重组人红细胞生成素对大鼠癫痫持续状态诱导的海马神经元凋亡及p-Akt表达的影响

目的 观察重组人红细胞生成素(Recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元凋亡及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响,应用磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol 3 kinase,PI3K)抑制剂LY294002进一步探讨rHuEPO作用的可能机制.方法 采用PTZ点燃SD大鼠制成SE模型,将75只SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、PTZ组(B组)、rHuEPO组(C组)、LY294002组(D组)、LY294002溶剂DMSO对照组(E组),每组15只,检测大鼠行为学和脑电图的改变及HE染色观察海马病理学的改变;用TUNEL方法检测海马神经细胞的凋亡情况;免疫组织化学法观察磷酸化蛋白激酶B(P-PKB/p-Akt)的表达.结果 A组海马区凋亡细胞数目(7.2±1.0)个与B、C、D、E[分别为(26.7±3.5)、(16.6±1.1)、(21.1±2.7)和(17.5±1.9)个]组相比差异均有统计学意义(P<0.01);C、D、E组凋亡细胞数目与B组相比差异均有统计学意义(P<0.05);D组凋亡细胞数目与C、E组比较差异均有统计学意义(P<0.05).A组p-Akt的阳性细胞数(21.4±1.2)与B、C、D、E组[分别为(26.6±2.5)、(54.8±5.1)、(33.1±4.9)、(52.4±4.6)]比较差异均有有统计学意义(P<0.01),且后者在胞核中也开始出现阳性信号;C、D、E组p-Akt的阳性细胞数与B组比较差异均有统计学意义(P<0.05);C、E组p-Akt的阳性细胞数与D组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 rHuEPO具有抗凋亡、促存活的神经保护作用,PI3K/Akt信号通路可能是rHuEPO发挥神经保护作用的通路之一.其作用机制可能是rHuEPO激活了重要的存活通路PI3K/Akt途径,与提高Akt的活性有关,借以发挥神经保护作用.     

重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马p-Akt和caspase-9的影响及作用机制

目的观察重组人红细胞生成素(rHuEPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)的SD大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)表达的影响,应用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002进一步探讨rHuEPO作用的可能机制。方法采用PTZ点燃大鼠SE模型,将175只大鼠随机分为正常对照组(给予生理盐水腹腔注射)、PTZ组(腹腔注射PTZ点燃SE发作后30min腹腔注射生理盐水)、rHuEPO组(SE发作后30min腹腔注射rHuEPO5000U/kg)、LY294002组(SE发作后10min脑室注射5μlLY294002,SE发作后30min腹腔注射rHuEPO5000U/kg)、二甲基亚砜(DMSO)组(SE发作后10min脑室注射5μlDMSO,SE发作后30min腹腔注射rHuEPO5000U/kg),并给予相应处理。检测大鼠行为学和脑电图的改变,免疫组织化学法观察p-Akt、caspase-9的表达,RT-PCR方法检测各组大鼠海马caspase-9mRNA的表达;Westernblot...     

重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马线粒体凋亡途径相关调控因子的影响及作用机制

目的 观察重组人红细胞生成素(rHuEPO)对戊四氮（PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的成年雄性（SD）大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响,并进一步探讨rHuEPO作用的可能机制。方法 于2010年3月,由河北省实验动物中心提供的健康清洁级成年SD大鼠。采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为B组（PTZ+0.9%氯化钠溶液)、C组（PTZ+rHuEPO）、D组（PTZ+LY294002+rHuEPO）、E组（PTZ+二甲基亚砜+rHuEPO）,同时另选取不进行SE制模的SD大鼠作为A组（0.9%氯化钠溶液）,检测大鼠行为学和脑电图的改变;用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测海马神经元的凋亡情况;免疫组织化学法观察p-Akt、Bax、XIAP的阳性细胞数;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马Bax信使RNA（BaxmRNA）的表达;Western blot方法检测各组大鼠海马蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、XIAP蛋白的表达。结果 与B组比较,C组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均增多,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均减少,差异有统计学意义(P＜0.05);与C组比较,D组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均减少,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均增多,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 rHuEPO可以提高p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达水平,降低Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平,减少海马神经元的凋亡,发挥神经保护作用;加入磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002后,海马p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达减少、Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达增加,海马神经元的凋亡增加,减弱了rHuEPO的保护作用。因此,PI3K/Akt信号通路是rHuEPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是rHuEPO活化PI3K/Akt后,提高p-Akt蛋白及线粒体凋亡途径相关调控因子XIAP的表达,下调了Bax的表达,从而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用。     

