β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

芹菜素诱导人卵巢癌细胞凋亡作用及机制研究

目的研究芹菜素(API)对人卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。方法培养人卵巢癌SKOV3细胞株,加入不同浓度的API,孵育48 h。PI染色流式细胞术(FCM)分析测定凋亡率;罗丹明染色FCM分析测定细胞线粒体跨膜电位(Δψm);caspase-9分光光度法检测试剂盒测定caspase-9活性;Western印迹检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白的表达,包括bax、bcl-2、caspase-9和caspase-3。结果API(20,40和80μmol/L)作用48 h能呈浓度依赖性地诱导SKOV3细胞凋亡。而且,API也能降低SKOV3细胞的Δψm,增加caspase-9活性,促进细胞色素c(Cyt c)释放,上调bax、caspase-9和caspase-3蛋白的表达,同时下调bcl-2蛋白表达,且呈剂量依赖性。结论API通过活化线粒体信号转导途径诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

熊去氧胆酸促进肝癌HepG2细胞凋亡研究

目的 探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及作用机制。方法 取对数生长期的肝癌HepG2细胞分为0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组,各组分别加入0、5、10μmol/L UDCA药液干预24 h。24 h后采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,倒置光学显微镜观察HepG2细胞的数量、形态变化,流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率和线粒体下降的膜电位,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA相对表达量,Western blot检测Bcl-2蛋白相对表达水平。结果 与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05),且UDCA药物浓度越高抑制率越强;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞数量减少,细胞脱落变圆,悬浮细胞相对增加;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞凋亡率均增加(P均<0.05),线粒体下降的膜电位均增加(P均<0.05);与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组Hep...     

秦皮乙素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的机制研究

目的探讨秦皮乙素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的分子机制。方法不同浓度秦皮乙素(1.12、2.24、4.48 mmol/L)处理人肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪检测线粒体膜电位,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性,蛋白印迹法和免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Caspase-9蛋白的表达。结果秦皮乙素显著降低SMMC-7721细胞线粒体膜电位,提高Caspase-3、Caspase-9的活性,而对Caspase-8的活性无显著影响;升高Bax/Bcl-2比例,进而活化Caspase-9,并呈良好的剂量依赖关系。结论秦皮乙素可通过线粒体途径,启动下游的效应Caspase,诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡。     

冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究

目的:研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法:MTT法、Hoechst33258荧光染色、流式细胞分析法和Western blot分析法。结果:冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性,其作用24h的半数有效抑制浓度IC50=(29.7±1.5)μmol.L-1。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生了凋亡;30μmol.L-1冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),p53抑制剂PFTα显著地抑制了ROS的产生,从而抑制了细胞凋亡的发生;在HepG2细胞中,30μmol.L-1冬凌草甲素促进了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,同时线粒体下游蛋白caspase-9,-3的抑制剂明显地抑制了30μmol.L-1冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过p53蛋白诱导ROS的产生,从而导致HepG2细胞凋亡,除此之外冬凌草甲素还通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

西兰花中异硫氰酸盐诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡作用及其机制的研究

目的：探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡过程中的作用及其可能机制。方法：不同浓度ITCS处理人肝癌细胞HepG-2,应用MTT法检测ITCS对HepG-2细胞增殖的影响；流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况。结果：ITCS可明显抑制HepG-2细胞增殖；15,30,60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内活性氧分别为(23.1±1.8)%,(53.3±3.3)%,(57.9±2.0)%,(79.9±3.4)%,(93.4±2.6)%；Δψm分别为(94.8±5.5)%,(91.8±5.4)%,(66.0±5.6)%,(65.5±6.6)%,(44.3±2.7)%；60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%,(21.9±4.4)%,(70.2±5.3)%。结论：ITCS能够通过刺激HepG-2细胞内活性氧的产生,损伤线粒体,使其膜电位下降,引起HepG-2细胞凋亡。     

白蔹药效成分没食子酸抑制人肝癌HepG2细胞生长及作用机制研究

目的:探讨从白蔹抗肿瘤活性部位分离得到的没食子酸对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的没食子酸处理HepG2细胞,MTT法测定没食子酸对HepG2细胞生长增殖的抑制活性;采用Hochest染色、荧光显微镜、Annexin V-FITC/PI双标记法和流式细胞术观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡;采用JC-1染色检测HepG2细胞线粒体膜电位变化情况。结果:没食子酸在12.5～200 mg·L-1对HepG2细胞生长有明显抑制作用,且呈一定的浓度依赖性;没食子酸能诱导HepG2细胞凋亡,降低细胞线粒体的膜电位。结论:没食子酸为白蔹抗肿瘤主要活性成分之一,通过降低细胞线粒体的膜电位而诱导细胞凋亡为其抗肿瘤作用机制之一。     

