一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物的细胞免疫特性研究(I)

目的：检测一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物（ＨＲＡ）诱导小鼠细胞免疫的反应．方法：免疫小鼠的脾淋巴细胞，体外分别经ＣｏｎＡ、ＨＲＡ和可溶性裂殖子抗原（ＳＭＡ）的刺激，３Ｈ－ＴｄＲ参入法检测淋巴细胞的增殖水平．结果：含佐剂的ＨＲＡ免疫ＢＡＬＢ／ｃ和Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后，其脾细胞经ＨＲＡ刺激后，增殖明显，可溶性裂殖子抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞经ＨＲＡ刺激发生明显的增殖．结论：ＨＲＡ上的Ｔ细胞位点发挥了效应．具有一定的突破ＭＨＣ限制的能力．     

GWe对免疫应答过程中抗体产生及IL—1活性的影响

研究了ＧＷｅ对ＨＲＢＣ免疫后的功能调节作用。在连续给中药ＧＷｅ的基础上，采用ＨＲＢＣ免疫普通小鼠，选择免疫后不同时间：１，３，５，７，９，１１天，用ＱＨＳ及血凝效价测定方法检测小鼠血浆Ａｂ的动态变化，Ａｂ产生峰值在第５天，ＧＷｅ组与对照组相比差异有显著性。同时又检测了免疫不同时间的ＣｏｎＡ诱导脾细胞上清中ＩＬ－１活性的变化，结果表明ＩＬ－１活性变化峰值在第５天，ＧＷｅ组与正常对照组比较差异有非常显     

小鼠CD3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能有小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤的细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对     

小鼠CD_3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能在小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对照组比较有显著差异。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的体内外抗肿瘤作用     

检测人血型抗A和抗B单克隆抗体的制备

用人Ａ型及Ｂ型红细胞分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取免疫脾细胞与同系ＳＰ２／０骨 髓瘤细胞融合，经克隆筛选出８株抗Ａ和５株抗Ｂ杂交瘤细胞株，用小鼠腹水单克隆抗体分 别做凝集试验。亲和力测定、标本检测及ＣＰＶ、ＰＨＡ、ＣｏｎＡ对单克隆抗体效价的影响。结果表 明除Ａ４和Ｂ４株外，其余各株凝集效价均在１：１２８０以上；亲合力与抗Ａ、抗Ｂ血清相似；标本 检测符合率为１００％。结果提示：用含ＰＨＡ、ＣｏｎＡ、ＣＰＶ的杂交瘤细胞注射小鼠，所产生的单 克隆抗体效价比单独用杂交瘤细胞产生的单克隆抗体均高出２倍。     

大鼠自发性高血压和心肌肥厚时热休克蛋白70基因表达的研究

本工作采用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法，检测了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）与其正常对照（ＷＫＹ）大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平，并对ＳＨＲ和ＷＫＹ肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片断长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：ａ．３７℃培养的ＳＨＲＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ大鼠，ＳＨＲＡＳＭＣ受热刺激（４２℃１５ｍｉｎ）后２ｈ，ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达增加的程度明显大于ＷＫＹ大鼠。ｂ．大鼠腹主动脉缩后造成左室压力超负荷，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在压力超负荷４ｈ时已明显升高，１ｄ、２ｄ、１ｗ均维持在高水平，１ｗ后逐渐降低。ｃ．ＳＨＲ和ＷＫＹ鼠肝组织基因组ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切后，ＳＨＲＨＳＰ７０基因缺失一条约５．６ｋｂ的片段。提示：ＳＨＲＡＳＭＣ对热敏感性增加；压力负荷增加早期，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加；ＨＳＰ７０基因结构异常可能与高血压发生有关。     

高血压大鼠心脏肌凝蛋白重链mRNA表达和卡托普利的作用

目的：观察自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）心肌肥厚时心脏α和β－肌凝蛋白重链（α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ）ｍＲＮＡ表达和卡托普利的保护作用。方法：１５周龄雄性ＳＨＲ口服卡托普利（１００ｍｇ·ｋｇ－１／ｄ）１２周（ＣＡＰ组），同样年龄性别的ＳＨＲ（ＳＨＲ组）和Ｗｉｓｔａｒ－ｋｙｏｔｏ大鼠（ＷＫＹ组）不给药，在同样条件下喂养同样时间，通过称重法计算左室重量指数（ＬＶ１），使用测微技术测量心肌细胞横径（ＴＤＭ），采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹技术检测左室α和β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平降低，但不影响β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平。结论：高血压肥厚心肌ＭＨＣ基因出现了异常表达，卡托普利可以防止这种现象的发生。     

HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶ ＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗     

检测人血型抗A和抗B单克隆抗体的制备

用人Ａ型及Ｂ型红细胞分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取免疫脾细胞与同系ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，经克隆筛选出８株抗Ａ５和５株抗Ｂ杂交瘤细胞株，用小鼠腹水单克隆抗体分别做凝集试验，亲和力测定，标本检测及ＣＰＶ，ＰＨＡ，ＣｏｎＡ对单克隆抗体效价的影响。结果表明除Ａ４和Ｂ４株外，其余各株凝集效价均在１：１２８０以外，亲合力与抗Ａ，抗Ｂ血清相似，标本检测符合率为１００％，结果提示，用含ＰＨＡ，ＣｏｎＡ，ＣＰＶ的     

