类鼻疽杆菌慢性感染BALB/c小鼠模型的建立

目的 建立类鼻疽杆菌(Burkholderia pseudomallei)慢性感染BALB/c小鼠模型并评价其稳定性.方法 采用0.01 mL洗涤后的高、中、低剂量的类鼻疽杆菌液(菌量分别为3.3×104、3.3×103、3.3×102 CFU)滴鼻感染BALB/c小鼠,密切监测42 d,记录小鼠的生存率,探索合适的攻毒剂量.在低剂量细菌(3.3×102 CFU)感染小鼠后21、28、35、42 d,计数小鼠血液、肝脏、脾脏和肺脏的细菌定植量,ELISA检测血清炎性因子TNF-α、IFN-γ的表达和血清类鼻疽杆菌特异性IgG抗体滴度,观察肝脏、脾脏和肺脏等主要器官的病理学改变,评价动物模型的稳定性.结果 低剂量类鼻疽杆菌滴鼻感染BALB/c小鼠后,小鼠42 d生存率为60％.期间小鼠体质量呈下降趋势,血液、肝脏、脾脏和肺脏均有细菌定植,并出现大量炎性细胞浸润、多灶性坏死和脓肿等病理改变;类鼻疽杆菌血清中特异性IgG抗体滴度从感染后21 d起持续增高;实验组小鼠血清炎性因子TNF-α和IFN-γ表达明显高于对照组(P＜0.05).结论 成功建立了稳定的类鼻疽杆菌慢性感染BALB/c小鼠模型.     

幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白DNA疫苗的构建及其免疫保护作用

目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用.方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌构建Hp-NAP口服DNA疫苗.口服Hp-SS1建立SS1长期感染小鼠模型,30周后随机均分为3组,每组各5只.治疗组予109cfu/0.4 ml疫苗菌灌胃,1次/周×3周;2个对照组分别予等体积生理盐水或空白质粒.末次免疫4周后行快速尿素酶检测,ELISA测定血清抗体效价.结果:重组真核表达质粒pIRES-napA成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207;所克隆napA与GenBank中SS1-na-pA核苷酸和蛋白质的同源性均＞98%.免疫后4周治疗组75%(3/4)小鼠快速尿素酶检测阴性,对照组均阳性,差异显著(P＜0.05);治疗组血清抗Hp-NAP抗体效价明显升高.结论:成功构建了具有较好免疫保护作用的Hp-NAP口服重组DNA疫苗,为进一步研制多价抗Hp核酸疫苗奠定了基础.     

板蓝根多糖对宿主抵抗鼠伤寒沙门菌感染能力的影响

目的:观察板蓝根多糖注射鼠伤寒沙门菌感染的小鼠后,对小鼠抵抗鼠伤寒杆菌能力的影响。方法:水煮法提取板蓝根多糖,配成悬液,腹腔注射感染鼠伤寒的小鼠,观察小鼠的生存时间,脾脏的重量指数,脏器菌落计数,检测小鼠血清中抗体IgG水平,用ELISA法测定小鼠脾脏释放的细胞因子。结果:注射板蓝根多糖的小鼠,生存时间延长,脾脏的重量指数,菌落计数均比对照组明显降低,血清中抗体IgG水平升高,脾脏细胞分泌细胞因子IFN-γ水平上升。结论:板蓝根多糖能够通过增强抗体的产生,调节细胞因子的释放,增强宿主的体液免疫和细胞免疫功能,保护宿主抵抗胞内菌的感染。     

