结缔组织生长因子在肝纤维化发生中的作用机制初探

目的:观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在人及大鼠纤维化肝组织中的表达,探讨CTGF及其介导的生物学信号在肝纤维化发生中的作用机制。方法:雄性SD大鼠32只,皮下注射CCl_4制备大鼠肝纤维化模型,分别于注射后1、4、8用处理动物并收集肝组织标本;44例人肝组织(12例正常肝组织、32例慢性病毒性肝炎和肝硬化组织)来自外科手术切除的诊断明确的病理存档标本。采用免疫组化方法对检测肝组织中CTGF的表达及分布。结果:免疫组化显示．CTGF主要表达于大鼠肝星状细胞(HSC)及肝细胞胞质中。CCl_4注射诱导后,大鼠肝组织中CTGF的表达较正常对照明显增强(P＜0．01或P＜0．05),且CCl_4注射1、4、8周组肝组织中CTGF的表达强度呈明显递增的趋势(P＜0．01或P＜0．05)。在人肝纤维化组织中,CTGF亦主要表达于HSC胞质及部分肝细胞胞质中,CTGF表达水平显著高于人正常肝组织(P＜0．01)。结论:CTGF作为一种促纤维化因子,其过表达主要促进HSC的增殖活化,促进细胞外基质的形成,从而参与肝纤维化的发生、发展。     

乙型肝炎患者肝脏结缔组织生长因子及碱性成纤维细胞生长因子与肝纤维化的关系

目的 观察结缔组织生长因子(CTGF)及碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)在慢性乙型肝炎肝纤维化不同进展阶段的表达和定位情况,探讨其与肝纤维化的关系.方法 对200例乙型肝炎患者肝组织CTGF、BFGF行免疫组化定量分析,并与肝脏纤维化分期进行统计学分析.结果 肝组织CTGF[S0期=(0.89±0.31)×10-2、S1期=(6.63±1.95)×10-2、S2期=(9.42±3.02)×10-2、S3期=(16.06±5.22)×10-2、S4期=(26.87±7.68)×10-2]、BFGF[S0期=(0.86±0.30)×10-2、S1期=(6.88±1.35)×10-2、S2期=(9.36±2.69)×10-2、S3期=(16.61±4.86)×10-2、S4期=(25.76±7.06)×10-2]随肝脏纤维化加重而表达增加,组间两两比较差异均具有统计学意义(P均<0.05);肝脏CTGF、BFGF之间呈正相关,r=0.873,P<0.05.结论 肝组织CTGF、BFGF与肝纤维化程度呈正相关,二者可作为评价肝纤维化严重程度的重要指标.     

川芎嗪和siRNA沉默转化生长因子β1干预大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子的表达

背景：作者前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用。一般认为转化生长因子β1是促进纤维化发生最重要的细胞因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制转化生长因子β1可能成为治疗肝纤维化的新方法。目的：观察川芎嗪及化学合成的siRNA转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响。方法：体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNA转化生长因子β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24h的细胞作为转染组,并设计空白对照组、转染试剂组、川芎嗪组及联合治疗组。结果与结论：与空白对照组相比,转染组、川芎嗪组、联合治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及结缔组织生长因子mRNA表达均下调（P〈0.05）。在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,结缔组织生长因子蛋白表达均下调（P〈0.05）;培养上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均降低（P〈0.05）。结果表明,siRNA沉默转化生长因子β1基因能下调结缔组织生长因子的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。川芎嗪也能下调结缔组织生长因子的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点。     

