酶法转化制备人参皂苷单体的研究进展

人参皂苷具有抗肿瘤、抗病毒、延缓衰老、增强免疫等多种药理活性,但不同皂苷单体在药材及其提取物中量不同,其药理活性亦有差异,量低而药理活性强的皂苷单体需大量制备,以满足医疗和科研需要。如何定向提高人参皂苷单体的量,酶法制备是解决该问题的关键技术,且利用该法有效定向获得人参皂苷单体进行了大量研究。就酶法转化制备人参皂苷单体进行综述,为人参皂苷单体的进一步开发利用提供理论依据和参考。     

肠道菌群代谢转化中药皂苷类成分研究进展

近年来，肠道菌群代谢转化中药皂苷成为国内外研究的热点。中药皂苷类成分口服后难以直接在肠道中吸收，生物利用度低，肠道菌群产生的代谢酶可参与中药皂苷的代谢转化，使其生成低极性的次级苷、苷元或其他代谢物而发挥药理作用。通过综述中药皂苷在肠道菌群下的代谢反应、参与中药皂苷代谢转化的肠道菌群、代谢产物的活性、影响肠道菌群代谢转化中药皂苷的因素，为后续中药皂苷类成分在肠道中的代谢转化研究提供理论指导。     

人参皂苷生物转化研究进展

人参皂苷是人参属植物药理活性的重要物质,尤以稀有人参皂苷及苷元的抗肿瘤,保护神经系统,保肝护肝等药理活性最为显著,因此,研究稀有人参皂苷获取的方法也日益增多。该文对人参属植物中人参皂苷的生物转化进行了简要的概述和展望。     

人肠道菌对人参皂苷的代谢及相关产物的抗变态反应活性

人参皂苷R_(b1)、R_(b2)、R_c可转化为20-O-β-原人参萜二醇(IH-901,化合物K)。对人参皂苷R_c经人肠道菌代谢及其相关生物活性的研究尚不完善。本次对此进行了研究,包括人参皂苷R_c经人肠道微生物区系代谢物的分离、代谢人参皂苷R_c细菌的筛选、人肠道菌代谢人参皂苷R_c活性检测、人粪便微生物区系代谢人参皂苷R_c的时效研究及人参皂苷类对RBL-2H3细胞系的抗变态反应活性检测等实验。     

人参皂苷Re在大鼠体内的代谢研究

目的:研究人参皂苷Re在大鼠体内的代谢情况并了解其代谢产物.方法:将6只SD大鼠按100mg·kg~(-1)灌胃给予人参皂苷Re,收集给药后12,24,36,48,60,72h粪便,预处理后采用HPLC-ESI-Ms/Ms方法,以人参皂苷Re的微生物转化产物为对照品,检测大鼠体内的代谢产物.结果:在大鼠体内共检测到6个代谢产物,并利用对照品鉴定了它们的结构分别为:20(S)-人参皂苷Rg2,20(S)-人参皂苷Rh_1,20(R)-人参皂苷Rh_1,人参皂苷F_1,3-羰基人参皂苷Rh,和原人参三醇.结论:人参皂苷Re在大鼠体内的代谢产物较多,且与微生物转化产物具有很强的相似性.     

人参皂苷Rg1在大鼠体内的代谢研究

目的：研究人参皂苷Rg1在大鼠体内的代谢情况，阐述人参皂苷Rg1在大鼠体内的代谢产物。方法：以人参皂苷Rg1的微生物转化产物为对照品，采用LC—ESI—MS／MS方法，检测大鼠体内的代谢产物。结果：在大鼠体内共检测到6个代谢产物，并利用对照品鉴定了它们的结构。结论：表明微生物转化和体内代谢具有相似性；     

蜗牛酶转化人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CompoundK的研究

目的:确定蜗牛酶转化人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷Compound K(CK)的主要因素,并优选出转化效率高、稳定、适合工业化生产的工艺条件。方法:采用蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK,以转化率为指标,通过单因素考察p H值、温度、底物浓度、酶用量、反应时间对转化率的影响,并通过响应面法试验优化制备工艺;采用MS,1H-NMR,13C-NMR鉴定酶解产物。结果:酶解反应的最优条件为温度55℃、p H值5.5醋酸-醋酸钠缓冲液,底物浓度1.0mg/m L,酶与底物质量比1∶1,反应时间36h,在此条件下的转化率为86.91%;经核磁图谱证实产物为人参稀有皂苷CK。结论:蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK反应条件温和,工艺简单可靠,适合工业化生产。     

