苯乙酸对胶质瘤U-251细胞中RNA编辑酶表达的影响

目的观察正常人脑胶质细胞和胶质瘤U-251细胞中RNA编辑酶RED1,RED2 mR- NA水平的表达,并观察诱导分化剂苯乙酸对U-251细胞中RED1 mRNA表达的影响。方法对原代培养的正常人脑胶质细胞和胶质瘤U-251细胞,应用RED1,RED2全长序列合成引物及合成的特异引物,分别通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RED1,RED2 mRNA水平的表达。用RT- PCR及图像分析法,检测胶质瘤细胞U-251在不同浓度的苯乙酸处理前后,RED1 mRNA表达水平的变化。RED1基因表达水平用基因/β-肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示。结果RED1在正常人脑胶质细胞中表达极弱,在高恶性度的胶质瘤U-251细胞中明显表达。诱导分化剂苯乙酸作用后, U-251细胞中RED1表达水平降低。RED2在正常人脑胶质细胞及苯乙酸处理前后的胶质瘤细胞中,均未见表达。结论RED1 mRNA水平高表达,可能与高恶性度胶质瘤的发生有关。诱导分化剂苯乙酸可能通过降低RED1mRNA水平的表达,作用于胶质瘤细胞的RNA编辑过程。     

印迹基因SLC22A18在乳腺癌中的表达及其意义

目的 研究印迹基因SLC22A18在乳腺浸润性导管癌中mRNA和蛋白水平的表达.并分析SLC22A18表达与乳腺癌临床病理特征之间的相关性,从而探讨SLC22A18基因在乳腺癌发生发展中的作用.方法 应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测46例乳腺浸润性导管癌和对应癌旁乳腺组织,以及20例乳腺良性病变组织中SLC22A18 mRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测46例乳腺浸润性导管癌组织、20例乳腺良性病变中SLC22A18蛋白表达,分析SLC22A18 mRNA和蛋白表达与乳腺癌临床病理特征间的关系.结果 SLC22A18在46例乳腺浸润性导管癌中mBNA表达量低于癌旁组织(Z=-4.900,P＜0.01);46例乳腺浸润性导管癌中SLC22A18 mRNA表达量低于乳腺良性病变(Z=-3.182,P＜0.01).40例乳腺浸润性导管癌中SLC22A18 mRNA表达量低于6例导管内癌灶性浸润(Z=-2.022,P＜0.05).SLC22A18蛋白在20例乳腺良性病变、46例乳腺浸润性导管癌中表达阳性率分别为95%、69.6%,两组阳性表达率差异有统计学意义(x2=5.135,P＜0.05).SLC22A18 mRNA和蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期及淋巴结转移均无相关性(P＞0.05).结论 SLC22A18在乳腺浸润性导管癌中表达下调,SLC22A18可能参与了乳腺癌的发生,并有可能成为乳腺癌早期诊断的新分子标志物.     

直肠癌组织中miR-155和miR-200c的表达差异及意义

目的 分析人直肠癌组织miR-155和miR-200c的表达差异及其与直肠癌临床病理特征的关系.方法 选取手术切除的卣肠癌标本71例,以正常黏膜为对照,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)对miR-155和miR-200c作定量分析.结果 相对于正常黏膜组织,miR-155和miR-200c在直肠癌组织中表达上调,差异有统计学意义(P<0.05).miR-155的表达与患者年龄有关(P<0.05);miR-200c的表达与患者血清癌胚抗原(CEA)水平有关(P<0.05).不同的直肠癌性别、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和分化程度间miR-155、miR-200c表达的差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-155和miR-200c在直肠癌组织中显著表达,可能参与直肠癌的发生过程.miR-200c对于直肠癌町能具有潜在的辅助诊断、疗效判断及预后评估意义.     

