISA法检测血清IgM则到感染后第6d才测出阳性,总阳性数为2(2/15)。经统计学检验,二者存在显著差异(P<0.05)。结论:PCR是一种快速、敏感、特异的检测方法,可用于弓形虫病的早期诊断。     

FDA批准罗氏诊断针对血浆和器官捐献进行HIV-1筛查

罗氏诊断最近宣布,美国食品和药品监督管理局(FDA)已经批准该公司针对血浆和器官捐献进行人免疫缺陷病毒(HIV - 1 )体外定性检测的CobasAmoliScreenHIV - 1检测(1 5版本)。这个检测已经在美国和其他国家用于全血捐献的筛查。血浆是全血的一个组分,许多的蛋白质制剂等都来源于此,包括治疗休克、血友病、免疫缺陷综合征、烧伤和其他一些症状的制剂。罗氏公司的CobasAmoliScreenHIV - 1检测(1 5版本)是第一个批准的核酸筛查检测,可以用于生产血浆制剂的公司在实验室检测。罗氏公司拥有聚合酶链反应技术(PCR)的全球专利,利用该技术可…     

微量手指全血与静脉血清反向间接血凝法检测HBsAg的比较

本文采用微量手指全血,不分离血清,直接在血凝板上一次完成RPHA法检测HBsAg,并与静脉血清法RPHA法所测结果进行比较.以期用微量手指全血替代静脉血法,现介绍如下:材料和方法1 标本来源 106例肝病患者.同一患者手指取全血25μl,静脉取血2ml.2 检测试剂和操作方法 冻干HBsAg诊断血球和稀释液(北京生物制品研究所提供),溶解手指全血中红细胞的溶解液为洁净蒸馏水.     

耐药基因和两种表型试验检测诱导克林霉素耐药葡萄球菌

目的调查微量肉汤稀释法、纸片扩散试验(2种表型试验)检测葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的现状(及其)耐药基因mecA、ermA、ermB、ermC、msrA在本地区的流行分布,指导临床合理使用抗生素。方法通过革兰染色、凝聚因子、凝固酶试验、触酶试验和Vitek 2 compact鉴定菌株。PCR检测细菌的mecA、ermA、ermB、ermC、msrA耐药基因。结果微量肉汤稀释法、纸片扩散试验检测葡萄球对克林霉素诱导耐药与基因检测有很好的一致性。ermC为葡萄球菌诱导克林霉素耐药的优势基因。ermC、ermA在S.aureus、S.epidermidi、S.haemolytic所占比例分别75.0%(81/108)、65.9%(91/138)、74.2%(92/124);21.3%(23/108)、22.5%(31/138)、15.3%(19/124)。结论 2种表型方法检测葡萄球对克林霉素诱导耐药试验与PCR检测耐药基因方法符合率高,微量肉汤稀释法可用于自动化仪器、纸片扩散试验可用于常规试验。     

探讨Real-Time PCR 方法在SARS早期诊断中的应用价值

SARS的早期诊断是治疗成功和减少死亡率的关键。Real-Time-PCR(荧光定量)检测方法是一灵敏度较高的分子生物学诊断方法。Real-Time PCR检测具有精度高、取样量微小、灵敏度高、稳定性好、检测时间短、检测结果可在10～10~(12)拷贝范围,并可以自动量化等特点,国外曾用于检查口蹄疫、流感、麻疹、炭疽病等。研究发现,Real-Time PCR检测方法亦可用于SARS微量病毒的检测,为SARS的早期诊断提供客观依据。本文就Real-Time PCR检测方法在SARS诊疗中的应用价值综述如下。     