促红细胞生成素预处理对锂-匹罗卡品诱导的癫痫持续状态大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rhEpo)预处理对癫痫持续状态(SE)大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:应用免疫组化法观察Epo预处理后SE大鼠海马caspase-3的表达情况。结果:rhEpo处理组大鼠CA1/CA3区、齿状回(DG)的caspase-3免疫阳性细胞的表达分别比癫痫组减少18%和26%,二者有显著性差异(P<0.05)。结论:腹腔注射Epo可减少SE大鼠海马神经元caspase-3表达,表明Epo对SE大鼠海马可经抗凋亡通路发挥神经保护作用。     

重组人红细胞生成素对肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注(IR)损伤过程中细胞凋亡的调控以及重组人红细胞生成素(rHuEPO)对其保护作用.方法 正常培养的HK-2细胞,分为7组:正常对照组、IR组、LY294002干预组(P13K-Akt阻断剂,10 μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂,20 μmol/L)、rHuEPO干预组(20 U/L)、rHuE-PO+LY294002干预组、rHuEPO+LiCl干预组.Western印迹法检测Akt(Ser473)、GSK-3β(Set9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)活性;MTT法检测细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡.结果 IR损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调(15.20%±1.43%)、Akt活性水平下降、GSK-3β及caspase-3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);与IR组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一一步上调(18.20%±2.06%)、Akt活性水平下调、GSK-3β及caspase-3酶活性上调,LiCl干预使细胞凋亡率下调(12.30%±0.85%)、Akt活性水平上调、GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异均有统计学意义(P＜0.05).rHuEPO干预组与IR组相比,细胞凋亡率下降(11.10%±1.62%)、Akt活性水平升高,GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异有统计学意义(P＜0.05).与rHuEPO干预组相比,rHuEPO+LY294002干预组细胞凋亡率升高(13.40%±1.94%)、Akt活性水平下降,GSK-3β及caspase-3酶活性上调,rHuEPO+LiCl双干预细胞凋亡率下调(7.50%±1.31%)、Akt活性水平上升,GSK-3β及caspase-3酶活性下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 IR损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低,GSK-3B活性升高影响caspase-3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一.rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及caspase-3酶活性,减轻细胞凋亡,对HK-2IR损伤有一定的保护作用.     

rhEPO对新型BPD模型肺组织BCL-2和Caspase-9表达的影响及意义

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 B(PI3K/AKT)通路在重组人促红细胞生成素( rhEPO)保护新型支气管肺发育不良( BPD)中的作用。方法40只定期受孕的SD大鼠,于孕第15天孕囊内注射脂多糖( LPS)或磷酸盐缓冲液( PBS ),新生大鼠分为4组：对照组、高氧组、rhEPO 组、rhEPO+LY294002组。采用Western blot法和RT-PCR法检测肺组织中BCL-2和Caspase-9蛋白及mRNA表达。结果高氧组、rhEPO+LY294002组新生大鼠肺组织BCL-2蛋白及mRNA表达减少, Caspase-9蛋白及 mRNA 表达明显增加;rhEPO组BCL-2蛋白及mRNA表达增加, Caspase-9蛋白及mRNA表达减少;于高氧暴露第1、7、14天各组间的差异均有统计学意义( P<0．05)。结论宫内炎性暴露联合生后高氧可导致肺细胞凋亡增加,rhEPO可能通过减少肺细胞凋亡,对新型 BPD 起一定的保护作用,其机制可能与 PI3K/AKT信号转导通路有关。     

