低剂量替尼泊苷联合沙利度胺对人胃癌移植瘤的抑制作用

目的:探讨低剂量替尼泊苷(VM-26)联合沙利度胺对人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤生长、荷瘤小鼠骨髓造血功能的变化及新生血管形成的影响.方法:建立人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤模型,建模成功后随机分为沙利度胺组、高剂量VM-26组、低剂量VM-26组、低剂量VM-26联合沙利度胺组和对照组,每组各10只.经尾静脉注射不同剂量VM-26、生理盐水,经口灌注沙利度胺.用药2周后测量裸鼠移植瘤瘤重,计算抑瘤率;观察裸鼠骨髓造血功能,检测移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、CD44v6的表达以及微血管密度(MVD)的变化.结果:各组裸鼠移植瘤瘤重差异有统计学意义(F=24.570,P＜0.05).各组移植组织中VEGF、CD44v6表达及MVD的差异均有统计学意义(λ2/F=22.881、26.371、19.518,P均＜0.05);各治疗组VEGF的表达和MVD均较对照组显著降低,低剂量VM-26联合沙利度胺组CD44v6的表达较对照组显著降低.低剂量VM-26联合沙利度胺组对骨髓造血功能的抑制较高剂量VM-26组减轻.结论:低剂量VM-26联合沙利度胺能抑制人胃癌BGC-823裸鼠移植瘤的生长、新生血管的形成,且对骨髓的造血功能无明显影响.     

VEGF基因沉默抑制HCT116裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的 应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响.方法 将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6 27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6 27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型.通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(microvessel density,MVD)改变.结果 C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P＜0.05).A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色.C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P＜0.05).C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P＜0.05).VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关.     

龙葵碱联合VEGF抗体对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的：建立人结肠癌鸡胚移植模型,探讨龙葵碱、VEGF抗体及两者联合对人结肠癌细胞诱导肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。方法将人结肠癌H T‐29细胞鸡胚移植模型分为实验组和对照组,实验组加入龙葵碱、V EG F抗体和龙葵碱＋VEGF抗体混合液,对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS）液。通过立体显微镜照相、IPP 6．0图像分析软件分析图片;免疫组织化学方法检测CD34抗原和ki‐67抗原,观察龙葵碱、VEGF抗体和龙葵碱联合VEGF抗体对肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。结果肿瘤血管面积、CD34抗原和ki‐67抗原表达：龙葵碱＋VEGF抗体组明显优于单药VEGF抗体组和龙葵碱组,VEGF抗体组优于龙葵碱组,3组均明显优于对照组（P＜0．01）。结论龙葵碱、VEGF抗体及两者联合时均能抑制人结肠癌 HT‐29细胞系诱导的肿瘤血管生成及肿瘤增殖,为抗肿瘤血管生成提供了一种新途径。     

重组人血管内皮抑素联合放疗对CNE1鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤生长及其VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达的影响

目的探讨重组人血管内皮抑素（恩度）联合放疗对人鼻咽癌细胞株1（CNE1）鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长及血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA表达的影响。方法建立人鼻咽癌细胞裸鼠模型,成瘤后随机分为4组,对照组、恩度组、放疗组和恩度＋放疗联合组,分别进行恩度与放疗干预,观察各组移植瘤的生长速度和瘤体大小的变化。4周后处死裸鼠摘取瘤体,应用RT-PCR检测各组瘤体组织中的VECF、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达变化。结果联合组对鼻咽癌移植瘤的生长有显著抑制作用,且明显强于其他三组（均P〈0.05）;联合组中VECF、MMP-2和MMP-9的表达与另外三组相比均显著下调（均P〈0.05）;VEGF与MMP-2及MMP-9的表达呈正相关（均P〈0.01）。结论恩度联合放疗能明显抑制CNE1鼻咽癌移植瘤的生长,恩度对鼻咽癌裸鼠抑制瘤具有放疗增敏作用,这种作用可能与VEGF、MMP-2和MMP-9表达下调有关。     

