小檗碱对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响

目的:研究小檗碱(Ber)对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:BALB/c小鼠分为对照组、DTH组与Ber处理的DTH组。对照组以不含DNFB的溶剂处理,DTH组以5g/LDNFB腹部致敏、耳廓激发的方法建立模型,Ber处理的DTH组每天腹腔注射(i.p)Ber,连续7d,总剂量为30mg/kg体质量。激发后48h,取小鼠双耳称重了解Ber对炎症抑制率的影响。镜下观察耳廓局部组织的变化;以结晶紫法检查Ber对脾脏T淋巴细胞与细胞外基质(ECM)黏附作用的影响;以膜联蛋白V(AnnexinV)染色检查淋巴结细胞的凋亡率。结果:双耳称重的结果显示,Ber处理的DTH组与DTH组具有显著的差异(P<0.05),能明显抑制DNFB引起的炎症反应;耳廓局部组织学检测也表明,Ber能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润。Ber处理的DTH组的T细胞与ECM的黏附能力明显降低(P<0.05)。Ber处理的DTH组与DTH组和对照组的细胞凋亡率均无明显差异(P>0.05)。结论:Ber对DNFB诱导的小鼠DTH具有明显的抑制作用,降低小鼠T细胞与ECM的黏附能力可能是其抑制DTH的机制之一。     

三七提取物对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的 分析三七提取物(SE)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用机制.方法 分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白(Con A)或者佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析三七提取物对淋巴细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布.结果 CFSE染色分析显示,SE对Con A或者佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.对细胞周期分析表明,随着三七提取物浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期,而处于亚二倍体峰的细胞数基本不变.结论 三七提取物对小鼠淋巴细胞的增殖有明显抑制作用,它能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期,这种抑制作用表现出明显的周期特异性.     

黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4 h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯类多克隆刺激剂PDB和离子霉素Ion进行刺激,以流式细胞术(FCM)结合荧光抗体染色技术检测黄芩苷对CD3+ T细胞增殖率的影响;以碘化丙锭(PI)染色结合FCM分析其细胞周期分布.结果:BA(10、15、20、25 ms/L)对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖均有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈浓度依赖性.对细胞周期分析表明,BA能使ConA或PDB和Ion刺激的小鼠淋巴细胞停滞于G0/G1 期、S期,阻止其进入G2/M期,阻止作用随浓度的增加而增强.结论:BA对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖有明显抑制作用,能够将淋巴细胞阻滞在G1/G1 期和S期,表现出明显的周期特异性.本研究提示黄芩苷有发展成免疫抑制剂的潜力.     

盐酸小檗碱对小鼠脾细胞增殖和凋亡及分泌细胞因子的影响

目的 研究盐酸小檗碱(BBR)对小鼠脾细胞增殖与凋亡及细胞因子产生的影响.方法 采用无菌取BALB/c小鼠脾脏,制成脾细胞悬液,脾细胞预先用(1、2、4) μg/mL BBR处理60 min,加入刀豆蛋白(ConA)刺激脾细胞增殖,细胞培养至24、48、72 h时,用MTT方法检测脾细胞增殖情况;流式细胞术检测脾细胞培养不同时间的凋亡情况,用细胞因子ELISA检测试剂盒定量分析细胞上清液中TNF-α,IL-2和IFN-γ的浓度.结果 与对照组相比,在以上浓度范围内,BBR对ConA刺激下实验组小鼠脾细胞的增殖和TNF-α,IL-2,IFN-γ产生有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈浓度及时间依赖性,但对小鼠脾细胞凋亡无明显影响(P>0.05).结论 BBR对小鼠脾细胞具有明显的免疫抑制作用,可作为潜在的免疫抑制药物.     

