胃癌组织中p16基因mRNA和蛋白的表达及其与p53、Cyclin D1蛋白表达的相关性和临床意义

目的排除正常组织细胞的影响，探讨ｐ１６基因在胃癌发生发展及预后判断上的作用和可能的基因调节机制。方法采用ＣＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位核酸杂交和免疫组化技术观察６１例胃癌组织和４９例癌旁非癌组织中ｐ１６基因ｍＲＮＡ和蛋白的表达，并与ｐ５３、ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达情况及肿瘤的生物学行为进行相关性分析（Ｘ２检验，Ｗｉｌｃｏｘｏｎ等级秩和检验，配对资料Ｙａｔｅｓ校正Ｘ２检验）。以ＰＣＲ随机引物法制备生物素标记的ｐ１６ＣＤＮＡ探针。结果（１）胃癌组织ｐ１６ｍＲＮＡ的阳性率为５０．８％，ｐ１６蛋白的阳性率为７０．５％，与癌旁正常胃粘膜１００％的阳性率相比，差异具有显著性意义（Ｐ＜０．００１）。１０例早期胃癌ｐ１６ｍＲＮＡ和蛋白均阳性，而５１例进展期胃癌的阳性率分别为４１．２％（２１／５１），６４．７％（３３／５１）。早期与进展期胃癌相比，ｐ１６ｍＲＮＡ和ｐ１６蛋白的阳性率均有显著性差异（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０１）。而且在同一切片中也可以观察到分化较好或浸润浅层的癌细胞表达ｐ１６ｍＲＮＡ和蛋白，而分化较差、浸润深层的癌细胞则没有表达。（２）ｐ１６ｍＲＮＡ和ｐ１６蛋白的表达强度与胃癌的分化程度、浸润深度，有无淋巴结转移及病     

人宫颈癌组织中c—myc基因的表达

目的 研究人宫颈癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的表达。方法 应用Ｄｉｇ标记ｃＤＮＡ探讨，ＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交技术检测３７例人宫颈鳞状细胞癌内癌基因ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ。结果 ３７例中１６例有ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达，检出率为４３．２４％，ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ主要分布在癌细胞胞浆内。结论 ｃ－ｍｙｃ癌基因表达在宫颈癌发生中可能起作用，宫颈癌的发生可能还有更多的癌基因参与。     

原位杂交测肿瘤坏死因子mRNA在宫颈上皮的表达

用地高辛（Ｄｉｇ）标记原位杂交技术，对正常子宫颈上皮ＮＣｘ，人乳头瘤病毒１６（ＨＰＶ１６）感染的宫颈癌上皮ＳｉＨａ及宫颈湿疣上皮Ｗ１２进行了肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）ｍＲＮＡ表达的研究。在ＳｉＨａ及Ｗ１２细胞中均可见ＴＮＦαｍＲＮＡ的表达，ＮＣｘ中未见其表达。结果提示：宫颈ＨＰＶ感染对细胞内ＴＮＦαｍＲＮＡ表达有促进使用，且上皮的组织学分化对其表达亦有影响。     

人宫颈癌组织中c-myc基因的表达

目的研究人宫颈癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的表达。方法应用Ｄｉｇ标记ｃＤＮＡ探针，ＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交技术检测３７例人宫颈鳞状细胞癌内癌基因ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。结果３７例中１６例有ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达，检出率为４３．２４％，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ主要分布在癌细胞胞浆内。结论ｃ－ｍｙｃ癌基因表达在宫颈癌发生中可能起作用，宫颈癌的发生可能还有更多的癌基因参与。     

宫颈非典型增生组织中HPV16—DNA的定量PCR检测

（１）目的建立定量聚合酶链技术（ＰＣＲ）方法，检测宫颈组织中乳头瘤病毒１６型ＨＰＶ１６的基因含量。（２）方法通过重叠延伸ＰＣＲ构建一含ＥｃｏＲＩ酶切位点的内参照模板，用竞争性ＰＣＲ（ＣＰＣＲ）检测６例ＨＰＶ１６阳性宫颈非典型增生组织标本中ＨＰＶ１６Ｅ６，基因的拷贝数。结果６例阳性标本ＨＰＶ１６Ｅ６基因的拷贝数为每毫克ＤＮＡ中含１．９９×１０＾５～２．５０×１０＾７。（４）结论用ＣＰＣＲ检测宫颈组织     

