[125I]-(A14)单碘胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤特性研究

目的：观察放射性碘标记胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤或亲肿瘤（tumor-seeking）特性。方法：采用荷人肝癌裸鼠模型。用[¹²⁵I]-(A14)单碘胰岛素进行荷人肝癌裸鼠体内分布实验和抑制实验。结果：体内分布实验显示肝癌组织摄取[¹²⁵I]-(A14)单碘胰岛素明显高于本底组织（肌肉）,肿瘤与血和肿瘤与肌肉的放射性比值随时间延长而增高。体内抑制实验发现肿瘤组织于30 min的抑制率为35.0%。结论：[¹²⁵I]-(A14)单碘胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内,通过受体介导作用,能被肝细胞癌组织特异性摄取。     

放射性碘标胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤特性研究

目的 :观察放射性碘标胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤特性。方法 :采用荷人肝癌裸鼠模型。用放射性碘标记胰岛素进行荷人肝癌裸鼠体内分布实验、抑制实验和显像研究。结果 :体内分布实验显示 ,肝癌组织摄取 [1 2 5Ｉ]-胰岛素明显高于本底组织 (肌肉 ) ;肿瘤与血和肿瘤与肌肉的放射性比值随时间延长而增高。体内抑制实验肿瘤组织的抑制率为 35%。接种肿瘤部位有明显的局部放射性浓聚 ,非标记胰岛素能明显抑制肿瘤组织中的放射性浓聚。结论 :放射性碘标胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内 ,通过受体介导作用 ,能被肝细胞癌组织特异性摄取放射性碘标胰…     

[~(125)I]-(A14)单碘胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤特性研究

目的 :观察放射性碘标记胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤或亲肿瘤 (tumor-seeking)特性。方法 :采用荷人肝癌裸鼠模型。用 [12 5I]- (A14)单碘胰岛素进行荷人肝癌裸鼠体内分布实验和抑制实验。结果 :体内分布实验显示肝癌组织摄取 [12 5I]- (A14)单碘胰岛素明显高于本底组织 (肌肉 ) ,肿瘤与血和肿瘤与肌肉的放射性比值随时间延长而增高。体内抑制实验发现肿瘤组织于 30min的抑制率为 35 .0 %。结论 :[12 5I]- (A14)单碘胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内 ,通过受体介导作用 ,能被肝细胞癌组织特异性摄取。     

131I标记重组人表皮生长因子体内抑制乳腺癌生长的实验研究

研究 1 31 I标记重组人表皮生长因子 (1 31 I- Recombinant hum an epiderm al growth factor,1 31 I- rh EGF)对荷人乳腺癌裸鼠肿瘤生长的抑制作用。1 31 I- rh EGF在荷人乳腺癌裸鼠体内的组织分布实验证实 1 31 I- rh EGF的生物活性及乳腺癌组织对 1 31 I- rh EGF的摄取 ,通过给药后荷人乳腺癌裸鼠肿瘤的生长实验观察 1 31 I- rh EGF对肿瘤生长的影响 ,用透射电镜和病理组织学检查分别观察 1 31 I- rh EGF治疗后肿瘤细胞的超微结构变化和组织病理学变化。1 31 I-rh EGF的组织分布显示 ,荷人乳腺癌裸鼠的肿瘤组织对 1 31 I- rh EGF有明显摄取。肿瘤生长观察结果显示 ,静脉注射和瘤体内注射 1 31 I- rh EGF均能明显抑制肿瘤的生长 ,抑瘤率 (82 .0 0 %和 80 .70 % )显著大于 1 31 I(7.4 9% )和 1 31 I- HSA(6 .91% ) (P<0 .0 5 )。透射电镜和病理学观察均显示 ,静脉注射和瘤体内注射 1 31 I- rh EGF均能明显杀伤、杀死肿瘤组织细胞。实验表明 ,1 31 I- rh EGF能抑制裸鼠体内的人乳腺癌细胞生长 ,可望成为受体介导放射性靶向治疗乳腺癌的新药物     

~(131)I标记单克隆抗体瘤内注射对结肠癌裸鼠移植瘤的放射免疫治疗

~(131)I标记抗结肠癌单克隆抗体CL3经两种途径给药治疗LS174t结肠癌细胞系裸鼠移植瘤。大剂量治疗组(18.5MBq/鼠)观察33d,瘤内和腹腔注射两种途径均具有明显的肿瘤抑制作用,与非治疗组、单纯CL3组和单纯~(131)I组有显著差异(P<0.05),两途径之间差距不大;瘤内注射两     

