稳定表达CD200的U937细胞株的建立

目的：构建稳定表达CD200蛋白的人单核细胞系U937细胞株,为研究该基因的作用机制奠定基础。方法：用电转染基因法将含有人CD200 cDNA的真核表达载体pcDNA3-CD200质粒和pcDNA3质粒分别转入人单核细胞系U937细胞中,经G418筛选,转染阳性细胞连续传代培养,并应用RT-PCR及流式细胞术检测CD200 mRNA和蛋白表达情况。结果：经G418筛选,U937细胞全部死亡,转染pcDNA3质粒和pcDNA3-CD200重组质粒的U937细胞存活,并可连续传代培养30代;转染pcDNA3-CD200重组质粒的U937细胞RT-PCR检测有一特异性扩增带;流式细胞术检测CD200表达结果显示：转染pcD-NA3-CD200重组质粒的U937细胞CD200表达阳性细胞率（77.20%）显著高于转染pcDNA3质粒（3.20%）和U937细胞组（2.10%）（F=133996.40,P〈0.01）;各代间差异无显著性（F=1.03,P〉0.05）。结论：用基因转染法成功地建立了稳定表达CD200蛋白的人单核细胞株U937-pcDNA3-CD200。     

U937细胞向巨噬细胞分化过程中清道夫受体BI(SR-BI)表达的变化

目的： 研究应用佛波酯使U937细胞向巨噬细胞分化过程中清道夫受体BI (SR-BI)蛋白及mRNA表达的变化。 方法： 用免疫细胞化学法、Western印迹法及RT-PCR法检测U937细胞诱导分化前和100 nmol/L PMA诱导分化24、48和72 h SR-BI蛋白及mRNA的表达。 结果： 诱导分化24、48及72 h，免疫细胞化学法检测的U937巨噬细胞SR-BI表达的平均积分吸光度值分别为15.94±3.56、27.86±4.39 及 9.08±2.37，前两者的平均积分吸光度值明显高于未分化细胞的SR-BI表达(7.76±1.74, P<0.05)；Western印迹法中诱导分化组SR-BI蛋白表达量分别是未分化组的2.08(P<0.05)、3.15(P<0.05)和1.24倍(P>0.05)。 RT-PCR结果显示，未分化组与各分化组SR-BI mRNA相对表达量分别是0.112±0.006、0.235±0.014、0.344±0.140和0.138±0.010。 结论： U937细胞向巨噬细胞分化过程中SR-BI蛋白及mRNA表达随着时间而先升高后降低，这种变化可能与泡沫细胞形成有关。     

氧化砷和维甲酸对PLZF-RARa阳性U937细胞的作用

目的：研究氧化砷（As2O3）和全反式维甲酸（AT—RA）对PLZF-RARα阳性细胞的作用。方法：稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞（U937／PLZF）经As2O2、ATRA处理后，Wright—Giemsa染色观察细胞形态，MTr法检测细胞生长增殖状态，流式细胞术（FCM）检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b、CD64、CD14等的表达变化，荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达，细胞化学染色和硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验观察细胞功能分化情况。结果：U937／PLZF细胞在去除四环素条件培养后，PLZF—RARα表达明显增加。As2O3（0．51μmol／L）联合ATRA（1μmol／L）使U937／PLZF细胞核质比缩小，核仁减少但未消失；生长增殖受抑；S期细胞减少；CD11b表达增高；PLZF—RARα蛋白表达减弱，分布以胞核弥漫细小颗粒为主。细胞化学染色和NBT反应变化不明显。结论：0．5μmol／L As2O3联合1μmol／LATRA可使PLZF—RARα阳性U937细胞产生轻微的形态学分化趋势，尚不足以引起其发生功能分化。     