67kD层粘连蛋白受体对HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨 67 kD层粘连蛋白受体(67LR)与肝癌细胞生长增殖的关系. 方法 流式细胞术检测67LR转染的HepG2细胞稳定株细胞膜表面67LR的表达,采用CCK-8试剂盒测定细胞生长曲线,将不同细胞接种于裸鼠皮下,观察其成瘤能力的差异.采用免疫组织化学分析细胞增殖核抗原Ki-67的表达. 结果 67LR高表达的HepG2细胞株其细胞增殖速度明显降低,从第2 d开始有明显差异(P<0.01,n=3),在裸鼠体内成瘤能力下降,瘤体平均质量仅为对照组的35.7%,为67LR低表达组的42.9%(P<0.01,n=10).移植瘤的Ki-67表达明显减少. 结论 67LR可以降低肝癌细胞的生长增殖.     

双歧杆菌对实验性大肠癌血管形成的影响

目的 从血管形成这一角度探索青春型双歧杆菌的抑瘤机理。方法 以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用免疫组化法检测大肠癌组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其微血管密度(MVD)。结果 双歧杆菌注射组大肠癌VEGF的阳胜细胞密度和MVD的数量均明显低于肿瘤对照组(P<0.01)。结论青春型双歧杆菌能抑制大肠癌的血管形成,其途径可能是下调VEGF的表达。     

sorafenib对裸鼠肝癌术后复发的抑制和促凋亡的实验研究

目的 多激酶抑制剂sorafenib具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其联合外科手术治疗肝癌的效果尚待研究.文中探讨裸鼠肝原位移植癌手术切除后,应用sorafenib抑制肿瘤复发的作用和机制. 方法 将肝癌细胞原位种植于30只裸鼠肝,2周后手术切除移植瘤.随机均分成3组:对照组、低剂量sorafenib治疗组(30mg/kg)和高剂量sorafenib治疗组(100mg/kg).3周后观察肿瘤复发情况和微血管密度(microvessel density,MVD),用免疫组化法检测肿瘤细胞中CD34、血管内皮生长因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)、细胞增殖相关抗原Ki67,用TUNEL法检测细胞凋亡. 结果 低剂量和高剂量sorafenib治疗组肿瘤体积明显小于对照组 (P<0.05),高剂量组小于低剂量组(P<0.05).高低剂量sorafenib治疗组MVD和VEGF表达均较对照组明显减少(P<0.05);高剂量组低于低剂量组,但无统计学差异(P>0.05).2个治疗组肝癌细胞凋亡数量显著增多,凋亡率明显高于对照组(P<0.01),高剂量组凋亡率高于低剂量组(P<0.05). 结论 sorafenib可有效地抑制裸鼠肝癌术后残留肿瘤细胞的生长,控制肿瘤的复发.     

胃安宁颗粒对肿瘤血管VEGF Ki-67表达影响的实验研究

目的：观察胃安宁颗粒对SGC-7901荷瘤裸鼠血管VEGF、Ki-67表达的影响。方法：将裸鼠皮下接种胃癌SGC-7901细胞后随机分为对照组、阳性药组及胃安宁颗粒大、中、小剂量组,用药后分别计算瘤重系数,并将肿瘤组织进行免疫组织化学染色,检测VEGF、Ki-67表达的情况。结果：胃安宁颗粒大、中剂量均能明显降低荷瘤裸鼠瘤重和瘤重系数（P〈0.05～0.001）,免疫组织化学染色显示,应用胃安宁颗粒后肿瘤组织VEGF、Ki-67的表达有所下降。结论：胃安宁颗粒可能通过抑制VEGF、Ki-67的表达起到抑制肿瘤血管生成的作用,从而达到抗肿瘤的目的。     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-9蛋白表达的影响