Twist在人肝癌细胞系与正常肝细胞系中的表达差异

目的 研究Twist在人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系L02中的表达及其作用.方法 利用荧光定量PCR技术及免疫印迹法分别检测Twist mRNA及Twist蛋白在人肝癌细胞系HepG2及人正常肝细胞系L02中表达的差异.结果 HepG2细胞的Twist mRNA表达水平为L02的2.36倍(P＜0.05),蛋白水平为(3.13±0.21)倍(P＜0.05).结论 Twist在肝癌细胞系中的过高表达可能与肝癌的发生、发展有关.     

GPC3/MXR7基因在肾细胞癌及癌旁肾组织中的表达

目的 探讨肾癌、癌旁肾组织中多种相关基因的表达水平及差异,以及与临床分期的关系.方法 应用实时荧光定量PCR方法 检测GPC3/MXR7基因在肾细胞癌组织及癌旁肾组织中的表达,并比较不同临床阶段其表达的差异.结果 GPC3/MXR7在肾癌组织中平均表达(GPC3/MXR7和18 S的比值)是(0.07±0.14)×10-3,而癌旁肾组织中是(0.16±0.14)×10-3,差异有统计学意义(P＜0.05),表明GPC3/MXR7基因在肾癌组织中平均表达均明显低于在癌旁肾组织中的平均表达.GPC3/MXR7在癌旁与肾癌的表达比值在临床分期(I+Ⅱ)期中平均为32.05±48.87,而在(Ⅲ+Ⅳ)期中为22.95±49.58,差异无统计学意义(P＞0.05),表明GPC3/MXR7基因在癌旁与肾癌组织中的表达降低或增高均与临床分期无关.结论 肾癌的发生、发展可能与GPC3/MXR7基因有关,是多种基因共同作用的结果 .     

结肠癌组织中Cyr61和HPA-1的表达水平及其在侵袭转移中的作用

目的：检测富含半胱氨酸61（Cyr61）蛋白、乙酰肝素酶（HPA－1）蛋白及Cyr61基因、HPA－1基因在结肠癌组织中的表达水平,探讨二者在结肠癌中侵袭转移的机制及关系。方法：用westernblot方法检测结肠癌组织Cyr61和HPA－1的蛋白表达水平,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测结肠癌Cyr61和HPA－1的基因表达水平,分析二者与结肠癌的临床病理特征的关系。结果：结肠癌中Cyr61蛋白及HPA－1蛋白的表达水平高于癌旁组织和正常组织,癌旁组织高于正常组织（户均〈O．001）;结肠癌中Cyr61mRNA及HPA－1mRNA的表达水平高于癌旁组织和正常组织,癌旁组织高于正常组织（P均〈0．001）。Cyr61蛋白及基因和HPA－1蛋白及基因表达的增强与肿瘤的分化程度、淋巴转移及TNM分期等相关（P均〈0．05）。结论：Cyr61蛋白、HPA－1蛋白及Cyr61mRNA、HPA－1mRNA在结肠癌组织中呈高表达,可促进结肠癌的侵袭转移。     

miR-21和miR-125在结直肠癌中的表达及其与临床病理指标的关系

目的探讨miR-21和miR-125在结直肠癌中的表达与临床病理特征之间的关系。方法选取2006年7月至2007年12月经手术切除的原发性结直肠癌标本100例．采用实时荧光定量PCR分析miR-21和miR-125的表达情况。结果相对于癌旁组织．100例结直肠癌组织中miR-21表达上调2．3倍（P=0．025）。其表达与TNM分期（P=0．028）以及浸润深度有关（P=0．023）：而miR-125在癌组织中的表达则下调3．3倍（P=0．005）,其表达与TNM分期、浸润深度和远处转移无明显关联（P〉0．05）。结论miR-21可能参与了结直肠癌的发生和发展：而miR-125可能未参与。     