外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中载脂蛋白B的影响

目的：研究Rb基因在U937细胞泡沫化过程中对细胞内载脂蛋白B含量的影响，初步探讨Rb基因在泡沫细胞形成过程中的作用。 方法： 采用氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）孵育U937细胞，以及Ox-LDL孵育同时导入外源性Rb基因转染U937细胞，分别于处理0 h、12 h、24 h收集细胞，半定量RT-PCR与流式细胞术检测Rb mRNA和蛋白的表达，流式细胞术检测细胞内载脂蛋白B的含量。平行实验重复3次，进行统计学方差分析。 结果： 氧化型低密度脂蛋白孵育U937细胞泡沫化过程中，12 h、24 h Rb基因的表达显著低于对照组0 h（P<0.05）；细胞内载脂蛋白B含量则显著高于对照组0 h（P<0.05）。而U937细胞在导入外源性Rb基因后，12 h、24 h细胞内的Rb基因的表达显著高于对照组0 h（P<0.05）；细胞内载脂蛋白B含量则显著低于对照组0 h（P<0.05）。 结论： 外源性Rb基因的导入可以下调细胞内载脂蛋白B的含量，表明Rb基因可能与单核细胞源性泡沫细胞形成有关，可能是影响泡沫细胞形成的相关基因的敏感候选基因之一。     

野生型p53基因导入对U937细胞分化和清道夫受体CD36表达的影响

目的 :单核细胞粘附血管内膜 ,向内膜下迁移、分化成为巨噬细胞 ,巨噬细胞吞噬大量氧化型低密度脂蛋白 (ox -LDL)形成泡沫细胞是动脉粥样硬化斑块形成和发展的重要步骤。CD36属于B族清道夫受体 (classBscavengerreceptor) ,是一种功能多样的细胞表面受体 ,ox -LDL孵育单核细胞系U937细胞形成泡沫化细胞过程中有CD36和p5 3基因表达增高 ,巨噬细胞对ox -LDL的吞噬有 4 0 %是由CD36介导。研究单核细胞向巨噬细胞分化和CD36的表达调控机制 ,对于防止动脉粥样硬化的发生与发展具有重要意义。方法 :①U937细胞培养及同步化处理 :人髓系白…     

白细胞介素-27对白血病细胞株U937细胞生物学行为的影响

目的: 探讨白细胞介素-27(IL-27)对人单核细胞白血病细胞株U937细胞的影响及其机制。方法: 用不同剂量的重组人IL-27和U937细胞分别共培养24h和48h,用荧光定量PCR测定细胞中促凋亡基因 p53、bax 及caspase-3、主要组织相容性复合物Ⅰ(MHCⅠ)类分子、协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达,流式细胞仪检测U937细胞表面CD86和CD54的表达,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定IL-27对细胞增殖的影响。结果: PCR结果显示经过不同剂量IL-27刺激后,U937细胞中促凋亡基因 p53和bax表达增加,同时,U937细胞中凋亡相关蛋白caspase-3的表达及活性也有相应增加;MTT结果显示,IL-27可以抑制U937细胞增殖并和抗肿瘤药物阿糖胞苷产生协同作用;IL-27可以诱导U937细胞中的MHCⅠ类分子(HLA-A,B,C)、表面的协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达增加。结论: IL-27可以诱导U937细胞中促凋亡基因的表达,直接抑制细胞增殖,对细胞中MHCⅠ、CD86和CD54的表达有诱导作用。这可能是IL-27抗肿瘤作用的重要机制。     

转染野生型p53基因诱发家兔动脉粥样硬化斑块不稳定性的实验研究

目的：探讨野生型p53基因对血管平滑肌细胞（VSMC）的促凋亡作用在构建动脉粥样硬化（As）不稳定斑块动物模型中的价值。方法： 54只雄性新西兰纯种兔用球囊损伤腹主动脉+高脂喂养10周, 于8周末随机分成A组（p53基因组，27只）和B组（LacZ基因组，27只），在腹主动脉斑块形成处分别转染携带野生型p53基因或LacZ基因的重组腺病毒载体；2周后，A组和B组各处死10只，观察斑块的自发破裂情况。然后两组剩余实验兔给予中国斑点蝰蛇毒（CRVV）和组胺药物触发，比较两组发生斑块破裂的发生率。应用免疫组织化学染色、流式细胞仪、原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）及电镜检测基因转染部位的平滑肌细胞的凋亡情况。结果： A组TUNEL测定的凋亡阳性细胞率显著高于B组（分别为2.5%±0.8%,1.0%±0.3%，P<0.05），流式细胞仪测定的细胞凋亡率亦明显高于B组（分别为20.04%±6.20%，6.89%±1.20%，P<0.01）；电镜结果显示胞核中异染色体边聚明显，凋亡小体多见；斑块中的VSMC显著减少，纤维帽变薄以及纤维帽/内中膜厚度明显少于B组（纤维帽厚度分别为132.9±56.7，181.8±59.7，P<0.05；纤维帽/内中膜厚度0.20±0.18，0.21±0.11，P<0.05），药物触发后斑块破裂的发生率显著高于B组（分别为85.7%，23.1%，P<0.01）。结论： 外源性人野生型p53基因转染As家兔后，可促进VSMC的凋亡的发生，导致As斑块向不稳定方向发展。     

