缺氧诱导因子-1αmRNA表达与胃癌血管生成、侵袭转移及预后的关系

近年来发现的转录因子缺氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）在氧平衡及肿瘤微血管形成中起着重要作用,HIF-1由α和β两个亚单位组成.其中HIF-1α是决定HIF-1活性的缺氧调节亚基.为此,我们采用原位分子杂交方法检测胃癌组织中的HIF-1α mRNA表达并分析其与血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白,微血管密度（MVD）及生存期的关系,旨在探讨HIF-1α和VEGF在胃癌侵袭转移中的作用及对胃癌患者预后的影响.     

缺氧诱导因子-1α对肿瘤侵袭转移的影响

肿瘤的形成和演变依赖于机体氧气和各种营养物质的供给,但肿瘤异常增殖和过度生长使瘤内出现严重缺氧,此时肿瘤细胞便通过调节自身代谢克服机体氧气和营养物质的不足,保证存活、快速生长和转移。缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α、HIF-1α）是近年来发现的广泛表达于人和哺乳动物细胞内的一种调控缺氧应答的转录因子,与肿瘤细胞去分化、增殖、凋亡、新生血管生成、侵袭和转移、放化疗耐受等密切相关[1-3]。大量的研究显示其在良性肿瘤中表达较低,恶性肿瘤中表达升高,而转移性肿瘤中的表达则更高,提示HIF-1α在肿瘤侵袭与转移方面起着非常重要的作用,并且是导致不良预后的主要原因。目前,HIF-1α关于肿瘤侵袭和转移中的作用及机制成了研究的热点,而对其阻断的研究可能使诊治上取得突破。现对HIF-1α关于肿瘤侵袭和转移方面的研究进展作一综述。     

直肠癌组织中低氧诱导因子1α的表达及与微淋巴管密度和淋巴结微转移的关系

目的 探索低氧诱导因子1α(HIF-1α)在直肠癌组织中的表达情况及其与直肠癌微淋巴管密度(MLVD)和淋巴结微转移的关系.方法 收集安徽医科大学第一附属医院2000-2003年间手术切除并经病理证实的中低位直肠癌标本40例,并取相应癌旁组织作为对照.用免疫组织化学方法测定组织中HIF-1α表达、D2-40表达(计算M...     

胰腺癌CT灌注与血管内皮生长因子、微血管密度和缺氧诱导因子-1α表达关系

目的 探讨胰腺癌CT灌注和血管生成相关因子表达的关系.方法 26例外科手术证实胰腺癌患者,术前行多层螺旋CT灌注扫描,同时检测肿瘤血管内皮生长因子,微血管密度(MVD)及缺氧诱导因子(HIF)-1α,探讨CT灌注与血管生成相关因子表达间关系.结果 低分化腺癌BF、BV均值分别为(917.4±256.4)ml·min-1·kg-1和(130.9±44.1)ml/kg体重,明显低于高分化腺癌的(2728.7±360.0)ml·min-1·kg-1和(241.2±86.2)ml/kg体重.低分化腺癌MVD、血管内皮生长因子(VEGF)和HIF-1α值高于高分化腺癌(t值分别为3.29、2.99和3.39,P＜0.01).同时胰腺癌的BF、BV和血管生成相关因子表达负相关,MTT与表达无关,PS值与表达正相关.结论 CT灌注成像对胰腺癌诊断有一定的临床价值.     

转录因子Snail及黏附分子E-cadherin在直肠癌中的表达及意义

目的 探讨转录因子Snail及黏附分子E-cadherin在直肠癌中的表达及意义.方法 采用免疫组化SABC法检测101例直肠癌组织中Snail、E-cadherin的表达,分析二者在不同临床病理分期与分化程度的直肠癌中的表达及其与预后的关系.结果 免疫组化检测结果显示直肠癌组织中Snail的阳性表达率为78.2%(79/101),直肠癌组织中E-cadherin的阳性表达缺失率为62.4%(63/1 01),Snail与E-cadherin的表达呈显著负相关.Snail、E-cadherin的表达与直肠癌的Dukes分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 Snail蛋白的高表达和E-cadherin蛋白的低表达可能是直肠癌侵袭转移的重要生物学标志.     

