补体C5a、C5a受体及其拮抗剂的研究进展

C5a是最重要的补体活化产物之一,它与相应的C5a受体结合被激活后,参与了多种疾病的病理过程,如急性肺损伤、脓毒血症、类风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病。如何阻断C5a信号的下传,从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题。目前C5a和C5a受体的拮抗剂主要分为抗C5a抗体、小分子拮抗剂、C5a反义肽、C5a突变体和细菌来源的趋化抑制蛋白等。本文着重介绍C5a和C5a受体的结构与功能,以及相关拮抗剂的研究进展。     

强啡肽A及其受体拮抗剂对大鼠脊髓损伤后脊髓血流量的影响

目的；探讨强啡肽Ａ在脊髓损伤（ＳＣＩ）中的作用。方法，采用Ａｌｉｅｎ打击法复制大鼠ＳＣＩ模型，应用强啡肽Ａ放免检测技术和氢清除法分别测定伤段脊髓组织２４ｈ内主Ａ含量和脊髓血流量（ＳＣＢＦ）的变化，并观察脊髓蛛网膜下腔注射强啡肽Ａ及其受体拮抗剂ｎｏｒ－ＢＮＩ对ＳＣＢＦ的影响。结果；ＳＣＢＦ在伤后１０ｍｉｎ即有明显下降，２ｈ较１ｈ略有回升，４－８ｈ又进一步下降，两次下降相差显著；ＳＣＩ后脊髓蛛网膜下腔     

PAF受体拮抗剂对脊髓损伤后花生四烯酸代谢的影响

目的：为了探讨ＰＡＦ受体阻断对脊髓损伤后脊髓组织花生四烯酸代谢的作用及ＰＡＦ受体拮抗剂对脊髓损伤的治疗作用机制。方法：应用ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１造成猫体内脊髓损伤前、后ＰＡＦ受体部分阻断，分别采用微量滴定法、＾１２５Ｉ放射免疫分析法测定脊髓损伤后６ｈ脊髓组织ＰＬＡ２活性及花生四烯酸代谢产物（ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）含量。结果：伤后脊髓组织ＰＬＡ２活性、ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－Ｐ     

白介素1受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤后神经元功能修复的影响

目的 观察白介素-1受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤后神经元功能修复的影响。方法 SD大鼠110只,随机分为假手术组30只,生理盐水组40只和IL-1Ra治疗组40只。采用改良Allen氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。在建模后1h,48h,72h获取损伤段脊髓标本,免疫组织化学染色检测NF表达,运用改良Rivlin斜板实验和BBB评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分。结果 IL-1Ra治疗组NF的表达及行为学评分方面明显优于生理盐水组,差异有显著性。结论 IL-1Ra对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段脊髓有保护作用,可能与IL-1受体拮抗剂增加NF表达,抑制局部炎症效应有关。     

补体C5a受体拮抗剂体外筛选平台的建立

目的　建立稳定的补体C5a受体（C5aR）拮抗剂筛选平台。方法　采集人外周静脉抗凝血,与不同浓度C5a、脂多糖及PMX-53孵育10～30 min。通过流式细胞术检测中性粒细胞表面CD11b的表达,溶菌酶检测试剂盒观察中性粒细胞分泌溶菌酶的能力变化,罗丹明-123检测中性粒细胞呼吸爆发的变化,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素（IL）?鄄8的表达变化,Western Blotting检测胞外信号调节激酶（ERK）、蛋白激酶B（AKB或AKT）含量及其磷酸化水平的变化,考察补体C5a刺激及使用阳性药物PMX?鄄53后对各生化指标的影响。结果　C5a刺激人外周血可增强中性粒细胞CD11b的表达,促进溶菌酶释放和IL-8的分泌,激发呼吸爆发,上调ERK、AKT的含量和磷酸化水平,阳性药物PMX-53则能显著抑制C5a的上述生物学效应。结论　成功建立C5aR拮抗剂人全血体外筛选平台,为C5aR拮抗剂筛选及功能研究奠定了基础。     