目的利用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制人舌癌Tca883细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF—siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞（VEGF—siRNA1、VEGF—siRNA2）为实验组,以转染空载体人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tea8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫细胞／组织化学法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF及MMP-9的蛋白表达。结果在培养细胞和移植瘤中,与实验对照组和空白对照组相比,VEGF—siRNA1组和VEGF—siRNA2组VEGF染色平均灰度值高,差异有统计学意义（P〈0．05）;各组培养细胞中均未见MMP-9表达;各组移植瘤MMP-9染色平均灰度值之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-9蛋白的表达无明显影响。     

耐药胃癌裸鼠移植瘤中血管生成与耐药机制的关系

目的探讨氟尿嘧啶耐药的人胃癌细胞裸鼠移植瘤血管生成与肿瘤耐药产生机制的关系.方法建立裸鼠移植瘤模型;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 的表达;免疫组织化学方法检测裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达;免疫组织化学方法进行血管内皮细胞染色,计算肿瘤组织内微血管密度.结果成功建立耐药和亲本两组裸鼠移植瘤.与其亲本细胞裸鼠移植瘤比较,耐药细胞裸鼠移植瘤组织VEGFmRNA和蛋白质表达以及微血管密度都显著减少(P<0.05).结论胃癌的耐药机制可能与血管生成减少有关.     

3,6-二羟黄酮对乳腺癌细胞MDA-MB-453移植瘤生长和miRNAs表达谱的影响

目的观察3,6-二羟黄酮对HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453移植瘤生长和miRNA表达谱的影响。方法以18只雌性BALB/c裸鼠建立乳腺癌MDA-MB-453细胞移植瘤模型,按照完全随机设计原则平均分入对照组和高、低剂量作用组,移植后72 h开始给予各处理因素,低、高剂量组分别以10、20 mg/(kg.d)的3,6-二羟黄酮灌胃,对照组以等量的生理盐水灌胃。每4天测量1次肿瘤体积和裸鼠体质量,处理28 d后取材,提取肿瘤组织总RNA并分离miRNA,样品采用PolyA Polymerase加尾后利用T4RNA连接酶将带有生物素标记的信号分子与之连接,进而与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析获得miRNAs表达谱。结果高、低剂量组移植瘤生长速度低于对照组,肿瘤体积分别在处理12 d和16 d后显著低于对照组(P<0.05);处理24 d后高、低剂量组移植瘤质量均显著低于对照组(P<0.01)。miRNAs表达谱分析显示,高剂量组瘤组织miRNAs表达与对照组相比显著上调的有12个,显著下降的有15个。结论3,6-二羟黄酮可显著抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-453移植瘤的生长并影响其miRNAs表达谱。     

大剂量维生素C通过减少糖酵解和蛋白质合成抑制乳腺癌细胞增殖

目的: 观察大剂量维生素C对乳腺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,并探索其中的机制。方法: 以乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453为体外研究对象,分别给予小（0.01 mmol/L）、中（0.10 mmol/L）、大（2.00 mmol/L）剂量的维生素C。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测葡萄糖转运蛋白1（Glut1）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达;乳酸脱氢酶比色法测定乳酸含量。同时,取10只6周龄雌性BALB/c裸鼠,采用皮下接种乳腺癌Bcap37细胞建立荷瘤小鼠移植瘤模型,取5只小鼠腹腔注射维生素C（4 g/kg）,观察肿瘤重量和小鼠体质量的变化。结果: 体外细胞学实验结果显示,与空白对照组比较,大剂量维生素C作用下Bcap37和MDA-MB-453细胞增殖受到抑制（均P < 0.01）,Glut1转运蛋白表达减少（均P < 0.05）,乳酸分泌量减少（均P < 0.01）,mTOR信号通路相关蛋白表达水平下调（均P < 0.05）。体内实验结果显示,与对照组比较,大剂量维生素C组肿瘤重量明显减小（P < 0.05）,但体质量增长无明显变化。结论: 大剂量维生素C可抑制乳腺癌细胞增殖,这一效果可能与大剂量维生素C抑制乳腺癌细胞能量摄取和下调mTOR信号通路有关。     

