肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型细胞中细胞因子的表达

目的观察博莱霉素致肺纤维化大鼠肺泡Ｉ型上皮细胞肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）和血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）表达的变化。方法大鼠气管内灌注博莱霉素Ａ５复制肺纤维化模型，分别于注药后第３、７、１４和２８天处死动物，进行免疫组织化学染色；同时提取肺泡Ⅱ型上皮细胞总ＲＮＡ进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。结果正常大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞不表达ＴＮＦα和ＰＤＧＦ；而肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞则表达ＴＮＦα和ＰＤＧＦ。其中ＴＮＦα表达高峰在注药后第２８天；ＰＤＧＦ的表达高峰在注药后第７天。结论肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型细胞过度表达ＴＮＦα和ＰＤＧＦ，参与了肺纤维的发病过程。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏一氧化氮系统基因表达的影响

我们于 2 0 0 1年 4～ 7月应用逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)技术检测了单侧肾切除糖尿病大鼠肾脏一氧化氮合酶 (ＮＯＳ) 3种异构体 (神经元型ｂＮＯＳ、诱导型ｉＮＯＳ、和内皮型ｅｃＮＯＳ)的ｍＲＮＡ表达 ,并观察了血管紧张素Ⅱ1型受体 (ＡＴ1)拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏一氧化氮 (ＮＯ)系统基因表达影响 ,为其临床应用提供依据。　　一、资料与方法　　 1.资料 :选择 6 0只健康雄性成年ＳＤ大鼠 (二级动物 ,体重 180～ 2 2 0ｇ ,由温州医学院实验动物中心提供 )在氯胺酮 (0 1ｇ/ｋｇ)腹腔注射麻醉下接受右侧肾切除术。术后死亡 …     

肿瘤坏死因子α对肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的研究肿瘤坏死因子（ＴＮＦ α）对肝星状细胞（ ＨＳＣ）结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ, ＣＴＧＦ）表达的影响。方法用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注, Ｎｙｃｏｄｅｎｚ一步密度梯度离心法分离正常大鼠 ＨＳＣ,并用 ＴＮＦ α,转化生长因子β １（ＴＧＦ β１）处理细胞;应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）技术分别观察不同培养时期的ＨＳＣ中的ＣＴＧＦ的表达。结果 ＴＮＦα, ＴＧＦβ１均诱导ＨＳＣ的ＣＴＧＦ表达; １０μｇ／Ｌ浓度的 ＴＮＦα作用 ６ｈ,没有观察到 ＨＳＣ表达 ＣＴＧＦ;作用 ２４ ｈ后,检测到有 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ的表达。 ＴＧＦ β１在 １μｇ／Ｌ浓度作用 ６ｈ后,即可诱导 ＨＳＣ的 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达。结论 ＴＮＦ α可诱导 ＨＳＣ的 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达,可能是其参与早期肝纤维化形成的作用机理之一。     

大鼠酒精性肝病早期1型纤溶酶原激活抑制物mRNA表达及药物的影响

纤溶酶原激活物包括组织型 (ｔＰＡ)和尿激酶型 (ｕＰＡ) ,而 1型纤溶酶原激活抑制物 (ＰＡＩ 1)是ｔＰＡ和ｕＰＡ的主要生理抑制剂 ,其含量和活性在肝脏中最高。近年研究发现 ,某些肝病情况下ＰＡＩ 1基因表达增强 ,但酒精及常用的肝脏解毒剂对其表达的影响鲜见报道。本研究通过观察短期大剂量酒精灌胃及还原型谷胱甘肽 (ＧＳＨ)解毒后大鼠肝脏中ＰＡＩ 1ｍＲＮＡ表达的变化 ,以探讨大鼠酒精性肝病早期ＰＡＩ 1ｍＲＮＡ的表达情况。一、材料与方法1.实验动物 :雄性ＳＤ大鼠 (体重 198～ 2 33ｇ)购自西普尔 必凯实验动物有限公司 ,随机分三…     

