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为提高单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞的融合率,本文作者采用了新的融合技术-电融合法(Electro fusion)取代传统的PEG法,并成功地获得一株抗细胞角蛋白单克隆抗体的细胞株(A53 B/A2).作者用小鼠浆细胞瘤细胞系X63 Ag8.653作为亲本细胞与经MCF 7细胞免疫后的小鼠脾细胞进行融合.收集的脾细胞先经渗透压休克处理以除去红细胞.X63 Ag8.653经蛋白酶处理后,加入脾细胞.两种 相似文献
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单克隆抗体作为研究工具和免疫试剂已被广泛应用。致敏脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合而产生的小鼠杂交瘤细胞系,在组织相容性鼠系以腹水瘤形式快速生长,同时分泌特异性单克隆抗体,一只带瘤小鼠能产生10-20mg单克隆抗体。本文报告将杂交瘤细胞注射于BALB/C鼠与SW/HPD鼠杂交产 相似文献
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一、抗霍乱毒素(或其亚单位)单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立:本文报道以福尔马林脱毒的CT-B免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤Sp 2/0细胞融合。筛选到一株能产抗CT-B单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为AE 72-26。CT-B免疫组的试验中,获得4株能产抗体的杂交瘤细胞系,但效价很低,且兼有抗CT-A、抗CT-B抗体。 相似文献
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用Ｎｕｌｌ细胞系Ｒｅｈ细胞免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＮＳ－１融合，运用人肾脏冰冻切片免疫酶染色法进行了筛选，获得了一株能稳定分泌ＩｇＧ１亚类抗人普通型急性淋巴母细胞性白血病抗原（ＣＡＬＬＡ）单克隆抗体的杂交瘤细胞系，即Ｗｕ１７４。文中叙述了对单克隆抗体Ｗｕ１７４特异性的鉴定，并对其初步应用价值和抗细胞性单克隆抗体筛选方法的选择进行了讨论。 相似文献
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双特异性单克隆抗体已被广泛接受并用于诱导T淋巴细胞专一裂解肿瘤细胞的目的。为此我们实验室也选择了一种抗人肝癌杂交瘤,以其HGPRT突变株与细胞毒性细胞免疫过的小鼠脾细胞融合,经HAT培养 相似文献
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本实验研究了转输615系小鼠脾LAK细胞和LAK—88/DC细胞系对615小鼠白血病(L615)的免疫防治效应,以及继承性化学免疫治疗作用。实验结果表明,攻击前二十一天转输LAK细胞或LAK—88/DC细胞系,并每日腹腔注射培养上清液一周,可以诱导正常受鼠产生对L615明显的免疫预防效应,分别使实验组80%的小鼠长期存活;单独注射培养上清液也有效,可使60%的小鼠长期存活。在攻击后五天,用环磷酰胺(CY:180mg/kg)进行化疗并转输LAK细胞或LAK—88/DC细胞系,则能延长晚期L615病鼠的平均存活时间,并可使实验组25%～28.6%的小鼠长期存活。 相似文献
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用人小细胞肺癌细胞系(源於北京市肺部肿瘤研究所汪惠等所建LIEP—P)为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合。获得两个新的与人小细胞肺癌细胞系起反应的杂交瘤细胞系,2D6和2F1并稳定地产生高活性单克隆抗 相似文献
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用亲和层析提纯的大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与SP 2/0小鼠骨髓瘤细胞在PEG-1000作用下融合,用ELISA筛选抗体阳性孔,经3～5次克隆化,获得2株分泌抗-LT单克隆抗体的细胞系。通过BLISA和平板免疫淀血试验分别对杂交瘤分泌的抗-LT单克隆抗体的特异性进行了鉴定。本文报道的抗-LT单克隆抗体特异地捕获人源LT(LTh),而与猪源LT(LTp)或霍乱肠毒素(CT)不发生交叉。杂交瘤细胞林经体外培养6个月传代40次,液氮保存3个月并反复冻融仍稳定地分泌抗-LT单克隆抗体。将单克隆抗体应用于平板免疫溶血试验和ELISA双抗夹心法检测已知产LT和不产LT菌株,及从临床各年龄组腹泻患者的未知菌株,结果均与分子杂交法检测的完全相符。 相似文献
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应用B细胞杂交瘤技术,将胎儿胸腺细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,以扁桃体冰冻组织切片免疫酶染色技术作为筛选方法。从两次融合筛选建立了四株分泌抗人T细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系(分别命名为SM,SM_2,SM_3和SM_4)四次克隆化后,阳性孔率均达100％。经七个月传代培养仍能稳定分泌特异性抗体。液氮冷冻复苏 相似文献
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本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。 相似文献
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近年来国外一些较为理想的乳腺癌单克隆抗体相继问世,但国内有关报道甚少。我们采用原发性乳腺癌组织细胞膜提取物免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合建立了分泌抗人体乳腺癌单克隆抗体6C_8杂交瘤细胞系并进行了研究。 相似文献