PEG修饰β-谷甾醇制备新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体的研究

目的：探讨用聚乙二醇(PEG)修饰β-谷甾醇(PEG-Sito)制备新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体的可行性。方法：以丁二酸酐为连接臂连接β-谷甾醇与PEG 2000合成PEG-Sito;以鞘磷脂和PEG-Sito为膜材采用乙醇注入法制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体;脂质体以鱼精蛋白沉淀法进行包封率的测定;¹H-NMR验证PEG-Sito的合成;粒径、电位、AFM电镜表征该新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体。结果：¹H-NMR证实了PEG-Sito的合成成功,采用乙醇注入法用PEG-Sito为材料制备长循环脂质体的包封率为74.3%,粒径288.1 nm,电位－20.25 mV,电镜下呈规则圆形。结论：用PEG-Sito为材料制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体方法可行,绞股蓝总皂苷包封率高,形态和粒径均较好。     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

阿萨伊油中β-谷甾醇及总甾醇含量测定和抗氧化活性研究

建立阿萨伊油中甾醇类成分的含量测定方法,并对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价。采用高效液相色谱法建立了阿萨伊油中β-谷甾醇、总甾醇(β-谷甾醇、豆甾醇之和,以β-谷甾醇计)的含量测定方法。采用Purosper STAR LP C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-异丙醇(30:70)为流动相,流速1 mL·min^-1,柱温为室温,蒸发光散射检测器漂移管温度70 ℃,雾化器流速2.0 L·min^-1。结果表明β-谷甾醇在0.766~6.38 μg线性关系良好,回归方程为Y=1.639X+0.702 7(r=0.999 2),平均加样回收率为95.7%(RSD 2.8%)。阿萨伊油中β-谷甾醇的质量分数为1.85 mg·g^-1,总甾醇的质量分数为1.93 mg·g^-1。同时采用总氧自由基清除能力(TOSC)法对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价,结果表明样品具有显著的抗氧化能力,样品浓度和抗氧化能力具有较好的剂量-效应关系。     

洛克米兰醇对肝癌HepG2细胞的抗增殖作用及其机制研究

目的研究传统中药米仔兰Aglaiaodorata中洛克米兰醇对肝癌细胞HepG2增殖的影响及抗肿瘤作用机制。方法 MTT、细胞克隆形成、EdU染色和CFDA染色方法考察洛克米兰醇对HepG2细胞的抗增殖效果;流式细胞仪检测洛克米兰醇对HepG2细胞细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blotting检测洛克米兰醇对细胞周期调控蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响。结果洛克米兰醇可以时间和浓度依赖性抑制HepG2细胞增殖。同等浓度下洛克米兰醇抗HepG2细胞增殖的效果好于阿霉素,而对正常肝细胞(L02)的毒性弱于阿霉素。流式细胞技术检测发现洛克米兰醇给药48 h能够诱导HepG2细胞G₂/M期细胞周期阻滞,但不诱导细胞凋亡。Western blotting研究发现该化合物抑制调控G₂/M周期相关蛋白cdc25C、cdc2和cyclin B1的表达并且激活细胞外调节蛋白激酶(ERK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)。对其机制深入研究发现,ERK抑制剂(U0126)可以部分逆转洛克米兰醇对HepG2的抗增殖和G     

PhaseoloidesideE诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:以人肝癌HepG2细胞为研究对象,探讨phaseoloideside E(PE)的体外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法,检测不同浓度的PE处理48 h后对HepG2细胞的细胞毒性效应;应用光学显微镜、荧光显微镜观察PE处理下的细胞形态学变化;用DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测凋亡,并用免疫印迹法检测PE对凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达水平的影响。结果:PE对HepG2细胞的生长有明显的细胞毒性效应;直接形态显微观察及Hoechst 33258荧光染色皆可见典型的凋亡细胞形态学特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示给药组出现明显的DNA梯状凋亡带,而对照组没有出现梯状条带;免疫印迹结果显示PE可以增加Bax表达并减少Bcl-2表达。结论:PE能够诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提示PE诱导的Bax,Bcl-2蛋白的表达水平变化可能与它的凋亡诱导效应紧密相关。     

