EFFECTS OF p53 GENE THERAPY COMBINED WITH CYCLOOXYGENASE-2 INHIBITOR ON CYCLOOXYGENASE-2 GENE EXPRESSION AND GROWTH INHIBITION OF HUMAN LUNG CANCER CELLS

Background Gene therapy by adenovirus-mediated wild-type p53 gene transfer has been shown to inhibit lung cancer growth in vitro, in animal models, and in human clinical trials. The antitumor effect of selective cyclooxygenase （COX）-2 inhibitors has been demonstrated in preclinical studies. However, no information is available on the effects of p53 gene therapy combined with selective COX-2 inhibitor on COX-2 gene expression and growth inhibition of human lung cancer cells. Methods We evaluated the effects of recombinant adenovirus-p53 （Adp53） gene therapy combined with selective CADX-2 inhibitor on the proliferation, apoptosis, cell cycle arrest of human lung adenocarcinoma A549 cell line, and the effects of tumor suppressor exogenous wild type p53 on COX-2 gene expression. Results Ad-p53 gene therapy combined with selective COX-2 inhibitor celecoxib shows significant synergistic inhibition effects on the growth of human lung adenocarcinoma A549 cell line. Exogenous p53 gene can suppress COX-2 gene expression. Conclusions Significant synergistic inhibition effects of A549 cell line by the combined Ad-p53 and selective COX-2 inhibitor celecoxib may be achieved by enhancement of growth inhibition, apoptosis induction and suppression of COX-2 gene expression. This study provides first evidence that the administration of p53 gene therapy in combination with COX-2 inhibitors might be a new clinical strategy for the treatment or prevention of NSCLC.     

重组人p53腺病毒注射液联合泰索帝对人肺腺癌细胞生长的抑制作用

目的探讨基因治疗药物重组人p53腺病毒注射液(Ad-p53)联合化疗药物泰索帝(多西紫杉醇,Docetaxel)对人肺腺癌GLC-82(含突变型p53基因)及A549(含野生型p53基因)细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用。方法将重组腺病毒载体所携带的野生型p53基因导入人肺腺癌细胞株GLC-82及A549,并联合应用化疗药物多西紫杉醇,通过Western blot法分析外源野生型p53基因在细胞内的表达,MTT法和流式细胞术观察对细胞生长抑制及细胞周期、凋亡的影响。结果通过West-ern blot证实了外源p53基因能在GLC-82及A549细胞中高效表达。MTT法观察到Ad-p53对肺癌细胞的抑制作用呈时间依赖性、剂量依赖性效应,100 MOI的Ad-p53与Docetaxel 5 mg/L联合应用后72 h,对A549细胞生长的抑制率达(51.96±0.76)%,单用的抑制率分别为(23.44±0.54)%、(40.53±1.37)%;对GLC-82细胞生长的抑制率达(62.42±1.43)%,单用的抑制率分别为(41.51±0.59)%、(48.39±0.88)%。流式细胞术检测结果显示,Ad-p53与Docetaxel联合应用能使细胞阻滞于G0~G1期,S期细胞比例明显减少,引起的A549细胞凋亡率为(23.35±0.64)%,单用的凋亡率分别为(15.35±1.31)%、(0.93±0.35)%;GLC-82细胞凋亡率为(47.73±1.17)%,单用的凋亡率分别为(20.88±0.71)%、(1.16±0.52)%。结论Ad-p53与化疗药物Docetaxel联用能显著协同抑制肺腺癌细胞的生长,增加化疗敏感性。     

结肠癌组织中p53、p14基因表达的研究

目的　探讨结肠癌组织中 p5 3、p14基因的表达及其与结肠癌某些生物学行为的关系。 方法　经病理诊断明确的内镜活检组织标本 318例 ,其中癌组织 12 6例 ,腺瘤组织 84例 ,正常组织 10 8例。采用免疫组织化学S -P法检测三种组织中p5 3、p14的表达。 结果　p5 3在结肠癌组织中的表达明显高于正常组织 (P<0 .0 5 ) ,p14在腺瘤和癌组织中的表达低于正常结肠组织 (P <0 .0 5 ) ,p14与癌组织的临床分期及组织分化程度相关 (P >0 .0 5 ) ,p5 3与 p14的表达存在负相关性 (r =- 0 .816 9)。 结论　p5 3、p14基因的表达异常可能与结肠癌的发生发展有关 ,联合检测两者的协同表达可作为结肠癌辅助诊断的参考指标。     