多肽生长因子在大鼠哮喘模型中的表达及地塞米松的影响

近年来的一些研究提示 ,多肽生长因子亦可能在哮喘气道重塑中起重要作用 ,为此我们观察血小板衍生生长因子(ＰＤＧＦ Ｂ)、转化生长因子 (ＴＧＦ β1)在大鼠哮喘模型的表达变化及地塞米松对ＰＤＧＦ Ｂ、ＴＧＦ β1表达的影响。材料与方法　选健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 4只 ,雌雄不拘 ,体重15 0～ 180ｇ ,随机分成三组 :正常组、哮喘模型组、地塞米松干预组 ,每组 8只 ,哮喘模型的制备见参考文献 [1],常规留取肺组织备做免疫组化和逆转录多聚酶链式反应 (ＲＴ ＰＣＲ)。免疫组化ＳＡＢＣ染色 :按武汉博士德公司ＳＡＢＣ免疫组化试剂盒说明操作…     

吸烟大鼠肺组织中基质金属蛋白酶2 mRNA及其蛋白的表达

基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ＭＭＰ)是一类具有金属 (锌 ,钙 )离子依赖性的、结构上高度同源性的内肽酶家族。我们采用免疫组织化学、逆转录多聚酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)、蛋白质印迹试验 (ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ)技术 ,半定量观察肺组织Ⅳ型胶原、ＭＭＰ 2ｍＲＮＡ及ＭＭＰ 2蛋白表达的变化 ,来探讨吸烟所致肺气肿的发病机制。材料与方法　 (1)动物模型的制作与分组 :健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 42只 ,体重 15 0～ 2 0 0ｇ ,雌雄不拘 (由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供 ) ,随机分为不吸烟组 ,吸…     

肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞释放肿瘤坏死因子－α和血小板源生长因子的研究

目的动态观察博莱霉素（ＢＬＭ）致大鼠肺纤维化过程中肺泡巨噬细胞（ＡＭ）释放肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）的变化。方法采用ＥＬＩＳＡ法测定ＴＮＦ－α；采用生物活性法测定ＰＤＧＦ。结果（１）ＡＭ释放ＴＮＦ－α于灌注ＢＬＭ后第３天开始升高，第７天达高峰，１４天后虽有下降，但仍显著高于对照组；（２）ＡＭ释放的ＰＤＧＦ于灌注ＢＬＭ后第３天升高，第７天达高峰，第１４天后下降，与对照组比较差异无显著性。结论ＡＭ可能通过释放ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ在肺纤维化形成中发挥作用。     

黄芪对糖尿病大鼠肾皮质TGF-β表达的影响

目的观察黄芪对糖尿病肾病（ＤＮ）的作用。方法以ＳＴＺ诱导糖尿病动物模型，采用免疫组化和ＲＴＰＣＲ检测方法观察黄芪对糖尿病大鼠肾皮质ＴＧＦβ蛋白、基因表达的影响。结果糖尿病大鼠肾皮质ＴＧＦβ免疫染色强度比未治疗大鼠明显减轻，ＴＧＦβｍＲＮＡ水平比未治疗大鼠明显下降（Ｐ＜０．０１），黄芪与开搏通合用可增强上述作用。结论黄芪可抑制糖尿病大鼠肾皮质ＴＧＦβ的过度表达，其防治ＤＮ发生、发展的作用机制可能部分是通过抑制ＴＧＦβ的过度表达。     