缺氧诱导因子1α对乳腺癌淋巴管生成及淋巴结转移的影响

本研究用免疫组化方法检测乳腺癌中HIF-1α（hypoxia inducible factor-1α）、VEGF-C（vascular endothelial growth factor）及其受体VEGFR-3（vascular endothelial growth factor receptor 3）,探讨HIF-1α对乳腺癌淋巴管生成及淋巴结转移的影响.     

缺氧诱导因子-1α与前列腺癌

新血管的形成和葡萄糖转运、糖酵解的增加是实体肿瘤的两个普遍特性,肿瘤的新血管形成及肿瘤对缺氧微环境的适应与肿瘤的浸润、转移及毁坏性密切相关.     

缺氧诱导因子-1α参与胃癌多药耐药的机制

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α参与胃癌SGC7901/DDP细胞株多药耐药的机制.方法 采用化疗药物顺氯胺铂(顺铂,DDP)按浓度梯度递增法(0.02～1.00mg/L)诱导胃癌SGC7901细胞株,10个月后成功建立对顺铂稳定耐药并具有MDR、MRP4表型的胃癌SGC7901/DDP细胞株,应用HIF-1α通路抑制剂YC-1(75 μmol/L)抑制HIF-1α在敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中的表达,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞凋亡率,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中HIF-1α和耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)的表达变化.结果 YC-1抑制HIF-1α表达后,耐药株SGC7901/DDP的药物敏感性显著增加,对DDP的半数抑制浓度(IC50)由(52.175±6.163)mg/L降低为(11.078±3.645)mg/L(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的细胞凋亡率由1.03%增加为14.26%(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的P-gP在基因和蛋白表达水平均明显减低,分别由1.846±0.135和2.017±0.102下降至0.814±0.057和0.962 ±0.039(P＜0.01).结论 HIF-1α可通过调节P-gP表达及抗凋亡信号通路参与胃癌顺铂耐药,可成为逆转胃癌耐药的新的靶点.     

结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与Survivin表达的关系

目的 探讨结肠癌LS174T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及与Survivin的关系.方法 构建靶向HIF-1α的质粒pSilence-2.1-U6-siRNA并鉴定,采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞,低氧培养24h,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测siRNA对HIF-1α的抑制作用.Western blot检测Survivin蛋白表达.应用免疫组织化学方法检测69例人结直肠腺癌组织中HIF-1α、Survivin蛋白的表达.结果 LS174T细胞转染靶向HIF-1α的siRNA表达载体后,HIF-1α、Survivin表达显著下降.69例结直肠腺癌组织中,HIF-1α、Survivin蛋白的阳性表达率为66.7％ (46/69)和56.5％ (39/69).腺癌组HIF-1α蛋白阳性表达率显著高于腺瘤组(P＜0.01).Ⅲ期腺癌HIF-1α蛋白表达显著高于Ⅰ～Ⅱ患者(P＜0.05).结直肠腺癌中HIF-1α表达与Survivin显著正相关.结论 结直肠腺癌发展过程中HIF-1α与Survivin表达密切相关.     

缺氧诱导因子-1α小干扰RNA联合顺铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡

目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α小干扰RNA联合顺铂(DDP)对人食管鳞癌TE-1细胞凋亡的影响.方法 人工合成HIF-1α小干扰RNA,体外培养人食管鳞癌TE-1细胞分为4组:A组用生理盐水处理,B组用DDP处理,C组用小干扰RNA处理,D组用小干扰RNA和DDP协同处理;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测HIF-1α mRNA的表达,Western blot法检测HIF-1α蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 RT-PCR法检测A、B、C和D组细胞的HIF1α mRNA表达分别为(0.5325±0.0809)、(0.5003±0.0726)、(0.0986±0.0171)和(0.0849±0.0133),Western blot法检测HIF-1α蛋白表达分别为(0.7280±0.0268)、(0.7115±0.1293)、(0.2362±0.0266)和(0.1917±0.0234),其中D组与A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.01),与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);A、B、C和D组的细胞凋亡率分别为(3.23±0.61)%、(29.88±3.48)%、(34.48±5.69)%、(56.37±7.99)%,其中D组与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α小干扰RNA能够提高DDP的细胞毒性作用,两者联合能有效促进人食管鳞癌TE-1细胞的凋亡,显著提高化疗效果.     