小檗碱对淋巴细胞与血管内皮细胞粘附及粘附分子的影响

目的：通过研究小檗碱对淋巴细胞与血管内皮细胞粘附及粘附分子的影响,探讨小檗碱免疫抑制作用机制。方法：以小檗碱处理人淋巴细胞或人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）后,用蛋白染料染色法研究对淋巴细胞与内皮细胞粘附的作用,用细胞ＥＬＩＳＡ,免疫细胞化学染色法研究对细胞表面粘附分子表达的影响。结果：小檗碱能抑制静息的及ＩＬ－１,ＴＮＦ激活的内皮细胞与淋巴细胞间的粘附,其主要分子机制为下调内皮细胞表面粘附分子ＩＣ     

小檗碱抗肿瘤新生血管形成作用机制的研究

目的：研究小檗碱对bFGF活化人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响，探讨其对肿瘤新生血管形成作用的机制。方法：MTT法检测小檗碱对bFGF活化HUVEC的增殖作用；流式细胞仪检测用药后细胞周期的变化；激光共聚焦扫描显微镜下观察药物对细胞形态、细胞内钙的影响；流式细胞仪检测小檗碱对细胞凋亡的作用。结果：小檗碱能明显抑制bFGF活化的HUVEC增殖，且存在剂量依赖关系；使细胞在G0-G1期的比例明显增多；使细胞核浓缩、甚至裂解成碎块，同时使细胞内钙增多；并诱导活化HUVEC发生细胞凋亡。结论：小檗碱可能通过将bFGF活化的HUVEC细胞周期阻滞在G0-G1期，抑制活化HUVEC的增殖：诱导活化HUVEC细胞发生凋亡等机制，阻止新生血管形成，发挥其抗肿瘤作用。     

小檗碱增强丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞周期阻滞及凋亡

目的:研究小檗碱(berberine,Ber)增强丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)诱导的人类膀胱癌T24细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:将T24细胞分为4组:对照组、MMC组、MMC+Ber组和Ber组;采用CCK-8法检测不同药物处理后T24细胞的活力;采用流式细胞术分析不同药物处理后T24细胞周期的情况;Western blot检测细胞周期调控相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达;Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:CCK-8实验表明Ber能增强MMC抑制T24细胞活力的作用;流式细胞术检测细胞周期结果显示,MMC+Ber组T24细胞滞于G_0/G_1期(P0.05);与MMC组相比,MMC+Ber组p21和p27的蛋白表达上调(P0.05),cyclin D1、CDK2和CDK4的蛋白表达下调(P0.05),同时Ber促进MMC下调survivin的蛋白表达(P0.05);Annexin V-FITC/PI双染结果显示,Ber能促进MMC诱导的T24细胞凋亡(P0.05)。结论:Ber能显著增强MMC抑制T24细胞活力的作用,其机制可能是通过上调p21和p27,进而抑制cyclin D1、CDK2和CDK4表达;同时通过抑制survivin蛋白的表达,最终导致细胞被阻滞在G_0/G_1期,并促进细胞凋亡。     

山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.     

桑色素对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究桑色素(morin)对小鼠T淋巴细胞活化、增殖和细胞周期的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)刺激培养的淋巴结来源的小鼠淋巴细胞,再以不同终浓度的morin与T细胞共培养,利用流式细胞术(FCM),检测早期T细胞活化的标志CD69分子的表达,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色检测T细胞的增殖;以碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期。结果:小鼠T细胞培养6 h后,未经ConA刺激的对照组中CD69 T的细胞比率为(2.97±0.12)%,经ConA刺激的CD69 T细胞的比率明显增高,达到(72.52±0.66)%,与对照组相比差别明显(P<0.01)。终浓度为25、50、100μmol/L的morin均下调CD69 T细胞的比率,其中,100μmol/L的morin抑制作用最强,为(48.95±0.81)%,与对照组比较具有统计学意义(P<0.01)。CFDA-SE染色分析显示,ConA组培养48 h和72 h的T细胞的增殖指数(PI)分别为(1.58±0.04)和(1.95±0.02),各浓度的morin对ConA刺激的T细胞增殖,具有明显地抑制作用,以100μmol/L的morin抑制作用最明显。培养48 h的ConA组T细胞的PI为(1.02±0.02)、培养72 h的ConA组T细胞的PI为(1.03±0.01),与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。PI染色后流式细胞术分析的结果表明,ConA组处于S期的T细胞的比率为(27.05±0.39)%,显著高于对照组的比率(5.10±0.07)%。morin组中S期的细胞比率较高。结论:Morin可显著抑制ConA刺激的T细胞活化及增殖;其对增殖的抑制作用主要表现为S期的细胞的阻滞。     