酒精性肝病外周血单个核细胞转化生长因子β1mRNA表达的研究

转化生长因子 β1(ＴＧＦ β1)在慢性肝病的纤维化过程中起重要作用。但对酒精性肝病 (ＡＬＤ)中ＴＧＦ β1的作用研究甚少 ,外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)的ＴＧＦ β1ｍＲＮＡ检测尚未见有报道。我们通过检测ＡＬＤ患者ＰＢＭＣ中的ＴＧＦ β1ｍＲＮＡ表达水平 ,以探讨其临床意义。一、材料与方法1 标本 :男性嗜酒者 10 7例 ,年龄 2 5～ 70岁 ,平均年龄4 3岁。按 1995年中华医学会肝病分会酒精性肝病及肝纤维化学术研讨会关于酒精性肝病诊断要点[1] 进行诊断分组 ,嗜酒无肝功能损害者 2 2例 ,酒精性脂肪肝 30例 ,酒精性肝炎31例 ,酒精性肝…     

血小板源生长因子在增殖型糖尿病视网膜病病人玻璃体内的增长水平

生长因子在增殖型糖尿病视网膜病的发病机理中起重要作用已被普遍接受。本研究目的是阐明血小板源生长因子ＡＢ(ＰＤＧＦＡＢ)在增殖型糖尿病视网膜病的血管生成过程中所起的作用。对象与方法　选择 2 3名糖尿病视网膜病病人、1 9名对照及 4名非糖尿病性缺血性增殖性视网膜病变者。非出血性玻璃体液由病人玻璃体摘除术中取得 ,标本均在 4℃ ,1 2 0 0 0ｇ离心 2 0ｍｉｎ ,为避免ＰＤＧＦ降解 ,取上清液储存于 - 70℃ ,用前置于 4℃ ,应用人ＰＤＧＦＡＢ酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)检测。血小板因子 4(ＰＦ4)由商业ＥＬＩＳＡ测定 ,数据由…     

血小板源生长因子对动脉平滑肌细胞增殖,Ⅰ、Ⅲ型前胶原信使核糖核酸的表达及胶原蛋白合成的调节作用

目的：研究血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对培养的人主动脉平滑肌细胞增殖、胶原蛋白合成、分泌及Ⅰ、Ⅲ型前胶原信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达的调节作用。方法：氚胸腺嘧啶脱氧核苷（３ＨＴｄＲ），氚脯氨酸参入及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析。３ＨＴｄＲ，氚脯氨酸参入的比较采用ｔ检验。结果：ＰＤＧＦ能促进人主动脉平滑肌细胞脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）合成和胶原蛋白合成、分泌；ＰＤＧＦ能上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达。结论：血小板源生长因子能通过上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达促进平滑肌细胞胶原蛋白的合成、分泌。     

缺氧及外源一氧化氮对肺动脉内皮细胞 PDGF-A 链和-B 链基因表达的影响

目的观察肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）旁分泌及其调节在缺氧性肺动脉高压中所起的作用。方法采用核酸分子杂交技术，分析缺氧时小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）表达ＰＤＧＦ－Ａ链、－Ｂ链ｍＲＮＡ的变化及外源一氧化氮（ＮＯ）对其表达的调节作用。结果缺氧（２．５％Ｏ２和０％Ｏ２）早期（１．５，３ｈ）能非常显著地增加肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ－Ａ，ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．００１，ｖｓ常氧组）；缺氧６～４８ｈ与常氧组相比ＰＤＧＦ－Ａ链无明显差别，ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ表达增加（Ｐ＜０．０５）。外源ＮＯ能非常显著地降低常氧肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ－Ａ链（Ｐ＜０．０１）和常氧ＰＤＧＦ－Ｂ链（Ｐ＜０．００１）ｍＲＮＡ的表达水平，而不能明显地抑制缺氧ＰＤＧＦ－Ａ，－Ｂ链的表达。结论缺氧可能一方面通过刺激肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ基因表达加强，一方面减弱ＮＯ对ＰＤＧＦ基因表达的抑制作用，从而参与缺氧性肺动脉高压的肺血管收缩反应加强和肺血管结构改建的发生过程。     