缺氧诱导因子-1α在结肠肿瘤中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在结肠肿瘤中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法,对30例结肠癌患者癌组织及癌旁组织、10例结肠腺瘤患者腺瘤组织中H1F-1α的表达情况进行检测,并分析HIF-1α表达与结肠癌临床病理特征之间的关系。结果HIF-1α阳性率在结肠癌和结肠腺瘤组织中分别为73．3％（22／30）和10．0％（1／10）,而在癌旁组织中无表达（P〈0．05）。结肠癌组织中HIF．1et的表达水平与患者性别、年龄、病理组织学类型及分化程度无关（P〉0．05）,而与区域淋巴结转移状况及Dukes分期密切相关（P〈0．05）。结论HIF-1α过度表达与结肠癌的浸润、转移密切相关,可能作为判断预后的重要指标。     

缺氧诱导因子-1α在前列腺癌中的表达及意义

目的　探讨缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)蛋白在前列腺癌 (CaP)中的表达及意义。　方法　应用免疫组化SP法检测 42例CaP和相应癌旁组织 ,12例高分级前列腺上皮内瘤 (PIN )以及 9例正常前列腺组织 (NP)中HIF 1α的表达 ,免疫印迹技术分析不同氧浓度诱导下CaP细胞株PC 3M的HIF 1α蛋白水平。　结果　 3 3例 (78.6% )CaP和 9例PIN组织HIF 1α蛋白表达阳性 ,有远处转移的CaP组织中HIF 1α表达显著高于无转移者 (P <0 .0 5) ,癌旁组织及正常前列腺组织中无阳性表达 ;PC 3M细胞株中HIF 1α表达水平随氧浓度减小而明显升高 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。　结论　HIF 1α表达是CaP形成的早期事件 ,其水平升高可能导致肿瘤向恶性发展表型 ,HIF 1α可作为CaP的早期诊断指标和治疗新靶点     

缺氧诱导因子1α的表达对HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的观察缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对HepG2细胞增殖相关CyclinD1、CyclinA基因与凋亡相关Survivin、Bcl-2基因的影响。方法对Tet—on基因表达系统调控的缺氧诱导因子1α转染入HepG2细胞,用不同质量浓度的强力霉素对受强力霉素调控、稳定表达HIF—1α的HepG2^Tet-on进行凋亡诱导,检测肝癌细胞的凋亡和HIF-1α、CyclinD1、CyclinA、Survivin、Bcl-2的基因表达。结果终浓度分别为0、0．1、1、5mg／L的对HIFHepG2^Tet-on进行细胞凋亡诱导,细胞凋亡率分别为56．4％±7．8％、42．7％±4．9％、31．5％±6．1％、19．7％±4．5％;随着强力霉素浓度的增加,HIF-1α、CyclinD1、CyclinA、Survivin、Bcl-2基因表达水平增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIF-1α基因在体外可以促进HepG2细胞的增殖,抑制其凋亡,而且随着HIF—1α基因表达水平的增加作用不断增强,这可能与HIF-1α诱导CyclinD1、CyclinA、Survivin、Bcl-2基因表达有关。     

缺氧诱导因子-1的调控

依赖缺氧诱导因子-1(HIF-1)的缺氧反应基因表达调控系统在维持肿瘤细胞的代谢适应、新血管形成及转移等方面起蘑要作用。HIF-1自身活性的调节是缺氧反应基因表达调控的中心环节，肿瘤内缺氧和影响信号转导途径的癌基因的改变均可导致HIF-1活性增加，主要涉及脯氨酸羟化酶、硫氧还蛋白、PKB、ILK、PIEN、EN及P14ARF等蛋白对HIF-1α的调控。     