食管癌组织中HPV原位杂交及E6,P^21ras和P^53免疫组化…

采用分子原位杂交和ＳＰ法免疫组化技术对柳州地区４０例食管鳞状细胞癌和２０例食管粘膜慢性炎的材料进行地高辛标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１，１６、１８ＤＮＡ及ＨＰＶ１６、２１８早期蛋白Ｅ６、Ｐ＾２１ｒａｓ和Ｐ＾５３癌基因产物检测。     

人乳头瘤病毒16型E6基因表达产物单克隆抗体的制备研究

将含有人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ_（１６））Ｅ_６基因的重组质粒ＰＡＳ１－ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６转染大肠杆菌ＡＲ１２０，在萘啶酮酸诱导下进行表达，表达产物经分离、纯化和鉴定获得一种分子量为１９０００的Ｅ_６表达蛋白。用纯化后的Ｅ６蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０－Ａｇ１４在ＰＥＧ_（４０００）作用下进行融合，经ＨＡＴ培养基筛选杂交瘤细胞株，甲基纤维素半固体培养基克隆，克隆筛选，ＥＬＩＳＡ检测和再克隆，得到一株持续稳定分泌抗ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤株ＲＡＣ_６。     

人乳头瘤病毒16型E6/E7基因对人角质形成细胞生长及CyclinA,CyclinD1和cdk4的影响

目的 研究１６型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）Ｅ６／Ｅ７对人角质形成细胞细胞周期素（ＣｙｃｌｉｎＡ,ＣｙｃｌｉｎＤ１）及细胞周期素依赖（ｃｄｋ４）的影响。方法 用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导法将ＰＬＸＳＮ１６Ｅ６／Ｅ７质粒转染逆 转录病毒包装细胞ＰＡ３１７,挑选Ｇ４１８抗性克隆检测病毒滴度,将表达ＨＰＶ１６原高滴度逆转 录病毒感染人角质形成细胞;免疫印迹分析感染细胞ＣｙｃｌｉｎＡ,ＣｙｃｌｉｎＤ１,ｃｄ     

中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16E6E7基因 …

目的 分析中国山东地区宫颈癌患者ＨＰＶ１６型Ｅ６Ｅ７基因结构特点。方法 从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取ＤＮＡ,经ＨＰＶ多重引物ＰＣＲ法鉴定标准中感染ＨＰＶ型别,选感染ＨＰＶ１６型的标本ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,获得ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７基因,将其重组入ｐＡＬＴＥＲ－１载体,进行双向测序、分析。结果 构建了含中国山东地区宫颈癌患者组织中ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７的重组质粒,命名为ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７－ＳＤ。     

16型人乳头状瘤病毒E6、E7与宫颈癌、宫颈炎关系的初步研究

目的 了解重庆地区宫颈癌、宫颈炎发病与１６例人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ１６）Ｅ６、Ｅ７的关系。方法 运用ＰＣＲ,分子生物学技术进行ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７的扩增和克隆。结果 重庆地区宫颈癌、宫颈炎组织中ＨＰＶ１６Ｅ６,Ｅ７总检出率分别为７０％和６５％。结论 重庆地区ＨＰＶ１６感染与宫颈癌、宫颈炎的发生相关。Ｅ７原癌蛋白可能与宫颈癌发生早期有关,而Ｅ６原癌蛋白可能与宫颈癌形成晚期关系密切。     

喉癌组织乳头状瘤病毒的检测

应用聚合酶链反应对成人型喉癌，喉癌旁组织及颈部淋巴结组织进行乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）检测，发现２０例喉癌组织中有１６例呈ＨＰＶ－６，１１例阳性，１例ＨＰＶ－１６，１８例阳性，２例癌旁１ｃｍ内组织有１例ＨＰＶ－６，１１阳性，２例癌旁２ｃｍ外组织均呈ＨＰＶ－６，１１，１６，１８阴性，３例淋巴结病是检查有癌转移，均主ＨＰＶ－６，１１型阳性。     

