紫杉醇对浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨紫杉醇对体外培养的浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养卵巢癌细胞HO-8910,用浓度1×10-9 mol/L、1×10-8 mol/L、1×10-7 mol/L和1×10-6 mol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行2.0 mg/L 琼脂糖凝胶电泳;消化HO-8910细胞并经碘化丙锭(IP)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HO-8910细胞进行形态学分析。结果:体外培养的卵巢癌HO-8910细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于1×10-7 mol/L 紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7 %;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变。结论:卵巢癌HO-8910细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对卵巢癌细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖、迁徙和侵袭的影响

背景与目的:肿瘤间质活化的成纤维细胞能表达成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP),本研究通过体外实验研究FAP在卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁徙过程中的作用。方法:人类卵巢癌细胞系HO-8910PM体外培养,加入不同浓度的FAP(30、100和300 pmol/L)处理,用MTT法检测FAP对HO-8910PM增殖的影响;细胞划痕实验检测FAP对HO-8910PM迁徙能力的影响;Transwell侵袭实验来研究FAP对HO-8910PM侵袭能力的影响。结果:MTT法及细胞生长曲线显示FAP对卵巢癌细胞有促增殖作用,并呈时间、剂量依赖性;细胞划痕试验结果显示,不同浓度的FAP对卵巢癌细胞系的迁徙均有促进作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01);Transwell侵袭实验显示FAP对卵巢癌细胞有促侵袭作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01)。结论:FAP具有促进卵巢癌细胞的增殖、迁徙和侵袭的作用。     

白花蛇舌草注射剂联合紫杉醇对HO-8910和HeLa细胞生长抑制作用的研究

目的:研究白花蛇舌草注射液(ODI)联合紫杉醇(PTX)对人卵巢癌HO-8910PM细胞株与人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用.方法:用M1T法测定白花蛇舌草注射液及其联合紫杉醇分别作用于HO-8910和Hela细胞的生长抑制作用,并用IC50值进行评价.结果:ODI作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为8.88μg/ml和2.91μg/ml(按ODI总黄酮计);LY294002作用于HeLa与HO-8910细胞的IC50分别为43.92μg/ml和23.91 μg/ml;PTX作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为>100μmol/L与46.75μgmol/L;PTX联合ODIICl0(10%生长抑制浓度,ICl0)作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为>100μmol/L与31.02μmol/L,PTX联合LY2940021C10作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为73.26μmol/L和36.01μmol/L.结论:ODI对HO-8910和HeLa细胞均有明显的生长抑制作用,且呈浓度依赖;无毒性剂量或ICl00DI联合PTX)(可明显增加HO-8910细胞对PTX的细胞毒作用或敏感性,但对HeLa细胞无明显影响.     

伽马-分泌酶抑制剂下调Notch1可诱导卵巢癌细胞A2780生长抑制及凋亡

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂对Notch1的抑制作用及对卵巢癌细胞生长抑制及凋亡的影响。方法 采用Western blot及实时定量PCR检测四株卵巢癌细胞（A2780, SKOV3, HO-8910, HO-8910PM）及一株卵巢上皮细胞（IOSE144）Notch1及其下游基因hes1的表达情况;采用MTT、流式细胞术、ELISA及克隆形成实验检测γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对卵巢癌细胞的影响。结果 Notch1、hes1在IOSE 144及四株卵巢癌细胞系中均有表达,且在A2780细胞系中的表达最高;DAPT下调Notch1可抑制A2780细胞生长、诱导细胞G1期阻滞、诱导细胞凋亡并呈现时间和剂量依赖性,同时A2780细胞中DAPT 下游hes1基因的表达也呈现时间和剂量依赖性。结论 γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制卵巢癌细胞A2780生长、诱导细胞凋亡,γ-分泌酶抑制剂下调Notch1可能是卵巢癌治疗的潜在靶点。     

携带内皮抑素基因腺病毒对卵巢癌HO-8910细胞作用研究

[目的]探讨携带内皮抑素基因腺病毒对卵巢癌HO-8910细胞的抑制作用.[方法]采用细胞培养、光镜、电镜、MTT法、RT-PCR、Western blot、TUNEI,法分析检测结果.[结果]重组腺病毒pLP-Ad-ES能够引起HO-8910细胞凋亡细胞形态结构改变:pLP-Ad-ES能够抑制卵巢癌细胞HO-8910的增殖(P<0.01),并且能够促进细胞凋亡,存在时间一剂量依赖关系;在基因蛋白水平上,随着滴度的增加,内皮抑素的表达增加.[结论]pLP-Ad-ES对卵巢癌HO-8910细胞有明显的抑制作用,能够诱导细胞凋亡.     