腺病毒介导黑色素瘤分化相关基因对乳腺癌细胞生长和凋亡的研究

目的 观察腺病毒介导黑色素瘤分化相关基因(mda-7/IL-24)对乳腺癌细胞生长和凋亡的作用.方法 将腺病毒mda-7/IL-24进行病毒的扩增、纯化和滴度测定.将纯化好的腺病毒mda-7/IL-24感染乳腺癌细胞,用Western印迹方法 检测mda-7/IL-24在乳腺癌细胞中的表达.结晶紫和4甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)观察腺病毒mda-7/IL-24对乳腺癌细胞生长的影响;Hoechst染色和膜联蛋白(Aanexin)V检测腺病毒mda-7/IL-24对乳腺癌细胞凋亡的影响;并在裸鼠上进行了动物实验研究.结果 腺病毒mda-7/IL-24感染的乳腺癌细胞上清液中可以检测到mda-7/IL-24蛋白的表达;腺病毒mda-7/IL-24能明显地抑制乳腺癌细胞的生长,Hochest染色和Annexin V提示腺病毒mda-7/IL-24促进乳腺癌细胞的凋亡.实验进一步证明了腺病毒mda-7/IL-24可以显著抑制裸鼠乳腺癌荷瘤的生长.结论 腺病毒mda-7/IL-24能显著抑制乳腺癌细胞的生长并诱导乳腺癌细胞的凋亡.     

基于PKCα-ERK1/2信号通路研究竹节参皂苷抑制肺癌的作用机理

目的:研究竹节参皂苷(Saponins from Panax Japonicus,SPJ)对Lewis肺癌移植瘤小鼠的影响以及对PKCα-ERK1/2信号通路的调控作用。方法:应用Lewis肺癌小鼠荷瘤模型,灌胃给予竹节参皂苷15 mg/kg·d,30 mg/kg·d和60 mg/kg·d,连续20 d,比较各组小鼠肿瘤体积,计算肿瘤生长曲线,ELISA法测定血清中VEGF和MMP 9水平,Western blot测定PKCα、P-PKCα、ERK1/2、P-ER K1/2蛋白表达情况。结果:与荷瘤对照组比较,SPJ给药组肿瘤体积增加缓慢,具有统计学差异(P<0.01);同时SPJ可显著降低血清中VEGF和MMP 9水平(P<0.01),降低PKCα和ERK1/2磷酸化水平(P<0.01);进一步采用静脉注射PKCα激动剂PMA 25μg/kg·d,连续10 d进行验证发现其可减弱SPJ对ERK1/2磷酸和肿瘤生长的抑制作用(P<0.01)。结论:SPJ对Lewis肺癌移植瘤小鼠模型肿瘤生长和转移具有抑制作用,其作用机制可能是抑制了PKCα-ERK1/2信号通路。     

不同分割照射方式对MDA-MB-231移植瘤增殖活性的影响

目的 以相同剂量下,研究单次大剂量照射对MDA-MB-231乳腺癌移植瘤的生物学效应。方法 建立MDA-MB-231乳腺癌移植瘤模型,待移植瘤直径达8~9mm,随机分为0Gy组（空白对照组）、8Gy组（8Gy/1f/1d）、10Gy组（10Gy/1f/1d）、4×2Gy组（8Gy/4f/4d）、2Gy×5（10Gy/5f/5d）组。每3天观察肿瘤体积变化,绘制移植瘤生长曲线。照射实验组（除对照组）裸鼠分别于放疗结束后第7天、14天行¹⁸F-FDG PET/CT检查,另取各实验组裸鼠分别于放疗结束后7天、14天处死,收集肿瘤组织行免疫组化测定Ki-67的表达。结果 单次大剂量和常规分割照射均能抑制MDA-MB-231移植瘤生长,以单次大剂量10Gy组最为明显（P<0.05）。且在同等剂量条件下,单次大剂量组在放疗后第7、14天PET/CT检查显示移植瘤SUVmax值均低于常规分割照射组（P<0.05）,Ki-67阳性细胞百分比单次大剂量组也低于同剂量常规分割组（P<0.05）。结论 在同等剂量情况下,单次大剂量放疗较常规分割放疗对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖活性的抑制更为显著,同时¹⁸F-FDG PET/CT在一定程度上可以反应早期放疗后MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖活性。     

