海洋来源微生物的分离培养与抗肿瘤活性筛选

目的 从海洋环境样品中分离纯化微生物,经发酵培养与活性筛选,获取抗肿瘤活性菌株以供筛选药源活性产物,获无活性菌株以供核糖体工程转化研究。方法 通过单菌落挑选与划线培养分离纯化微生物菌株,经摇床发酵和提取操作制备活性测试样品。采用MTT法结合显微镜下细胞形态学检测的方法,测试样品的抗肿瘤活性。结果 从渤海湾驴驹河潮间带海泥样品中分离得到了微生物127株,其中真菌80株、放线菌47株。在127株中100 mg·L^-1样品浓度下对K562细胞的抑制率大于40%的活性菌株为8株,占菌株总数的6.3%(其中放线菌4株,占放线菌数的8.5%,真菌4株,占真菌数的5%),抑制率在20%～40%的放线菌6株,占放线菌数的12.7%。结论 从渤海湾海泥样品中分离得到真菌80株、放线菌47株,从中获得抗肿瘤活性真菌4株、放线菌10株,从放线菌中获得抗肿瘤活性菌株的频率远远高于真菌。活性菌株为寻找药源活性产物提供了菌株,无活性菌株则为核糖体工程拓展药源菌株来源研究提供了资源。     

贵州5种药用植物内生菌的分离及次级代谢产物研究

目的 分离筛选具有抗菌活性及抗肿瘤活性的药用植物内生菌.方法 采集贵州地道药用植物大黄、刺梨、杜仲、白芍和刺五加等5种组织材料,经表面消毒、无菌匀浆后,用改良的GYM培养基和TWYE培养基进行分离,利用耐药大肠杆菌、耐药金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌及白色链球菌等测试菌和稻瘟霉模型对分离菌株的发酵产物进行筛选,并通过HPLC对活性菌株发酵产物做进一步分析.结果 分离得到植物内生菌180株,其中46株有不同程度的抗菌活性,占分离菌株总数的25.6％,58株菌有不同程度的抗稻瘟霉活性,占分离菌株总数的32.2％.结论 5种药用植物中内生菌种类极其丰富,且有活性的菌株所占比例较高,HPLC检测有新的紫外吸收峰,值得对其次级代谢产物进一步研究.可见贵州药用植物具有丰富的活性内生菌资源,有巨大的开发研究价值.     

东海药用微生物资源的初步调查研究

目的:对中国东海药用微生物资源进行初步调查研究.方法:从中国东海采集海水和底泥样品,选用不同的分离培养基,采用无限稀释及平板划线的方法分离出单菌落,利用纸片法和稻瘟霉模型对菌株发酵液进行活性筛选.结果:从样品中分离得到1 041株单菌落,包括506株放线菌,421株细菌和114株真菌,其中具有抗菌活性菌株303株,活性菌株分离率为29.1％.抗稻瘟霉分生孢子活性菌株219株,活性菌株分离率为21.0％.结论:分离得到的抗菌活性菌株,抗稻瘟霉分生孢子活性菌株的比例均达到20.0％以上,说明东海具有丰富的药用微生物资源.     

1株滇重楼内生真菌的研究——抑真菌活性及分离鉴定

目的 分离滇重楼内生真菌,研究其抑制病原性真菌的作用并进行分类鉴定.方法 从滇重楼植株中分离培养内生真菌.在体外,用指示菌株金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌及白色念株菌进行抑菌活性筛选.对具有抑制白色念珠菌的内生真菌菌株进行培养,观察显微形态特征,确定其分类地位.结果 从滇重楼的根中分离到一株内生真蒲菌株,对白色念株菌有较强抑制作用,鉴定为尤孢菌群.结论 滇重楼内生真菌无孢菌群菌株LRF4具有抑制白色念珠菌的作用.     

一株具有抗稻瘟霉活性的海洋细菌32-11-2-2的筛选和分离鉴定

目的:从中国东海微生物样品中分离筛选活性细菌菌株,并对活性菌株32-11-2-2进行鉴定.方法:采用无限稀释和平板划线法分离微生物样品,利用稻瘟霉模型进行活性筛选;并对其中的活性菌株32-11-2-2的形态、培养特征以及生理生化特征进行研究,使用16S rDNA序列分析的方法对菌株32-11-2-2进行了分类鉴定.结果:分离得到421株细菌,包括活性菌株54株,其中活性菌株32-11-2-2是一株弱嗜盐菌,具有陆地芽孢杆菌的形态特点,能产生胞外淀粉酶、过氧化氢酶,液化明胶、石蕊牛奶反应阳性,16S rDNA序列分析该菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)同源性达到98%以上.结论:活性菌株32-11-2-2是一株适应了海洋环境的枯草芽孢杆菌.     

