δ阿片受体激动剂对脓毒症大鼠细胞免疫功能的影响

目的 探讨δ阿片受体激动剂对脓毒症大鼠细胞免疫功能的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠150只,体重154～198g,随机分为3组(n=50):假手术组(S组)仅穿线,不进行盲肠结扎穿孔;脓毒症组(SEP组)采用盲肠结扎穿孔的方法制备脓毒症模型;δ阿片受体激动剂组(DADLE组)于盲肠结扎穿孔后立即腹腔注射δ阿片受体激动剂DALDE 10 ml/kg,浓度为0.5 mg/ml.于盲肠结扎穿孔后4、8、12 h(T1～3)时各组随机取10只大鼠,抽取下腔静脉血样,采用ELISA法检测血清TNF-α和IL-10的浓度,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群变化.记录盲肠结扎穿孔后7 d内大鼠的生存情况.结果 与S组比较,SEP组和DADLE组各时点血清TNF-α和IL-10的浓度、TNF-α/lL-10比值升高,T3时CD4+T细胞水平和CD4+/CD8+降低,CD8+T细胞水平升高(P＜0.05或0.01);与SEP组比较,DADLE组T2.3时血清TNF-α和IL-10的浓度、TNF-α/IL-10比值降低,T3时CD4+T细胞水平和CD4+/CD8+升高,CD8+T细胞水平降低,盲肠结扎穿孔后7 d内大鼠生存率升高(P＜0.05).结论 δ阿片受体激动剂可改善细胞免疫功能,从而减轻炎性反应,有利于脓毒症大鼠的预后.     

脓毒症时枯否细胞介质在脾免疫抑制机制中的主要作用

本实验通过小鼠脓毒症模型,在脓毒症发生之前减少枯否细胞以了解能否保护脾淋巴细胞的功能。实验组小鼠于48h前静脉注射氯化钆(GdCl_2,10mg/kg),使肝脏的枯否细胞数下降40％;对照组小鼠注射生理盐水(NS)。用盲肠结扎和穿刺模型(CLP)造成多细菌脓毒症,并给     

腹腔感染性败血症大鼠胸腺细胞凋亡的研究

细胞凋亡是有别于坏死的另一种细胞死亡现象。我们对腹腔感染性败血症大鼠模型的胸腺细胞凋亡进行研究 ,现报道如下。一、材料和方法1.腹腔感染性败血症模型的制备 :选体重 2 0 0～ 40 0 ｇ的雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗ ｌｅｙ大鼠 ,采用盲肠结扎加穿孔法 (ＣＬＰ)制备模型。大鼠以乌拉坦腹腔注射麻醉后 ,作 1～ 2ｃｍ长的腹正中切口。游离出盲肠并用 3 0号丝线结扎之 ,以 2 2Ｇ针头于盲肠穿刺 2处 ,并挤出小量肠内容物以保持穿刺孔开放。还纳肠管 ,以6 0丝线缝合关腹。术毕皮下注射生理盐水 40ｍｌ/ｋｇ体重。假ＣＬＰ组除盲肠不行结扎和穿…     

抗内毒素单抗对脓毒症小鼠胸腺细胞凋亡及白介素1β—转移酶 …

目的 探讨胸腺细胞凋亡在小鼠脓毒症机制中的作用，观察抗内毒素单抗对胸腺细胞内胸腺细胞凋亡相关基因白介素１β－转移酶（ＩＣＥ）表达的影响。方法 盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）造成小鼠脓毒症，假手术组接受同样的手术操作但不行ＣＬＰ，治疗组在术前２小时腹腔内注射抗内毒素单抗４ｍｇ／ｋｇ，致伤后１、３、６小时取胸腺组织，采用ＲＴ－ＰＣＲ定量检测ＩＣＥ基因表达。结果 抗内毒素单抗明显减少了胸腺细胞凋亡的数量并且下调     