Cytotoxic effect of Eucalyptus citriodora resin on human hepatoma HepG2 cells

The aim of this study was to evaluate the antiproliferative effect of Eucalyptus citriodora resin (ECR) on human hepatoma HepG2 cells. The results from MTT assay and LDH leakage analysis showed that water extracts of ECR (WEECR) in the dose range of 0-500 μg/ml displayed stronger cytotoxic effects on HepG2 cells than other organic solvent extracts of ECR. By flow cytometry analysis, WEECR slowed down the cell cycle at the G0/G1 phase after 24 h of incubation. Moreover, WEECR treatment induced an apoptotic response in HepG2 cells. WEECR-induced apoptosis was in association with the attenuation of mitochondrial transmembrane potentials (ΔΨ(m)), increased Bax/Bcl-2 ratio and activation of caspase-3. In addition, WEECR contained high concentration of phenolics and flavonoids, which may be responsible for the potent cytotoxicity of WEECR on HepG2 cells. Taken together, WEECR may be a potent antihepatoma agent due to apoptosis in HepG2 cells.     

小柴胡汤对体外培养人肝癌细胞株HepG2增殖的影响

目的探讨小柴胡汤45%乙醇提取物对体外培养人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其可能的机理。方法采用ATP-Lite法测定不同浓度小柴胡汤对体外培养的HepG2增殖的作用,同时利用氧自由基清除能(ORAC)法测定样品的抗氧化活性;以LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO),Griess法测定NO的终产物亚硝酸盐的含量,观察样品对NO生成的影响。结果小柴胡汤在62.5～500mg/L浓度范围内可以显著抑制HepG2增殖,抑制作用呈剂量相关性,计算半数抑制浓度(IC50)为(90.7±23.7)mg/L。小柴胡汤提取物具有一定的抗氧化活性,其抗氧化能力为阳性对照维生素C的1.3倍。小柴胡汤在3.125～50mg/L浓度范围内均可以显著抑制NO的生成(P0.05,P0.01)。结论小柴胡汤具有体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,其抑制作用可能与其抗氧化活性及抑制NO生成有关。     

Antiproliferative and apoptotic effects of tetrandrine on different human hepatoma cell lines

Tetrandrine (TET), a bis-benzylisoquinoline alkaloid isolated from the dried root of Hang-Fang-Chi (Stephania tetrandra S. Moore), is well known to possess activities including antioxidant, anti-inflammation, anti-fibrotic and anticancer. It is used clinically to treat hypertension and silicosis. In the present study, the anti-proliferative and apoptotic effects of TET were evaluated on three different hepatoma cell lines, namely Hep G2, PLC/PRF/5 and Hep 3B. Using XTT assay, results showed that the IC50 values of TET were 4.35 microM for Hep G2, 9.44 microM for PLC/PRF/5 and 10.41 microM for Hep 3B cells. The CC50 of TET against BNL-CL.2 mouse normal liver cells was 31.12 microM. Interestingly, TET exhibited a lower IC50 value and better selectivity against Hep G2 and PLC/PRF/5 cells than cisplatin. Microscopic observation study, DNA fragmentation assay and flow cytometric analysis further supported apoptotic effect of TET on both PLC/PRF/5 and Hep 3B cells. The cell cycle of PLC/PRF/5 treated with TET appeared to arrest at G2/M phase in a dose-dependent manner, whereas no effect was noted on the cell cycle of Hep 3B cells. The present study concludes that TET exhibited anti-proliferative effect on Hep G2, PLC/PRF/5 and Hep 3B cells in a dose-dependent manner. TET also possesses a lower IC50 and better SI value than cisplatin against Hep G2 and PLC/PRF/5 cells. The effect of TET on cell cycle progression was found to vary with the type of hepatoma cells, suggesting the genetic make-up of the cells play an important role in the response to drug treatment.     