不同检材微量血间日疟原虫PCR检测模板制备方法的研究

目的 探寻不同检材微量血间日疟原虫PRC检测模板制备的方法.方法 全血标本采用酚/氯仿抽提法、洗涤沉淀法、Chelex煮沸法和洗涤水煮法;滤纸干血滴及厚血膜标本以Chelex煮沸法和洗涤沉淀法制备模板.以间日疟原虫特异性引物作PCR扩增检测模板制备的效果.结果 采用上述4种不同的方法制备的全血间日疟原虫DNA模板与采用Chelex法和洗涤沉淀法制备的滤纸干血滴以及厚血膜疟原虫DNA模板均可被扩增出1条341bp的间日疟原虫特异性DNA条带,与预期的扩增片断大小一致;不同方法制备的10份间日疟患者血样DNA模板用于PCR扩增检测,结果无明显差异.其中,Chelex煮沸法和洗涤沉淀法对不同检材的疟原虫感染血样DNA模板均能有效制备,且可在同一离心管中进行,减少了交叉污染的机会.结论 Chelex法和洗涤沉淀法简便、实用,适用于不同检材微量血疟原虫PRC模板的制备.     

应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K-ras基因突变

目的:应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K-ras基因突变,探讨其诊断价值.方法:结合特异性肽核酸(针对野生型序列)与实时定量PCR技术建立一步K-ras基因检测法,与传统限制性片段长度多态性PCR法检测结果进行比较,评价新方法的诊断价值.结果:肽核酸钳制PCR法可同时对胰腺癌标本中K-ras基因的第12、13密码子突变情况进行检测,操作简便;可在105倍的野生型K-ras基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测突变基因最低限为102拷贝;该方法可同时进行较大规模的样品检测,单次检测时间仅需1 h.而传统方法可检测的突变基因最低限为103拷贝,检测灵敏度为0.01%;需花费约2 d完成同样数量的样本检测.结论:肽核酸钳制实时定量PCR法较限制性片段长度多态性PCR法有明显优势,适用于胰腺癌大规模临床样本的K-ras基因突变检测,可作为胰腺癌筛查的有效手段.     

应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K ras基因突变

目的:应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌Kras基因突变,探讨其诊断价值。方法:结合特异性肽核酸(针对野生型序列)与实时定量PCR技术建立一步Kras基因检测法,与传统限制性片段长度多态性PCR法检测结果进行比较,评价新方法的诊断价值。结果:肽核酸钳制PCR法可同时对胰腺癌标本中Kras基因的第12、13密码子突变情况进行检测,操作简便;可在105倍的野生型Kras基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测突变基因最低限为102拷贝;该方法可同时进行较大规模的样品检测,单次检测时间仅需1 h。而传统方法可检测的突变基因最低限为103拷贝,检测灵敏度为0.01%;需花费约2 d完成同样数量的样本检测。结论:肽核酸钳制实时定量PCR法较限制性片段长度多态性PCR法有明显优势,适用于胰腺癌大规模临床样本的Kras基因突变检测,可作为胰腺癌筛查的有效手段。     

PCR精准检测儿童EB病毒感染的临床研究及推广

目的探讨分析PCR精准检测对儿童EB病毒感染的临床诊断研究与推广。方法选取我院从2017年1月至2017年12月收治的600例儿童EB病毒感染者作为本次临床研究对象,随机分为对照组(n=300)与观察组(n=300);对照组患儿行血清学检测方式,观察患儿行PCR精准检测,观察患儿血清学检测与核酸EBV-DNA检测阳性率。结果对照组患儿在血清学检测中患NA Ig G的阳性率最低,而观察组患儿行PCR精准检测方式其EBV-DNA阳性率高于全血EBV-DNA阳性率,差异有统计学意义(P0.05)。结论对儿童EB病毒感染者行PCR精准检测,在临床检测中准确率更高,值得广泛应用和推广。     