白细胞介素-13对肾小球系膜细胞炎症细胞因子基因表达的影响

白细胞介素 (ＩＬ) 13是一种多效性的Ｔｈ2 细胞因子 ,能抑制脂多糖 (ＬＰＳ)诱导的外周血单核 /巨噬细胞炎症介质如ＩＬ 1β、ＩＬ 6、肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ) α、ＩＬ 2、ＩＬ 8和细胞间黏附分子 (ＩＣＡＭ)等[1] 。肾小球系膜细胞可表达ＴＮＦ α及ＩＬ 6等。目前ＩＬ 13对系膜细胞的作用国内外尚缺乏研究。我们观察了ＩＬ 13对体外培养的肾小球系膜细胞炎症细胞因子ＴＮＦ α及ＩＬ 6表达的影响 ,以探索肾小球肾炎的发病机制。一、材料与方法1.大鼠系膜细胞培养 :选取体重 10 0～ 12 0ｇ、2～ 3月龄的雄性ＳＤ大鼠 ,参考Ｌｏｖｅｔｔ…     

支气管哮喘大鼠气道重构与平滑肌肌动蛋白α表达的关系

平滑肌肌动蛋白α(ＳＭＡ α)是平滑肌的主要标志物 ,可反映平滑肌数量及其收缩能力的改变[1] 。为了解气道平滑肌在哮喘气道重构时的变化 ,我们的研究通过逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)检测支气管哮喘 (简称哮喘 )大鼠气道重构中肺部ＳＭＡ αｍＲＮＡ表达 ,旨在阐明气道平滑肌在哮喘气道重构中的作用。材料与方法　健康ＳＤ大鼠 2 4只 ,由四川大学动物实验中心提供。ＴＲＩｚｏｌ试剂购自美国ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司。ＳＭＡ α与ＧＡＰＤＨ引物由美国ＧＩＢＣＯＢＲＬ合成。ＲＴ ＰＣＲ试剂盒购自瑞士Ｒｏｃｈｅ公司…     

急性肺损伤大鼠白细胞介素10表达及肾上腺素β激动剂作用

我们就油酸性急性肺损伤 (ＡＬＩ)大鼠肺组织白细胞介素10 (ＩＬ 10 )ｍＲＮＡ、肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ α)表达及肾上腺素 β受体激动剂的作用进行了研究。材料与方法　雌性ＳＤ大鼠 90只 (2 40～ 310ｇ)随机分为5组 :正常对照组 (Ｃ组 ) ;油酸致伤组 (Ｏ组 ) ;盐酸异丙肾上腺素 (ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ)组 (Ｉ组 ) ;盐酸普萘洛尔 (ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ)组(Ｐ组 ) ;ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ+ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ组 (Ｉ+Ｐ组 )。大鼠麻醉后 ,Ｃ组颈外静脉注入生理盐水 ,余组注入肝素和油酸 (0 2 5ｍｌ/ｋｇ)。油酸注入 15ｍ…     

哮喘患者外周血单个核细胞肿瘤坏死因子α转换酶的表达

肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ α)是支气管哮喘炎症过程中重要的前炎因子 ,具有生物活性的可溶性ＴＮＦ α是由肿瘤坏死因子α转换酶 (ＴＡＣＥ)蛋白水解其无活性的膜结合前体而来[1] 。我们的研究观察了哮喘患者外周血单个核细胞(ＰＢＭＣｓ)ＴＡＣＥｍＲＮＡ和蛋白的表达 ,及其培养上清ＴＮＦ α的水平 ,同时观察了吸入糖皮质激素对ＴＡＣＥｍＲＮＡ和ＴＮＦ α的影响 ,旨在探讨ＴＡＣＥ在哮喘发病中的可能作用地位。对象与方法　哮喘组 16例 :男 5例 ,女 7例 ,平均年龄(32± 5 )岁 ,为本院呼吸科门诊患者并符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组…     