细胞因子通路抑制因子3在前列腺癌中的表达及其意义

目的 检测细胞因子通路抑制因子3( SOCS3)在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达,分析其表达水平与临床病理参数的关系,探讨SOCS3在前列腺癌中的意义.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测SOCS3基因在前列腺癌、前列腺增生组织中的表达,免疫组织化学技术检测前列腺癌、前列腺增生组织中SOCS3蛋白的表达,结合SOCS3免疫组织化学评分与前列腺癌患者临床病理参数进行分析.结果 相对于前列腺增生组织,前列腺癌患者组织中SOCS3表达下调(P＜0.01);49例前列腺癌组织有26例阳性,29例前列腺增生组织有22例染色阳性,SOCS3在前列腺增生组织的染色强于前列腺癌组织(P＜0.05);SOCS3表达与前列腺癌患者血清前列腺特异性抗原(PSA)水平(P＜0.01)、Gleason评分(P＜0.05)和肿瘤TNM分期呈负相关(P＜0.01),与肿瘤转移呈正相关(P＜0.01),与年龄无明显相关(P＞0.05).结论 检测SOCS3可鉴别前列腺癌和前列腺增生;在前列腺癌中SOCS3表达下调可抑制前列腺癌的进展,表达上调促进前列 腺癌转移.     

LGL/Hugl-1在肾细胞癌及癌旁肾组织中的表达及其意义

目的 探讨肾细胞癌、癌旁肾组织中LGL( lethal giant larvae)/Hugl-1基因的表达水平及临床意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR法)方法检测肾细胞癌组织及癌旁组织各30例中LGL/Hugl-1基因的表达,同时应用统计学方法评价在肾细胞癌不同临床阶段LGL/Hugl-1基因表达的差异.结果 LGL/Hugl-1在肾细胞癌组织中平均表达(LGL/Hugl-1和18s的比值)为0.00018±0.00021,而癌旁组织中该值为0.00004±0.00003,差异有统计学意义(P＜0.05);LGL/Hugl-1基因在80.0％ (24/30)的肾细胞癌组织中表达升高,其中升高超过2倍的病例为73.3％ (22/30);LGL/Hugl-1在癌旁与肾癌的表达比值在临床分期(Ⅰ+Ⅱ)期中平均为7.2±8.7,而在(Ⅲ+Ⅳ)期中为8.9±11.1,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LGL/Hugl-1基因在肾细胞癌组织中表达明显高于癌旁组织.LGL/Hugl-1基因在肾细胞癌组织与癌旁组织中的表达差异与临床分期无关.肾细胞癌的发生、发展可能与LGL/Hugl-1基因有关.     

抑癌候选基因NDRG2在结肠癌组织中的表达

目的分析抑癌候选基因NDRG2在人类结肠肿瘤组织中的表达情况。方法收集30例患者的结肠癌组织及其正常组织，提取总RNA，应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测NDRG2 mRNA的表达水平。为进一步分析NDRG2蛋白质的表达水平，分别提取30例组织的总蛋白，应用蛋白质印迹和免疫组织化学（免疫组化）技术检测其NDRG2的蛋白表达水平。结果RT-PCR结果显示，30例结肠癌组织中，有12例的NDRG2 mRNA表达明显降低。蛋白印迹结果显示，30例结肠肿瘤组织中有12例NDRG2蛋白水平明显下降，与RT-PCR结果一致。免疫组化结果显示，正常组织及肿瘤组织中NDRG2阳性率分别为90．0％（27／30）和53．3％（16／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．05），NDRG2的表达与患者的年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度、Dukes分期无明显相关关系（P〉0．05），而与肿瘤组织分化级别相关，高、中分化组NDRG2阳性表达率高于低分化组（P〈0．05）。结论NDRG2在某些结肠癌组织中呈低表达，而且其表达与结肠癌的分化程度有关，提示其可能对结肠癌的发生或发展有重要的作用。这为研究结肠癌的发病机制提供了进一步的线索。     