非小细胞肺癌组织P53、P16和Bcl-2蛋白表达及意义

目的探讨P53、P16和Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化技术,检测原发性非小细胞肺癌组织60例和距离肿瘤边缘5 cm以上的癌旁正常肺组织18例的P53、P16和Bcl-2蛋白的表达。结果 P53、P16和Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达与癌旁正常肺组织比较,差异有显著性（Hc=10.003~14.783,P〈0.01）。非小细胞肺癌组织P53、P16蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关（Hc=15.119、19.078,P〈0.01）,Bcl-2蛋白的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关（Hc=16.271、13.205,u=2.849,P〈0.01）。非小细胞肺癌组织的P53与P16蛋白表达之间呈负相关（rs=-0.437,P〈0.01）。结论 P53、P16及Bcl-2蛋白的表达失衡与非小细胞肺癌的发生发展密切相关。     

幽门螺杆菌和p53基因与胃癌的关系研究

研究幽门螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）感染、突变型 ｐ５３基因表达与胃癌的关系,以及胃癌时 ＨＰ感染与突变型ｐ５３基因表达的关系。方法：用快速尿素酶试验和ＥＬＩＳＡ法检测ＨＰ和ＨＰ抗体,用免疫组化方法测定突变型ｐ５３蛋白。结果：胃癌和胃癌前病变组ＨＰ阳性率高于其它组（Ｐ＜０．０５）,而胃癌组ＨＰ阳性率和胃癌前病变组无显著差异（Ｐ＞０．０５）,胃癌组突变型 ｐ５３蛋白阳性率高于胃癌前病变组（Ｐ＜０．０５）,胃癌中 ＨＰ阳性者突变型 ｐ５３蛋白阳性率高于 ＨＰ阴性者（Ｐ＜０．０５）。结论：胃癌的发生和ＨＰ感染、突变型ｐ５３基因表达有关,胃癌时ＨＰ感染与突变型ｐ５３基因表达也存在相关性。     

草分枝杆菌对SPCA/Ι人肺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 :探讨草分枝杆菌 (MycobacteriumPhlei)对人肺腺癌细胞系SPCA /Ⅰ的抗增殖效应。 方法 :应用细胞培养和MTT比色法检测不同浓度组的草分枝杆菌对SPCA /Ⅰ人肺腺癌细胞生长的抑制作用 ,波长定于 5 70nm ,测定光密度 (A值 )并计算其抑制率。结果 :不同浓度的草分枝杆菌体外对人肺腺癌细胞株SPCA/Ⅰ均有直接的抑制作用 ,其抑制率与所用药物浓度呈正相关。结论 :草分枝杆菌体外对SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞有直接的抑制作用 ,该结果可能为肿瘤的临床联合治疗提供实验依据。     

三维适形放疗同步化疗治疗局部晚期非小细胞肺癌效果

目的探讨三维适形放疗联合多西他赛和顺铂同步化疗治疗不可手术的局部晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的效果和毒副反应。方法将52例局部晚期NSCLC病人随机分为2组,各26例。单放组采用三维适形放疗,每日单次剂量DT2Gy,总剂量DT60-64Gy。化放组给予多西他赛30mg／m^2和顺铂20mg／m^2化疗,第1、8、22、29天分别在放疗前进行,放疗方法同单放组。结果化放组和单放组有效率分别为92．3％、76．9％,两组比较差异有显著性（χ^2=10．8,P〈0．05）。两组急性毒副反应发生率差异无显著性（P〉0．05）。结论三维适形放疗联合多西他赛和顺铂同步化疗治疗不可手术的局部晚期NSCLC的效果和病人耐受性较好。     