重组人促红细胞生成素对高氧肺损伤新生大鼠细胞凋亡及蛋白激酶B表达的影响

目的支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是新生儿呼吸系统常见疾病,文中探讨rhEPO对高氧肺损伤新生大鼠肺细胞凋亡和蛋白激酶B(又称Akt)表达的影响,为BPD的防治提供实验依据。方法将新生大鼠给予60%高氧暴露,rhEPO组皮下注射rhEPO,采用TUNEL法检测肺细胞凋亡和RT-PCR法检测Akt mRNA表达水平。结果①高氧组新生大鼠肺细胞凋亡指数为44.312±12.337,明显高于空气组的12.810±4.353(P<0.01);rhEPO组凋亡指数为23.371±9.508,明显低于高氧组(P<0.01)。②高氧组肺组织Akt mRNA表达水平为0.462±0.122,明显低于空气组的1.236±0.357(P<0.01);rhEPO组肺组织Akt mRNA表达水平为0.893±0.235,明显高于高氧组(P<0.01)。结论高氧可引起新生大鼠肺细胞凋亡增多,rhEPO可明显减少肺细胞凋亡,其机制可能与肺组织Akt mRNA表达有关。     

PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应

目的 探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用.方法 正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂 10 μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂 20 μmol/L)、rHuEPO干预组(20 U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、rHuEPO +LiCl双干预组.Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、Akt Ser473、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、GSK-3β Ser9及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3活性;MTT法检测细胞活力;AnnexinⅤ/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡. 结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调[(15.2±1.4)%]、Akt活性水平下降、GSK-3β及Caspase 3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调[(18.2±2.1)%]、Akt活性水平下调、GSK-3β及Caspase 3酶活性上调;LiCl干预使细胞凋亡率下调[(12.3±0.8)%]、Akt活性水平上调、GSK-3β及Caspase 3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).rHuEPO干预与I/R组相比,细胞凋亡率下降[(11.1±1.6)%]、Akt活性水平升高而GSK-3β及Caspase 3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与rHuEPO干预组比较,rHuEPO+LY294002双干预组细胞凋亡率升高[(13.4±1.9)%]、Akt活性水平下降而GSK-3β及Caspase 3酶活性上调;rHuEPO+LiCl双干预组细胞凋亡率下调[(7.5±1.3)%]、Akt活性水平上升而GSK-3β及Caspase 3酶活性下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响Caspase 3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一.rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及Caspase 3酶活性,减少细胞凋亡,对HK-2缺血再灌注损伤有一定的保护作用.     

重组人促红细胞生成素对大鼠创伤性脑损伤细胞凋亡的影响

目的研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠创伤性脑损伤的创伤灶周围神经细胞凋亡的影响。探讨rhEPO对大鼠创伤性脑损伤的保护作用。方法采用改进的Feeney氏法制作脑创伤模型，而后实验组立即腹腔注射5000u／kg rhEPO，对照组和假手术组注射生理盐水。于伤后12h、48h、120h处死动物，制作脑切片后行HE染色、TUNEL染色。结果rhEPO干预组与对照组、假手术组比较，各时间点rhEPO治疗组创伤灶周围TUNEL阳性细胞数比对照组显著减少，差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论rhEPO可以抑制神经细胞凋亡，对大鼠创伤性脑损伤具有保护作用。     