稀有人参皂苷糖苷化合成方法的研究进展

稀有人参皂苷是人参皂苷中一类重要的活性成分,该类化合物具有极强的抗肿瘤活性。其主要通过糖苷化的方法来实现,现有的糖苷化方法主要包括化学合成法、酶解法和微生物转化法。研究表明糖苷化能改变化合物的生物活性、稳定性、水溶性、以及与受体分子的相互识别和结合特性,另外还能降低或除去内源和外源有毒物质的毒性。综述了3类糖苷化方法,并对比总结各个方法的优劣之处,有利于选择出最佳的合成稀有人参皂苷的糖苷化方法,以满足临床和科研等方面的需求。对人参皂苷的糖苷化最新研究进展进行综述,并对糖苷化人参皂苷的发展趋势作了简要的讨论。     

肠内菌群对人参皂苷Rg1的代谢转化作用的研究

目的 :通过离体和整体实验研究大鼠及人的肠道内细菌对人参皂苷Rg1的代谢作用。方法 :用薄层层析及电喷雾质谱检测Rg1的代谢产物。结果 :Rg1在大鼠体内被代谢成一对同分异构体 (Rh1及F1)及苷元 [2 0(S)Protopanaxatriol,Ppt]。但在人的肠道内 ,则代谢物为Rh1及苷元。结论 :Rg1在人和大鼠肠内菌作用下均被代谢 ,但沿不同的代谢途径进行代谢。在大鼠体内 ,代谢模式为 :Rg1Rh1(F1)Ppt ;在人体内 ,代谢模式为Rg1Rh1Ppt。     

酶转化三七叶总皂苷制备人参皂苷C-K的工艺优化

目的 研究以三七叶总皂苷制备人参皂苷C-K的酶转化工艺。方法 利用4种工业酶制剂对三七叶总皂苷进行转化，筛选出最佳酶制剂；以人参皂苷C-K的含量为指标，采用正交试验法进行酶转化工艺的优化；采用TLC及HPLC法检测酶转化产物。结果 酶转化三七叶皂苷的最佳工艺条件为：20％p葡聚糖苷酶，pH5．4，反应温度55℃，反应时间48h。反应时间的影响最大，其次是酶的体积分数。结论 β-葡聚糖苷酶对三七叶总皂苷的转化作用最强。     

柴胡总皂苷提取物体外溶血作用

目的:考察柴胡总皂苷提取物的溶血作用和抗氧化剂对柴胡总皂苷溶血的影响。方法:通过肉眼观察和分光光度法考察不同浓度柴胡皂苷的溶血作用及抗氧化剂对柴胡总皂苷溶血的影响。结果:柴胡总皂苷质量浓度为在0.01,0.02 g.L-1时,其溶血曲线呈S形,溶血当量为0.01 mg,溶血指数为1∶10万,抗氧化剂与柴胡总皂苷组溶血率低于同浓度柴胡总皂苷组。结论:柴胡总皂苷具有一定的溶血作用,且溶血强度与浓度呈剂量依赖性,抗氧化剂的加入能减轻柴胡总皂苷的溶血作用。     

射干提取物体内体外抑菌作用的研究

目的:研究射干提取物的体内外抑菌作用。方法:通过测定抑菌圈直径考察射干提取物对不同菌株的敏感性;采用2倍稀释法检测射干提取物的最小抑菌浓度(MIC);通过ip金黄色葡萄球菌观察射干提取物低、中、高(0.46,0.92.1.84g.kg-1)3个剂量ig给药7 d对小鼠的致死保护率。结果:肺炎链球菌、铜绿假单胞菌对射干提取物有较强的敏感性,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、化脓链球菌、痢疾志贺菌对射干提取物中度敏感;射干提取物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、无乳链球菌、化脓链球菌、痢疾志贺菌的最小抑菌浓度(MIC/g.mL-1)分别为0.062 5,0.015 6,0.250 0,0.031 2,0.015 6,0.015 6,0.062 5;射干提取物低、中、高3个剂量组均显著降低金黄色葡萄球菌酵母悬液引起的小鼠死亡率,死亡率分别为45%,35%,30%,与模型对照组死亡率100%比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:射干提取物体内体外对所试菌株均有抑菌作用。     