熊果酸体内抗肺癌作用机制探讨

目的：探讨熊果酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法:采用人肺腺癌A549细胞株进行裸鼠移植瘤实验。通过移植瘤生长曲线、终末瘤重计算抑制率观察熊果酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用,采用免疫组化法检测VEGF蛋白表达、微血管密度,TUNEL检测凋亡指数,探讨其作用机制。结果:实验组用药后移植瘤生长缓慢,实验结束时,实验组瘤重及瘤体积明显低于对照组（P＜0.05）,抑瘤率为51.35％。实验组移植瘤组织微血管密度及VEGF蛋白表达明显低于对照组（P均＜0.01）,实验组癌细胞凋亡指数高于对照组(P＜0.01)。结论:熊果酸对裸鼠肺腺癌移植瘤生长有抑制作用,其机制可能与降低移植瘤促血管生成因子VEGF的表达、抑制新生血管的形成和促进肿瘤细胞凋亡有关。     

三羟异黄酮联合阿霉素对人乳腺癌细胞HER-2/neu表达的影响

目的:探讨三羟异黄酮(GEN)联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中HER-2/neu mR-NA及蛋白表达的影响。方法:将不同浓度GEN和ADM单独或联合作用于体外培养的MCF-7/ADM细胞后,RT-PCR检测HER-2/neu mRNA表达情况,Western blot检测HER-2/neu蛋白表达情况。结果:体外培养的MCF-7/ADM细胞高表达HER-2/neu mRNA及蛋白,经GEN单独及联合ADM作用后,HER-2/neu mRNA和蛋白表达明显下调。联合用药比相同浓度GEN单用下调更明显。结论:人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与HER-2/neu mRNA及蛋白高表达相关,GEN能部分逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性。     

蛞蝓有效提取物抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长

目的 观察蛞蝓有效提取物(EL-3)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法制备宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤模型,检查EL-3对瘤体积、瘤重及VEGF蛋白表达的影响,评估EL-3在体内治疗宫颈癌的有效性。结果EL-3(10、30和100 mg/kg)实验组的瘤体积显著低于生理盐水组(P<0.05),同时,其移植瘤的瘤重抑制率分别为42.0%、67.0%和83.0%,提示EL-3在体内抗宫颈癌作用较强,且呈剂量依赖性;采用免疫组化检测证实EL-3下调宫颈癌裸鼠移植瘤细胞VEGF蛋白表达。结论EL-3具有抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的作用,其机理可能与抑制肿瘤血管生成有关。     

重组ANGPT2及抗体对白血病荷瘤小鼠ANGPT1/2表达的影响

目的 应用重组的ANGPT2及ANGPT2单克隆抗体注射急性髓系白血病荷瘤小鼠,了解荷瘤小鼠肿瘤组织中ANGPT1/2表达的变化.方法 应用HL-60细胞构建急性髓系白血病模型,同时给予小鼠注射重组的ANGPT2和Anti-ANGPT2,应用Western blot检测急性髓系白血病小鼠肿瘤组织中的ANGPT1/2蛋白的表达.结果 应用重组的ANGPT2,对照组与实验组中的ANGPT1和ANGPT2蛋白的表达差异无统计学意义;应用An-ti-ANGPT2,对照组与实验组中的ANGPT2蛋白的表达差异无统计学意义,ANGPT1蛋白的表达明显低于对照组.结论 进行ANGPT2单克隆抗体实验时,需要阻断VEGF以达到理想的结果。