经鼻给小剂量重组人促红细胞生成素对大鼠癫痫的影响

目的:研究经鼻给小剂量重组人促红细胞生成素(r-HuEPO)对大鼠癫痫发作的影响.方法:大鼠经鼻或腹腔给r-HuEPO后,观察对戊四唑(PTZ)诱导癫痫发作潜伏时间、级别、大发作持续时间、次数的影响.另外,大鼠经鼻给r-HuEPO后,观察对最大电休克(MES)诱导的惊厥发作级别,前肢或后肢强直性伸展时间的影响;对杏仁核电点燃后阈刺激诱导的行为等级,大发作持续时间及后放电的影响.结果:经鼻给予小剂量r-HuEPO,可明显延长PTZ诱导的癫痫发作潜伏时间,降低癫痫发作级别、大发作持续时间和发作次数,其中2.4 IU剂量组作用最为明显.而腹腔给r-HuEPO(3 000、4 000 IU/kg),仅可减少大发作次数和缩短大发作持续时间.经鼻给2.4 IU的r-HuEPO,可显著降低MES诱导的大鼠惊厥发作级别,缩短前肢和后肢强直性伸展时间.另外,经鼻给2.4 IU r-HuEPO,明显降低杏仁核电点燃后阈刺激诱导的癫痫发作级别,缩短大发作时间和后放电时间.结论:经鼻给小剂量的r-HuEPO有明显的抗癫痫作用.     

PI3K、p-Akt蛋白在喉鳞癌中的表达及临床意义

目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶( phosphoinositide 3-kinase, PI3K) 和蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)在人喉鳞状细胞癌组织中的表达特征及临床意义.方法 应用免疫组化S-P法检测40例喉鳞癌、20例声带息肉和20例喉乳头状瘤组织中PI3K和p-Akt的蛋白表达,显微镜下计数阳性细胞,对结果进行统计学分析.结果 PI3K和p-Akt在声带息肉组织中均呈低表达;在喉乳头状瘤中,PI3K高表达,而p-Akt呈低表达;在喉鳞状细胞癌组织中,PI3K和p-Akt均呈高表达.喉鳞状细胞癌中PI3K和p-Akt的表达与喉癌临床分期、颈部淋巴结转移及肿瘤的原发部位均无明显差异(P＞0.05).PI3K和p-Akt蛋白的阳性表达率随喉鳞癌分化程度的降低而降低,差异有统计学意义(P＜0.01).同一标本中PI3K和p-Akt的表达有显著的相关性(r=0.687, P＜0.01).结论 喉鳞癌存在PI3K和Akt蛋白的异常表达并与癌细胞的病理分级关系密切,PI3K/Akt途径的异常活化可能在喉鳞状细胞癌发生过程中起重要作用.     

氯通道阻滞剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤致心肌细胞凋亡的作用

目的本研究应用大鼠在体心肌缺血再灌注损伤（I/RI）动物模型,观察氯通道阻滞剂DIDS（4,4＇-disothiocya-nostibibene-2,2＇-disulfonic acid）对心肌细胞凋亡的作用以及与磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路可能存在的相互作用,明确DIDS心肌保护作用的可能机制。方法 75只大鼠随机分成5组：假手术组,I/RI组,I/RI＋DIDS（14 mg/kg）,I/RI＋LY294002（PI3K-Akt特异性阻断剂）,I/R＋DIDS＋LY294002组。TTC染色检测心肌梗死范围;TUNEL法测定细胞凋亡;Caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;免疫印迹法检测p-Akt水平。结果与I/R组比较DIDS可以减少心肌梗死范围（各组n=4,P〈0.01）,可以明显抑制心肌细胞凋亡（各组n=5,P〈0.01）,降低凋亡效应子caspase-3活性（各组n=5,P〈0.01）,提高I/RI心肌的p-Akt水平（各组n=5,P〈0.01）,LY294002可以部分阻断这些作用,LY294002自身并无减少心肌梗死范围的作用。结论氯离子通道阻滞剂DIDS对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,其作用部分是通过PI3K/Akt信号通路来实现的。     

