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1.
目的探讨纯化的结核杆菌Ag85A重组蛋白激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型结核疫苗的设计打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的重组表达Ag85A蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性,初步鉴定Ag85A重组蛋白的免疫原性。结果以刺激系数(SI)>3为界,Ag85A重组蛋白(10μΜ)能刺激全部12例HL-A*0201阳性(A2 )结核菌素阳性(PPD )健康个体的PBMC发生增殖(平均SI为56.2±3.6);增殖反应明显高于PPD(平均SI为13.7±3.5)引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在Ag85A重组蛋白诱导的CTL细胞毒活性分析中以负载抗原肽(10μΜ)的T2细胞作为靶细胞,Ag85A重组蛋白诱导的CTL作为效应细胞,Ag85A重组蛋白能诱导全部的12例A2 PPD( )健康个体中CTL杀伤活性,平均活性分别为(85.2±8.5%),显著高于PPD〔(平均为(21.6±1.7%)〕(P<0.01)诱导的CTL杀伤活性。结论本研究得到的重组优化Ag85A蛋白具有较好的免疫原性,能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性,为进一步开发有效的结核疫苗打下了基础。 相似文献
2.
结核分枝杆菌Ag85B基因克隆及表达质粒构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 克隆并构建编码结棱分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒。方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法从结棱分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B基因(978bp),并克隆到T栽体,然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pGEX-4T-2连接,转入大肠杆菌E.coli DH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果 酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致,证实符合表达框架。结论成功地克隆并构建了Ag85B基因的重组表达质粒pGEX-Ag85BV。 相似文献
3.
目的 克隆并构建编码结核分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B基因 (978bp) ,并克隆到T载体 ,然后用双内切酶消化后 ,与同样酶消化的pGEX 4T 2连接 ,转入大肠杆菌E .coliDH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果 酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符 ,测序结果与文献报道一致 ,证实符合表达框架。结论 成功地克隆并构建了Ag85B基因的重组表达质粒 pGEX Ag85BV。 相似文献
4.
结核分枝杆菌Ag85A/MPT-64融合基因DNA疫苗的构建及免疫研究中ELISPOT技术的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建结核分枝杆菌蛋白Ag85A/MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗,并利用ELISPOT技术检测其免疫原性。方法利用PCR和基因克隆技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85A/MPT-64编码基因,构建真核表达载体,用酶切和双向DNA测序进行鉴定。鉴定正确的阳性克隆重组质粒,肌注免疫小鼠,3周后用ELISPOT法检测抗体滴度。结果 构建到真核载体中的结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A/MPT-64融合基因经序列测定证实无突变。ELISPOT法检测几何平均滴度为1∶1 000。结论以Ag85A/MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达以及ELISPOT技术的应用,为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础。 相似文献
6.
目的运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值。方法根据Genbank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法。选用46株结核分枝杆菌临床分离株,以及2株非结核分枝杆菌。应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv国际标准株fbpB、psts1、mpt64基因的表达水平。结果结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号;耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,P〈0.01;t=2.545,P〈0.05),北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。结论有统计学意义(t=2.567,P〈0.05;t=2.373,P〈0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR检测方法,该方法可以快速判断活菌与死菌。检测发现耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株;北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。 相似文献
7.
目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础.方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A.将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-Ag85A.通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增及测序,以及western-blotting对重组卡介苗进行鉴定.结果:经鉴定,重组卡介苗成功构建,并可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A.结论:重组卡介苗rBCG-12p70-Ag85A构建成功,并可高效表达目的蛋白. 相似文献
8.
目的 在大肠埃希菌中表达、纯化结核分枝杆菌Ag85A蛋白,探讨Ag85A蛋白作为候选疫苗用于结核免疫预防和治疗的可行性.方法 扩增人结核分枝杆菌Ag85A基因序列,将结核分枝杆菌Ag85A的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Ag85A重组质粒.将重组质粒转入大肠埃希菌BL21并以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定大肠埃希菌表达的重组蛋白.结果 成功克隆了结核分枝杆菌Ag85A,获得了pGEX4T-Ag85A重组子,Ag85A在大肠埃希菌中实现了稳定表达,表达的蛋白条带大小约32 kD,与预期结果 相符.结论 成功地对结核分枝杆菌免疫保护性抗原Ag85A进行了基因克隆与表达,为进一步研究其在结核病新型疫苗研制中的应用奠定了基础. 相似文献
9.