血清肝细胞生长因子与结直肠癌转移及预后的关系

目的：探讨结直肠癌患者血清中肝细胞生长因子（HGF）的表达水平及其与结直肠癌转移和预后的关系, 以及其作为结直肠肿瘤标志物的可行性。 方法：应用夹心ELISA方法检测65例结、直肠癌患者及20例健康志愿者血清HGF, 癌胚抗原（CEA）, 糖抗原（CA19-9）的表达水平;Kaplan-Meier法计算患者生存率;Cox生存分析血HGF, 癌胚抗原（CEA）, 糖抗原（CA19-9）水平对患者预后的影响。 结果：结直肠癌淋巴结转移组HGF水平为（0.37±0.11）ng/mL;T3-4期为（0.32±0.29）ng/mL;肝转移组血清HGF水平为（0.43±0.10） ng/mL, 上3组均显著高于对照组的（0.18±0.07）ng/mL（P＜0.05）, 亦明显高于各对应组(P<0.05)。单因素分析显示HGF水平越高者生存期越短。 结论：血清HGF水平与结直肠癌发展及转移有密切关系;结直肠癌患者血HGF水平增高提示患者预后差。HGF可作为检测结、直肠癌转移和判断预后的临床参考指标。     

肿瘤坏死因子-α基因多态性与结直肠癌的关系

目的研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）-308G／A基因功能多态性与结直肠癌生成及发展的关系。方法研究病例为德国曼海姆医院普通外科2000年10月至2003年3月间收治的157例经病理组织学证实为结直肠癌的患者（病例组），对照组为117例查体的健康人，病例与对照人群均为欧洲高加索人种。采用聚合酶链反应，限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测结直肠癌组及正常对照组的TNF-α-308G／A基因型。结果病例组患者TNF-α-308G／A基因型和等位基因与对照组相比，差异无统计学意义（基因型P=0．663；等位基因χ^2=0．404，P=0．525）。Ⅲ、Ⅳ期病理分期患者A等位基因（22．6％）和A／A基因型（8．1％）的比例明显大于Ⅰ、Ⅱ期（12．9％和1．2％），两者差异有统计学意义（基因型：P=0．048，OR=7．368，95％CI=0．839～64．743；等位基因：χ^2=4．720，P=0．03，OR=1．962，95％CI=1．061～3．628）。结论TNF-α-308G／A基因功能多态性与结直肠癌生成无关．TNF-α-308A／A基因型或A等位基因与结直肠癌的进展相关。     

缺氧诱导因子-1α在胃癌中的表达及其与化疗疗效关系的研究

目的观察缺氧诱导因子（HIF）-1α在胃癌组织中的表达及其与化疗疗效和临床预后的关系。方法对52例未接受过任何放化疗的中晚期胃癌患者予以四氢叶酸（CF）、氟尿嘧啶（5-FU）、草酸铂（L-OHP）为基础的联合化疗方案（CF200mg／m^2静脉滴注2h。5-FU1500mg／m^2静脉持续滴注46h,L-OHP85mg／m^2静脉滴注2h）,分别于第1天和第14天给药．4周为1个周期．至少需完成4个周期的化疗。化疗结束后进行疗效评价。并对患者加以随访以作生存分析。同时对该52例患者的胃癌组织标本进行免疫组织化学染色,检测HIF-1α、P糖蛋白（P—gP）和多药耐药相关蛋白（MRP4）在胃癌组织中的表达,另取27例正常胃黏膜作对照。结果HIF—1α、P—gP和MRP4在胃癌组织中的阳性表达率分别为53．9％、51．9％和57．7％,在正常胃黏膜组织中分别为0、18．5％和14．8％。两组间的差异均有统计学意义（均P〈0．05）。HIF-1α阳性表达者化疗有效率14．3％,显著低于HIF—1α阴性表达者（50．0％,P〈0．05）。HIF-1α阳性表达组中位无进展生存期（PFS）为4．9个月,中位总生存期（OS）为8．8个月,1年和2年生存率分别为37．5％和21．5％;而HIF-1α阴性表达组中位PFS为8．4个月．中位OS为12．6个月．1年和2年生存率分别为51．2％和33．5％：两组生存期的差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论HIF-1α表达可作为临床上预测胃癌化疗疗效及临床预后的的指标之一。     