雄黄致体内外染色体畸变

目的:用仓鼠体内染色体畸变试验和中国仓鼠肺细胞CHL细胞染色体畸变试验评价雄黄的遗传毒性.方法:体内染色体畸变试验用毛足属仓鼠连续ig5 d给予33.25,66.5,133 mg·kg-1剂量雄黄悬浊液,处死前2 h ip秋水仙素.处死后取骨髓细胞制备染色体.油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型.CHL细胞染色体畸变试验用雄黄浸出液终质量浓度为0.15,0.3,0.6g.L-1作用于CHL细胞,培养24 h或48 h,终止培养前4h加入秋水仙素.收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞有丝分裂指数和200个中期分裂相细胞的畸变类型.结果:①雄黄265.0 mg· kg -1组和雄黄530.0 mg·kg-1组ig给药和雄黄浸出液(1.2,2.4g·L-1)作用于CHL细胞显示有明显的抑制有丝分裂作用.②与阴性对照组比较,雄黄ig给药仓鼠体内染色体畸变率和雄黄体外给药CHL细胞染色体畸变率均显著升高,差异有极显著意义,且有明显的量效关系.但体内试验的畸变率低于体外试验.③雄黄给药后CHL细胞染色体畸变试验中可见较多的染色体断片,而仓鼠体内染色体畸变试验中未发现,这可能与体内外药物作用的方式不同.结论:①雄黄能致体内外细胞染色体畸变,具有遗传毒性.②仓鼠体内染色体畸变试验可作为中药新药遗传毒性评价试验组合的方法之一.     

何首乌不定根的离体诱导及悬浮培养研究

通过离体不定根的高效诱导与悬浮培养,实现何首乌资源的永续利用。在培养基中添加不同浓度的蔗糖和植物生长物质,筛选从幼茎有效诱导不定根的最适培养基;采用正交试验筛选不定根悬浮培养的最适培养基;对悬浮培养的不定根进行继代培养并测定生长曲线,同时对不定根中的主要有效成分进行检测。结果表明,能够从幼茎有效诱导不定根的最适培养基为MS+蔗糖 40 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+6-卞基腺嘌呤 0.2 mg·L^-1;不定根悬浮培养的最适培养基为 MS+蔗糖30 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+生根粉 0.2 mg·L^-1;经过检测,发现不定根同样含有何首乌药材中的主要有效成分二苯乙烯苷。该实验实现了何首乌不定根的高效诱导与培养,为中药资源的永续利用研究提供了工作基础。     

Evaluation of toxicity of Calophyllum brasiliense stem bark extract by in vivo and in vitro assays

Ethnopharmacological relevance

Calophyllum brasiliense Camb., Clusiaceae, is commonly known as “guanandi” and its stem bark is used in Brazilian traditional medicine to treat rheumatism, vein problems, hemorrhoids and gastric ulcers. The aim of this study was to evaluate the toxicity of hexane extract of Calophyllum brasiliense stem bark (HECb) using in vitro and in vivo experimental models.

Materials and methods

In vitro toxicity was evaluated by Alamar Blue cytotoxicity assay and micronucleus test, using Chinese hamster ovary (CHO-k1) epithelial cells. in vivo toxicity was evaluated by oral acute and subchronic toxicity assays. In the oral acute toxicity screening, a single dose of HECb was administered to mice at doses ranging from 250 to 1000 mg/kg. In the subchronic study, HECb was administered orally for 30 days to Wistar rats at doses of 100 mg/kg and 500 mg/kg. Phytochemical analyses were performed by HPLC/UV–vis, secondary metabolites were quantified by spectrophotometric methods.

Results

HECb presented IC₅₀=119.94±4.31 µg/mL after a 24 h cytotoxicity test using CHO-k1 cells, showing low cytotoxicity. However, when the cells were exposed to HECb for 72 h, the IC₅₀ value was 8.39±2.00 µg/mL, showing in this case, a pronounced cytotoxic effect. In the oral acute toxicity studies, doses up to 500 mg/kg of HECb did not cause any changes in both male and female mice. At 1000 mg/kg, male mice showed signs typical of depression and stimulation that were reversed at 72 h. Besides, female mice were more sensitive to the toxic effect of HECb at 1000 mg/kg, which initially presented typical agitation signals, followed by depression signals, leading to death of all the animals at 24 h. In subchronic assay with rats, HECb administered orally at doses of 100 and 500 mg/kg did not cause significant changes in all clinical parameters evaluated. Histopathological analyses showed no deleterious effect in the vital organs of rats. Preliminary phytochemical analysis revealed the presence of phenolic compounds, steroids, and volatile coumarins. Analysis by HPLC showed two major peaks characteristic of chromanones.

Conclusions

In vitro toxicological tests showed that HECb exhibited cytotoxicity especially after 72 h of exposition, and mutagenicity on the highest tested dose. The in vivo studies demonstrated that HECb produced some toxicity signs at the highest dose tested, particularly, in the acute toxicity test but showed no significant signs of toxicity in the subchronic assay. Based on these and previous pharmacological studies, it is possible to say that HECb did not exhibit significant toxicity at its effective dose. This suggests that HECb is relatively safe in humans at its effective dose.     