COX-2通过PI3K/Akt通路调节氧诱导视网膜病变模型中视网膜新生血管的形成

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)调节氧诱导视网膜病变(OIR)模型中视网膜新生血管形成的信号转导机制.方法 将乳鼠随机分为正常对照组、OIR模型组以及COX-2选择性抑制剂NS-398组(每组18只乳鼠).正常对照组小鼠生长于正常空气氧浓度(21%),OIR模型组和NS-398组小鼠于出生后第7天放置于高浓度氧环境(75%)生长,第12天调整氧浓度为正常.NS-398组小鼠于出生后第12～17天每日腹腔注射10 mg/kg NS-398.于第17天,获取3组视网膜标本,采用常规病理学检查在光镜下观察视网膜新生血管的变化;应用免疫组织化学法、Real-time PCR以及West-ern blot技术检测视网膜组织中COX-2、VEGF和PI3K/Akt的表达.结果 正常对照组病理切片未见视网膜新生血管形成,OIR模型组和NS-398组均出现与内界膜相连的新生血管,以OIR模型组为甚.COX-2、VEGF和PI3K/Akt在正常对照组均存在一定表达,在OIR模型组呈强表达,在NS-398组的表达明显低于OIR组,但仍高于正常对照组.3组间COX-2、VEGF的吸光度值、mRNA和蛋白相对量及PI3K/Akt的蛋白相对量两两比较,差异均有显著性意义(均P<0.05).结论 COX-2表达受到抑制后通过下调VEGF的表达减少OIR模型中的视网膜新生血管形成,在此过程中涉及到PI3K/Akt信号通路的作用.     

E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的实验研究

目的：研究E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的相关性,为探讨前列腺癌的浸润转移机制提供实验依据。方法：应用电穿孔方法将线性化的PrevTet—off-in调控质粒和PrevTRE2-flag—E6AP重组质粒导入前列腺癌细胞（Lncap）,建立稳定表达E6-AP的前列腺癌细胞。应用MTT实验检测细胞的增殖;应用Matrigel Invasion Chamber检测肿瘤细胞迁移浸润特性。结果：MTT结果显示,稳定转染表达E6-AP的前列腺癌细胞比未转染的细胞具有较强的增殖活性;在细胞的迁移浸润试验中,表达E6-AP的稳定转染细胞具有较强的爬行与附着能力。结论：E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润性密切相关。     

Ghrelin对缺氧／复氧心肌细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的:本实验研究Ghrelin对缺氧/复氧干预下心肌细胞凋亡的影响以及其具体的作用机制.方法:用体外培养的SD乳大鼠心肌细胞,建立缺氧(4 h)/复氧(1h)模型.实验分4组:①对照组;②缺氧/复氧组(H/R);③H/R+Ghrelin干预组;④H/R+Ghrelin+沃曼青霉素干预组.分别检测各组培养液中LDH浓度,Tunel法测定各组细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞内激酶磷酸化Akt的表达.结果:实验发现,与H/R组和H/R+Ghrelin+沃曼青霉素干预组相比H/R+Ghrelin组能明显减轻缺氧/复氧损伤所导致的LDH的漏出(30.00±6.60与78.00±4.20U/L;30.00±6.60与61.67±7.22U/L),以及明显减低心肌细胞的凋亡率(0.0859±0.0303与0.3516±0.06329;0.0859±0.0303与0.3255±0.02258)(P<0.05).同时H/R+Ghrelin干预组磷酸化Akt的表达明显增强.结论:Ghrelin具有减轻缺氧/复氧所引起的心肌细胞损伤,抑制心肌细胞凋亡的作用.与Ghrelin激活细胞内信号传递途径PI3K/Akt(磷脂酰肌醇3激酶/丝-苏氨酸激酶)有关.     