重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对Hep2细胞移植瘤的杀伤效应

目的研究自行构建的重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对裸鼠Hep2细胞移植瘤的杀伤效应。 方法裸鼠皮下接种Hep2细胞悬液建立荷人喉癌动物模型。将裸鼠分为单次治疗组和连续治疗（每天1次、连续5d）组，每组据治疗药物不同再分为PBS组、携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的复制缺陷型5型重组腺病毒（Ad-GFP）组、Ad-CD80-TPE-GM组，以PBS、Ad-GFP组为对照组。单次治疗组于治疗后4d取外周血并剥离肿瘤，分别用有限稀释法、BCA蛋白质定量试剂盒和流式细胞术检测肿瘤组织中的病毒感染滴度、总蛋白浓度和CD80表达阳性率，ELISA法检测血清和肿瘤组织中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CS）表达水平，并计算肿瘤组织中病毒感染滴度量和总蛋白中GM-CSF的表达量。连续治疗组于首次给药后观察裸鼠肿瘤体积的变化，待对照组肿瘤直径〉1cm，或肿瘤表面出现明显溃疡时剥离肿瘤，计算Ad-CD80-TPE-GM组分别与2个对照组相比的相对肿瘤增殖率和抑瘤率。 结果单次治疗组中，Ad-CD80-TPE-GM组肿瘤组织中病毒感染滴度量（IU/tumor）为1.13×10^6（1.40×10^5～7.25×10^7），明显高于Ad-GFP组[1.17×10^2（7.80×10^1～2.40×10^2），P=0.01]，而PBS组未检测到病毒；GM-CSF表达量（pg/mg）为397.32±179.67，明显高于PBS组（4.02±0.93，P〈0.01）和Ad-GFP组（6.92±2.79，P〈0.01）；CD80表达阳性率为31.6%＆#61617;9.0%，而PBS和Ad-GFP组均基本不表达（均P〈0.001）。连续治疗组中，Ad-CD80-TPE-GM组与PBS和Ad-GFP组相比，相对肿瘤增殖率分别为31.8%（P〈0.05）、25.9%（P〈0.01）；抑瘤率分别为73.4%、77.9%（均P〈0.001）。 结论Ad-CD80-TPE-GM能在端粒酶阳性的人喉癌Hep2细胞移植瘤组织内大量复制并有效表达目的基因，具有明显的抗肿瘤效应。     

裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型。方法BLBA/c裸鼠颈背部皮下注射人肝癌SMMC-7721细胞悬液5×106个.0.2m l-1.只-1,观察肿瘤生长情况,45d处死。瘤组织作病理及电镜检查;取裸鼠周围血作甲胎蛋白(AFP)的检测;用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)。结果该模型具有类似人原发性肝癌的形态学特征。结论成功建立了人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。     

肝原位移植瘤裸鼠模型的建立及活体荧光成像检测

目的 建立能够通过活体荧光成像系统实时监测肿瘤进展的肝原位移植瘤裸鼠模型.方法 重组质粒pcDNA3.1-Luc转染细胞构建稳定表达荧光素酶的PLC/PRF/5肝癌细胞株,将该细胞注入裸鼠肝脏实质内,应用活体成像技术动态监测肿瘤进展情况,解剖荧光信号阳性裸鼠观察肿瘤组织生长情况.免疫荧光检测肿瘤组织中HBsAg表达.结果 对裸鼠肝原位移植瘤应用活体荧光系统成像,在肿瘤细胞注射部位检测到荧光信号,解剖动物后可在肝脏组织中观察到异质细胞团块.免疫荧光证实移植瘤中有HBsAg表达.结论 肝脏原位移植瘤裸鼠模型建立成功,为抗肝癌药物的研发提供了工具.     