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目的:制备肝癌相关的单克隆抗体(mAb)用于肝癌的诊断。方法:用高转移肝癌细胞系HCCLM-6细胞免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与Sp2/0融合建立杂交瘤细胞系。通过ELISA法筛选HCCLM-6细胞蛋白的特异性mAb,用免疫组化染色法筛查对肝癌组织阳性率高的mAb,并用免疫荧光方法鉴定其在不同肿瘤细胞系中的表达,最后通过筛选Uni-ZAP XR人肝细胞cDNA表达文库初步鉴定mAb识别的抗原及其表位。结果:建立了28株杂交瘤细胞株,用ELISA法和免疫组化染色法筛选出肝癌阳性率较高的mAbQGA062。通过人肝细胞cDNA表达文库筛选初步鉴定表明mAb QGA062识别的抗原是纤维连接蛋白(FN),经分析其抗原表位位于肽段YTVSLVAIKGNQESPK。结论:获得与肝癌相关的mAb QGA062,并鉴定了其识别的抗原和表位,为肝癌的诊断和FN参与肝癌转移的机制研究提供了重要的制剂。 相似文献
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分泌抗-HBs、抗-HBc杂交瘤细胞系的建立及其在临床诊断中的初步应用 总被引：1，自引：0，他引：1
以含Dane颗粒的无临床症状的HBsAg掳带者血浆沉淀物免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞在50％PEG下融合。以固相放射免疫测定(SPRIA)、被动凝试验(PHA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法检测抗体,于一次细胞融合实验中建立三株分泌抗-HBs和一株分泌抗-HBc的杂交瘤细胞系。四株细胞分泌的单克隆抗体(以下简称“单抗”)皆属于小鼠IgG_1亚类。抗-HBs属于“a”亚型。经ELISA和微量免疫电泳证实两种单抗具有良好的特异性和亲和性。两和单抗纯化后用于乙肝的临床诊断。 相似文献
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目的 制备出高效价的抗人肺鳞癌单克隆抗体。方法 以云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC -90免疫的Balb/C小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1、SP2/0细胞为亲代细胞,应用鼠-鼠杂交瘤技术建立杂交瘤细胞系。ELISA法筛选,有限稀释法克隆化培养,ELISA法测定抗体效价,双抗体夹心法鉴定Ig亚类,制备染色体,Giemsa染色计数染色体数目,ABC免疫组化法行不同组织细胞的交叉检测。结果 获得三株稳定分泌抗YTMLC-90细胞抗体的杂交瘤细胞株S2D1、N2D1及N3C5。培养上清效价分别为1∶512、1∶284及1∶1024,腹水效价分别为1∶105、1∶104及1∶104;Ig亚类分别为IgG1、IgG2a及IgG3;染色体众数在90～110之间;三株抗人肺鳞癌单克隆抗体与其它组织细胞无交叉反应性。杂交瘤细胞体外传代培养6个月仍保持抗体稳定分泌。结论 成功制备高效且特异的抗人肺癌单克隆抗体。 相似文献
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目的制备与鉴定鼠抗C-myc蛋白单克隆抗体。方法利用C-myc蛋白做免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA法筛选、有限稀释法克隆、单克隆抗体Ig亚型鉴定,获得2株能够稳定分泌抗C-myc特异性抗体的杂交瘤细胞株,再将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔诱使小鼠产生腹水。结果获得2株可稳定分泌抗C-myc抗体的杂交瘤细胞株,命名为SHH-1H11,SHH-2A9,Ig亚型分别为IgG1亚类和IgM。细胞培养上清效价分别为1:10240、1:5 120;小鼠腹水效价分别为1:64 000、1:32 000。结论制备的C-myc单克隆抗体仅与C-myc蛋白反应,与其他蛋白没有交叉反应,表明获得的单克隆抗体的特异性很高。 相似文献
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汪美先 《细胞与分子免疫学杂志》1988,(2)
在细菌学、病毒学、免疫学及其它领域应用细胞融合法研制单克隆抗体取得许多成果。为建立分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系需要以抗原免疫BALB/c小鼠,而后用免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而获得。本文报告在体外免疫研制单克隆抗体。 作者们认为体外免疫的有用性,以甲型肝炎病毒(HAV)作为抗原,探讨了HAV单克隆抗体的制作法。取小测细胞在体外进行HAV免疫,与小鼠骨髓瘤细胞融合,243个孔有173 相似文献
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本文探索了用基因工程HBcAg研制抗-HBc单克隆抗体,获得成功。本文用基因工程HBcAg经单克隆抗-HBc制备的亲和层析柱进一步纯化后,免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0瘤细胞在50％PEG(MW 4,000)作用下进行杂交融合,经三次有限稀释克隆化后,选出一株分泌抗-HBc单克隆抗体杂交瘤细胞株,培养上清用兔抗鼠血清作双扩检测免疫球 相似文献
20.
贺永怀 《细胞与分子免疫学杂志》1985,(4)
识别人T淋巴细胞的单克隆抗体TA-1,不能结合补体。将其与完整ricin或ricinA链连接。在体外处理周血淋巴细胞后,测定T细胞增殖。 单克隆抗体TA-1是由HSB-2(人类T细胞白血病)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与P_3-NS1-1-AgA-1骨髓瘤细胞系融合产生的杂交瘤细胞系中获得。在间接免疫荧光试验 相似文献