乳酸杆菌对系统性白色念珠菌感染小鼠保护作用的实验研究

目的:探讨乳酸杆菌对系统性白色念珠菌感染的免疫抑制小鼠保护作用的机理。方法:建立系统性白色念珠菌感染小鼠模型,随机分为生理盐水对照组,低剂量、中剂量、高剂量组。造模后24h分别给予4组小鼠腹腔注射生理盐水,1×108、1×109、1×1010/ml乳酸杆菌悬液0.2ml/d×10。ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、IL-12水平,MTT法测小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性,计算小鼠肾负荷真菌数。结果:中、高剂量组小鼠血清IFN-γ、IL-12水平与生理盐水对照组、低剂量组差异明显(P<0.05),中、高剂量组小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性与生理盐水对照组、低剂量组差异明显(P<0.05),中、高剂量组小鼠肾负荷真菌数与生理盐水对照组、低剂量组差异明显(P<0.05)。结论:乳酸杆菌可通过增强系统性白色念珠菌感染小鼠细胞免疫功能对其发挥保护作用,且保护作用与乳酸杆菌的剂量有关。     

铜绿假单胞菌及其外毒素A对人单个核细胞TNF-α分泌的影响

目的:探讨加热杀灭的铜绿假单胞菌(HKPA)及其外毒素A(PEA)对人单个核细胞(PBMC)TNF-α分泌的影响。方法:采用1×107CFU/mlHKPA作为诱导物、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/LPEA作为抑制物、抗PEA血清作为中和物,诱导PBMC体外产生TNF-α。ELISA法检测TNFα浓度。结果:对照组HKPA可诱导PBMC产生一定浓度的TNFα;当PEA浓度≥100μg/L时,抑制TNF-α的产生(P<0.01),TNF-α浓度与PEA的剂量呈负相关(r=-0.82,P<0.01)。抗PEA血清完全中和PEA的抑制作用,与对照组比较,TNF-α分泌量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HKPA在体外可有效诱导PBMC产生TNF-α,PEA以剂量依赖的方式抑制TNF-α的产生。     

姜黄素对APP/PS1转基因鼠TNF-α、IL-6的影响

目的 探讨APP/PS1转基因鼠体内细胞因子TNF-α和IL-6的变化规律以及不同药量的姜黄素对其变化规律的影响.方法 6月龄雌性小鼠分为:野生型小鼠(对照组,n=9),APP/PS1转基因鼠(模型组,n=9)和APP/PS1转基因鼠+姜黄素(用药组,n=27).对照组和模型组自由摄食和饮水;用药组,姜黄素按60,160,600 mg·kg-1加入小鼠饲料,各组小鼠每次取3只分别于9,12,18月龄时处死,应用ELISA检测其大脑、血清中的细胞因子TNF-α和IL-6.结果 (1)与野生型小鼠相比,APP/PS1转基因鼠脑组织、血清中的TNF-α和IL-6于9月龄时开始升高,12月龄时差异显著(P＜0.05),18月龄时差异更加显著(P＜0.01);(2)应用姜黄素60mg·kg-1治疗后,APP/PS1转基因鼠脑组织、血清中的TNF-α和IL-6表达水平降低,姜黄素160mg·kg-1出现显著性差异(P＜0.05),姜黄素600 mg·kg-1差异更加显著(P＜0.01).结论 APP/PS1转基因鼠随着病情发展脑组织、血清中TNF-α和IL-6水平逐渐升高,应用姜黄素治疗后细胞因子TNF-α和IL-6逐渐降低,并呈剂量依赖性.     