131I标记重组人表皮生长因子在裸鼠体内的辐射生物学效应研究

研究131I标记的重组人表皮生长因子(131I-rhEGF)对荷人乳腺癌裸鼠的辐射生物学效应。通过131I-rhEGF在小鼠体内的分布实验找寻131I-rhEGF的主要浓聚组织,再通过生化检查和活组织病理检查检测131I-rhEGF对荷人乳腺癌裸鼠主要浓聚131I-rhEGF的组织的辐射损伤。131I-rhEGF在小鼠体内的分布实验显示,131I-rhEGF主要浓聚在肾、肝、脾、血。生化检查和活组织病理检查结果显示,注射131I-rhEGF2次(每次注射量相当于50kg人体注射14.58GBq,间隔为14d)对荷人乳腺癌裸鼠的肿瘤有较强的杀伤作用,而对肾、肝、脾和造血组织均无辐射损伤。因此,131I-rhEGF在受体介导放射性靶向治疗乳腺癌的过程中对正常组织是安全的药物。     

碘标记肝癌单克隆抗体对裸鼠肝癌移植瘤导向治疗的意义和观察

本文报告用~(131)I标记肝癌单克隆抗体HAb18、及其F(ab’)2片段对裸鼠移植瘤导向治疗的观察,具有明显的杀伤效应,其效果优于国外同类抗体。 同位素标记与显像 用~(131)I标记HAb8、18IgG及其F(ab’)2片段,全部采用氯胺T碘化法,标记率:51％比活性:9.58×10~4Bq/μg。抗体与肝癌细胞在体外的亲和率:IgG—70％,F(ab’)2—55％。尾静脉注入碘标记物后,荷瘤裸鼠肿瘤部位明确显像。其定位指数;IgG—3.09,F(ab’)2—6.99。 实验分组与治疗12只荷瘤肝癌裸鼠(SMMU—LTNM)分4组,实验前服用0.25％     

腺病毒介导重组人单链IL-27融合基因在肝癌细胞的表达及活性鉴定

目的:利用腺病毒表达系统在肝癌细胞表达有生物活性的单链重组人白细胞介素-27(rhscIL-27)并检测其生物学活性。方法:将rhscIL-27基因片段从pcDNA3.1载体克隆到腺病毒载体pAdTrack-CMV,然后在细菌内与pAdEasy同源重组构建AdIL-27腺病毒载体并转染293细胞包装、扩增腺病毒颗粒。将重组腺病毒感染肝癌细胞株HepG2,荧光显微镜、RT-PCR及ELISA等方法进行检测蛋白表达情况,IFN-γ诱生实验检测rhscIL-27的生物学活性。结果:成功构建AdIL-27腺病毒载体,经293细胞包装扩增后感染HepG2细胞观察到有GFP表达,RT-PCR及ELISA检测到细胞有rhscIL-27表达,IFN-γ诱生实验证实表达的rhscIL-27具有诱导产生IFN-γ的生物学活性。结论:利用腺病毒表达系统成功在肝癌细胞表达有生物活性的重组人单链IL-27(rhscIL-27),并具有诱导产生IFN-γ的生物学活性,为研究IL-27的生物学功能及其对肝癌的基因治疗奠定了基础。     

靶向腺病毒载体介导的EGFP基因在甲胎蛋白阳性肝癌细胞的特异表达

目的：建立一种在甲胎蛋白(AFP)阳性的肝癌细胞中靶向表达目的基因的重组腺病毒载体。方法： 基于腺病毒载体Adeno-XTM Expression system,以300 bp AFP特异启动子替换穿梭质粒Pshuttle中CMV启动子，将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因亚克隆至Pshuttle，HEK293细胞包装腺病毒，收集病毒后分别转染人正常肝脏LO2细胞，人肝癌HepG2细胞及HeLa细胞；通过Northern杂交检测EGFP基因在3种细胞中的转录水平，荧光显微镜下观察3种细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果：Northern杂交显示，HepG2细胞中有大量EGFP基因的转录，而正常肝细胞LO2和HeLa细胞中仅能检测到微量基因的转录；荧光显微镜检测发现HepG2细胞内有强绿色荧光表达，而在LO2以及HeLa细胞内见极弱绿色荧光。 结论： 在AFP特异启动子作用下，腺病毒携带的目的基因在AFP阳性的肝癌细胞中得到显著转录和表达，而在非AFP阳性细胞仅微量转录，蛋白表达极弱。该腺病毒载体可作为AFP阳性的肝癌基因靶向治疗的适宜载体。     