U937与鼻咽癌细胞混合培养对其CD36表达的影响

U937是一种前单核细胞,其主要是以悬浮生长为主,细胞形态成圆球状,表面光滑,没有突起。在PMA,内毒素或生长因子的刺激下细胞可由悬浮状态衍变为贴壁生长,细胞形态由圆球状变化为多边型,细胞表面有突起伸出。本实验采用流式细胞术检测了U937与鼻咽癌细胞CNE－2混合培养对其CD36表达的影响。结果发现：U937与CNE－2混合培养以促进U937对CD36的表达,共同培养24小时,CD36表达显增加。表明：前单核细胞与肿瘤细胞混合培养可促进前单核细胞向单核细胞的分化。     

丙戊酸钠诱导K562细胞周期阻滞和凋亡并上调p21WAF1基因mRNA的表达

目的：探讨丙戊酸钠（VPA）对慢性粒细胞白血病急变期细胞株(K562细胞)细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法：利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞周期和细胞凋亡情况；利用RT-PCR方法检测p21WAF1基因的mRNA的表达。结果：VPA引起K562细胞凋亡增加［（11.47±0.25）% vs （4.77±0.40）%, (P<0.05)］和细胞周期阻滞在G0/G1期［(82.30±9.41)% vs (40.13±2.12)%, (P<0.05)］。同时处理后的细胞中p21WAF1基因mRNA的表达增加［(1.65±0.91) vs (0.25±0.04), P<0.05］。结论：VPA可能通过上调p21WAF1基因，导致K562细胞周期阻滞并引起细胞凋亡。     

上调c-myc基因的表达对U937白血病细胞的影响

 目的：构建稳定表达外源c-myc基因的人单核细胞白血病细胞株U937,并初步分析其特性。方法：首先构建重组质粒MSCV-c-myc-IRES-GFP （MMIG）载体,分别用MMIG及空载体MSCV-IRES-GFP（MIG）包装病毒,并感染U937细胞,用流式细胞术分选绿色荧光细胞,获得 U937/GFP和U937/MYC细胞,用荧光显微镜及流式细胞术检测GFP阳性率,用Western blotting测定细胞中c-Myc、survivin、X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和Bcl-2的蛋白表达水平,流式细胞术检测U937/GFP和U937/MYC细胞周期,并用MTT法测定U937/GFP和U937/MYC细胞的生长情况,克隆形成实验检测克隆形成能力。结果：荧光显微镜观察,MIG和MMIG病毒感染后,2种细胞均表达绿色荧光蛋白;流式细胞术结果显示,MIG病毒感染的细胞荧光率为26.0%,MMIG病毒感染的细胞荧光率为277%;Western blotting的结果显示,c-Myc蛋白在MMIG病毒感染的细胞中表达水平升高。流式细胞术分选后,荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达明显增多,U937/GFP和U937/MYC细胞绿色荧光蛋白表达率分别达98.7%和93.7%。 U937/MYC细胞中c-Myc蛋白表达较U937/GFP细胞显著升高,c-Myc蛋白下游的survivin表达增多,而凋亡相关蛋白XIAP及Bcl-2的表达则没有明显变化。细胞周期检测显示,U937/MYC细胞处于S期的细胞数增多。MTT实验结果显示,U937/MYC细胞的生长速率较U937/GFP细胞增快。U937/MYC细胞的克隆形成能力较U937/GFP细胞强。结论：成功构建了c-myc基因高表达的U937稳定细胞株U937/MYC。在U937/MYC细胞中,c-Myc及其下游的survivin表达明显上调,处于细胞周期S期的细胞数增多、细胞生长加快、克隆形成能力增强,提示c-Myc可能通过增强自我更新能力、加快细胞周期、促进相关抗凋亡蛋白表达从而提高细胞的存活率。     