顺铂对五种肿瘤细胞系Survivin基因表达的影响

目的 探讨顺铂在抑制肿瘤细胞生长的过程中对Survivin基因的影响及其可能的作用机制.方法 选取五种肿瘤细胞系:人胃腺癌细胞株(SGC-7910)、人卵巢癌细胞系(HO-8910)、高转移卵巢癌细胞(HO-8910pm)、人喉癌细胞(Hep-2)、人胰腺癌细胞(PC-2),应用RT-PCR方法检测顺铂作用后Survivin基因表达的变化.结果 五种肿瘤细胞系中Survivin基因均有较高的表达,顺铂对SGC-7910、HO-8910、HO-8910pm细胞系中Survivin基因有显著的抑制作用,Hep-2、PC-2细胞系在顺铂作用后Survivin基因的表达与正常组没有显著差异.结论 顺铂可能是通过抑制Survivin基因诱导SGC-7910、HO-8910、HO-8910PM细胞凋亡而发挥其抗肿瘤功效,而对Hep-2、PC-2细胞系Survivin基因的表达没有明显作用.     

洛伐他汀对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响

目的 探讨洛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响.方法 以MTT法检测洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析洛伐他汀对HO-8910PM细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变.结果 洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用,并使G0/G1期细胞增多,G2/M、S期细胞减少,32μmol/L用药48h有指示细胞凋亡的亚G1期"凋亡峰"出现.结论 洛伐他汀阻滞HO-8910PM细胞于G0/G1期,并能有效抑制癌细胞的体外增殖,以上作用均有剂量和时间依赖性.     

肾上腺髓质素对卵巢癌细胞迁移影响及其机制的探讨

目的:观察外源性肾上腺髓质素(AM)对卵巢癌细胞HO8910迁移的影响,并探讨其作用机制.方法:外源性应用AM后,采用划痕实验观察卵巢癌细胞系HO8910的迁移功能,并且利用蛋白质印迹法检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达,以了解AM对ERK1/2蛋白及其活性的影响.结果:外源性给予AM(100 nmol/L)的细胞12 h迁移率为(62.61±4.51)％,阴性对照细胞的迁移率为(29.23±4.15)％,AM可以促进卵巢癌细胞HO8910的迁移,P=0.001.提前应用ERK1/2抑制剂PD98059的细胞在外源性AM(100 nmol/L)的刺激下迁移率为(37.97±3.44)％,比单纯应用AM刺激的细胞迁移率降低,P=0.002.外源性给予AM(100 nmol/L)可以促进卵巢癌细胞的ERK1/2蛋白磷酸化.结论:AM促进卵巢癌细胞的迁移,与细胞的ERK1/2活化相关,可能为卵巢癌迁移的治疗提出一个新的研究方向.     

转化生长因子-β1对人卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β1对人卵巢癌细胞系HO-8910增殖的影响及其作用机制.方法:采用MTT及流式细胞术检测TGF-β1对HO-8910细胞增殖的抑制作用,同时采用半定量RT-PCR和Western blot方法分别检测TGF-β1作用不同时相细胞中Smad7、p15、p21和c-myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化.结果:TGF-β1明显抑制HO-8910细胞的增殖;在TGF-β1(10ng/ml)刺激下,细胞中p15和Smad7的表达上调而c-myc的表达明显降低,p21的表达无明显变化.结论:TGF-β1可能通过上调p15、下调c-myc基因表达水平影响细胞周期调控,从而抑制卵巢癌细胞的增殖.     

miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.     

三氧化二砷对人大肠癌细胞生长及其端粒酶活性的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞生长及其端粒酶活性的影响。方法采用活细胞观察法、台盘兰拒染法和四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法,严密观察As2O3注射液对人大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320生长的影响;应用端粒重复序列扩增法(TRAP)—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法检测As2O3注射液处理前、后大肠癌细胞端粒酶活性的变化。结果As2O3注射液能够显著地抑制LoVo和CoLo-320细胞株的生长,并对癌细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用,该作用呈现出一定的浓度和时间依赖性。结论As2O3注射液的确对于人大肠癌细胞株的生长具有显著的抑制作用,该作用可能与As2O3注射液能够抑制癌细胞的端粒酶活性密切相关。     

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的　研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法　将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果　奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论　奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性     