内皮素受体拮抗剂PD142893对大鼠损伤脊髓血流及功能的影响

目的：研究内皮素受体拮抗剂PD142893对大鼠损伤脊髓血流及功能的影响,探讨内皮素在继发性脊髓损伤中的作用机制。方法：35 g物体后路压迫大鼠胸段脊髓5 min造成脊髓急性中度损伤。应用激光多普勒血流仪检测对照组、损伤组及PD142893治疗组(蛛网膜下腔注射给药50 μg)大鼠局部脊髓血流的动态变化,并观察伤后一周的神经功能恢复情况。结果：PD142893蛛网膜下腔注射能明显改善脊髓压迫伤早期（30 min至8 h）的低血流灌注;且能部分恢复损伤大鼠脊髓功能。结论：内皮素可能是脊髓继发性损伤的重要损害因子之一; 蛛网膜下腔注射内皮素受体拮抗剂PD142893能部分逆转脊髓损伤。     

莱菔硫烷对小鼠脊髓损伤后后肢功能的作用

目的 观察莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对小鼠脊髓损伤后炎症反应、胶质瘢痕、轴突再生的干预作用,探讨其在脊髓损伤中的作用机制.方法 雌性ICR小鼠66只,按随机数字表法分为4组:假手术组(n=12)、单纯损伤组(n=18)、莱菔硫烷组[5 mg/(kg·d)SFN,ip,n=18]、溶剂对照组(等体积玉米油腹腔注射,n=18).假手术组仅咬除椎板,余各组行脊髓夹伤术,制备脊髓夹伤模型.建模后1、7、14、21、28 d进行小鼠后肢运动功能评分(BMS评分);Western blot检测建模后7d各损伤组小鼠脊髓GFAP、CSPG、P65表达情况,28 d后各损伤组GAP-43表达情况;ELISA检测建模后7d各组小鼠脊髓TNF-α、IL-1β表达情况;免疫荧光染色观察建模后7d各损伤组小鼠脊髓GFAP、CSPG、P65表达情况.结果 假手术组BMS评分9分,各脊髓损伤组术后后肢运动功能均有不同程度恢复,术后28 d时单纯损伤组评分为(2.17±0.41)分,溶剂对照组(2.33±0.52)分,莱菔硫烷组(3.33±0.52)分,后者与前二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).术后7d行免疫荧光染色可见各脊髓损伤组星形胶质细胞活化,GFAP、CSPG、P65表达增加,单纯损伤组与溶剂对照组较莱菔硫烷组更明显.术后7d莱菔硫烷组GFAP、CSPG、P65蛋白相对表达量均较单纯损伤组与溶剂对照组低(P＜0.05),术后28 d莱菔硫烷组GAP-43蛋白相对表达量较单纯损伤组与溶剂对照组明显增加(P＜0.05).建模后7d,莱菔硫烷组小鼠脊髓TNF-α、IL-1β表达较其余损伤组明显降低(P＜0.05).结论 莱菔硫烷可减轻小鼠脊髓损伤后炎症反应,抑制胶质瘢痕形成,促进轴突再生,改善后肢运动功能.     

Nogo受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的探讨Nogo受体拮抗剂NEP1-40对大鼠脊髓损伤后脊髓功能恢复的影响,为临床治疗急性脊髓损伤提供实验依据。方法健康Wistar大鼠48只随机分为创伤对照组、NEP1-40治疗组。建立大鼠中段胸部脊髓后半部横切模型。对照组注入生理盐水,实验组采用NEP1-40治疗。分别在术后取材行苏木精-伊红染色、免疫荧光染色检测。术后第1、3天及1、2、3、4周对动物进行运动功能评分。结果脊髓损伤3周后,NEP1-40组行为学评分高于对照组,同时NeuN/NF-200阳性染色亦明显高于对照组,差异有统计学意义。结论NEP1-40治疗脊髓损伤能促进神经元的再生,恢复脊髓功能。     

C3a、C5a及其受体拮抗剂对肾小管上皮细胞β-catenin表达的影响

目的 探讨补体分子C3a、C5a及其受体阻断剂(C3aRA、C5aRA)对体外培养的肾小管上皮细胞株HK-2细胞β-catenin表达的影响.方法 将体外培养的HK-2细胞分成C3a组和C5a组,各组再分成4亚组:C3a组[对照组,1 μmol/L转化生长因子β1(TGF-β1)组,50 nmol/L C3a组,1 μ...     