两株蜚蠊肠道内生放线菌抗真菌活性初步研究和分类鉴定

目的检测蜚蠊肠道内生放线菌WA2-4和WA2-5的抗真菌活性,并对菌株进行初步分类学鉴定。方法采用牛津杯法测定菌株WA2-4和WA2-5发酵液对白色念珠菌和红色毛癣菌等真菌生长的影响,扫描电子显微镜观察菌株发酵液对受试真菌形态的影响,利用16S rDNA测序、Blast比对和构建系统发育树等方法,结合菌株形态学特征对菌株WA2-4和WA2-5进行初步分类学鉴定。结果菌株WA2-4和WA2-5发酵液对白色念珠菌和红色毛癣菌的生长均有抑制作用;扫描电子显微镜结果显示菌株WA2-4和WA2-5发酵液破坏了白色念珠菌的细胞膜结构,使红色毛癣菌的菌丝断裂成碎片;初步分类学鉴定结果显示,菌株WA2-4和WA2-5分别为链霉菌属和戈登氏菌属,与其各自亲缘菌株的16S rDNA序列同源相似性分别为93.5%和92.3%,均低于98.2%,因此推断该两株菌株很有可能是新菌种。结论蜚蠊肠道WA2-4和WA2-5放线菌具有抗真菌活性。     

华南毛蕨内生真菌抑菌活性筛选及活性菌株Pestalotiopsis sp.CYC38代谢产物的研究

目的 筛选具有抑菌活性的华南毛蕨内生真菌及分析其中1株活性较强的菌株的代谢产物.方法 以敏感型金黄色葡萄球菌、耐药型金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为供试指示菌,采用琼脂块法对43株内生真菌进行抑菌活性筛选,以Pestalotiopsis sp.CYC38作为目标菌株,对其次级代谢产物进行分离,并采用波谱学分析手段鉴定化合物结构.结果 43株内生真菌中有19株菌株至少对1种指示菌有抑菌作用,占分离菌株总数的44%;从高活性菌株CYC38的发酵产物中分离到2个化合物,分别鉴定为啤酒甾醇和1-(4-羟基苯基)-2氨基乙醇.结论 华南毛蕨内生真菌具有较好的抗菌活性,且对耐药型金黄色葡萄球菌也表现出良好的抑制作用,该结果为开发新型的抗耐药菌药物提供基础.     

微生物转化氧化槐定碱活性菌株的筛选

目的通过微生物转化方法对氧化槐定碱进行结构修饰和改造,以期得到结构新颖或活性更强的衍生物,从中筛选出对氧化槐定碱有催化活性的微生物菌株。方法采用稀释法分离土壤微生物菌株,表面消毒法分离植物内生菌,通过薄层色谱法(TLC)对转化反应进行筛选;通过表型和基因型鉴定活性菌株。结果从遵义医学院土壤分离得到土壤微生物菌株26株,从植物分离得到内生真菌60株;17株土壤微生物具有催化活性,其中菌株T003表现出强的选择性,经显微结构和16S r DNA序列分析,鉴定其为Escherichia coli。结论微生物转化法为氧化槐定碱的结构修饰和改造提供了一个很好的选择方法。     

两株产生大环内酯Macrolactin S的海洋细菌的筛选及鉴定

目的:从中国东海分离筛选抗菌活性微生物,确定活性菌株的分类地位。方法:随机挑选30株本室保存的分离自中国东海的细菌,利用抗大肠杆菌模型进行活性筛选。对活性菌株进行形态特征、生化特征、盐需求测试及16S rDNA序列分析,并将所测得的序列在NCBI数据库进行相似性搜索,选取其中具有代表性的序列以邻接法构建系统进化树,将菌株鉴定到属。结果:筛选出活性菌株F81612和F201721,它们的最适生长盐浓度分别为10%和7.5%,菌株形态特征、生化性质与Bacillus sp.相符,菌株F81612和F201721的16S rDNA序列分别与Bacillus subtilis和Bacillus amyloliquefaciens相似程度最大。结论:利用抗大肠杆菌模型筛选到两株产大环内酯Macrolactin S的细菌,均为中等嗜盐的海洋Bacillus sp.。     

铜绿假单胞菌抗菌物质对白色念珠菌的

目的 观察铜绿假单胞菌抗菌物质对白色念珠菌的体外抑菌活性.方法 用交叉条带实验方法测定铜绿假单胞菌对18株白色念珠菌等的体外抑制活性.结果 铜绿假单胞菌抗菌物质对白色念珠菌体外抑菌活性良好,第6和8株铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抑制率均达到了100%,铜绿假单胞菌产生色素的菌株抗真菌活性显著优于不产色素的菌株.铜绿假单胞菌抑制白色念珠菌的生长,主要是铜绿假单胞菌产生的绿脓素.结论 铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对白色念珠菌具有较强的抗真菌活性.     