食管癌组织中人乳头瘤病毒的检测

用人乳头瘤病毒保守基因的通信引物和１６、１８型特异性引物，通过聚合酶链反应，检测２０例正常新鲜活检食管粘膜，４０例新鲜食管癌组织昨５１例石蜡包埋的食管癌组织标本的ＨＰＶＤＮＡ，在２０例正常人食管粘膜组织中ＨＰＶＤＮＡ检出率９．１％，癌组织中为３６．２％，磷癌和腺癌分别为３４．７％、４７．１％，鳞癌以１６型感染为主，腺癌以１８型为主，但肿瘤分化程度与ＨＰＶ感染无关，结果提示：ＨＰＶ感染与食砭 癌的发     

人喉癌中p53基因表达和人乳头状瘤病毒感染的初步研究

应用免疫组织化学和多聚酶链反应技术检测４２例喉和喉咽鳞癌，２５例癌旁组织ｐ５３蛋白的表达和１３例癌组织人类乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１６／１８型ＤＮＡ。结果显示：５４．８％的癌组织和２０％的癌旁组织中ｐ５３蛋白呈阳性表达，２３．１％的高分化声带癌中检测到编码ＨＰＶ１６型Ｅ６蛋白的ＤＮＡ，表明ｐ５３蛋白的过度表达和人乳头状瘤病毒感染与喉癌的发生有关，二者起协同作用。     

人喉癌组织中人乳头瘤病毒DNA的检测

目的：为探讨喉癌与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系和ＨＰＶ在喉癌中基因组型的分布与表达。方法：应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）制备非放射性探针标记物－地高辛标记ＨＰＶ共有引物探针，对１４６例喉不同病变的新鲜组织标本（喉癌６８例，喉其他病变４８例，正常喉组织３０例），进行ＨＰＶ６，１１，１６，１８，３１，３３，３５，４２，５８共９型ＨＰＶＤＮＡ感染的检测；阳性者用多重引物ＰＣＲ方法分型。结果：喉癌ＨＰＶ感染阳性率４５．６％（３１／６８），喉癌颈转移淋巴结组织阳性率２０．０％（３／１５），喉癌前病变阳性率１１．８％（２／１７），声带息肉阳性率６．３％（１／１６），１５例癌旁及１５例癌周正常喉组织均为ＨＰＶＤＮＡ阴性。ＨＰＶＤＮＡ型别分布在喉癌中以ＨＰＶ１６，１８型为主，喉良性病变中以ＨＰＶ６，１１型为主。结论：喉癌发生与ＨＰＶ感染有关。     

人喉癌中p53基因表达和人乳头状瘤病毒感染的初步研究

应用免疫组织化学和多聚酶链反应技术检测４２例喉和喉咽鳞癌，２５例癌旁组织ｐ５３蛋白的表达和１３例癌组织人类乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１６／１８型ＤＮＡ，结果显示：５４．８％的癌组织和２０％的癌旁组织中ｐ５３蛋白呈阳性表达，２３．１％的高分化声带癌中检测的编码ＨＰＶ１６型Ｅ６蛋白的ＤＮＡ，表明ｐ５３蛋白的过度表达和人乳头状瘤病毒感染与喉癌的发生有关，二者起协同作用。     

人宫颈癌多基因致癌机理的研究

应用核酸分子杂交、ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＡＳＯ杂交等技术，对人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ等三种癌基因、ＨＰＶ１６病毒基因及Ｐ５３、Ｒｂ抑癌基因等多基因变化及其致癌机理进行了研究。结果表明：①宫颈癌中存在Ｈａ－ｒａｓ第１２位密码子Ｇ→Ｔ点突变，突变率为１８．２％（８／４４），并有Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，扩增率为４５％（９／２０）；②ｃ－ｅｒｂＢ２基因在宫颈癌中的扩增率为７３．３％（１１／１５），５例伴有重排；③ｃ－ｍｙｃ基因在宫颈癌中的扩增率为９１．７％（１１／１２）；④ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７为引物的ＰＣＲ检测结果，宫颈癌中的阳性率为８０．５％（３３／４１）；⑤１２例宫颈癌中未发现Ｐ５８、Ｒｂ基因缺失。上述多基因致癌机理的研究表明，人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ２经点突变、扩增、重排而被激活，在癌变中起着协同致癌作用。ＨＰＶ１６基因的整合可能启动ｃ－ｍｙｃ，为癌变的起始因素，而Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２的基因改变可能为中、晚期事件，抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ的作用尚需进一步研究。     