降糖宁胶囊对HepG2细胞糖代谢作用及其作用机制的研究

目的观察降糖宁胶囊(人参、山药、石膏、知母等)对Hep G2细胞糖代谢的影响,并探讨其降糖机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,MTT法检测降糖宁对细胞活力的影响;HE染色法观察降糖宁对细胞形态的影响;采用葡萄糖氧化酶法检测降糖宁对细胞糖消耗的影响;Western-blot检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及人胰岛素受体底物(IRS1)表达量。结果降糖宁胶囊对Hep G2细胞的活力和形态无明显影响,可明显促进Hep G2细胞对葡萄糖的消耗,能促进AMPKβ1/2、IRS1蛋白表达量。结论降糖宁胶囊的降糖机制可能涉及对胰岛素受体信号通路及AMPK信号通路的影响。     

结合斑蝥素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用

目的研究贵州罗甸地区南方大斑蝥(Mylabris phalerata Pallas)和黄黑小斑蝥(Mylabris cichorii Linnaeus)体内的结合斑蝥素(conjugated cantharidin)对人肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡的影响。方法采用两种斑蝥三氯甲烷提取物的水浸液获取结合斑蝥素。运用磺酰罗丹明染色法(SRB)检测结合斑蝥素对Hep G2细胞增殖的作用。利用Annexin V-FITC/PI双染法检测结合斑蝥素对Hep G2细胞凋亡的影响。应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果两种结合斑蝥素对Hep G2细胞的增殖均有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.90、0.85 mg/L。流式细胞术结果显示,以0.90 mg/L的南方大斑蝥结合斑蝥素和0.85 mg/L黄黑小斑蝥结合斑蝥素作用Hep G2细胞24 h后,细胞呈典型的凋亡形态特征,凋亡率分别为(10.5±1.45)%和(12.8±1.53)%;结论两种来源斑蝥体内结合斑蝥素均可抑制肝癌Hep G2细胞的增殖并促进其凋亡。     

Growth inhibitory and apoptosis inducing effect of Perilla frutescens extract on human hepatoma HepG2 cells

Perilla frutescens (L.) Britt. (Lamiaceae) has traditionally been used to treat diseases, including tumors, but the antitumorigenesis mechanism is unclear. We evaluated the effects of Perilla frutescens leaf extract (PLE) on proliferation and apoptosis inducing in human hepatoma HepG2 cells using a cell proliferation assay, flow cytometry, and cDNA microarrays. Gene expression and apoptosis were also assessed in HepG2 cells treated with a major constituent of PLE, rosmarinic acid (RosA). In the PLE-treated HepG2 cells, antiproliferative activity (105 microg/mL) were observed, flow cytometry revealed significant apoptosis, and microarray data indicated that the expression of a lot apoptosis-related genes were regulated in a time-dependent manner. Compared with PLE, RosA (10 microg/mL; a dose equivalent to 105 microg/mL of PLE) was less effective in increasing the expression of apoptosis-related genes and apoptosis inducing in HepG2 cells. Thus, additional PLE constituents may influence apoptosis in HepG2 cells. The results of our study suggest that the PLE should be further investigated as a promising to treat hepatocellular carcinoma.     

Antiproliferative effects of alkaloids from Sedum sarmentosum on murine and human hepatoma cell lines

The whole plant of Sedum sarmentosum (SS) has been traditionally used for the treatment of chronic viral hepatitis in China and South Korea. Certain hepatitis virus causes acute and chronic hepatitis and induces hepatocellular carcinoma (HC). In the present study, we examined whether the crude alkaloid fraction (CAF) of SS had any anticancer effects on hepatoma cell lines. Murine hepatoma (BNL CL. 2) and human hepatoma (HepG2) cell lines were cultured in the presence of CAF of SS at various doses (50-150 microg/ml) for 24 or 48 h. CAF caused a dose-dependent inhibition of cell proliferation without necrosis or apoptosis. Antiproliferative effects of CAF of SS were associated with an increase in the number of cells in the G1 phase of cell cycle. This study suggests that SS may improve survival of hepatoma patients via the inhibition of excessive growth of tumor cells.     

青蒿琥酯抑制人肝癌细胞株HepG2细胞生长及其机制的初步研究

目的：研究青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和survivin表达的影响,探讨青蒿琥酯影响肝癌细胞增殖的可能机制.方法：常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组;青蒿琥酯不同浓度组（3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、50μg/ml）,作用不同时间后用MTT法检测青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,应用RT-PCR检测细胞survivin在mRNA水平的表达.结果：青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,与对照组比较细胞生长明显受到抑制（P〈0.05）,当青蒿琥酯浓度在12.5μg/ml时,survivin的表达（相对表达量为（0.75＋0.01）显著降低（P〈0.05）.结论：青蒿琥酯可通过下调survivin的表达来抑制肝癌细胞HepG2的生长.