TMB-8对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的: 研究胞内钙离子释放阻断剂8- (N,N-二乙胺) 辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯（TMB-8）对刀豆蛋白A（Con A）介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法: 以Con A作为T细胞活化、增殖的刺激剂，以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A（CsA）联合作用于该系统，用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术，分析TMB-8在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色分析细胞周期的分布情况。结果: Con A作用6 h后，CD69+ T细胞的比率为（74.88±1.88）%，TMB-8在终浓度10、20、40 μmol/L下均抑制Con A介导的T细胞CD69表达（P<0.01），其中，40 μmol/L的TMB-8为（52.55±1.54）%, 达到最高抑制率。培养48 h和72 h，Con A刺激下的PI值分别为1.24±0.01和2.05±0.07，TMB-8从5 μmol/L起均抑制Con A介导的淋巴细胞增殖（P<0.01），以40 μmol/L的效果最为显著，PI值分别为1.01±0.01和1.10±0.01；10 μmol/L的TMB-8与25 μg/L的环孢菌素A（CsA）具有明显的协同抑制作用（P<0.01）。细胞周期分析显示，培养48 h的TMB-8从10 μmol/L起即显著抑制S期（P<0.01）。结论: TMB-8可明显抑制Con A介导下的T细胞早期活化及增殖，并具T细胞周期的S期阻滞作用。     

黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用

目的:研究黄连素(Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法:正常人外周血全血培养,以植物血凝素(PHA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激活化淋巴细胞,双荧光染色及溶血获取有核细胞后,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD69和CD25的水平,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果:浓度为100μmol/L和50μmol/L的Ber对PDB+Ion或PHA激活T细胞表达CD69有明显抑制,而25μmol/L的Ber抑制效应无显著性;随时间延长,对CD69表达的抑制程度下降;对于CD25表达,上述3个浓度的Ber抑制作用均有显著性,且呈剂量依赖性。同时,这3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G₂/M,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论:Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖,发挥其免疫抑制作用。     

喜树碱对小鼠T淋巴细胞活化、增殖以及细胞周期的影响

目的： 研究喜树碱（CPT）对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响。方法：以ConA刺激小鼠T淋巴细胞，建立小鼠T淋巴细胞活化、增殖的模型，以不同浓度的CPT作用于该模型，流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术分析CPT 在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期的分布情况。 结果： ConA作用6 h后流式细胞术分析显示CD69的表达率为（58.88±0.55）%，不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）CD69的表达率分别为（55.48±0.98）%、（54.67±1.05）%、（50.40±0.82）%、（42.47±1.32）%，均可明显抑制CD69的表达(P<0.01)；ConA刺激48 h后流式细胞术分析显示，不同浓度的 CPT 组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）的增殖指数（PI）明显低于对照组(P<0.05)；细胞周期分析显示刺激48 h后不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）均出现明显的凋亡峰（apoptosis peak，AP），sub-G1期、G₀/G₁期细胞的比率明显高于ConA刺激组(P<0.01)。结论：CPT可明显抑制ConA刺激的T淋巴细胞的活化、增殖，同时使淋巴细胞阻滞于G₀/G₁期。     

小檗碱对人胃癌细胞增殖、细胞周期及CD44V6表达的影响

目的：研究小檗碱对人胃癌MGC-803细胞增殖、细胞周期及CD44V6分子表达的影响，探讨其抗肿瘤及抗肿瘤转移作用机制。方法：MTT法检测小檗碱对人胃癌MGC-803细胞体外增殖作用。激光共聚焦显微镜观察用药后细胞形态的改变并用流式细胞仪检测细胞周期的变化。应用免疫组化和流式细胞术技术检测药物对细胞表面CD44V6表达的影响。结果：小檗碱对MGC-803细胞有显著抑制作用，在10、20、40μg/ml浓度下，其抑制率分别为36．2％、49．7％和59．3％，有明显剂量依赖关系。激光共聚焦显微镜下细胞核固缩，并可见凋亡小体。药物可将细胞阻滞在G0-G1期，并使细胞表面的CD44V6表达降低。结论：小檗碱可通过诱导MGC-803细胞凋亡并将细胞阻滞在G0-G1期，发挥抑制瘤细胞的体外增殖作用；小檗碱可降低MGC-803细胞株CD44V6的表达，具有抗肿瘤转移作用。     