Se-methylselenocysteine enhances PMA-mediated CD11c expression via phospholipase D1 activation in U937 cells

CD11c/CD18 is expressed primarily on myeloid cells, where its expression is regulated both during differentiation and during monocyte maturation into tissue macrophages, and is also a receptor for fibrinogen and lipopolysaccharide (LPS). We focused on the molecular mechanisms leading to the activation of CD11c expression in differentiating U937 cells. During phorbol myristate acetate (PMA)-induced differentiation of U937 cells, we found that the mRNA expression of CD11c was increased. Se-methylselenocysteine (Se-MSC) potentiated up-regulation of CD11c expression and its promoter activity and increased PLD1 activity without affecting the level of PLD1 protein in PMA-treated cells. To examine the regulation mechanism of PMA and Se-MSC on CD11c gene expression through the activation of PLD1, we analyzed changes in the CD11c mRNA level and the promoter activity following treatment of a selective PLD inhibitor n-butanol. The combinatory effect of PMA and Se-MSC on CD11c gene expression was abolished by n-butanol in a dose-dependent manner. Further, introduction of PLD1 gene into U937 cells increased CD11c mRNA expression and activated CD11c promoter activity in a dose-dependent manner. These results showed that Se-MSC increased PMA-induced CD11c expression through the activation of PLD1 signaling pathway. To our knowledge, this is the first report that expression of the CD11c gene is regulated by PLD1 and is enhanced by Se-MSC during PMA-induced U937 differentiation.     

替米沙坦抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:探讨替米沙坦对U937细胞株的生长抑制及凋亡诱导作用。方法:分别以不同浓度的替米沙坦处理人类急性髓系白血病细胞U937;以CCK-8法检测不同浓度替米沙坦对U937细胞的生长抑制作用;以集落形成实验观察不同浓度替米沙坦对U937细胞集落形成能力的影响;以Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342染色法检测不同浓度替米沙坦作用前后U937细胞凋亡程度的变化;以流式细胞术检测U937细胞表面抗原CD11b的阳性表达率,瑞氏染色后倒置显微镜进行细胞形态学观察,了解U937细胞的分化情况;以Western blot法检测不同浓度替米沙坦作用U937细胞后凋亡相关蛋白表达量的改变。结果:CCK-8实验结果证实替米沙坦呈时间和剂量依赖性抑制U937细胞的生长;集落形成实验显示低剂量替米沙坦可以完全抑制U937细胞的集落形成能力;Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342法结果证实替米沙坦可以诱导U937细胞凋亡;细胞表面抗原流式检测术及瑞氏染色结果证实替米沙坦可以促进部分U937细胞分化;Western blot实验结果证实替米沙坦作用于U937细胞72 h后,促凋亡相关蛋白cleaved PARP及cleaved caspase-3蛋白的水平明显增高。结论:替米沙坦可以抑制细胞增殖以及诱导U937细胞部分分化,并通过caspase依赖的凋亡途径触发U937细胞凋亡。     

二甲双胍对U937 细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的：探究二甲双胍（metformin）对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响。 方法：以U937细胞为研究对象,予不同浓度的二甲双胍处理,分别在24、48和72 h收集细胞。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式检测细胞凋亡及细胞周期,并使用Western blot方法检测促凋亡蛋白Bax、抑凋亡蛋白Bcl-2、p-AMPK、p53的表达情况。结果：CCK8结果显示二甲双胍抑制U937的增殖,且呈时间-剂量依赖性。流式结果显示二甲双胍处理后细胞周期停滞在G0/G1期,G0/G1期细胞比例的增加呈时间-剂量依赖性。二甲双胍可诱导细胞凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性;二甲双胍浓度为20 mmol/L时,凋亡率呈时间依赖性。Western blot结果显示二甲双胍处理后,p-AMPK、p53、Bax的表达上调,而Bcl-2的表达下调。 结论：二甲双胍能抑制U937细胞的增殖,阻滞细胞周期在G0/G1期,诱导细胞凋亡;其机制可能与其上调胞内促凋亡蛋白Bax的表达、下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达、激活AMPK/p53通路有关。     