烟碱对大鼠脑组织多巴胺D1、D2受体mRNA表达的影响

研究表明 ,吸烟可降低帕金森病 (ＰＤ)的发病率〔1〕。烟碱可能通过诱导大鼠脑内神经营养因子 (ＢＤＮＦ)的合成及抑制羟自由基的产生等〔2〕,而对多巴胺神经元具有保护效应。本课题于 2 0 0 0年 10月至 2 0 0 1年 4月进行 ,旨在研究烟碱对大鼠脑组织多巴胺受体 (Ｄ1、Ｄ2 受体 )ｍＲＮＡ达的影响。　　一、材料与方法　　 1 实验动物和分组 :2 4只健康雄性清洁级ＳＤ大鼠 ,10周龄 ,重 180～ 2 0 0ｇ ,由中南大学湘雅医学院实验动物学部提供。动物随机分为 2组 :生理盐水对照组 (12只 ) ;烟碱实验组 (12只 )。分别给予生理盐水、烟碱 (美国…     

Aβ1-40诱导大鼠脑皮质与海马差异表达基因的克隆与鉴定

我们于 2 0 0 1年 3～ 8月以 β 淀粉样蛋白1 4 0 (ｂｅｔａ ａｍｙｌｏｉｄｐｒｏｔｅｉｎ ,Ａβ1 4 0 )注入脑室建立大鼠ＡＤ模型 ,采用抑制消减杂交 (ＳＳＨ)技术构建Ａβ诱导大鼠皮质与海马差异表达的基因文库 ,旨在探讨Ａβ1 4 0 神经元毒性的分子机制。　　一、材料与方法　　 1 ＡＤ模型的建立 :清洁级成年雄性ＳＤ大鼠 2 0只 ,3月龄 ,体重 3 0 0 ｇ左右 ,购自上海ＢＫ实验动物中心 ,分为 2组。采用立体定向仪 (江湾Ⅱ )向实验组大鼠第 3脑室注射Ａβ1 4 0 (Ｓｉｇｍａ美国 ) 10 μｌ(1μｇ/ μｌ) ,脑室立体定向坐标为 :ＡＰ = 1ｍ…     

抗肿瘤坏死因子单克隆抗体对流行性乙型脑炎病毒感染小鼠的影响

在流行性乙型脑炎 (乙脑 )中 ,肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ α)升高的程度与病情轻重有关[1] 。因此认为ＴＮＦ α作为一种炎性因子 ,参与了乙脑的发病过程。我们选用一种肿瘤坏死因子拮抗剂———抗肿瘤坏死因子单克隆抗体 (ＴＮＦ αＭｃＡｂ)来阻止ＴＮＦ α生物活性 ,以观察ＴＮＦ αＭｃＡｂ对乙脑病毒 (ＪＥＶ)感染小鼠的发病影响 ,旨在为临床治疗乙脑开辟新的途径。材料与方法一、药物ＴＮＦ αＭｃＡｂ购自北京邦定生物公司二、动物5 5只 2～ 3周龄小白鼠 15～ 2 1ｇ ,清洁级 ,由同济医科大学实验动物中心提供。三、病毒株感染病毒为ＪＥ…     

川崎病血清对血管内皮细胞表达血小板源生长因子及对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察川崎病血清对血管内皮细胞表达血小板源生长因子Ｂ链蛋白（ＰＤＧＦ－Ｂ）的影响，以及川崎病血清作用后的内皮细胞条件培养基对血管平滑肌细胞表达ＰＤＧＦ受体信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）和对细胞周期的影响。方法：采用免疫细胞化学、核酸杂交和流式细胞分析方法。结果：川崎病血清能够强烈诱导内皮细胞表达ＰＤＧＦ－Ｂ；川崎病血清作用后的内皮细胞条件培养基能够显著促进平滑肌细胞表达ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ，并强烈诱导平滑肌细胞增殖。结论：ＰＤＧＦ—ＰＤＧＦ受体途径的激活可能参与了川崎病冠状动脉并发症的形成。