PAR-2激动剂对肝癌细胞增殖及Ca2+水平的影响

目的： 研究PAR-2激动剂对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞内Ca2+浓度（［Ca2+］c）的影响。方法: 培养人肝癌细胞HepG2, 分别利用PAR-2激动剂SLIGKV-NH2及反PAR-2激动肽VKGILS-NH2干预肝癌细胞生长,用Fura-2荧光法测定肝癌细胞内［Ca2+］c,用MTT法检测对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞周期改变情况,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA表达变化。结果: 50 μmol/L SLIGKV-NH2刺激HepG2细胞后,［Ca2+］c迅速短暂升高（P<0.01）;G0/G1期比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)明显提高（P<0.01）;cyclinD1 mRNA的表达显著增加（P<0.01）。SLIGKV-NH2在1-50 μmol/L时可以促进HepG2细胞增殖,呈剂量依赖性（P<0.01或P<0.05）。而VKGILS-NH2组与对照组相比差异无显著（P>0.05）。结论: PAR-2激动剂在体外能通过激活PAR-2,诱导HepG2细胞内［Ca2+］c升高,上调cyclinD1 mRNA的表达,加速HepG2细胞周期进程,促进DNA合成,促进肝癌细胞增殖。     

Growth factor assays for normal human hepatocytes and hepatoma cells

Summary An improved assay procedure of growth factors for normal human hepatocytes and hepatoma cells is reviewed. The combined use of improved cell isolation and dispersion procedures and a selective culture medium supports the response of human parenchymal cells homogenous to growth factors under serum-free culture conditions. Differentiated human hepatoma cells (HepG2), which synthesize and secrete the liver-specific plasma proteins and enzymes, provide a useful model for comparative study of growth factor requirements of hepatoma cells to normal hepatocytes. HepG2 cells grow in protein-free, defined medium at high cell density. This indicates that the hepatoma cells may secrete autocrine growth factors into the medium. HepG2 cells at low cell density permit detection of exogeneous growth factors that may be secreted by HepG2 cells at high cell density. HepG2 cells at high cell density are a useful assay for growth inhibitory activities for hepatoma cells.     

RNA干扰技术沉默CDC25a基因对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

 目的:研究细胞分裂周期素25a（cell division cycle 25a,CDC25a）基因沉默后对于人肝癌细胞系HepG2增殖的影响。同时探讨该影响发生的可能作用机制。 方法: 使用RNA干扰技术沉默人肝癌HepG2细胞的CDC25a基因,采用实时荧光定量PCR技术检测肝癌细胞中的CDC25a 及其作用基因cyclin E及CDK2的 mRNA表达水平,Western blotting检测CDC25a的蛋白表达水平,并采用MTT法、Giemsa染色法及流式细胞技术检测细胞的增殖情况。 结果: CDC25a 的mRNA及蛋白表达水平在RNA沉默组细胞中的表达低于阴性对照组及正常对照组细胞（P＜0.05）。Cyclin E及CDK2 的mRNA表达水平在沉默组低于阴性对照及正常对照组（P＜0.05）。MTT法、Giemsa染色法结果显示沉默组细胞增殖能力低于阴性对照组及正常对照组细胞（P＜0.05）,流式细胞技术结果显示沉默组细胞阻滞在G1期。 结论: LV-CDC25a-RNAi重组体感染HepG2细胞可以有效抑制CDC25a基因的表达,使人肝癌HepG2细胞增殖受到抑制,提示CDC25a基因可能是肝癌治疗的关键靶点。     

Recombinant adenovirus vector-mediated human MDA-7 gene transfection suppresses hepatocellular carcinoma growth in a mouse xenograft model

Hepatocellular carcinoma is one of the most common tumors in the world.The purpose of the present study was to investigate the inhibitory effects of adenoviral transduction of human melanoma differentiation-associated gene-7(MDA-7)gene on hepatocellular carcinoma,so as to provide a theoretical basis for gene therapy of the disease.The human MDA-7 gene was cloned into replication-defective adenovirus specific to HepG2 cells using recombinant virus technology.RT-PCR and Western blotting assays were used to determine the expression of human MDA-7 mRNA and MDA-7 protein in HepG2 cells in vitro.Induction of apoptosis by overexpression of the human MDA-7 gene was determined by flow cytometry.In-vivo efficacy of adenoviral delivery of the human MDA-7 gene was assessed in nude mice bearing HepG2 cell lines in vivo by determining inhibition of tumor growth,VEGF and CD34 expression,and microvascular density(MVD).The results showed that AdGFP/MDA-7 induced apoptosis of HepG2 cells in vitro and significantly inhibited tumor growth in vivo(P < 0.05).The intra-tumoral MVD decreased significantly in the treated tumors(P < 0.05).We conclude the recombination adenovirus AdGFP/MDA-7 can effectively express biologically active human MDA-7,which leads to inhibition of hepatocellular carcinoma growth.     