苯乙酸和二甲基甲酰胺对胶质瘤同源盒基因表达影响的比较

目的　观察苯乙酸 (PA)和二甲基甲酰胺 (DMF)诱导分化胶质瘤细胞C6 过程中同源盒(Hox)基因表达的变化。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及图像分析法 ,检测PA、DMF对胶质瘤细胞C6 诱导分化过程中Hox基因组P1、P2、P3及特异Hox基因的表达。Hox基因(组 )表达水平用基因 (组 ) / β 肌动蛋白 (β actin)灰度比值表示。 结果　Hox基因组P2在胶质瘤细胞C6 中表达明显低于P1、P3组 [0 .682 5± 0 .0 987<0 .881 7± 0 .0 73 1 ,0 .860 8± 0 .0 881 ,(P<0 .0 0 1 ) ]。应用PA后 ,P2组HoxB2基因表达明显上调 [0 .776 3± 0 .1 2 4 1 >0 .483 9± 0 .1 34 3 ,(P <0 .0 0 1 ) ] ;应用DMF后 ,HoxB2基因表达无显著变化 ,差异无显著性 (P >0 .0 5)。HoxB4基因在应用PA和DMF前后均未见表达。结论　PA对HoxB2基因mRNA水平的表达有明显的上调作用 ,DMF对Hox基因表达无显著影响     

多药耐药基因在泌尿系统肿瘤细胞系中的表达

目的检测泌尿系统肿瘤多药耐药基因及其产物的表达。方法对肾颗粒细胞癌细胞系ＧＲＣ１，肾透明细胞癌细胞系ＲＣＣ９４９，膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７、Ｔ２４、ＥＪ，前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ和对照的白血病细胞系ＨＬ６０进行免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测。结果只有ＧＲＣ１同时表达Ｐ糖蛋白（ＰＧＰ）和ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ，其他肿瘤细胞系均无表达。结论泌尿系肿瘤细胞系多数无ＰＧＰ也没有ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ水平的表达，只有ＧＲＣ１例外     

原发性肝细胞肝癌中PinX1的表达及其临床意义

【摘要】 目的 探讨Pin2/TRF1结合蛋白X1(PinX1)在原发性肝细胞肝癌中的表达及其临床意义。方法〓收集我院43例原发性肝细胞肝癌患者的癌和癌旁正常组织以及病例资料,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测PinX1 的mRNA表达水平,并分析表达差异与临床病理特征及患者预后的关系,卡方检验分析率的差异,应用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox风险比例回归模型筛选预后影响因素。结果〓在43对癌和癌旁正常组织标本中,29例(67.4%)肝癌组织中的PinX1 mRNA呈低表达,而相应的癌旁组织只有14例(32.6%)呈低表达,差异具有统计学意义(P<0.05);PinX1 mRNA表达水平与患者年龄具有相关性,生存分析和Cox单因素、多因素风险比例回归模型表明癌组织中PinX1 mRNA低表达是肝癌患者总生存期的独立预后因子(HR=5.057,P=0.005;HR=3.761,P=0.006)。结论〓PinX1可能是原发性肝细胞肝癌中潜在的抑癌基因,其表达下调在肝癌的发生发展过程发挥重要作用,并可能成为判断肝癌患者预后的重要的生物学指标。     

苯乙酸抑制胰腺癌BXPC-3细胞增殖及RNA编辑酶表达的研究

目的 探讨苯乙酸对胰腺癌诱导分化作用及RNA编辑在胰腺癌细胞增殖分化过程中的作用机理.方法 采用MTT比色法和流式细胞术检测苯乙酸对胰腺癌BXPC-3细胞系增殖抑制作用及对BXPC-3细胞周期的影响.RT-PCR方法检测RNA编辑酶ADAR mRNA在胰腺癌细胞系和胰腺癌组织中的表达以及应用苯乙酸后ADAR mRNA表达的变化.结果 人胰腺癌组织及胰腺癌BXPC-3细胞中均可检测到编辑酶ADAR2.应用1.0及2.0mmol/L苯乙酸后24h及72 h,BXPC-3细胞增殖抑制率增加,G0/G1期比例下降,S期比例显著升高.ADAR2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 ADAR2可能在胰腺细胞增殖分化过程中发挥作用,且苯乙酸可能通过调控ADAR2 mRNA的表达来发挥诱导分化作用.     

mRNA expression of the five membrane-type matrix metalloproteinases MT1-MT5 in human prostatic cell lines and their down-regulation in human malignant prostatic tissue