体外检测近交系小鼠HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞方法的建立

通过磷酸钙法用含ＨＢＶＳ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＭＶＳ与含筛选标记基因—ｎｅｏｒ基因的质粒ｐＳＶ２ｎｅｏ对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株—Ｐ８１５细胞进行了质粒共转染，并经Ｇ４１８筛选得到了Ｇ４１８抗性细胞，即Ｐ８１５Ｓ细胞。斑点杂交和免疫组化实验分别证实Ｐ８１５Ｓ细胞内有ＨＢＶＳ基因的存在；Ｐ８１５Ｓ细胞浆内和膜上有ＨＢｓＡｇ的表达。表明了Ｐ８１５Ｓ细胞可作为体外检测ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ的靶细胞。进一步对Ｐ８１５Ｓ细胞成功地进行５１Ｃｒ标记，以及标记靶细胞５１Ｃｒ最大释放值和自然释放值的测定表明：利用５１Ｃｒ释放法体外检测近交系小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ功能的方法被建立。     

高血压大鼠下丘脑弓状核、室旁核神经元的形态学改变及尼群地平的影响

采用体视学方法，对正常血压鼠（ＷＫＹ），自发性高血压鼠（ＳＨＲ）、服用降压药尼群地平的自发性高血压鼠下丘脑弓状核（ＡＲＣ），室旁核大细胞部（ｍＰＶＮ）和室旁核小细胞部（ｐＰＶＮ）进行了体视学计量研究。实验结果表明，和ＷＫＹ鼠相比，ＳＨＲ鼠ＡＲＣ神经元细胞密度减少，ＡＲＣ神经元胞体增大，ｍＰＶＮ和ｐＰＶＮ的形态学未见明显变化。服用尼群地平的ＳＨＲ鼠体视学参数和未用药的ＳＨＲ鼠基本保持一致，未见逆转倾。作者就上述结果与高血压发生和转归的关系进行了讨论。     

射频消融术后心率变异性改变的临床观察

目的：探讨射频消融术（ＲＦＣＡ）后ＨＲＶ的改变及其自然恢复过程。方法：采用２４ｈ动态心电图的时域及频域分析法，观察ＲＦＣＡ后ＨＲＶ变化。结果：ＲＦＣＡ后２￣３ｄ几乎所有ＨＲＶ的各项频域及时域指标均较ＲＦＣＡ前明显降低，而术后５￣７ｄ各项指标呈仍较ＲＦＣＡ前降低，但仅ＳＤＮＮＩ降低有统计学意义。结论：提示射频电流对心脏自主神经的损伤在术后５￣７ｄ已有所恢复。     

抗小鼠Ⅱ—2R单克隆抗体的制备及初步应用

目的：制备抗小鼠白细胞介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体。方法：利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株，并用细胞ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性克隆。结果：得到３株分泌抗小鼠Ⅱ－２ＲＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，其中８Ｃ８对ＣｏｎＡ刺激淋转有抑制作用，且ｓＩＬ－２Ｒ可抑制８Ｃ８与ＩＬ－２Ｒα一细胞的结合。结论：８Ｃ８是抗小鼠ＩＬ－２Ｒ抗体。     

SHR和WKY大鼠主动脉hsp 70 mRNA水平的比较研究

本工作应用热激蛋白７０ＫＤ核酸分子杂交方法，检测了：（１）自发性高血压主动脉和离体培养的主动脉平滑肌细胞受热激后ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平的变化；（２）不同细胞培养时间的ＳＨＲ、ＷＫＹ主动脉ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平。结果提示ＳＨＲ主动脉ｈｓｐ ｍＲＮＡ水平增加，ＳＨＲ细胞培养受热激后２ｈ，ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平明显高于ＷＫＹ鼠者，６周较３个月的ＳＨＲ细胞ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平高；６个月的ＳＨＲ细     

自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞缺氧预处理的延迟保护作用

目的：观察缺氧预处理（ＰＣ）对于自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）缺氧复氧（Ｈ／Ｒ）损伤的延迟保护作用，并探讨其可能机制。方法：对ＶＳＭＣ于缺氧ＰＣ２４ｈ后进行Ｈ（２ｈ）／Ｒ（１ｈ），结束实验时测定其Ｈ／Ｒ后细胞存活率、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放和ＡＴＰ含量，并测定其金属硫蛋白（ＭＴ）量。结果：缺氧ＰＣ明显减轻Ｈ／Ｒ造成的ＳＨＲ的ＶＳＭＣ存活率下降、ＡＴＰ耗竭和ＬＤＨ释放，并使细胞内应激蛋白ＭＴ含量升高１．３倍，上述指标与正常血压对照组ＷＫＹ大鼠ＶＳＭＣ的结果相近。结论：培养的ＳＨＲ的ＶＳＭＣ亦存在ＰＣ的延迟保护作用，其保护机制涉及ＭＴ合成增多。     