人乳癌细胞小球藻CvFad3基因的表达和作用

目的构建真核表达载体pEGFP-C3-n-3,检测小球藻n-3脂肪酸脱氢酶基因CvFad3在人乳癌MCF-7细胞中的表达和作用。方法通过RT-PCR法扩增得到CvFad3基因,将CvFad3基因cDNA插入到真核表达载体pEGFP-C3中,构建重组表达载体pEGFP-C3-n-3,并将其转染入MCF-7细胞中,设空载体pEGFP-C3为对照组。采用RT-PCR检测CvFad3基因的表达,MTT法分析CvFad3基因对MCF-7细胞增殖的影响,气相色谱检测CvFad3基因对MCF-7细胞n-3多不饱和脂肪酸含量的影响。结果构建的重组载体pEGFP-C3-n-3转染入乳癌MCF-7细胞48 h后可检测到CvFad3基因mRNA的条带,而转染pEGFP-C3的MCF-7细胞48 h后检测不到CvFad3基因mRNA的条带。与对照组比较,转染pEGFP-C3-n-3的细胞MTT吸光度明显降低（t=6.039,P〈0.01）;人乳癌细胞MCF-7细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量显著升高。结论重组载体pEGFP-C3-n-3构建成功,CvFad3基因能在MCF-7细胞内有效异源表达,且抑制了MCF-7细胞的增殖,增加了细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量。     

凋亡相关基因p53和bcl-2蛋白在前列腺癌的中表达及其临床意义

目的 :探讨细胞凋亡相关基因bcl 2、p5 3在前列腺癌中的表达及意义。 方法 :应用免疫组织化学ABC法 ,检测 3 6例前列腺癌 (Pca) ,2 0例前列腺增生 (BPH )组织和 11例正常前列腺组织 (NP)中bcl 2、p5 3蛋白表达。结果 :①Pca和BPH组bcl 2蛋白阳性表达率明显高于NP组 (P <0 .0 5 ) ,而Pca组与BPH组阳性率无显著性差异。Pca组 p5 3蛋白阳性表达率明显高于BPH组和NP组 (P <0 .0 5 ) ,而BPH组与NP组阳性率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。②在Pca组中bcl 2蛋白阳性 10例 ,其中Ⅰ、Ⅱ级肿瘤组阳性 4例 ,Ⅲ、Ⅳ级肿瘤组 6例 (P <0 .0 5 ) ;p5 3蛋白阳性 12例 ,其中Ⅰ、Ⅱ级肿瘤组阳性 5例 ,Ⅲ、Ⅳ级肿瘤组 7例 (P <0 .0 5 )。显示bcl 2、p5 3蛋白表达随着病理分级的增高而增高。③p5 3蛋白表达阳性率≤ 5年生存组明显高于>5年生存组 ,呈负相关 (P <0 .0 5 )。bcl 2蛋白表达与生存期无关 (P >0 .0 5 )。结论 :p5 3、bcl 2蛋白的异常表达与前列腺癌的发生发展、病理分级及预后有关。     

Survivin、Caspase-3蛋白在非小细胞肺癌的表达及其相关性研究

目的研究Survivin、Caspase-3蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达及其生物学意义,并探讨其相关性。方法用免疫组化(2步法)染色技术对47例NSCLC组织石蜡标本进行Survivin、Caspase-3蛋白表达的检测和分析。结果Sur-vivin、Caspase-3在非小细胞肺癌中阳性表达率为59.57%、57.45%;与性别、年龄、组织学分型、病理分级、TMN分期、淋巴结转移无明显相关(P>0.05);Survivin与Caspase-3蛋白的表达呈负相关(U 2.325;P<0.05)。结论Survivin蛋白在非小细胞肺癌中表达上调,提示其通过抑制细胞凋亡,在肺癌癌变发生、发展中起重要作用,可能成为肺癌基因治疗的新靶点;Sur-vivin通过与激活的Caspase-3结合,抑制其活性,从而阻止细胞凋亡,其阳性表达亦预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后。     

肺癌患者IL-6及T淋巴细胞亚群检测的实验研究

目的 :观察肺癌患者IL -6水平及外周血T淋巴细胞亚群 ,探讨其免疫功能与临床意义的关系。方法 :采用ELISA方法检测患者血清IL -6水平。用单克隆抗体检测肺癌患者外周血中T淋巴细胞亚群。结果 :Ⅰ、Ⅱ期肺癌组与正常对照组比较 ,T淋巴细胞亚群 (CD3 、CD4、CD8)无明显差异 ,IL -6水平增高 ;Ⅲ、Ⅳ期肺癌组与正常对照组比较CD3 、CD4水平下降 ,而CD8与IL -6水平明显增高。结论 :肺癌患者IL -6及外周血T淋巴细胞亚群水平检测可反映机体免疫功能状态。对临床分析肿瘤发展状况 ,判断其预后及疗效有一定的意义。     