2007—2009年医院内深部感染白色假丝酵母菌的分布及耐药性研究

目的 了解临床分离白色假丝酵母菌菌株分布及耐药现状,以指导临床合理用药.方法 回顾性分析2007-2009年临床分离假丝酵母菌的病例,采用科玛嘉（CHRO-Magar）和API 20C AUX试剂条进行鉴定、ATB Fungus2进行药物敏感试验.并用WHONET5.4软件进行数据分析.结果 653株白色假丝酵母菌不主要分离于下呼吸道感染的痰液429株（65.7%） ,其次为尿液112株（17.2%）.白色假丝酵母菌耐药性由低到高的药物依次为5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑,耐药性分别为0%、0%、4.6%、9.2%.值得注意的是两性霉素B剂量依赖敏感比率升高.结论 临床标本中假丝酵母菌感染仍以白色假丝酵母菌为主,临床选药应根据药敏结果.     

月桂挥发油体外抗病原微生物活性研究

目的 探讨月桂挥发油对临床分离细菌和真菌的体外抗菌活性,为月桂在治疗感染性疾病中的开发与运用奠定基础.方法 采用琼脂平板二倍稀释法测定了月桂挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌共16种65株临床分离细菌、14株白假丝酵母和1株非白假丝酵母临床分离真菌的最低抑菌浓度.用SPSS 17.0软件中单因素方差分析法比较分析了月桂挥发油分别对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、洛菲不动杆菌和白假丝酵母菌共5个不同种属细菌和真菌抑菌活性的强弱.结果 月桂挥发油除对铜绿假单胞菌无明显抗菌活性外,对其余受试细菌均有较强的抗菌活性,MIC为0.27 mg/mL～2.15 mg/mL;月桂挥发油对白假丝酵母菌和非白假丝酵母菌均有较强的抗菌活性,MIC分别为0.07～0.54 mg/mL和0.03 mg/mL;月桂挥发油对白假丝酵母菌和洛菲不动杆菌的抑菌活性明显强于对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌活性（P＜0.01）,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的抑菌活性比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 月桂挥发油有较强的抗细菌和抗真菌活性,具有用于防治感染性疾病-新型抗菌药物的开发和运用前景.     

2012年某院临床分离病原菌分布及耐药性分析

目的 了解2012年延安大学附属医院临床分离病原菌分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供病原学依据.方法 分离菌采用美国Microscan-Walkaway40SI全自动微生物分析仪进行鉴定和药敏试验,用WHO-NET5.6软件进行统计分析.结果 2012-01 ～2012-12共分离出病原菌2271株.其中革兰阳性菌1049株,占46.2％,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）分别为38.9％、80.6％;革兰阴性菌821株,占36.2％,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLS率分别为61.1％、35.5％;真菌399株,占17.6％,以白色念珠菌为主.革兰阳性菌对万古霉素、利奈唑胺100％敏感,对其他抗菌药物均有不同程度耐药;革兰阴性菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南耐药率较低（0～18.6％）;白色念珠菌对7种常用抗真菌药物的耐药率为0～42.3％.结论 葡萄球菌属、白色念珠菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、屎肠球菌是本院分离的主要病原菌;病原菌耐药现象较严重,应加强病原菌耐药性监测,以指导临床合理使用抗菌药物.     

54株白假丝酵母菌感染及药敏分析

目的 了解海南省人民医院白假丝酵母菌的感染情况,分析该医院临床分离的白假丝酵母菌对抗常见真菌药物氟胞嘧啶、两性霉素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的体外敏感性,为控制该菌感染和指导临床合理使用抗真菌药物提供参考.方法 收集、分离、鉴定临床送检标本,用微量稀释法测定临床分离白假丝酵母菌对5种抗真菌药物的敏感性,结果用各个药物的最低抑菌浓度(MIC)表示,并对这些白假丝酵母菌感染患者的病历进行统计分析.结果 共检出54株白假丝酵母菌,其对氟胞嘧啶、两性霉素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的敏感性分别为85.2％,98.1％,33.3％,22.2％,31.5％.结论 白假丝酵母菌对两性霉素敏感性最高.     