SHR和WKY大鼠主动脉hsp70mRNA水平的比较研究

本工作应用热激蛋白７０ＫＤ（ｈｓｐ７０）核酸分子杂交方法，检测了：（１）自发性高血压（ＳＨＲ）主动脉和离休培养的主动脉平滑肌细胞受热激后ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平的变化；（２）不同细胞培养时间（３个月与６周）的ＳＨＲ、ＷＫＹ主动脉ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平。结果提示ＳＨＲ主动脉ｈｓｐｍＲＮＡ水平增加，ＳＨＲ细胞培养受热激（４２℃，１５ｍｉｎ）后２ｈ，ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平明显高于ＷＫＹ鼠者，６周较３个月的ＳＨＲ细胞ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平高；６个月的ＳＨＲ细胞较同期和３个月的ＷＫＹ细胞ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ高。推论ＳＨＲ血管平滑肌细胞对热敏感，原癌基因ｃ－ｍｙｃ和抗癌基因Ｐ５３可能参与ｈｓｐ７０表达调控，并共同参与ＳＨＲ细胞增殖的调节。     

衰老小鼠激活T细胞内原癌基因表达及钙离子浓度的变化

为了研究影响白细胞介素２基因诱导表达的因素和磷酯酰肌醒信息途径在Ｔ细胞衰老过程中的作用，作者用斑点杂交法检测了老龄小鼠Ｔ细胞原癌基因的表达，用［３Ｈ］－胸腺嘧啶核苷掺入，测定其增殖能力，同时用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光法测定其细胞内钙浓度的变化。结果表明：ｃ－ｆｏｓ的表达在老龄小鼠Ｔ细胞中受到抑制；老龄小鼠Ｔ细胞对伴刀豆球蛋白（ＣｏｎＡ）刺激的增殖力比幼龄小鼠低，佛波酯（ＰＭＡ）和离子霉素联合刺激不能使其增殖力恢复；经ＣｏｎＡ以及ＰＭＡ和离子霉素联合刺激以后，老龄小鼠Ｔ细胞胞内钙浓度比幼龄小鼠低。结果提示老龄小鼠Ｔ细胞中可能存在信息传递系统的变化。     

经物干预或手术干预对急性心肌梗死与冠心病患者心率变异性的影响

目的：探讨药物或手术干预对包性心肌梗死（ＡＭＩ）与冠心病人心率变异性（ＨＲＶ）的影响，方法：通过观察３１例ＡＭＩ患者药物治疗前后ＨＲＶ改变及２６例ＰＴＣＡ术病人，２５例ＣＡＢＧ术病人手术干预性治疗前后ＨＲＶ的改变。结果：三组病人的ＨＲＶ指标在药物或手术干预后均有不同程度的改善，治疗后６个月趋稳定，但仍低于正常对照组。结论心血管的干预性治疗可改善病人的ＨＲＶ值，但该类病人仍存在交感迷走神经的平衡失调     

自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统的关系

目的以２０周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压大鼠（ＷＫＹ）胸主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）为模型，探讨ＳＨＲＡＳＭＣ异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统（ＲＡＳ）的关系。方法用３Ｈ－ＴｄＲ参入量和倍增时间（ＤＴ）反映ＡＳＭＣ的增殖能力，放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）浓度，紫外分光光度法测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性。结果（１）ＳＨＲＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ，ＤＴ显著短于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。基础状态下，ＳＨＲＡＳＭＣ合成ＡｎｇⅡ、ＡＣＥ以及分泌ＡｎｇⅡ的量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。（２）在含２％ＦＣＳ的培养基中，１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲ、ＷＫＹ的３Ｈ－ＴｄＲ参入量分别提高到对照组的３．３倍、２．２倍（Ｐ＜０．０１），ＳＨＲＡＳＭＣ在不同浓度ＡｎｇⅡ刺激时的３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１），１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲＡＳＭＣ细胞数增加７２．５±２３．１％（Ｐ＜０．０１），ＷＫＹＡＳＭＣ细胞数无显著增加，１０倍浓度ＡｎｇⅡ的Ｓａｒａｌａｓｉｎ对ＳＨＲ、ＷＫＹ３Ｈ－ＴｄＲ参入的抑制率分别为６６．７±３．３％，４４．７±９．９％（Ｐ＜０．０１）     

猪囊尾蚴抗原的异质性分析

目的：分析猪囊尾蚴抗原的异质性。方法：采用间接型ＥＬＩＳＡ法，以正常猪血清（ＮＰＳ）为抗原，对用猪囊尾蚴抗原（ＣＦＡ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠杂交瘤细胞的培养上清液进行检测。同时设猪囊尾蚴抗原组。结果：ＮＰＳ阳性２１孔，阳性率２４．７１％（２１／８５）。ＣＦＡ阳性２４孔。结论：猪囊尾蚴抗原含有宿主的蛋白质成分。