重症急性胰腺炎急性肾损伤机制探讨

目的：通过体内体外观察大鼠和大鼠正常肾细胞(NRK)在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）状态下凋亡和分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的情况,探讨SAP时急性肾功能损伤的机制。方法: SD大鼠54只随机分成SAP组（n=30）和假手术组(n=24),SAP组以5%牛磺酸胆酸钠溶液胆管逆行注射诱导模型,术后6、12、24h采集血清、腹水。ELISA法检测血清、腹水TNF-α水平,TUNEL法检测肾组织凋亡率,RT-PCR检测肾组织TNF-αmRNA表达。将24h采集的血清和腹水处理后,体外培养NRK细胞,MTT法检测细胞活性,检测培养液TNF-α水平,流式细胞术测定NRK细胞凋亡率,检测NRK细胞TNF-αmRNA表达。 结果: SAP组6、12、24h血清和腹水TNF-α水平呈进行性升高,各时段比较差异有统计学意义(P<0.05),较假手术组在各时段明显升高(P<0.01)。SAP组肾组织TNF-α　mRNA表达较假手术组明显上调。SAP组凋亡指数在6、12、24h时分别为（18.6±5.6）%、（18.1±4.7）%、（25.3±5.1）%,假手术组分别为（19.4±3.1）%、（13.5±2.8）%、（14.6±5.5）%, 24?h时SAP组凋亡指数明显高于假手术组（P<0.05）。SAP组24h肾组织TNF-α mRNA的表达较假手术组明显上调。经SAP组大鼠血清和腹水处理后,NRK细胞活性低于假手术组。经SAP组大鼠血清和腹水处理24h后,NRK细胞培养液中TNF-α水平较假手术组明显升高（P<0.01）,NRK细胞TNF-αmRNA表达上调,显著高于假手术组,NRK细胞凋亡率均较假手术组明显升高（P<0.05）。结论: SAP时肾损害明显,其损伤可能与肾细胞过度凋亡有关,而肾细胞过度凋亡与血清和腹水TNF-α升高及肾细胞过多分泌TNF-α有关,SAP腹水对肾的直接损伤可能比血清明显。     

白细胞介素-10对小鼠弓形虫眼病眼部炎症的影响

 【目的】 探讨白细胞介素-10(IL-10)对弓形虫眼病小鼠视网膜组织炎症和体内γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。【方法】 将120只C57BL/6小鼠分为3组:①对照组40只;②感染组(实验A组)40只;③IL-10干预组(实验B组)40只。腹腔注射弓形虫感染小鼠后,观察小鼠眼部的组织学切片,对眼球和外周血做基因检测;注射IL-10后,观察其对眼部炎症反应和体内IFN-γ和TNF-α水平的影响。【结果】 弓形虫感染第6天,在实验组小鼠眼部和外周血中均可检测到小鼠P30基因;房水中IFN-γ(4531.4 pg/mL)和TNF-α(1572.3 pg/mL)的浓度升高;血清中IFN-γ(456 ± 39) pg/mL和TNF-α(14.6 ± 2.2)pg/mL的浓度升高;视网膜组织可见到弓形虫,且出现明显的炎症反应;IL-10注射后,房水中IFN-γ(2482.7 pg/mL)和TNF-α(1248.1 pg/mL)的浓度降低,血清中IFN-γ(266 ± 27)pg/mL和TNF-α(12.1 ± 1.9)pg/mL的浓度降低,但仍高于对照组,视网膜组织中仍可见到弓形虫,但炎症反应减轻,将三组血清中两种细胞因子的浓度组间差异进行方差分析,P < 0.01,表明差别具有统计学意义。【结论】 小鼠急性眼部弓形虫感染病变主要集中在视网膜,IL-10可减轻弓形虫感染小鼠的眼部炎症反应。     

仙人掌提取物对S180荷瘤小鼠IL-2、TNF-α的影响

目的观察仙人掌提取物对S180荷瘤小鼠IL-2、TNF-α的影响。方法用S180腹水型肉瘤小鼠的腹水肿瘤细胞悬液接种小鼠左腋皮下复制肿瘤模型。造模后随机分为仙人掌提取物组、肝复乐片组、模型空白组、正常对照组。前两组分别给予仙人掌提取液、肝复乐混悬液灌胃;模空组和正常对照组以生理盐水灌胃。每次0.2 ml/10g.d-1,每天1次,连续10天。于第11天取材测定小鼠血清IL-2、TNF-α含量。结果仙人掌提取物组小鼠血清IL-2水平比模空组明显提高(P<0.01);TNF-α水平明显降低(P<0.05)。结论仙人掌提取物能提高IL-2水平,降低TNF-α水平,有抗肿瘤作用。     