小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌快速检测方法的建立

目的建立实验动物冷冻资源(胚胎、精子等)常见病原菌的微量、快速监测方法。方法以实验动物三个常见病原菌(金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和乙型溶血性链球菌)为研究对象,分别提取三个阳性菌株的DNA,通过引物设计和相应PCR条件的优化,建立三种阳性菌株的PCR检测方法。然后提取冷冻资源(胚胎、精子等)中的DNA,按照三个阳性菌的PCR条件进行检测,并将一部分样品DNA用荧光定量PCR方法进行检测。结果 1成功建立三个阳性菌株的PCR检测方法。三种病原菌的最低检测浓度,金黄色葡萄球菌为4.19×10~(-5)ng/μL,肺炎克雷伯氏菌为1.98×10~(-5)ng/μL,乙型溶血性链球菌为1.07×10~(-3)ng/μL.2通过普通PCR和荧光定量PCR方法均未检测出样品中三种阳性菌的存在。结论建立了小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌微量、快速检测方法。     

微量末梢全血生理盐水稀释沉淀法检测HBsAg的研究

目的:探讨应用微量末梢全血代替末梢血清或静脉血清，在快速ELISA检测血样的乙型肝炎病毒表面抗原的效果。方法:用生理盐水稀释微量末梢全血，沉淀血球，取上清液用快速ELISA试验检测423份血标本中的乙型肝炎病毒特异性标记物HBsAg，并与相应的静脉全血、静脉血清、末梢血清结果进行比较，计算其检出率、符合率、灵敏度和特异度。结果:末梢全血生理盐水稀释法与静脉血清法的总符合率为98．74％。以静脉血清法作参照，末梢全血稀释沉淀法的灵敏度和特异度分别是98．31％和97．27％，阳性预测值和阴性预测值分别为97．35％和95．47％，虽略低于末梢血清法的相应指标，但差异无显性。结论:微量末梢全血稀释沉淀快速ELISA法检测HBsAg，用血量少，人们乐于接受，操作方便快捷，结果稳定可靠，可作为大批量行业性检查中HBsAg的筛查方法，具有较高的实用价值。     

PCR-SSCP法分析载脂蛋白E基因多态性

目的:建立一种快速、简便、敏感的载脂蛋白E(ApoE)基因多态性检测方法。方法:酚/氯仿法提取46例原发性肾病综合征(primarynephroticsyndrome,PNS)患儿全血基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增ApoE第四外显子,取PCR产物10μl加入等体积含有甲酰胺的上样缓冲液中,变性后行8%聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显示结果。同时对PCR产物进行测序,确认单链构象多态性(single strandconformationpolymorphism,SSCP)的检测结果。结果:PCR SSCP法筛选出的各基因型与测序结果完全符合。结论:PCR SSCP法可以快速准确地检测ApoE常见基因型。     

甲种胎儿蛋白诊断肝癌方法的改进

湖北省微生物研究所、第一冶金建设公司职工医院及武汉钢铁公司职工医院共同将甲种胎儿蛋白的检测,从用较大量血清的常规双向琼脂扩散法改进为微量全血玻片双向琼脂扩散法,其特点为:(1)缩小了琼脂板(在载玻     

全血法流式细胞术检测血小板抗体

目的　初步建立一种以全血为标本的流式细胞仪 (FCM)检测血小板抗体的方法。方法　FCM多参数分析全血中的CD6 1标记的血小板群。结果　每次检测需血以微升为数量级单位 ,所用时间 2h。能从正常的血小板中检出 3%含有CD6 1抗体的血小板 ,阳性率与理论值呈明显相关 (r >0 .9,P <0 .0 0 1) ;可检测血小板计数低达 10× 10 9/L的标本。结论　本法具有结果准确、重复性好的优点 ,需血量少 ,病人易接受 ,并且更接近生理状态 ;多参数检测 ,快速省时 ,更适用于血小板极低或抗体量少的患者。优于传统的定量法与定性法检测     

PCR检测诊断细菌性眼内炎的探讨

目的 采用PCR定性方法 探讨快速诊断外源性细菌性眼内炎.方法 用常见致病性细菌的共有引物片段,建立PCR检测方法.结果 数小时可检测出标本中微量致病性细菌,与细菌培养法相比,阳性率略高于培养法但无统计学意义(P＞0.05).结论 PCR检测速度快,有助于外源性细菌性眼内炎的快速明确诊断.