川芎嗪和siRNA沉默转化生长因子β1干预大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子的表达

背景:作者前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用。一般认为转化生长因子β1是促进纤维化发生最重要的细胞因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制转化生长因子β1可能成为治疗肝纤维化的新方法。目的:观察川芎嗪及化学合成的siRNA转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNA转化生长因子β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24h的细胞作为转染组,并设计空白对照组、转染试剂组、川芎嗪组及联合治疗组。结果与结论:与空白对照组相比,转染组、川芎嗪组、联合治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及结缔组织生长因子mRNA表达均下调(P<0.05)。在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,结缔组织生长因子蛋白表达均下调(P<0.05);培养上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均降低(P<0.05)。结果表明,siRNA沉默转化生长因子β1基因能下调结缔组织生长因子的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。川芎嗪也能下调结缔组织生长因子的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点。     

结缔组织生长因子在特发性肺纤维化患者肺组织的表达及意义

目的:研究结缔组织生长因子(CTGF)在特发性肺纤维化(IPF)患者肺组织的表达及意义。方法:IPF组的肺组织标本来自35例IPF患者,对照组的正常肺组织标本来自30例肺叶切除术。用原位杂交结合免疫组化方法检测CTGFmRNA及其蛋白的表达,用免疫组化方法检测纤维连接蛋白(Fn)的表达。结果:IPF组CTGFm-RNA及其蛋白以及Fn的阳性面积百分比均高于对照组(P均<0.001);IPF组CTGFmRNA及其蛋白在增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞、肺泡巨嗜细胞和肺间质成纤维细胞中的表达强度均高于对照组(P均<0.001),在细支气管上皮细胞中的表达无差异(P>0.05);IPF组CTGFmRNA及其蛋白的阳性面积百分比与Fn阳性面积百分比之间呈正相关。结论:IPF患者肺组织CTGFmRNA及其蛋白表达增高,并主要定位于Ⅱ型肺泡上皮细胞、肺泡巨嗜细胞和间质成纤维细胞,CTGF可能通过促进Fn的合成而在IPF中发挥作用。     

结缔组织生长因子与器官纤维化

目的:通过综述结缔组织生长因子的研究现状,探讨结缔组织生长因子与器官纤维化的关系。资料来源:应用计算机检索美国NCBI PubMed数据库1988-01/2006-12相关结缔组织生长因子与器官纤维化方面的文献,检索词“connective tissue growth factor,fibrosis”,限定文献语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,选取包括结缔组织生长因子与器官纤维化的文献,开始查找全文。纳入标准:具有原创性,论点论据可靠的实验文章。观点明确,分析全面的综述文章。文献主体内容与本课题联系紧密的文章。排除标准:具有明显实验设计和结果错误的文章及观点模糊的综述。质量评价主要考察资料的真实性、实施过程是否严密。资料提炼:共检索到336篇关于结缔组织生长因子与器官纤维化的文献,最终纳入32篇符合标准的文献。资料综合:结缔组织生长因子基因是即刻早期基因家族成员,可刺激细胞增殖、分化和凋亡、促进细胞外基质沉积、介导细胞粘附、刺激细胞迁移、促进胚胎发育、损伤修复及新血管的生成。在病理状态下,结缔组织生长因子作为转化生长因子β的下游因子在多种纤维化疾病的发生和发展中起重要作用。文章分别阐明了结缔组织生长因子及其超家族成员、结缔组织生长因子基因和蛋白质结构、受体、功能和生物学作用、致纤维化作用和与其相关的防纤维化策略。结论:通过抑制结缔组织生长因子的表达有望阻断和逆转纤维化进程。     

RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子拮抗肾脏纤维化的发展

目的 研究RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子(CTGF)对高血压大鼠肾脏纤维化指标的影响.方法 本研究于2006-2008年在武汉协和医院心血管病研究所完成,实验以自发性高血压大鼠(SHR)为动物模型,随机(随机数字法)分为未干预的SHR组(n=10)和RNA干扰组(RNAi组,n=10),并设置WKY大鼠(n=8)为正常对照组.构建并筛选出靶向大鼠CTGF的RNAi质粒重组体,通过升主动脉钳夹冠脉灌注法联合尾静脉注射将质粒转染至大鼠体内,RNA干扰结束后,获取肾脏标本,RT-PCR和Western blotting检测肾脏组织CTGF及纤维连接蛋白(FN)的mRNA和蛋白表达,免疫组化技术分析CTGF及FN在肾脏的空间表达.0.1%天狼星红-饱和苦味酸胶原染色分析肾组织胶原类型及代谢水平(以胶原容积分数CVF表示),比色法测定肾脏组织羟脯氨酸含量.所有数据以(x-±s)表示,多个均数的组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为有统计学意义.结果 RNA干扰使高血压大鼠肾脏组织CTGF的mRNA和蛋白表达分别下调66%和62%(P<0.01),FN mRNA和蛋白的表达也相应降低达56%和51%(P<0.01);免疫组化显示了同样的抑制效应,而且观察到CTGF及FN不同的空间表达,CTGF在肾实质和间质中均可表达,而FN主要在肾脏间质表达.天狼星红染色显示RNA干扰组胶原沉积减少,偏光显微镜下进一步观察到RNA 干扰主要抑制了I型胶原的合成;肾脏组织羟脯氨酸含量在RNA干扰组显著减少[SHR组:(0.596±0.067)μg/mg,RNAi组:(0.368±0.084)μg/mg,P<0.01].结论 C-CTGF靶向性RNA干扰显著下调肾组织中CTGF的表达并相应抑制细胞外基质在肾间质的沉积,且这种效应独立于降压之外.提示CTGF在肾脏纤维化发生及进展中起着关键作用.     

RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子拮抗肾脏纤维化的发展

Objective To investigate the impact on renal fibrosis by inhibition of connective tissue growth factor( CTGF) by RNA interference in spontaneous hypertension rat( SHR) . Method Twenty SHR were randomly (random number) divided into SHR group ( n = 10) and RNAi group ( n = 10), eight Wistar-Kyoto rats were set as control. At the end of RNA interference procedure, all the rats were sacrificed and the kidneys were harvested. The mRNA and plasmosin of CTGF and fibronectin(FN) of renal tissue were extracted and measured by RT-PCR and Western Blotting. And the localization of CTGF and FN were analyzed with immunohistochernistry technique. The collagen deposition(shown as collagen volume traction, CVF) were evaluated with 0.1% sirius-picric staining, and the hydroxyproline of myocardium were detected by colorimetry. Results The mRNA and protein expression of CTGF decreased 66% and 62% in RNAi group (P < 0.01). The mRNA and protein expression of FN decreased 56% and 51% in RNAi group.The same inhibition effect was observed by hislological analysis. Immuno-histochemistry showed that CTGF localized both in renal parenchyma and renal interstitium, whereas FN majorly expressed in renal interstitium. Observation with light microscope showed that collagen deposition(CVF)decreased sharply in RNAi group versus SHR group. And the same effect was viewed in hydroxypnoline assay[SHR group: (0.596 ± 0.067) μg/mg, RNAi group: (0.368±0.084) μg/mg, P < 0.01 ] .Further study by polarized microscope displayed that RNA interference mainly suppressed type I collagen synthesis. Conclusions Targeted inhibition of CTGF by RNA interference leads significant decrease of extracellular matrix deposition in kidney. And the anti-fibrotic effect independent of lower the blood pressure. This study indicated CTGF take a key role in the development and progress of renal fibrosis.     

RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子拮抗肾脏纤维化的发展

Objective To investigate the impact on renal fibrosis by inhibition of connective tissue growth factor( CTGF) by RNA interference in spontaneous hypertension rat( SHR) . Method Twenty SHR were randomly (random number) divided into SHR group ( n = 10) and RNAi group ( n = 10), eight Wistar-Kyoto rats were set as control. At the end of RNA interference procedure, all the rats were sacrificed and the kidneys were harvested. The mRNA and plasmosin of CTGF and fibronectin(FN) of renal tissue were extracted and measured by RT-PCR and Western Blotting. And the localization of CTGF and FN were analyzed with immunohistochernistry technique. The collagen deposition(shown as collagen volume traction, CVF) were evaluated with 0.1% sirius-picric staining, and the hydroxyproline of myocardium were detected by colorimetry. Results The mRNA and protein expression of CTGF decreased 66% and 62% in RNAi group (P < 0.01). The mRNA and protein expression of FN decreased 56% and 51% in RNAi group.The same inhibition effect was observed by hislological analysis. Immuno-histochemistry showed that CTGF localized both in renal parenchyma and renal interstitium, whereas FN majorly expressed in renal interstitium. Observation with light microscope showed that collagen deposition(CVF)decreased sharply in RNAi group versus SHR group. And the same effect was viewed in hydroxypnoline assay[SHR group: (0.596 ± 0.067) μg/mg, RNAi group: (0.368±0.084) μg/mg, P < 0.01 ] .Further study by polarized microscope displayed that RNA interference mainly suppressed type I collagen synthesis. Conclusions Targeted inhibition of CTGF by RNA interference leads significant decrease of extracellular matrix deposition in kidney. And the anti-fibrotic effect independent of lower the blood pressure. This study indicated CTGF take a key role in the development and progress of renal fibrosis.     

转化生长因子-β、结缔组织生长因子、基质金属蛋白酶及其抑制物与肝纤维化

肝纤维化是慢性肝病发展至肝硬化的必经病理阶段。激活的肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）在肝纤维化发生发展中起重要作用。肝损伤时激活的HSC分泌大量的转化生长因子-β（transforming growth factor—β,TGF—β）和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）,促进细胞外基质的生成,其中胶原的降解与基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制因子的表达有着重要关系。     

糖尿病肾病患者尿中结缔组织生长因子的检测及意义

目的 探讨糖尿病患者尿中结缔组织生长因子（CTGF）浓度的变化及其意义。方法 将60例糖尿病患者根据尿白蛋白排泄率（uAER）分为正常白蛋白尿组（Ⅰ组）、微量白蛋白尿组（Ⅱ组）和大量白蛋白尿组（Ⅲ组）,分别检测各组患者尿CTGF及临床生化指标,并与20例对照组（NC组）进行比较。结果 糖尿病各组患者尿中CTGF含量显著高于对照组（P〈0．05）,且随着UAER增加其水平亦呈递增趋势,组间比较差异有显著性（P〈0．01）。相关分析表明,尿CTGF与UAER及视黄醇结合蛋白排泄率呈显著正相关（P〈0．01）,与内生肌酐清除率（Ccr）成负相关。结论 肾脏CTGF蛋白表达的上调可能是糖尿病肾病的发生机制之一,尿CTGF排泄率可以作为诊断早期糖尿病肾病和评价病变程度的标志物之一。     

阿托伐他汀对高血压大鼠血管纤维化及结缔组织生长因子的影响

目的:探究阿托伐他汀(atorvastatin)对肾血管性高血压血管纤维化及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:24只SD大鼠随机分为假手术组(N组)、高血压组(RH组)、阿托伐他汀组(他汀组)各8只;将RH组及他汀组大鼠建立二肾一夹肾血管性高血压(2K1C-RH)大鼠模型。术后4周末,他汀组开始以阿托伐他汀(10mg.Kg-1.d-1)灌胃,共8周。治疗前后RT-PCR法检测各组大鼠收缩压、胸主动脉CTGF、纤维连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的表达,并用免疫组化显示CTGF的表达。结果:与N组比较,RH组大鼠胸主动脉CTG-FmRNA、FNmRNA、ColⅢmRNA显著增加(P0.01);他汀组与RH组比较则3项指标明显下调(P0.05)。结论:阿托伐他汀能抑制高血压血管纤维化,可能与下调CTGF的表达有关。     