夏枯草花粉离体萌发观察

选用唇形科植物夏枯草花粉为材料,通过在离体条件下花粉的萌发来探讨夏枯草花粉萌发的最适条件.以10％ H3BO4,30％ Ca(NO3)2,20％ MgSO4,10％ KNO3配制成无机盐溶液为基本培养基,统计不同相对分子质量的PEG,不同浓度的蔗糖,不同pH和不同温度条件以及不同采集时间下花粉萌发率的情况.夏枯草花粉萌发的最适液体培养条件是:10％ H3BO4 +30％ Ca(NO3)2 +20％ MgSO4+10％ KNO3+25％ PEG-4000,pH在6.5左右,刚刚开花时采集的花粉在此条件下花粉萌发率最高.     

交泰丸有效部位自微乳系统的体内外评价

目的:对交泰丸有效部位自微乳化释药系统质量及大鼠在体肠吸收进行评价。方法:考察交泰丸有效部位自微乳液的外观、自微乳化后微乳粒径分布、外观、形态、类型、自乳化时间、药物含量及自微乳、微乳化后的稳定性;以黄连总碱为指标,运用大鼠在体肠回流模型,分析比较交泰丸有效部位制备自微乳前后对大鼠在体肠吸收的改善。结果:交泰丸有效部位自微乳化后微乳平均粒径为34.12 nm,可在3 min内基本乳化完全;自微乳液在室温下放置3个月较稳定;自微乳化后的微乳液在37℃下0.1 mol.L-1HCl溶液中放置8 h,交泰丸有效部位自微乳液与有效部位溶液剂比较,黄连总碱在体肠灌流液中的相对剩余百分含量(T)和表观吸收速率常数(Ka)值均获得明显提高(P0.01),前者的Ka是后者的152.6%。结论:自微乳化给药系统能显著改善交泰丸有效部位中黄连总碱大鼠小肠吸收,增加肉桂油在制剂中的稳定性。适合难溶性和难吸收药物的口服吸收,提高其生物利用度,是具有良好应用前景的中药制剂新剂型。     

金线莲抗软腐病离体鉴定方法的研究

以活体喷雾法作对照,研究不同离体接种方法、不同接种浓度以及不同叶龄对金线莲抗软腐病的影响。结果表明离体叶碟滴接法接种后金线兰和台湾金线莲之间病情指数差异较大,能够比较明显区分其抗病性;当接种浓度为1.0×10⁷ cfu·mL^-1时,病情指数差异较明显,能够较好地区分抗、感病品种;在4个月叶龄接种时,金线兰和台湾金线莲间病情指数有一定的差异,能相对准确地反映品种间的抗性差异。采用离体叶碟滴接法,对4个月叶龄的金线兰与台湾金线莲接种浓度为1.0×10⁷ cfu·mL^-1的细菌悬浮液,放入14 h光照、28℃培养箱中培养5 d后进行鉴定,其鉴定结果与活体喷雾法一致,可用于金线莲抗软腐病离体鉴定,为金线莲抗软腐病的新品种选育及种质创新提供依据。     

黄芩花粉离体萌发与花粉管生长研究

目的:筛选黄芩花粉离体萌发和花粉管生长的最佳培养体系,为黄芩花粉活力测定提供一种高效的测定方法.方法:以二年生黄芩植株为材料,采用液体培养法研究了培养基种类,蔗糖,PEG,pH以及培养温度、培养时间对黄芩花粉离体萌发生长的影响.结果与结论:100 g·L-1的蔗糖有利于花粉萌发和花粉管生长,高浓度蔗糖有明显抑制作用;PEG可促进花粉萌发生长,150 g·L-1PEG为最适作用浓度;黄芩花粉可以在BK培养基上较好萌发生长,以BK+ 10％蔗糖+150 g· L-1PEG( pH 5.8)培养效果最佳;25～35℃条件下黄芩花粉均可良好萌发,但25℃下花粉管生长明显减缓,其中以30℃培养2～3h花粉萌发生长最为良好.     

三七总皂苷肠溶微丸的体内外相关性

目的:考察三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins,PNS)肠溶微丸在Beagle犬体内的释药行为及其体内外相关性。方法:采用双周期交叉试验设计,6只健康Beagle犬口服自制PNS普通胶囊或自制PNS肠溶微丸(胶囊型)后,用HPLC测定血药浓度,计算2种制剂的药动学参数,进行生物利用度比较,并对体外累积释度和体内累积吸收率进行线性回归。结果:自制PNS肠溶微丸对PNS普通胶囊的相对生物利用度为三七皂苷R1 520.56%,人参皂苷Rb1 367.70%,人参皂苷Rg1251.66%,上述3成分在体内的平均滞留时间均延长;R1,Rb1,Rg1的体内外相关系数分别为0.784 9,0.877 2,0.691 2。结论:自制PNS肠溶微丸与PNS普通胶囊相比生物利用度更高,在pH 6.8的缓冲液中R1,Rb1,Rg1的体内外相关性较差。