黄芪多糖在宿主抵抗李斯特菌中的作用

目的:观察黄芪提取物注射小鼠后,对小鼠抵抗单核细胞增生李斯特菌能力的影响。方法:水煮法提取黄芪多糖,配成悬液,腹腔注射感染李斯特菌的小鼠,并设对照,每组20只昆明鼠,观察小鼠的生存时间,脾脏的重量指数,脏器菌落计数,检测小鼠血清中抗体IgG水平,利用ELISA法测定小鼠脾脏释放的细胞因子。结果:注射黄芪多糖的小鼠,在30d观察期结束后仍有12只存活,而对照组只有2只存活。黄芪多糖组小鼠脾脏的重量指数(5.2±1.2),菌落计数(4.1±1.5)均比对照组的重量指数(11.0±0.9),菌落计数(8.8±1.3)明显降低。黄芪多糖组小鼠血清中抗体滴度(OD490)为0.38±0.05,对照组的抗体滴度为0.18±0.07。ELISA法测的黄芪多糖组小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ为(240±15)ng/L,对照组为(150±19)ng/L。结论:黄芪多糖能够增强宿主的体液免疫和细胞免疫来保护宿主抵抗胞内菌的感染。     

荆芥、桂枝挥发油对LPS体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的:观察VOHS(荆芥挥发油)、VOCC(桂枝挥发油)体外干预小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4通路的抗炎机制.方法:1.常规培养小鼠腹腔巨噬细胞,加入不同浓度的VOHS、VOCC,药物作用24h后采用MTT法检测细胞存活率.2.常规培养小鼠腹腔巨噬细胞,分组加药培养24h后,提取细胞总RNA,采用RT-PCR测定TLR2...     

肿瘤坏死因子α在抗鼠衣原体生殖道感染过程中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）在抗衣原体感染免疫以及介导衣原体生殖道病理损伤过程中的作用。方法 以5~6周龄雌性C57BL/6J野生型小鼠及TNF-αR基因敲除小鼠为研究对象,野生型和TNF-αR基因敲除两组各15只小鼠,经生殖道感染1×104包涵体形成单位的鼠衣原体,初次感染后第56天,每组8只小鼠再次感染同等剂量的鼠衣原体。每隔3~4 d 取小鼠生殖道分泌物用于衣原体包涵体数目的检测。于初次感染后第80天处死小鼠,收集小鼠腹腔巨噬细胞,并分离生殖道和脾脏。观察输卵管和子宫角病理损伤程度,并采用盲法对管腔扩张以及炎性细胞浸润程度进行半定量分析;测定小鼠巨噬细胞培养上清中的IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和TNF-α等前炎症因子水平;制备脾细胞悬液,体外经衣原体EB刺激后检测其产生的IL-4、IL-5、IL-17和 IFN-γ 等细胞因子水平。结果 TNF-αR 基因敲除组生殖道衣原体清除速度与野生型组基本一致,与初次感染或再次感染无 关;两组小鼠子宫角和输卵管的炎症程度差异没有统计学意义（P>0.05）,但TNF-αR基因敲除组输卵管水肿程度明显低于野生型组（P<0.05）。腹腔巨噬细胞细胞因子检测结果显示,TNF-αR基因敲除小鼠的TNF-α水平高于野生型小鼠（P<0.05）;脾细胞细胞因子水平显示,两组小鼠脾细胞均产生较高水平的IFN-γ,TNF-αR基因敲除小鼠产生的IL-17细胞因子水平低于野生型小鼠（P<0.05）。结论 TNF-α对小鼠生殖道清除鼠衣原体感染无影响,但可促进鼠衣原体引起的生殖道炎症病理损伤。     

miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h,Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞,用TNF-α（100ng／mL）刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF,50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度;50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01）,但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。     