反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌生长转移的影响

目的观察反义缺氧诱导因子（HIF）-1α对胰腺癌生长、转移的影响及其与β1-integrin的关系。方法缺氧条件下（0.5％O2）体外培养4h，未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为缺氧对照组；常氧条件下体外培养，未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为常氧对照组；缺氧条件下（0．5％O2）体外培养4h，稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为实验组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测HIF-1α和β1-integrin的表达情况。Transwell侵袭室方法检测BxPc-3细胞侵袭能力。裸鼠皮下接种BxPc-3细胞8周后，观察各组肿瘤生长情况。结果实验组HIF-1α和β1-integrin的表达明显降低，迁移的细胞数远少于对照组（P〈0．05）；实验组肿瘤的体积、重量、生长速度远低于对照组（P〈0.05）。结论反义HIF-1α可能通过阻断β1-integrin的表达而抑制胰腺癌的生长和转移。因此，阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供了新途径。     

结直肠癌中缺氧诱导因子1-α与FasL 表达相关性的研允

目的 探讨结直肠癌侵袭转移过程中缺氧诱导因子1-α(alpha,HIF-1α)与FasL表达的相关性.方法 采用分子克隆方法,将我室已构建的FasL-pcD-NA3.1(+)质粒与pcDNA3.1(一)质粒进行重组,得到新的FasL-pcDNA3.1(一)质粒并加以鉴定;通过脂质体转染法将空质粒、FasL-pcDNA3.1(+)与FasL-pcDNA3.1(一)质粒分别转染人直肠癌HR-8348细胞,构建侵袭力不同的结直肠癌细胞HR-8348L、HR一8348F和HR一8348As,未转染细胞HR一8348B为空白对照,应用Tran-swell,小室检测各组细胞的侵袭能力;采用化学缺氧法构建四组细胞的缺氧模型,Western blot方法定量检测缺氧0h、6h、12h及24h各组细胞内HIF-1α的表达.结果 FasL-pcDNA3.1(一)质粒符合要求,FasL片段大小约900bp,测序结果正确率99.2%;单层细胞体外侵袭实验见HR一8348F细胞穿透Transwell滤膜的细胞数目为(12.930±2.434),显著多于HR-8348B(8.133±1.959)、HR-8348L(7.670±2.093)和HR-8348As(7.870±1.685)细胞(P<0.05);Western blot检测示HIF-1α蛋白于120kD处显色,缺氧0h与6h,各组样品中HIF-α仅表达微量,HIF-1α水平无显著性差异(P>0.05);缺氧12h与24h,HR一8348F细胞内HIF-1α水平较0h和6h时明显增高(P<0.05),而HR-8348B、HR-8348L及HR-8348As细胞内HIF-1α表达与6h时无明显变化(P>0.05),HR-8348F细胞HIF-1α水平显著高于HR-8348B、HR-8348L及HR-8348As细胞(P<0.01).结论 缺氧环境中结直肠癌细胞FasL表达增强是除低氧分压外另一个诱导HIF-1α表达增高的因素,FasL与 HIF-1α水平呈正相关,高侵袭能力的结直肠癌细胞对缺氧的适应能力加强,促进肿瘤的远处转移.     

结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与NDRG1表达的关系

目的探讨结肠癌LS174T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1d（HIF-1d）的表达及与NDRG1的相关性。方法构建靶向HIF—1d的质粒pSi1ence-2．1-U6-siRNA并鉴定，采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞，低氧培养24h，运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF-1α、NDRG1mRNA表达。Western blots检测NDRG1蛋白表达。采用原位杂交技术检测人结直肠腺瘤和腺癌组织中HIF-1dmRNA，应用免疫组织化学方法检测NDRG1蛋白的表达。结果siRNA从转录水平抑制了HIF-1d基因表达。同时，NDRG1mRNA、蛋白表达也显著受抑制。结直肠腺癌组织中HIF-1dmRNA阳性表达率为67．7％（42／62），腺瘤为44．4％（8／18）。从DukesA期到DukesC＋D期演变过程中HIF-1dmRNA表达阳性率不断增加（P〈0．05）。腺癌组NDRG1阳性表达率显著高于腺瘤组。结直肠腺癌中NDRG1阳性表达与Dukes分期显著相关。HIF-1d与NDRG1均呈正相关（P〈0．05）。结论HIF-1d可能通过上调NDRG1表达参与了结直肠腺的进展．