亚砷酸钠对人肺癌Spc-A1细胞端粒酶活性的影响

目的:研究亚砷酸钠( NaAsO2)对人肺癌Spc-A1细胞株端粒酶活性及其催化亚单位hTERT表达的影响,探讨其抗癌机制.方法:四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测亚砷酸钠对Spc-A1细胞增殖的抑制作用;端粒酶活性采用端粒末端重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)测定;端粒酶催化亚单位hTERT mRNA表达采用反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)测定.结果:亚砷酸钠对人肺癌细胞株Spc-A1的增殖具有一定程度的抑制作用.在12h、24h和48h三个时间段均可见Spc-A1细胞端粒酶活性随着药物浓度的增加逐渐下降.并且,hTERT mRNA表达下调与端粒酶活性下降一致.结论:亚砷酸钠对Spc-A1细胞的增殖具有一定的抑制作用,下调癌细胞hTERT mRNA的表达来抑制端粒酶活性可能是其中一种机制.     

亚砷酸钠对人肺癌Spc—A1细胞端粒酶活性的影响

目的：研究亚砷酸钠（NaAsO2）对人肺癌Spc—A1细胞株端粒酶活性及其催化亚单位hTERT表达的影响，探讨其抗癌机制。方法：四甲基偶氮唑蓝法（MTF）检测亚砷酸钠对Spc—A1细胞增殖的抑制作用；端粒酶活性采用端粒末端重复序列扩增一酶联免疫吸附法（TRAP—ELISA）钡0定；端粒酶催化亚单位hTERT—mRNA表达采用反转录聚合酶链式反应法（RT—PCR）测定。结果：亚砷酸钠对人肺癌细胞株Spc—A1的增殖具有一定程度的抑制作用。在12h、24h和48h三个时间段均可见Spc—A1细胞端粒酶活性随着药物浓度的增加逐渐下降。并且，hTERTmRNA表达下调与端粒酶活性下降一致。结论：亚砷酸钠对Spc—A1细胞的增殖具有一定的抑制作用，下调癌细胞hTERTmRNA的表达来抑制端粒酶活性可能是其中一种机制。     

核酶对食管癌EC9706细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的 :观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对食管癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 :利用脂质体Lipofectamine介导 ,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS2 12Rz及空载质粒pBBS2 12转染食管癌EC970 6细胞 ,采用TRAP ELISA法检测端粒酶活性 ,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果 :重组质粒pBBS2 12Rz转染的食管癌EC970 6细胞的端粒酶活性明显下降 ,细胞生长速度明显变慢 ,凋亡加速。结论 :端粒酶核酶对食管癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用 ,可望成为食管癌基因治疗的新方法     

Paclitaxel nanoparticle inhibits growth of ovarian cancer xenografts and enhances lymphatic targeting

Objectives: Ovarian cancer has the highest mortality of all the gynecologic cancers. The antitumor agent paclitaxel has been proved to be efficient in the treatment of ovarian cancer. Our study is to develop a polymeric drug delivery system for paclitaxel and determine whether paclitaxel nanoparticle can inhibit growth of ovarian carcinoma xenografts in Fisher344 (F344) rats by intraperitoneal administration. The mechanism of paclitaxel nanoparticles in rats bearing ovarian cancer has been investigated in this study. Methods: Synthesize paclitaxel loading nanoparticle (PLA) by ultrasonic emulsification; MTT analysis identified cytotoxic activity of paclitaxel nanoparticle in vitro; rat ovarian carcinoma cells were injected into the peritoneal cavity of F344 rats. The antitumor effect of paclitaxel nanoparticle in vivo has been evaluated by measuring tumor weight and ascite volume. At the end of the procedure rats were sacrificed; tumors were excised and processed for PCNA staining, tissue terminal deoxynucleotide transferase-mediated dUTP nick and labeling assay and RT-PCR to evaluate the proliferative and apoptotic changes and cancer transfer-related gene expression induced by PLA. Paclitaxel concentration in plasma, pelvic lymph nodes, liver, and heart were determined by high-performance liquid chromatography. Results: Paclitaxel nanoparticle and PTX (Cremophor) showed equivalent cytotoxic activity in vitro. In rats implanted carcinoma cells, paclitaxel nanoparticles significantly reduced tumor weight and ascites volume, and induced apoptosis of tumor cells. PLA also inhibited cell proliferation and matrix metalloproteinase 9 mRNA expression. The paclitaxel concentration of pelvic lymph nodes in PLA treated animals was 20-fold higher than that of free PTX treated animals at 48 h after intraperitoneal administration. Conclusion: The intraperitoneal administration of paclitaxel nanoparticle can significantly inhibit the progression of ovarian carcinoma in peritoneal cavity of female F344 rat. The paclitaxel nanoparticle is safe and lymphatic targeting.     