肺癌A549细胞P物质和NK-1表达及SR140333对其影响

目的探讨P物质及其受体神经激肽1（NK-1）在体外培养的肺癌细胞系A549中的表达及免疫细胞化学定位,并进一步研究NK-1受体拮抗剂SR140333对A549细胞的影响。方法用放入盖玻片的6孔板进行A549肺癌细胞系的培养,第3天将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色;另取培养3 d后的细胞加入SR140333,48 h后应用免疫细胞化学染色方法检测P物质和NK-1的表达。结果 A549细胞系中P物质和NK-1呈阳性表达,P物质阳性表达主要位于胞浆,而NK-1阳性表达主要位于胞膜和胞浆。加入SR140333的A549细胞P物质和NK-1阳性表达明显低于仅加入培养液的细胞,差异有显著性（t=11.54、14.58,P〈0.05）。结论 P物质和NK-1可能通过神经内分泌机制参与肺癌的发病过程,SR140333可抑制A549细胞P物质及NK-1的阳性表达。     

MDM2、p53在卵巢肿瘤组织及细胞系的表达和意义

目的　研究MDM 2 (murinedoubleminute 2 )和 p5 3在卵巢肿瘤组织、细胞系表达及与卵巢癌发生关系。 方法　①用细胞培养、蛋白质提取、Western免疫印迹法检测 17个卵巢癌细胞系MDM 2、p5 3蛋白表达。②用免疫组化SP法检测卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MDM 2、p5 3蛋白的表达。结果　① 17个卵巢癌细胞系MDM 2蛋白p90表达阳性率为 11 8% (2 / 17) ;p5 3的阳性表达率为 3 5 3 % (6/ 17) ,2例MDM 2表达阳性出现在野生型卵巢癌细胞株。②在卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MDM 2的阳性表达率分别为 :2 0 % (2 / 10 )、2 5 % (2 / 8)和 2 5 % (5 / 2 0 ) ;p5 3的阳性表达率分别为 2 0 % (2 / 10 )、3 7 5 % (3 / 8)和 60 % (12 / 2 0 )。 3组中 ,MDM 2阳性表达率无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而 p5 3在卵巢癌中的阳性表达率显著高于卵巢良性上皮性肿瘤和交界性上皮性肿瘤 (P <0 0 5 )。结论　p5 3的异常表达与卵巢肿瘤的恶性表型相关。在卵巢癌的发生发展过程中 ,p5 3的异常表达比MDM 2更有意义。MDM 2表达阳性可能在无 p5 3基因突变的卵巢癌细胞发生、发展过程中起一定作用     

非小细胞肺癌组织COX-2和生存素的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中环氧化酶-2（COX-2）和生存素（survivin）的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法,检测65例NSCLC中COX-2和survivin表达,结合临床病理指标及随访资料进行研究分析。结果在NSCLC中COX-2和survivin表达阳性率分别为70．8％（45／65）和66．2％（43／65）。COX-2和survivin表达均与NSCLC的PTNM分期、病理分级、淋巴结转移和病人预后有关（χ^2=4．32～9．35,P〈0．05）。NSCLC组织中COX-2表达与survivin表达呈明显正相关（r=0．41,P〈0．05）。结论NSCLC组织中COX-2与survivin表达密切相关,两者均可作为预测肺癌转移和评估病人预后的参考指标。     

乳腺癌组织中雌激素受体与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1表达

目的观察乳腺癌组织中雌激素受体(ER)与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1(P-gp)蛋白表达并探讨其相互关系。方法用免疫组织化学法(S-P法)对162例乳腺癌手术切除标本进行ER、C-erbB-2、MDR1(P-gp)检测,结果作统计学分析。结果ER、C-erbB-2、MDR1(P-gp)的阳性表达率各为53.7%、37.0%和27.7%。ER在分化越高和无腋窝淋巴结转移者的乳腺癌中其阳性表达率高,C-erbB-2在分化越差的乳腺癌中其阳性表达率高,组间相比有显著差异(P<0.05)。在有腋窝淋巴结转移的乳腺癌中C-erbB-2、MDR1(P-gp)表达率明显升高。C-erbB-2与MDR1(P-gp)的阳性表达率间具有一定的正相关性,C-erbB-2表达与ER表达呈负相关。结论ER、C-erbB-2基因、MDR1(P-gp)在乳腺癌中有一定的内在联系,联合检测有助于乳腺癌预后的判断,为合理制定综合治疗方案提供依据。     