雄性大鼠脊髓损伤对生殖系细菌感染及IL-1、TNF-α、SOD表达的影响

目的:了解脊髓损伤后雄性大鼠前列腺、附睾、睾丸细菌感染及IL-1、TNF-α、SOD蛋白的表达情况.方法:80只SD大鼠采用随机数字法分为对照组(n=40)和实验组(n=40),采用改良Allen法建立脊髓损伤动物模型,分别喂养1、2、4、8、16 d,2组均于每个时间点摘取8只大鼠的前列腺、附睾、睾丸组织进行细菌培养...     

氨基胍对大鼠脊髓压迫伤后后肢运动功能的影响

目的观察诱导型一氧化氮合酶抑制剂-氨基胍(AG)对大鼠脊髓损伤后运动功能的影响。方法大鼠脊髓压迫伤后给予AG进行治疗,24 h后用分光光度法测定脊髓组织中一氧化氮(NO)含量和NOS活性;72 h后用流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况;4周后用电生理和动物行为学等指标评价运动功能的恢复情况。以正常大鼠和损伤未治大鼠为对照。结果AG可以抑制组织中的NO含量和NOS活性,同时降低神经细胞的凋亡比率,提高动物后肢运动功能评分,恢复运动诱发电位的振幅和潜伏期,与对照及损伤未治大鼠相比均有显著差异(P<0.05)。结论脊髓损伤后应用NOS抑制剂可以使伤后运动功能得到改善,提示iNOS活性变化可能对脊髓损伤的恢复更具决定作用,其作用机制与抑制伤后细胞凋亡有关。     

氨基胍对大鼠脊髓压迫伤后后肢运动功能的影响

OBJECTIVE: To study the effects of aminoguanidine (AG), the inhibitor of inducible nitric oxide synthase (NOS), on the recovery of rat hindlimb motor function after spinal cord injury and explore the possible mechanism. METHODS: Thirty rat models of spinal cord compression injury were established according to Nystrom's method. AG therapy was administered for 4 times at 1 h before and 8, 24, 36 h after the injury, and 24 h after the completion of the therapy, spectrophotography was performed to measure the content of NO and activity of NOS in the injured spinal cord, followed by flow cytometry for determining the apoptotic rate 48 h later. The evaluation of the hindlimb motor function recovery was conducted by electrophysiological method and by measuring the behavior scores. RESULTS: AG significantly decreased the NO content (from 2.2714+/-0.4239 micromol/g.pro to 0.8466+/-0.0477 micromol/g.pro, P <0.05) and NOS activity (from 0.3408+/-0.0228 U/mg pro to 0.2702+/-0.0148 U/mg pro, P <0.05) in the injured spinal cord. The apoptotic rats were also reduced (from 7.88% +/-0.79% to 3.10% +/-0.66%, P <0.05). Four weeks after the therapy, the behavior score of the rats improved from 7.1+/-4.5 to 17.3+/-4.7 (P <0.01), and the latency and amplitude of the motor evoked potentials improved from 0 ms to 8.89+/-0.91 ms and from 0 mv to 1.99+/-0.48 mv respectively, showing significant therapeutic effect of AG (P <0.05). CONCLUSION: AG can improve motor functions of injured spinal cord in rats, possibly resulting from decreased apoptotic cells of the neurons in the spinal cord in the early stages of the injury.     