Synergistic down-regulation of telomerase by all-trans retinoic acid and antisense oligonucleotide in oral squamous cell carcinoma cell line (Tca8113)

Human telomerase, activated in about 90% of cancers, is mainly composed of hTR, hTERT and TP1. The exposed RNA template of hTR is an ideal target for antisense oligonucleotides (As-ODN); while recent findings indicate all-trans retinoid acid (ATRA) could effectively inhibit the expression of catalytic subunit-hTERT. The aim of this study was to investigate the effect of ATRA and As-ODN in oral squamous cell carcinoma and whether telomerase activity could be synergistically inhibited by them and thus therapeutically exploited in the future. As-ODN-hTR was transfected into human tongue squamous cell carcinoma cell line (Tca8113) with or without ATRA. Telomerase activity was examined by PCR-Elisa; viability was compared with growth curve; apoptotic rate was analyzed by Annexin V/PI double staining and hTERT expression was tested with western blot. Tca8113 cells displayed significant growth inhibition during the 9-day exposure to ATRA/As-ODN, especially to a combination of As-ODN-hTR and 5muM ATRA, correlating with the inhibition of telomerase expression. The relative telomerase activity was inhibited during treated with As-ODN-hTR alone, ATRA alone, or a combination of them. While without ATRA, the effect of As-ODN would disappear at 96h after transfection. As-ODN-hTR alone or combined with ATRA also significantly increase the apoptotic rate. Our findings provided direct evidence, in oral squamous cell carcinoma, As-ODN-hTR and ATRA could synergistically inhibit telomerase activity and telomerase protein in human tongue squamous cell carcinoma cells, which correlated with the induction of growth arrest.     

Experimental study of the differentiation HPV16 subgenes-immortalized human endocervical cells induced by all-trans-retinoic acid

Objective： To investigate the differentiation-inducing effects of all-trans-retinoic （ATRA） to HPV16 subgenesimmortalized human l：ndocervical cells （H8 cell） in vitro. Methods： HPV16 subgenes-immortalized human endocervical cells （H8 cells） were cultured in vitro. After treated with ATRA, the proliferation of immortalized human endocervical cells was measured by MTT assay; morphological changes were observed using M and TEM; cell cycle was analyzed by FCM; expression of Ki67 was tested using immunocytochemistry and the activity of telomerase was tested using PCR-ELISA. Results： ATRA could inhibit proliferation of H8 cells significantly and induce their morphodifferentiation. According to FCM, H8 cells accumulated in G1 phase and expression of Ki67 and activity of telomerase reduced significantly after treatment with ATRA. Conclusion： ATRA could induce the differentiation of H8 cell line obviously, which might be achieved by inhibiting proliferation, blocking cell cycle, and reducing activity of telomerase.     

肝素对胃癌细胞端粒酶活性及生长的影响

目的:研究肝素对胃癌细胞生长及端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的肝素作用于胃癌SGC7901细胞,倒置相差显微镜进行细胞计数,绘制生长曲线,TRAPELISA法测定细胞端粒酶活性。结果:肝素浓度为10mg/mL时细胞端粒酶活性明显受抑制,P<005;各浓度肝素下胃癌细胞的生长速度减慢,以中等剂量(10mg/mL)时明显,但均无细胞死亡。结论:肝素对胃癌细胞的端粒酶活性有抑制作用,对肿瘤细胞自身的增殖有一定抑制作用,但肝素不引起细胞死亡。     

RNA干扰对肾癌细胞端粒酶活性及增殖、凋亡的影响

目的 探讨针对人端粒酶RNA（hTR）及其催化亚基（hTERT）的小干扰RNA（siRNA）对肾癌细胞端粒酶活性及其增殖、凋亡的影响。方法 将hTR-siRNA、hTERT-siRNA（100nmol／L）单独或联合转染人肾癌786—0细胞,采用RT-PCR法检测hTR、hTERT mRNA表达,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。结果 （1）hTR-siRNA可显著降低786—0细胞hTR mRNA表达（P〈0．01）,hTERT-siRNA可显著降低hTERT mRNA表达（P〈0．01）,但彼此互不影响。（2）二者均能显著抑制端粒酶活性（P〈0．01,P〈0．01）,并增加786—0细胞增殖抑制率及凋亡细胞阳性率（P〈0．01,P〈0．01）。二者联合应用与单独应用差异亦无显著性（P〉0．05）。结论 hTR、hTERT siRNA通过抑制各自基因表达,抑制人肾癌细胞端粒酶活性,进而抑制增殖、促进凋亡。