Nigella sativa oil inhibits proliferation and stimulates apoptosis of human lymphocytes in vitro

The study aimed to examine the in vitro influence of Nigella sativa oil on human lymphocytes. Cells were stimulated with a monoclonal anti-CD3 antibody in the presence of serial oil ethanol dilutions. Then their proliferation and apoptosis rates were assessed using flow cytometry. Our results demonstrate that the lowest dilutions (1:1 and 1:10) of Nigella sativa oil inhibited lymphocytes’ proliferation. The number of cell divisions was 8, 1.25, 1.88 after stimulation with anti-CD3, or its combination with 1:1 and 1:10 oil dilution. The percentage of proliferating cells was 92.48%, 8.75%, 24.3% after stimulation with anti-CD3 antibody, or its combination with 1:1 and 1:10 oil dilution. The mean percentage of living cells was 81% after stimulation with anti-CD3, 13.6%, 19.9% in the presence of 1:1 and 1:10 oil dilution. The preliminary studies show that black seed oil has a potent antiproliferative and proapoptotic effect on human lymphocytes in vitro.     

葫芦素B对小鼠淋巴细胞活化、增殖和凋亡的影响

目的分析葫芦素B(CuB)对多克隆丝裂原激活的小鼠淋巴细胞活化、增殖、凋亡和γ-干扰素(IFN-γ)表达的影响,探讨其免疫调节作用的机制。方法经CuB处理的小鼠淋巴细胞,在刀豆蛋白(ConA,5μg/ml)或者佛波醇酯(PDB,10-7 mol/L)和离子霉素(Ion,0.5μg/ml)刺激后,细胞计数观察CuB对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析CD69和IFN-γ的表达及亚二倍体峰和线粒体膜电位的变化;免疫印迹分析Caspase 3的活化水平。结果细胞计数分析显示,CuB对小鼠淋巴细胞增殖的抑制呈剂量依赖关系。对细胞DNA含量分析表明,随着CuB浓度的增加,处于亚二倍体峰(即凋亡峰)的细胞数量增加。同样,经CuB处理后,早期活化标志CD69和IFN-γ在CD3+T细胞中的表达均受剂量依赖性抑制。JC-1染色结果表明,10μmol/L CuB能显著使小鼠淋巴细胞的线粒体膜电位发生下降(P<0.01)。免疫印迹分析表明,10μmol/L CuB处理24 h后,Caspase 3明显活化。结论 CuB对小鼠淋巴细胞的增殖和活化具有明显抑制作,可以诱导体外培养的小鼠淋巴细胞发生凋亡,具有潜在的抗炎免疫调节活性。     

金银花提取物对小鼠淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的 研究金银花(Flos lonicerae,FL)提取物对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,并初探其免疫抑制作用机制.方法 分离小鼠淋巴结细胞,以荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测FL对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)刺激的小鼠淋巴细胞活化的影响;利用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,分析FL对淋巴细胞增殖情况.结果 细胞活化分析表明,金银花提取物对ConA诱导的小鼠淋巴细胞CD69、CD25和CD71表达均有明显的抑制作用,且这种抑制程度与其药物浓度呈正相关(P＜0.05).CFDA-SE染色分析显示,不同浓度的金银花提取物均能明显抑制淋巴细胞的增殖(P＜0.05).结论 金银花提取物对ConA诱导下的小鼠淋巴细胞体外活化和增殖均有明显抑制作用,是一种有潜在能力的免疫抑制剂.     

小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的：观察小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用，以探讨小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制。 方法： 用小檗碱与体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共同孵育，以MTT法检测细胞的增殖活性，免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，荧光染色法观察凋亡细胞核形态，用Rhodamine123染色，激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。 结果： 不同浓度小檗碱与HUVEC共同孵育可明显抑制HUVEC的增殖(P<0.05，P<0.01)，呈现一定的浓度依赖性和时效性；20 mg/L小檗碱与HUVEC共同孵育48 h，可显著降低细胞核PCNA的表达（P<0.01），并可见凋亡细胞数增多、线粒体膜电位明显降低（P<0.01）。 结论： 小檗碱抑制血管内皮细胞的增殖，并促进血管内皮细胞凋亡，从而抑制肿瘤血管形成，可能是小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制之一。