脓毒症大鼠调节性T细胞凋亡对效应T细胞增殖和分泌功能的影响及血必净注射液的干预作用

目的 探讨血必净注射液对脓毒症大鼠CD+4CD+25调节性T细胞(Treg)凋亡的影响及与效应T细胞(Teff)增殖及分泌功能的关系.方法 Wister大鼠随机分为对照组、假于术组、肓肠结扎穿孔(CLP)组和血必净治疗组,每组8只;于第3天采用免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD+4CD25+Treg和CD+4CD25-T细胞.CD+4CD25+Treg培养12 h后检测凋亡率、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达及门细胞介素(IL)-10的分泌.将Treg与CD+4CD25-T细胞共培养,并以刀豆素A刺激后观察Treg对Teff增殖活性和细胞培养上清IL-2/可溶性IL-2受体α(slL-2Rα)含量的影响.结果 CLP组CD+4CD25+Treg细胞凋亡率<对照组和假于术组(P<0.01),而血必净治疗组明显>CLP组(P<0.01).与CLP组比较,血必净治疗组CD+4CD25+Treg细胞Foxp3、CTLA-4表达和IL-10分泌显著下降(P<0.01).同时,CLP组Teff增殖反应抑制率明显>对照组,而血必净组其抑制率CLP组,sll-2Rα低于CLP组(P<0.01).结论 脓毒症病理过程中CD+4CD25+Treg细胞对Teff抑制效应明显增强,而血必净注射液能诱导Treg细胞凋亡,减轻Treg对Teff的抑制作用.     

复合法诱发小鼠结肠炎模型的建立和免疫学验证

目的:建立2,4-二硝基氯苯(DNCB)和醋酸(AA)复合法诱导的小鼠结肠炎模型,并验证其在炎性肠病(IBD)发病及治疗机制中的研究价值。方法:昆明种小鼠48只,按体重随机分为正常对照、模型、硫氮磺胺吡啶(SASP)及中药灌肠治疗4组,肠道积分法观察组织病理学变化;DAPI染色检测淋巴细胞凋亡指数的改变;流式细胞仪分析外周血中CD4~ CD29~ T细胞及外周血和肠系膜淋巴结中CD3~ 、CD4~ T细胞的变化。结果:成功建立免疫型小鼠结肠炎模型。模型组小鼠肠道病理学损伤较正常对照组明显加重;特别是模型组CD4~ CD29~ T细胞比例明显高于正常对照组(P<0.01);免疫组织淋巴细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);而CD3~ 、CD4~ T细胞较正常对照组明显降低(P<0.05)。经SASP和中药灌肠治疗后,肠道组织病理损伤明显减轻,免疫组织淋巴细胞凋亡指数显著降低,且CD3~ 、CD4~ T细胞亚群较模型组明显增高。结论:DNCB AA法诱导的小鼠结肠炎模型,是一种较理想的IBD动物模型,可成功用于炎性肠病发病及治疗机制的研究。     

脂多糖腹腔重复注射诱导脓毒症小鼠髓系抑制细胞的生成

目的探讨脂多糖（LPS）诱导脓毒症小鼠免疫抑制的细胞学机制。方法腹腔高剂量LPS重复注射建立脓毒症小鼠模型;通过模型小鼠生存率和血浆细胞因子水平鉴定脓毒症的分期;区分粒系和单核系来源的髓系抑制细胞（MDSCs）亚群,流式细胞术检测其在感染性休克不同阶段的动态变化;通过CD4+T细胞增殖抑制实验评价其免疫抑制功能。结果本研究利用腹腔重复注射高剂量LPS成功建立不同分期脓毒症小鼠模型;与正常对照小鼠相比,脓毒症小鼠骨髓、外周血和脾脏中的MDSCs细胞比例显著增加;不同MDSCs亚群均对CD4+T细胞具有明显增殖抑制作用。结论MDSCs在脓毒症免疫调节中发挥了重要作用,是介导脓毒症免疫麻痹的重要负向调节细胞。     