东北鹤虱多糖对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：研究东北鹤虱多糖（LEGPS-Ⅱ）对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞（MФ）功能的影响。方法：采用免疫力低下小鼠,通过中性红实验,观察LEGPS-Ⅱ对小鼠静止和ConA活化的腹腔M中体外吞噬功能的影响;采用噻唑蓝比色法（MTT）,观察LEG—PS-Ⅱ对小鼠静止和ConA活化的腹腔M中体外分泌IL—1β与TNF—α的影响。结果：MФ体外吞噬实验表明,LEGPS—Ⅱ在0．0156-0．25μg·mL^-1的浓度范围内可剂量依赖性地增加静止和ConA活化的免疫力低下小鼠腹腔MФ吞噬中性红的能力;LEGPS—Ⅱ在20—80μg·mL^-1的浓度范围内可剂量依赖性地增加ConA活化的免疫低下小鼠腹腔MФ分泌IL-1β,但不能有效刺激免疫低下小鼠静止的腹腔MФ产生IL-1β;LEGPS-Ⅱ在10～80μg·mL^-1。的浓度范围内可增加静止和ConA活化的免疫力低下小鼠腹腔MФ分泌TNF—α,且刺激作用具有剂量依赖性。结论：LEGPS-Ⅱ可以通过提高小鼠腹腔MФ的吞噬能力,并增加IL-1β与TNF—α．的分泌而增强MФ的免疫调节功能。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF—αmRNA、iNOSmRNA的表达

目的观察脂多糖对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α以及诱导型一氧化氮合酶表达水平的影响。方法按常规方法获取小鼠腹腔巨噬细胞,随机分成两组：空白对照组及LPS组（分别含LPSO．01,0．1,1．0,10rag／L）。采用荧光定量PCR方法测定肿瘤坏死因子-α及诱导型一氧化氮合酶的基因表达情况。结果经0．01μg／mL LPS刺激后细胞TNF-αmRNA、iNOSmRNA表达水平均明显升高,与空白对照组比较有显著性差异（P〈0．01）,并且在一定范围内呈剂量一效应关系。结论LPS可诱导小鼠巨噬细胞TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达。     

RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α的影响

[目的]探讨RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞表达TNF-α的抑制作用。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α的siRNA表达框架,转染细胞,用RT-PCR方法检测TNF-αmRNA的水平,用ELISA方法检测TNF-α分泌情况。[结果]从凝胶电泳图像TNF-α/β-actin灰度值比可以看出干扰组TNF-αmRNA的水平0.18±0.03较阳性对照组0.91±0.05及阴性对照组0.85±0.10明显降低（P〈0.05）。干扰组TNF-α分泌量（21.87±1.20）pg/mL较阳性对照组（28.02±1.03）pg/mL及阴性对照组（27.64±1.92）pg/mL均明显降低（P〈0.05）。[结论]RNA干扰可以有效地抑制原代培养小鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA水平及其蛋白分泌。     

N-乙酰半胱氨酸(NAC)对体外LPS刺激下小鼠巨噬细胞HIF-1α表达的影响

目的:探讨NF-κB抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞内HIF-1表达的影响及意义。方法:取健康Balb/c小鼠,分离腹腔巨噬细胞并将其分为正常对照组、LPS刺激组、不同剂量NAC加LPS组。采用RT-PCR检测各组HIF-1α、TNF-αmRNA表达,细胞免疫化学检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达。结果:与LPS刺激组比较,NAC+LPS组HIF-1αmRNA表达无明显差异、TNF-αmRNA明显减少,HIF-1α、VEGF蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:NAC可降低LPS刺激下小鼠巨噬细胞TNF-αmRNA表达,TNF-α的降低可能通过HIF-1α转录后途径下调该蛋白的表达,进而下调VEGF表达。提示在急性炎性反应中,NF-κB可能通过增加TNF-α在转录后水平影响HIF-1α的表达。     