宫颈非典型增生组织中HPV16－DNA的定量PCR检测

①目的建立定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，检测宫颈组织中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）的基因含量。②方法通过重叠延伸ＰＣＲ构建一含ＥｃｏＲＩ酶切位点的内参照模板，用竞争性ＰＣＲ（ＣＰＣＲ）检测６例ＨＰＶ１６阳性宫颈非典型增生组织标本中ＨＰＶ１６Ｅ６基因的拷贝数。③结果６例阳性标本ＨＰＶ１６Ｅ６基因的拷贝数为每毫克ＤＮＡ中含１．９９×１０５～２．５０×１０７．④结论用ＣＰＣＲ检测宫颈组织中ＨＰＶ１６Ｅ６基因的含量是可行的，进一步比较不同宫颈疾患组织中ＨＰＶ１６Ｅ６基因的含量，可以从分子水平探讨ＨＰＶ１６的致癌机理。     

HPV16、HPV18感染及p53蛋白过度表达与肺癌的相关性研究

为研究人乳头瘤病毒１６和１８型（ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８）感染及ｐ５３基因突变与肺癌的关系，应用经病理学证实的肺癌活组织，行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测癌组织中的ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；并用ＬＳＡＢ免疫组化法检测相应蜡块标本中ｐ５３蛋白的过度表达。在４８例肺癌组织标本中未检出ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；ｐ５３蛋白表达呈阳性，阳性率为５４．２％（２６／４８），其中鳞癌６６．７％（１８／２７），腺癌５７．１（４／７），小细胞癌３３．３％（１／３），大细胞癌３３．３％（２／６），类癌２０．０％（１／５）。提示肺癌的发生可能与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染无关，而与ｐ５３基因突变有关，尤以与鳞癌和腺癌关系密切     

卵巢浆液性肿瘤P16抑癌基因表达的原位杂交研究

目的：探讨ｐ１６抑癌基因与卵巢浆液性癌发生、发展及其生物学特征的关系。方法：应用非放射性原位杂交技术对４７例卵巢上皮性浆液性肿瘤组织（良性１０例、交界性４例、癌３３例）和８例正常卵巢组织中ｐ１６ｍＲ－ＮＡ进行检测。结果：ｐ１６ｍＲＮＡ表达主要位于胞浆内呈红色颗粒状,阳性表达细胞多呈灶状分布。ｐ１６ｍＲＮＡ在卵巢浆液性癌中检出率（４８．５％）,低于良性浆液性瘤（９０％）及正常卵巢组织（１００％）（Ｐ均＜０．０５）。结论：ｐ１６ｍＲ－ＮＡ低表达与卵巢浆液性癌的恶性程度高、肿瘤分化差、癌瘤播散及淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。ｐ１６作为一种新型抑癌基因,其ｍＲＮＡ低表达可能与卵巢浆液性癌发生、发展密切相关。     

胃粘膜良恶性病变对P21、P53、P16、EGFR、PCNA及CEA的联合表达

目的 探明胃粘膜良性病变和恶性病变之间的关系。方法 应用免疫组化Ｓ－Ｐ法，检测胃粘膜结肠型和小肠型化生及轻度不典型增生和中重度不典型增生细胞中Ｐ＾５３，Ｐ＾２１、Ｐ＾１６、ＥＧＦＲ，ＰＣＮＡ和ＣＥＡ的表达，并和胃癌组织及正常胃粘膜组织进行对照。结果 Ｐ＾２１对判断细胞的癌变倾向有帮助。而Ｐ＾５３仅在癌组织内才有明显表达。Ｐ＾１６在良性病变和癌组织内的表达与理论上有出入，ＥＧＦＲ在胃癌及中重不典型增