目的 评价重组结核分枝杆菌蛋白38KDa皮试注射液(rTPA38)用于军人结核分枝杆菌感染筛查的价值.方法 以结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)为对照,采用同体双臂Mantoux法(皮内注射)为1 150人同时做PPD和rTPA38皮试;皮试后24 h,48 h双盲测量皮试反应(包括红晕或硬结).PPD和rTPA38皮试阴性者接种卡介苗,3个月后同前进行皮试试验.结果 局部皮肤红晕(或硬结)横、纵平均直径≥5 mm为阳性.24.6%受试者rTPA38皮试反应阳性,阳性反应直径集中于5 mm~10 mm;53.0%受试者PPD皮试反应阳性,阳性反应直径集中于5 mm~15 mm.rTPA38皮试反应阳性率随年龄增长基本呈现上升趋势,同一年龄段,rTPA38皮试反应阳性率明显低于PPD( P<0.01).有卡痕与无卡痕受试者rTPA38皮试反应阳性率比较、统计学分析差异有极显著性意义(x2=27.06,P<0.01).PPD皮试阳转率与rT-PA38皮试阳转率分别为62.0%和27.2%,两者比较差异有极显著性意义(x2=52.90,P<0.01).结论 rTPA38可作为结核分枝杆菌感染筛查的诊断试剂. 相似文献
10.
目的研究和评估基于结核分枝杆菌蛋白抗原(TB-SA)研制的结核诊断试剂盒在结核病诊断中的应用价值。方法运用胶体金法分别检测结核组、非结核其他呼吸系统疾病组、健康对照组血清TB-SA结核抗体。结果 TB-SA结核抗体检测结核的灵敏度为72.2%,特异度95.8%,检测结核病患者阳性率(72.2%)明显高于涂片法(44.9%)和培养法(37.1%),差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TB-SA抗体检测具有较好的敏感性和特异性,对结核病诊断和鉴别诊断有较高的临床应用价值。 相似文献
11.
目的鉴定结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。方法采用数据库SYFPEITHI初步预测结核抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL表位;经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲和力;经时间荧光分辨法检测患者外周血单个核细胞(PBMCs)对抗原肽的增殖反应;最后通过细胞毒实验逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL预测的表位。结果实验证明,预测的位于Ag85A氨基酸序列(242-250aa)的肽表位与HLA-A*0201具有较高的亲和力。结论筛选出的KLIANNTRV(242-250aa)是结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。 相似文献
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母牛分枝杆菌菌苗辅助治疗复治肺结核的Meta分析 总被引:4,自引:0,他引:4
目的系统评价母牛分枝杆菌菌苗(微卡)联合抗结核药物治疗复治肺结核的疗效与安全性。方法检索PubMed(1990~2006)、中文期刊全文数据库(1997~2006)、万方数据库(1997~2006)、Cochrane临床对照试验数据库(2006年第4期)、National Research Register(1996~2006)等,纳入比较微卡辅助治疗组与对照组的随机对照临床试验,由两名评价者独立提取资料并进行方法学质量评价。试验数据的统计分析采用Cochrane协作网提供的RevMan4.2.2软件。结果最终纳入11个RCT。Meta分析结果显示,微卡辅助治疗组与对照组相比,痰菌阴转情况[RR=1.36,95%CI(1.21,1.54)],病灶吸收情况[RR=1.39,95%CI(1.13,1.72)],病灶未吸收情况[RR=0.46,95%CI(0.36,0.60)]的差异均有统计学意义。未报道与微卡临床应用相关的严重系统性不良反应。结论现有临床证据表明,微卡联合抗痨治疗能有效改善复治肺结核患者的细胞免疫功能,增强化疗效果,有助于痰菌转阴,病灶好转吸收。受本评价纳入研究质量所限,尚需开展更多高质量的研究进一步分析。 相似文献