双歧杆菌脂磷壁酸对刀豆蛋白A活化小鼠肝细胞肿瘤坏死因子-α和一氧化氮水平的影响

目的研究双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对刀豆蛋白A(Con A)活化小鼠肝细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)水平的影响,探讨临床应用LTA治疗免疫性肝损伤的可能性。方法将用胶原酶灌注法获取的小鼠肝细胞分为对照组(达尔伯克改良伊格尔培养基完全培养液)、LTA+Con A处理组(LTA终浓度分别为1.0、2.0、4.0μg.L-1,Con A终浓度为10 mg.L-1)和Con A组(Con A终浓度为10mg.L-1);细胞处理24 h后,采用酶联免疫吸附法测定肝细胞上清液中TNF-α和NO水平,反转录-聚合酶链反应检测肝细胞TNF-αmRNA水平。结果 ConA组肝细胞上清液中TNF-α和NO水平及肝细胞TNF-αmRNA水平均显著高于对照组(P<0.05),不同浓度的LTA处理后上述各指标均较Con A组显著降低(P<0.05),且LTA的作用与其浓度呈一定的梯度关系。结论 LTA可能通过抑制Con A活化的小鼠肝细胞体外TNF-α和NO的生成发挥对免疫性肝损伤的保护作用。     

炎症反应中巨噬细胞的Siglec-G分子对DAMPs和PAMPs的识别及调节作用

目的:探究巨噬细胞中唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素（Siglecs）家族的成员Siglec-G参与损伤相关分子模式（DAMPs）和病原相关分子模式（PAMPs）识别及其在炎症反应中的调节作用。方法:提取并纯化野生型小鼠腹腔巨噬细胞, 用DAMPs中的高迁移率族蛋白Bl（HMGB1）和PAMPs中的脂多糖（LPS）分别刺激24 h,Real-time PCR方法检测细胞中Siglec-G基因的表达,ELISA方法检测野生型和Siglec-G基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中肿瘤坏死因子α （TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的分泌情况。结果:HMGB1能够使巨噬细胞中Siglec-G的表达明显升高,而LPS作用后Siglec-G的表达没有明显改变,同时发现,HMGB1作用于Siglec-G敲除小鼠的巨噬细胞后,TNF-α和IL-6的分泌明显增加,而LPS刺激后炎症因子的分泌没有明显改变。结论:巨噬细胞通过表达Siglec-G来识别DAMPs并发挥免疫抑制作用,而其对于PAMPs缺乏识别及调控作用。     

登革病毒1、2型单、双价病毒样颗粒的免疫原性研究

目的初步研究登革病毒1、2型单、双价病毒样颗粒(VLP)的免疫原性。方法表达纯化各型VLP,用纯化好的VLP免疫BALB/c小鼠,将BALB/c小鼠随机分PBS组、灭活DENV1、灭活DENV2、纯化VLP1、纯化VLP2、纯化VLP1+2组,以灭活病毒为阳性对照,PBS为阴性对照。ELISA法检测小鼠血清抗VLP抗体效价以及血清IFN-γ、TNF-α细胞因子水平,流式细胞术检测小鼠脾细胞CD4+细胞和CD8+细胞数。结果登革病毒1、2型单、双价VLP均能刺激免疫小鼠产生一定程度的抗血清效价,VLP1的抗体水平较VLP2的低,双价VLP组针对DENV2抗原的抗体水平上升明显,是单价VLP2的2～3倍;攻毒后,灭活DENV1和VLP2可以产生高水平的IFN-γ,分别为60和35pg/ml,双价VLP组的较低;VLP2组的TNF-α一直保持较高水平,双价VLP组中攻DENV2组的TNF-α水平较DENV1组高;三次免疫后,各实验组较之PBS组CD4+细胞的比例都有下降,而CD8+细胞变化不大,除灭活DENV1组有增加,其余各组都有减少。结论无论单、双价VLP均能刺激小鼠产生一定程度的体液免疫和细胞免疫反应,联合免疫有一定程度的协同性。