脉冲电场联合野生型p53基因诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

背景：在前期研究基础上,设想将基因电转染作为脉冲电场治疗恶性肿瘤的辅助方法。 目的：探讨脉冲电场联合抑癌基因野生型p53基因诱导人宫颈癌hela细胞发生凋亡及相互作用。 方法：采用空质粒及含有野生型p53的质粒转染Hela细胞得到Hela-vector、Hela-p53细胞,将Hela细胞、Hela-vector和Hela-p53细胞分别施加固定脉宽100 μs、频率1 Hz、脉冲数8个、电场强度为1 500 V/cm的脉冲电场处理。 结果与结论：相同参数脉冲电场作用于各组细胞12 h后,MTT结果显示Hela-p53组细胞吸光度明显低于Hela组(P < 0.05);流式细胞仪及RT-PCR检测结果显示Hela-p53组的早期凋亡率和p53 mRNA表达较Hela组明显增加;Western bolt及激光共聚焦显微镜结果显示与Hela组比较,Hela-p53组细胞Bax蛋白表达明显上升,而Bcl-2蛋白则明显下降,Casepase-3相对荧光强度明显增强。表明野生型p53基因对宫颈癌Hela细胞生长有明显的抑制作用,野生型p53基因可以提高脉冲电场诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的作用。     

维生素D3诱导的U937细胞中CD14表达的实验研究

目的: 探讨维生素D3诱导U937细胞上CD14蛋白的表达及其对内毒素 (LPS)刺激的反应性。方法: 用0. 1μmol/LVitD3与U937细胞共同培养 24h诱导CD14基因的表达, 并观察U937细胞对不同浓度的LPS刺激不同时间的反应性。结果: VitD3能稳定诱导U937细胞表达CD14mRNA和CD14蛋白。经VitD3诱导的U937细胞对LPS刺激的敏感性显著增强, 表现为低浓度LPS刺激即能诱导该细胞核中NF -κB激活, 促进TNF- αmRNA的转录和表达, 并将表达的TNF α释放入培养上清中。结论: VitD3能诱导U937细胞中CD14基因和蛋白的表达, 并增加其对LPS刺激的反应性。     

Monocyte CD64 or CD89 targeting by surfactant protein D/anti-Fc receptor mediates bacterial uptake

We recently showed that a chimeric protein, consisting of a recombinant fragment of human surfactant protein D (rfSP-D) coupled to a Fab' fragment directed against the human Fcalpha receptor (CD89), effectively targets pathogens recognized by SP-D to human neutrophils. The present study evaluates the effectiveness of chimeric rfSP-D/anti-Fc receptor proteins targeting Escherichia coli to CD89 or to the Fcgamma receptor I (CD64) on monocytes. Both chimeric rfSP-D/anti-Fc receptor proteins increased internalization of E. coli by the human promonocytic cell line U937, but only after induction of monocytic differentiation, despite the fact that the expression levels of CD64 and CD89 on undifferentiated cells were at least as high as on differentiated cells. The two chimeric rfSP-D/anti-Fc receptor proteins did not enhance each other's effect on E. coli uptake. Targeting to differentiated U937 cells was inhibited by blocking the interaction either between the rfSP-D part of the chimeric molecule and E. coli, or between the anti-Fc receptor Fab' fragment and the Fc receptor on the U937 cell. In conclusion, both CD64 and CD89 on U937 cells prove to be suitable for targeting by rfSP-D/anti-Fc receptor proteins. However, in addition to mere Fc receptor expression, effective targeting requires monocytic differentiation.     

Multiple effects of human recombinant interleukin 4 on human myeloid monocyte cell lines

The effects of recombinant human interleukin 4 (rIL-4) on proliferation and differentiation on human myeloid/monocytic leukemia cell lines were examined. At high concentrations, rIL-4 had a slight enhancing effect on [3H]thymidine incorporation by U937 cells. rIL-4 markedly induced expression of the Fc epsilon receptor (CD23) and the Leu-M3 antigen (CD14) on U937 cells. HL60 and THP-1 cells treated with rIL-4 also showed increased CD23 expression, but little change of CD14 antigen expression. CD23 induction required lower amounts of IL-4 than needed for T cell growth, indicating that CD23 induction on U937 will serve as a sensitive assay for human IL-4. rIL-4 reduced the steady state level of IL-1 beta mRNA in U937.