Ghrelin对PI3K/Akt抑制剂预处理大鼠中枢血压调节及NADPH表达的影响

目的 研究食欲刺激素(ghrelin)对PI3K/Akt抑制剂预处理大鼠中枢血压调节及血管烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)表达的影响.方法 选取10~12周龄雄性SD大鼠18只,腹腔内注射麻醉,股动、静脉插管,侧脑室内插管.随机分为3组,人工脑脊液(aCSF)对照组,ghrelin组,PI3K抑制剂(wortmannin)预处理组,每组6只.aCSF组侧脑室内注射aCSF(10 μL);ghrelin组侧脑室内注射aCSF(10 μL),10 min后侧脑室内注射食欲刺激素(50 pmol/10 μL);wortmannin预处理组侧脑室内注射wortmannin (20 nmol/10 μL),10 min后侧脑室内注射食欲刺激素(50 pmol/10 μL).观察各组血压、心率的变化.用酶联免疫吸附法,实验结束后测定NADPH浓度.结果 Ghrelin组平均动脉压(MAP)最大下降幅度(-12.3±2.6)mmHg,心率(HR)最大下降幅度(-29.5±13.4) bpm,与aCSF组相比,差异具有统计学意义(P<0.01, P<0.05).wortmannin预处理组侧脑室内注射食欲刺激素后MAP最大下降幅度(-4.0±2.7)mmHg,与ghrelin组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);与aCSF组比较,差异无统计学意义.在延髓和下丘脑中,ghrelin组NADPH浓度为(67.3±8.2)μmol/L和(67.5±7.2) μmol/L,均明显高于aCSF组(P<0.01);wortmannin预处理组与aCSF对照组及ghrelin组比较,差异均无统计学意义.结论 ghrelin通过PI3K/Akt信号传导通路引起降压作用并上调NADPH表达.     

PI3K/Akt抑制剂对肺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对肺癌细胞A549、SPC-A1化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于肺癌细胞A549、SPC-A1,用MTT法检测单独使用顺铂、紫杉醇及联合PI3K抑制剂LY294002对体外培养的肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物的敏感性,用流式细胞术检测肺癌细胞A549、SPC-A1凋亡率和细胞周期变化.结果 联合LY294002作用后肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物顺铂、紫杉醇敏感性显著增强(P<0.01),且细胞凋亡率显著提高(P<0.01),G0/G1期细胞比例增加,S+G2/M期细胞比例减少(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物顺铂、紫杉醇体外对A549、SPC-A1细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,显著提高肺癌化疗效果.     

川芎嗪对大鼠心肌再灌注损伤保护机制的实验研究

目的:观察川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的保护作用以及其作用机制。方法:建立在体大鼠心肌IR模型,随机分为假手术组,IR组,川芎嗪低、中、高剂量组以及川芎嗪+渥曼青霉素组。测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,心肌梗死面积,缺血心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Western blotting法检测心肌磷酸化蛋白激酶B(Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果:与IR组相比,川芎嗪中、高剂量组的血浆CK-MB和LDH水平降低,心肌组织MDA含量减少,SOD活性增加,心肌梗死面积减小,Akt磷酸化水平增高,川芎嗪各组eNOS磷酸化水平均增高。渥曼青霉素显著抑制川芎嗪所致的Akt和eNOS磷酸化,并能消除川芎嗪的心肌保护作用。结论:川芎嗪预处理能减少大鼠心肌缺血再灌注损伤且与剂量相关,其通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt-eNOS信号通路保护在体大鼠再灌注损伤心肌。     

Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响

目的 观察Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响,初步探讨其作用机制.方法 实验分为空白对照组、阴性对照组和Torin2加药组,CCK-8检测Torin2对各组A549细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞的凋亡及周期;Transwell检测细胞的迁移;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 Torin2对A549细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,IC50为214.96 nmol/L;流式细胞仪检测对照组、加药组200 nmol/L和400 nmol/L细胞凋亡率分别为(4.51±1.32)％、(9.56±2.34)％、(16.40 ±3.57)％;各加药组凋亡率明显高于对照组(P＜0.05),且加药组与对照组比较:G1期细胞比例显著增多(P＜0.05),S期显著减少(P＜0.05).Transwell实验结果显示加药组(200 nmol/L和400 nmol/L)的A549细胞迁移能力较对照组显著下降.Western blot结果显示A549细胞经Torin2加药处理后,p-Akt473、p-4EBP1、Cyclin D1蛋白表达明显降低,Caspase 9蛋白酶切片段表达显著增加.结论 Torin2可以抑制A549细胞增殖,引起细胞周期G1/S期阻滞,抑制细胞迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与Torin2抑制了PI3K/Akt/mTOR信号通路以及周期相关蛋白Cyclin D1的表达有关.