低氧大鼠肺内结缔组织生长因子表达与肺血管重建的关系

目的了解低氧肺动脉高压时肺内结缔组织生长因子（CTGF）与肺血管重建的关系。方法将20只雄性Wistar大鼠分为低氧性肺动脉高压组（n=10）和对照组（n=10）两组,肺动脉高压组以常压低氧建立大鼠肺动脉高压模型,以微导管法测定各组大鼠肺动脉压,采用免疫组化法检测各组大鼠肺内CTGF和Ⅰ型胶原的表达,对肺组织切片进行图象分析。结果低氧3周后,低氧组大鼠形成明显的肺动脉高压,管壁增厚和管腔狭窄,低氧组大鼠肺动脉压（2.89±0.41）kP,右心室肥厚指数[RV/（LV＋S）]为41.01±2.79、管壁厚度占外径的百分比（WT%）为35.13±10.31,管壁面积占血管总面积的百分比（WA%）为54.18±11.46,分别与正常对照组（1.37±0.26）kP、24.59±3.51、23.66±9.74和40.59±13.87相比明显升高（P〈0.01）;肺小动脉CTGF免疫阳性染色在低氧组大鼠为1.32±0.05,与正常对照组1.10±0.04相比明显增强（P〈0.01）,低氧组大鼠Ⅰ型胶原免疫阳性染色为1.30±0.04,与正常对照组1.14±0.05相比明显增强（P〈0.01）。结论低氧所致CTGF的合成增多在低氧性肺血管重建和肺动脉高压的发病过程中起一定的作用。     

The Effects of Immobilization on Connective Tissue

Abstract

Details of the composition and structure of connective tissue are covered along with the effects of mechanical stress and immobilization on these tissues. The purpose of the paper is to describe the biomechanical and biochemical effects of immobilization on periarticular connective tissue, ligaments, tendons and articular cartilage. Implications for treatment and suggestions for further research are presented.     

肝细胞生长因子基因治疗减轻胆管结扎肝纤维化的实验研究

目的:验证肝细胞生长因子(HGF)基因治疗在胆管结扎肝纤维化中的保护作用。方法:用雄性CD-1小鼠,随机分为3组。正常对照组仅解剖肝门分离胆总管,不作胆管结扎;胆管结扎的2组,分别给予HGF质粒(pCMV-HGF,1μg/g)和空质粒(pcDNA3),每2周1次。3个月后将小鼠处死,评价肝纤维化程度。结果:肝细胞生长因子基因治疗能显著减少胆管周围胶原的沉积,表现在:肝胶原染色(Masson-Trichrome染色)减少;胆管周围Ⅰ型和Ⅲ型胶原的免疫荧光染色减少。和空质粒组相比,HGF治疗组肝组织羟脯氨酸的含量显著降低(两组分别为0.48±0.04μg/mgvs1.37±0.06μg/mg,P<0.05);肝纤维母细胞的激活减少——表现为肝组织中α-SMA的表达减少(两组分别为0.32±0.05vs.0.84±0.14,P<0.05);TGF-β1的表达减少(两组分别为0.69±0.11vs.1.31±0.23,P(0.01)。结论:在胆管结扎肝纤维化中,肝细胞生长因子基因治疗能减轻肝纤维化的程度,肝细胞生长因子可用于肝纤维化的治疗。     

可注射神经生长因子缓释制剂的体外释药性能

目的:观察可注射神经生长因子(NGF)缓释制剂的一般性质和体外释药特征。方法:采用药物微球技术制备的NGF微球,与生物纤维蛋白胶混合形成NGF复合缓释制剂,并通过体外释放率和PC12细胞活性考察其体外释药性质。结果:体外实验证明,NGF复合缓释制剂可持续释放NGF达7周以上,累积释放率为63.85%,释出的NGF可促进PC12细胞分化,具有较强的生物学活性,出现神经突触样生长。结论:制备可注射NGF缓释制剂,可长期释放NGF,并具有生物活性,可作为补充外源性NGF的良好制剂。