环孢素A对小鼠体内调节性T淋巴细胞的作用及机制

目的 探讨环孢素A(CsA)对小鼠体内CD4+Foxp3+调节性T淋巴细胞的作用及机制.方法 选择雄性C57BL/6小鼠20只,随机平均分为两组.实验组小鼠腹腔注射环孢素A20 mg·kg-1·d-1×2周;对照组小鼠腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)×2周.2周后,两组小鼠在无菌条件下经眼球采集外周血,并分离脾脏和胸腺,制备单细胞悬液.采用流式细胞仪检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中的CD4+Foxp3+T淋巴细胞的比例.结果 实验组小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中CD4+Foxp3+T淋巴细胞的比例分别为(0.581±0.089)%、(2.189±0.046)%和(0.472±0.049)%,对照组的比例分别为(1.751±0.227)%、(3.684±0.169)%和(1.412±0.188)%,两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.001).结论 CsA可以损害小鼠体内调节性T淋巴细胞的发育,从而减少调节性T淋巴细胞的数量.     

慢性前列腺炎前列腺液标本中免疫细胞构成的分析

目的分析慢性前列腺炎(Chronic prostatitis, CP)患者前列腺液标本中的免疫细胞构成特点.方法2010年12月至2011年4月门诊就诊的慢性前列腺炎患者125例,取同期20例医学院学生前列腺液标本作为正常对照组,采用流式细胞术分析前列腺液中CD4+,CD8+,CD3/CD56(NK),CD14+和CD15+细胞计数及相对比例.结果在Ⅱ型,Ⅲ型CP及正常对照组中,CD4+细胞的检出比例分别为43.2%(16/37),53.4%(47/88)和30%(6/20)(P>0.05);CD15+细胞绝对计数中位值分别为4.6×106/ml,4.6×105/ml 和5.1×104/ml(P<0.001);相对比例为65.3%,46.5%和22.4%(P<0.001);CD14+细胞绝对计数中位值分别为1.3×105/ml,4.7×104/ml 和4.2×103/ml(P<0.001);相对比例为12.4%,5.4%和2.0%(P<0.001);CD8+细胞仅在8.2%(12/145)的样本中检出; CD3/CD56(NK)细胞仅在5.5%(8/145)的样本中检出.结论 CD15+细胞、CD14+细胞在不同类型CP患者和正常人群之间在数量和构成比上存在明显差异;CD4+细胞在Ⅲ型中最常存在,Ⅱ型次之,正常标本中相对较少.CD15+细胞、CD14+细胞可望成为CP分型的分子标志并为未来进一步药物干预提供潜在的靶标.     

免疫调理对脓毒症免疫功能和预后的作用

目的：探讨免疫调理对改善脓毒症大鼠和患者免疫功能及预后所起的作用。
方法：（1）实验部分：将大鼠分为3组：假手术组、对照组和实验组,每组20只。后2组采用大鼠盲肠结扎穿孔的方法制备大鼠脓毒症模型,对照组接受抗生素治疗,实验组接受抗生素加免疫调理。制作模后分别在3,12,24,48 h采血。各组大鼠按时点进行淋巴细胞计数和测定CD4+,CD8+ T淋巴细胞和CD4/CD8比值;观察胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡情况,计算脓毒症大鼠的存活率。（1）临床部分：前瞻性分析70例符合脓毒症患者,随机分成对照组和观察组。对照组接受经典治疗,观察组采用经典治疗联合蛋白酶抑制剂和胸腺肽α1治疗（经典治疗+免疫调理）,免疫调理疗程为7 d,分别观察治疗前和治疗后1,3,7 d临床和相关免疫学指标。
结果：（1）实验部分：CLP脓毒症造模成功后,实验组淋巴细胞,CD4+T淋巴细胞水平,CD4/CD8值均显著高于对照组明显（P＜0.05）。对照组胸腺和脾脏的淋巴细胞凋亡指数比实验组明显增高（P＜0.05）。实验组72 h存活时间比对照组明显延长（P＜0.05）。（2）临床部分：观察组CD4+T淋巴细胞,淋巴细胞计数及CD14+单核细胞HLA-DR水平较对照组显著升高（P＜0.05）。对照组死亡20例,观察组死亡13例（P＜0.05）。
结论：免疫调理可使脓毒症大鼠免疫功能提高,降低胸腺和脾脏淋巴细胞的凋亡率,提高脓毒症大鼠的存活率。免疫调理可提高脓毒症患者免疫调理的免疫功能,改善其免疫麻痹,延长近期生存率。