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:MTT 法观察细胞增殖能 力;RT鄄PCR 检测细胞内Bax 和Bcl鄄2 mRNA 水平;免疫印迹(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白水平。结果:扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2 细胞内Bcl-2 基因转录,增加Bax 基因转录;扶正解毒通络方 能明显诱导减少HepG2 胞内Bcl-2 蛋白表达,增加Bax、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白表达。结论:与正常对照组比 较,正常血清组人肝癌细胞HepG2 细胞内Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、基因及蛋白表达水平无明显改变;与正常血清组比较, 扶正解毒通络方低、中和高剂量含药血清和阳性对照组HepG2 细胞内Bcl鄄2 基因转录减少,蛋白表达减少;Bax 基因转录增 加,蛋白表达增加,活化的caspase鄄3 蛋白表达增加。     

人剪切修复基因XPD肝癌对人HepG2细胞中Rb和MAD2表达的影响*

 目的：探讨人剪切修复基因着色性干皮病D组基因（xeroderma pigmentosum group D, XPD)转染人肝癌HepG2细胞后视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma,Rb)和有丝分裂阻滞缺陷蛋白 2（mitotic arrest deficient 2, MAD2）表达的变化及对细胞增殖的影响。方法：将人工合成的pEGFP-N2-XPD重组质粒通过LipofectamineTM 2000转染HepG2细胞。实验分为4组,分别为无转染HepG2细胞组（空白对照组）、脂质体转染HepG2细胞组（脂质体组）、空载质粒pEGFP-N2转染细胞组（N2 组）和重组质粒pEGFP-N2-XPD转染细胞组（XPD组）。分别用RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中XPD、Rb及MAD2 mRNA和蛋白的表达量,用MTT法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况及细胞周期。结果：与其它3组相比,XPD组XPD mRNA及蛋白表达量明显升高（P<0.05）,Rb mRNA及蛋白表达量明显升高（P<0.05）,而MAD2 mRNA及蛋白表达量显著降低（P<0.05）。XPD组细胞增殖活力显著降低,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。XPD组细胞停滞在G1期,难以进入S期。结论：XPD可以抑制MAD2的表达和肝癌细胞的增殖,促进Rb的表达。     

Experimental Study on the Inhibitory Effect of Sodium Cantharidinate on Human Hepatoma HepG2 Cells

Backgroud

Cantharidin, and its derivatives can not only inhibit the proliferation of tumor cells, but can also induce tumor cell apoptosis. It shows cantharidin exhibits a wide range of reactivity in anticancer. The objective of this paper was to study the inhibitory effect of sodium cantharidinate on human hepatoma HepG2 cells.

Materials and Methods

MTT assay was used to detect the proliferation of HepG2 cells, and immunohisto-chemical method was used to detect the change in VEGF, protein level, and to determine the inhibitory effect of sodium cantharidinate on human hepatoma HepG2 cells.

Results

As results, sodium cantharidinate significantly inhibited the growth of HepG2 cells in a time-and dose-dependent manner.

Conclusion

We conclude that sodium cantharidinate has an inhibitory effect on human hepatoma HepG2 cells.     

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对人肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制

 目的：研究糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B（glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B,GPNMB）对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制。方法：以人HepG2细胞为研究对象,构建GPNMB的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）以及过表达载体,转染入细胞后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell小室法观察其对HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果：增殖实验结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的增殖;流式细胞术检测发现GPNMB对HepG2细胞凋亡几乎无影响;细胞侵袭结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的侵袭;当整合素β1亚基基因被siRNA沉默后,GPNMB对HepG2细胞增殖和侵袭的促进作用均受到明显抑制。结论: GPNMB可能通过与整合素β1亚基相互作用促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力,提示GPNMB可以作为治疗肝癌的潜在靶点。