BACKGROUND: The aim of this study was to assess the expression of membrane-type matrix metalloproteinases (MT-MMPs) 1-5 in the human prostatic cell lines BPH-1, LNCaP, DU 145, PC-3, in malignant and non-malignant prostatic tissue samples, and in epithelial cells cultured from these tissue samples. METHODS: Matched malignant and non-malignant tissue specimens were obtained from 12 men with untreated prostate carcinoma after radical prostatectomy. Expression of mRNA for the five MT-MMPs was quantified by real-time PCR technique and normalized to the expression of the housekeeping gene glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH). RESULTS: The expression of the five MT-MMPs was distinctly different not only between the prostate cell lines but also varied in the same cell line. There was a general higher expression of all MT-MMPs except for MT3-MMP in the androgen-insensitive cells DU 145 and PC-3 compared with that in the androgen-sensitive LNCaP cells. Their relatively high expression in the benign prostatic cell line BPH-1 and also in the primary cell cultures from malignant and non-malignant tissue samples argues against a simple association between MT-MMP expression and invasiveness. In malignant tissue samples and their corresponding cell cultures, the expression of most MT-MMPs was down-regulated in comparison to the normal counterparts. There was no correlation between tumor classification data and the MT-MMP expression results. CONCLUSIONS: In contrast to other carcinoma, the down-regulation of most MT-MMPs is typical for prostate carcinoma. It seems to occur mainly in epithelial cells and has to be examined as special characteristic of this tumor entity in further studies.     

三氧化二砷对不同p53表型胶质瘤细胞程序性死亡相关基因表达的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对两种不同p53表型胶质瘤细胞U87MG、T98G作用后细胞程序性死亡相关基因表达的影响。方法应用基因芯片技术筛选出As2O3作用于两种胶质瘤细胞U87MG、T98G前、后与细胞程序性死亡有关的表达差异有统计学意义的基因；用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率；用电镜和原位凋亡检测（TUNEL）法及及吖啶噔／溴乙啶双荧光染色进行细胞形态观察、流式细胞仪等方法检测细胞程序性死亡改变。结果两种胶质瘤细胞应用As2O3后，透射电镜下T98G中频繁地观察到细胞自噬现象；筛选出U87MG细胞在As2O3作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共4J6条（上调33条，下调13条）。T98G细胞在As2O3作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共54条（上调34条，下调20条）。结论 As2O3以剂量依赖的方式通过细胞程序性死亡来抑制U87MG和198G细胞的增殖；As2O3诱导下的两种不同P53表型的细胞系中还存在非凋亡调控的细胞程序性死亡（自噬）；P53／ATM通路的基因、Bcl-2家族、TNF配体家族、TNF受体家族基因参与As2O3诱导胶质瘤细胞程序性死亡的发生机制。     

颅缝早闭症相关实验荧光定量PCR内参基因的选择研究

目的探讨用于颅缝早闭症相关实验的荧光定量PCR的最佳内参基因。方法应用与颅骨成骨、颅缝闭合相关的3组实验标本,分别为:Fgfr2cC342Y/+Crouzon综合征小鼠颅缝组织、颅缝早闭患者体外培养颅缝原代细胞和体外培养的小鼠Kusa 4b 10成骨细胞株。以常用的候选管家基因作为研究对象,利用geNorm软件对RT-qPCR结果进行比较分析,以筛选出在不同组织细胞中表达最为稳定的管家基因作为内参。结果Fgfr2cC342Y/+小鼠颅缝组织,Cyc1-Gapdh-Canx为最佳组合;颅缝早闭症患者体外培养颅缝原代细胞,18S rRNA和ATP5B为最佳组合;体外培养的小鼠Kusa 4b10成骨细胞株,18S rRNA和Canx为最佳组合。选择不同内参基因对目的基因RT-qPCR的结果影响显著。结论在设计RT-qPCR实验之前,应针对所选择的标本类型与种类进行管家基因稳定性分析,以增加结果的可信度。