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目的探讨结核分枝杆菌L-型(MTB-L)在结核病和肺癌患者痰、胸腔积液两种临床标本中检出的意义。方法选取华北石油总医院2007年2~11月门诊及住院确诊为肺癌的患者110例为肺癌组,选择同期该院健康体检者42例为健康健康对照组,选择同期门诊及住院101例肺癌胸腔积液患者为结核病组,比较3组的MTB-L的资料。结果结核病组IK抗酸染色检测痰和胸腔积液标本中阳性率分别为42.9%、34.4%,均高于肺癌组(26.8%,21.1%,P<0.05);结核病组痰和胸腔积液标本中MTB-L阳性率分别为57.1%、40.6%,均高于肺癌组(24.4%,26.3%,P<0.05)。结论 MTB-L感染在肺癌的形成过程中可能起到一定的作用。 相似文献
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Mycobacterium tuberculosis Secreted Proteins As Potential Biomarkers for the Diagnosis of Active Tuberculosis and Latent Tuberculosis Infection 下载免费PDF全文
Caiqin Zhang Xiaoqin Song Yong Zhao Hai Zhang Shanmin Zhao Fengfeng Mao Bing Bai Shaoping Wu Changhong Shi 《Journal of clinical laboratory analysis》2015,29(5):375-382
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目的构建结核分枝杆菌(MTB)融合基因2×esat-6原核表达载体,利用耻垢分枝杆菌诱导表达、纯化早期分泌抗原ESAT-6重组二聚体(rdESAT-6),Western blot分析其抗原性,并评估其在结核病患者中的血清学诊断价值。方法以DNA疫苗HG856A2为模板扩增2×esat-6基因,构建pMF41-2×esat-6原核表达载体,电转化耻垢分枝杆菌,诱导表达rdESAT-6蛋白,Western blot分析其抗原性。收集126例确诊的结核病患者和42名健康体检者的血清,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和结核斑点金免疫渗滤试验(TB-DOT)检测血清结核抗体,评估rdESAT-6在结核血清学诊断中的价值。结果成功构建了pMF41-2×esat-6重组质粒,以包涵体形式表达了rdESAT-6蛋白,纯化的蛋白纯度在95%以上,可与小鼠抗ESAT-6血清发生特异性反应。126例结核病患者血清检测结果表明,rdESAT-6蛋白在MTB阳性组和阴性组患者血清学诊断的敏感性分别为79.75%(63/79)、61.70%(29/47),好于TB-DOT的62.03%(49/79)、44.68%(21/47)(P0.05)。2种方法对42名健康体检者血清诊断特异性均为95.24%(40/42)。结论 MTB的融合蛋白rdESAT-6用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性,可作为结核病血清学诊断的优选抗原。 相似文献
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血清结核杆菌抗体检测在结核病的临床意义 总被引:6,自引:0,他引:6
目的:探讨血清结核杆菌抗体检测在住院患者结核病诊断中的临床价值。方法150例结核病患者,80例非结核病患者以及40例健康志愿者均应用以脂阿拉伯甘露糖(LAM)为抗原的 ELISA法进行抗体阳性率的检测。并应用痰涂片和PPD实验检查对150例结核患者进行检测。结果在150例肺结核患者中,结核杆菌抗体检测的阳性检出率为72.67%(109/150),显著高于痰涂片的51.33%(77/150)和PPD实验的58.67%(88/150),且差异均具有统计学意义(χ2=14.49,6.52;P<0.001,0.011)。结核病组抗体阳性率总数为72.67%(109/150),显著高于非结核病组的17.50%(14/80)和健康对照组的10.00%(4/40),且与二者比较,差异均具有统计学意义(χ2=41.15,51.45;P<0.001,0.001)。非结核疾病组与健康人群比较,抗体阳性率的差异无统计学意义(χ2=1.18,P=0.27)。结论结核抗体测定对结核病的阳性检出率较高,优于传统的痰涂片和PPD实验检测,临床上具有很大的应用价值。 相似文献