C5a对血管内皮细胞表达P-选择素的影响

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ 选择素表达的影响尚不十分清楚 ,本实验在体外用不同浓度Ｃ5ａ与培养的人脐静脉内皮细胞用 ,测定Ｐ 选择素及中性粒细胞粘附率的动态变化 ,研究Ｃ5ａ对Ｐ 选择素表达和对中性粒细胞粘附的影响。1　材料与方法1.1　材料　　人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ30 4:本室冻存 ;重组人Ｃ5ａ[美国ｓｉｇｍａ公司 ] ;小鼠抗人Ｐ 选择素单克隆抗体…     

阿司匹林诱生型脂氧素A4对小鼠脊髓撞击损伤后神经病理性疼痛的影响及机制探讨

目的  评估阿司匹林诱生型脂氧素A4（ATL）对小鼠脊髓损伤（SCI）模型中神经炎症和神经病理痛的影响。方法  成年FVB小鼠T10节段脊髓进行改良Allen''脊髓撞击损伤。小鼠随机分成ATL组和Vehicle组,分别在SCI手术后4和24 h鞘内注射ATL（300 pmol）或vehicle。采用von Frey方法评估两组小鼠后脚机械刺激的敏感性;采用PCR方法检测两组小鼠脊髓小胶质细胞标记物和细胞因子信使核糖核酸（mRNA）表达;此外,通过小鼠大脑皮层组织小胶质细胞培养来评估ATL对小胶质细胞的激活和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放的直接影响。结果  与Vehicle组小鼠比较,ATL处理导致SCI诱导的小鼠机械痛敏降低;脊髓小胶质细胞标记物和促炎性细胞因子mRNA水平也下降。而且,ATL处理对小胶质细胞标记物IBA-1和促炎性因子TNF-α表达影响。此外,原代皮层小胶质细胞表达ATL相应受体ALX,ATL通过ALX发挥抗炎作用。结论  ATL通过ALX受体调节小胶质细胞激活和TNF-α释放,最终降低小鼠SCI后神经病理性疼痛。

     

C5a/C5aR通路在硕大利什曼原虫易感小鼠免疫病理发生中的作用及其机制

目的研究C5a/C5aR通路在对硕大利什曼原虫(Leishmania major,L.major)易感的BALB/c小鼠免疫病理发生中的作用及机制探讨。方法以C5aR KO小鼠(BALB/c背景)为模型,观察比较了WT和C5aR KO的BALB/c小鼠在L.major感染后的病变情况,有限稀释法检测了各组感染小鼠体内寄生虫的负荷,并进一步通过FACS检测了相关细胞因子如IL-17和IL-4的产生,来探讨C5a/C5aR通路在L.major易感型BALB/c小鼠免疫病理发生中的作用机制。结果相比WT小鼠,C5aRKO小鼠感染L.major后的病变程度明显减轻(P<0.05),体内寄生虫负荷也显著降低(6.952±0.398vs 4.340±0.434,P<0.01);同时,FACS胞内染色结果表明CD4+IL-4+T细胞亚群百分比显著降低(0.960 0±0.148 3 vs0.314 0±0.042 6,P<0.01),但CD3+IL-17+T细胞亚群的百分比在两组之间无显著差异(0.792 0±0.051 3 vs 0.858 0±0.084 5,P=0.522 3)。结论 C5a/C5aR通路通过调节Th2细胞关键细胞因子IL-4的产生,在L.major易感小鼠的免疫病理发生中发挥作用。     

细菌伴侣蛋白Skp对C5a受体的作用位点

目的 Skp（Seventeen-Kilodalton protein）已被证明是C5a受体的两个内源性的化学配体：C5a和S19核糖体蛋白二聚体（RPS19 dimer）之外的第3个配体，通过C5a受体引起白细胞的趋化运动.该研究目的：阐明Skp如何与受体结合及与受体结合的位点.方法 使用S19核糖体蛋白（RPS19）和C5a的合成模拟肽链，进行的受体拮抗试验.使用Skp的合成模拟肽链进行趋化运动分析试验.结果 证明Skp与RPS19和C5a一样，结合于C5a受体的相同结合区域，且也通过两步结合机制使受体活化.并初步推测了Skp分子结构中可能的受体结合位点.结论 C5a受体可以通过识别革兰氏阴性细菌蛋白，在先天性免疫方面起到重要的作用.