复发性外阴阴道念珠菌病患者念珠菌菌种鉴定及药敏分析

目的 检测复发性外阴阴道念珠菌病患者念珠菌菌种分布及耐药状况,为临床治疗方案制订提供依据。方法120例患者依据病史分为复发性外阴阴道念珠菌病患者（RVVC）60例（病例组）,偶发外阴阴道念珠菌病者（VVC）60例（对照组）。病例组及对照组分别进行真菌培养、菌种鉴定及药物敏感试验。结果在120株念珠茵中白念珠茵占80．83％,非白念珠茵占19．17％。RVVC组中自念珠茵占73．33％;VVC组中为白念珠茵占88．33％,RVVC组白念珠菌所占比例明显低于VVC组,差异有统计学意义（氏0,05）。60株RVVC念珠菌对两性霉素B、氟康唑和伊曲康唑的敏感率分别为100．00％、93．33％、95．00％。结论白念珠茵仍是VVC、RVVC的主要致病菌,RVVC分离菌株对咪唑类抗真菌药物仍有较高的敏感率。     

随机分离致病性白念珠菌17例的基因分型

目的研究白念珠菌不同基因型的同源性，以及在菌株群中分布的特征，为白念珠菌的分子流行病学研究找到一个方法。方法扩增出白念菌株CDC3(保守基因)的部分片段并测序，应用Vector-NTI软件包进行比较。结果17株菌株被分为9个基因型，有8株菌株的基因型高度同源，有9株的基因同源性较高，这9株菌株的基因型在样本分布中占优势；高度同源的8株菌株与其它菌株的主要区别在于，在第195—205位缺少TTTCTTCTT，在第338—345位多了TAAGTAAG。结论菌株3等9个菌株的基因型在样本分布中占优势，可能是进化过程中为适应宿主的结果。     

123株白色念珠菌耐药基因CDR1和CDR2表达研究

目的了解白色念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性及其耐药基因CDR1、CDR2的表达情况。方法常规方法分离123株临床菌株，科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定，采用Roseo纸片扩散法进行药敏试验，所有耐药株与随机选择的同等数量的敏感株（对照株）用聚合酶链反应（PCR）扩增目标基因CDR1、CDR2，扩增产物经凝胶电泳后进行初步分析。结果123株白色念珠菌分布于呼吸道50．4％（62／123）、泌尿道28．5％（35／123）、生殖道14．6％（18／123）和其它6．5％（8／123）。通过药敏筛选，获得耐药菌株35株，其中有15株出现交叉耐药。受试菌对两性霉素、5-氟胞嘧啶、咪康唑、伊曲康唑和氟康唑的敏感率分别为99．2％、85．4％、87、0％、84．6％、和83．7％。35株耐药株和对照株均出现耐药基因CDR1、CDR2。结论白色念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性呈下降趋势，编码外排蛋白的耐药基因CDR1和CDR2可能同时存在于全部受试菌株内。     

阴道白假丝酵母菌的耐药性和ERG11基因突变关系研究

目的探讨ERG11基因突变与白假丝酵母菌对吡咯类药物敏感性下降的关系。方法收集VVC患者的白假丝酵母菌60株,用科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定,纸片扩散法进行药敏试验,选取所有中度敏感株和耐药株用聚合酶链反应扩增(PCR)ERG11基因,将PCR产物进行测序分析和比对分析。结果 60株白假丝酵母菌对咪康唑、酮康唑和氟康唑敏感率分别为36.7%、56.1%和80%;将38株中度敏感株和耐药株进行ERG11基因分析后共发现29个有义突变和25个同义突变,其中,有义突变中发现多个新突变位点。结论有些新发现的突变位点可能与耐药相关;多位点有义突变可能降低菌株对药物的敏感性。     

汕头市念珠菌性包皮龟头炎分离菌种鉴定及药敏测定

目的了解汕头市皮肤性病防治院2005～2008年包皮龟头炎临床分离念珠菌种类及对抗真菌药物的敏感性。方法采用科玛嘉念珠菌显色培养基、YBC鉴定卡对分离到的念珠菌进行鉴定,并对分离的念珠菌用ROSCO纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果2005～2008年共分离出676株念珠苗,其中白念珠菌589株（87．1％）;近平滑念珠菌61株（9．0％）;光滑念珠菌8株（1．2％）;季也蒙念珠菌占7株（1．0％）;无名念珠菌6株（0．9％）;热带念珠菌3株（0．4％）;诞沫念珠菌2株（0．3％）。白念珠菌对特比萘芬（Terbinafine）、伊曲康唑（Itraconazole）、氟康唑（Fluconazole）、制霉菌素（Nystatin）、咪康唑（Miconazole）和酮康唑（Ketoconazole）的敏感率分别为33．6％、79．1％、91．3％、100％、45．1％和98．7％,耐药率分别为47．9％、16．5％、0．7％、0、14．9％和0．2％。结论白念珠菌是念珠菌性包皮龟头炎的主要分离菌种。其次是近平滑念珠菌,白念珠菌体外药敏显示对制霉菌素、酮康唑和氟康唑有很高的敏感性,对特比萘芬、咪康唑的敏感性较低。