纤维支气管镜局部化疗加微波治疗晚期中央型肺癌疗效探讨

目的 :探讨应用纤维支气管镜 (纤支镜 )介入微波并局部注药治疗晚期中央型肺癌疗效。方法 :将 42例晚期中央型肺癌患者随机分为治疗组和对照组 ;治疗组 2 2例采用纤支镜介入微波并局部注药 ,对照组 2 0例只进行局部注药。结果 :2 2例治疗组平均药物注射 3 .3次 ,微波平均治疗 3 .5次 ,症状改善率 90 .9% ,KPS评分提高者 95 .5 % ,纤支镜下病灶好转率 81 .8% ,胸部CT及X线改变示肺不张或阻塞性肺炎好转率 77.2 % ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1 )。结论 :该疗法效果明显优于单纯局部药物注射组 ,能缓解晚期中央型肺癌患者的呼吸困难 ,解除阻塞 ,明显提高患者的生活质量     

突变型与野生型c—myc在非p53依赖性通路中对Bim基因表达的影响

目的探讨突变型与野生型c-myc基因在非p53依赖性通路中对Bim基因表达调控及细胞凋亡的诱导功能。方法分别用携带突变型与野生型c-myc基因慢病毒载体感染p53缺失型乳癌HCCl937细胞,并得到二者过表达的稳定细胞株,以未感染组及感染不携带cmyc基因的慢病毒细胞做空白对照和感染对照,RT-PCR检测突变型与野生型c-myc及Bim基因mRNA表达,MTT、TUNEL检测突变型与野生型c-myc基因过表达乳癌HCCl937细胞增殖与凋亡情况。结果RT-PCR结果显示,突变型组与野生型组cmyc基因mRNA过表达,野生型组Bim基因mRNA表达量与突变型组比较,差异有显著性（F=125．191、157．974,P％0．05）。突变型组细胞增殖活性显著高于野生型组（F=769,64,P％0．05）。突变型组与两对照组细胞凋亡率较低,三者相比差异无显著性,野生型组细胞凋亡率显著高于突变型组与两对照组（F=61．57,P％0．05）。结论非p53依赖性通路中,野生型c-myc基因过表达能明显上调Bim基因表达,通过Bim诱导细胞凋亡,而突蛮后此作用丧失,致瘤件增高。     

Activation of p53 signalling in acetylsalicylic acid-induced apoptosis in OC2 human oral cancer cells

BACKGROUND: Nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) such as acetylsalicylic acid (ASA, aspirin) are well known chemotherapeutic agents of cancers; however, the signalling molecules involved remain unclear. The aim of this study was to investigate the possible existence of a putative p53-dependent pathway underlying the ASA-induced apoptosis in OC2 cells, a human oral cancer cell line. MATERIALS AND METHODS: The methyl tetrazolium (MTT) assay was employed to quantify differences in cell viability. DNA ladder formation on agarose electrophoresis was used as apoptosis assay. The expression levels of several master regulatory molecules controlling various signal pathways were monitored using the immunoblotting techniques. Flow cytometry was used to confirm the effect of ASA on cell cycle. Patterns of changes in expression were scanned and analyzed using the NIH image 1.56 software (NIH, Bethesda, MD, USA). All the data were analyzed by ANOVA. RESULTS: Acetylsalicylic acid reduced cell viability and presence of internucleosomal DNA fragmentation. In the meanwhile, phosphorylation of p53 at serine 15, accumulation of p53 and increased the expression of its downstream target genes, p21 and Bax induced by ASA. The expression of cyclooxygenase-2 was suppressed. Disruption of p53-murine double minute-2 (MDM2) complex formation resulted in increasing the expression of MDM2 60-kDa cleavage fragment. Inhibited the activation of p42/p44 mitogen-activated protein kinase (MAPK) by PD98059, a specific inhibitor of extracellular regulatory kinase (ERK), significantly decreased cell viability and enhanced the expression of p53 induced by ASA. The result of the cell-cycle analysis showed that ASA and PD98059 induced the cell cycle arrested at the G0/G1 phase and resulted in apoptosis. CONCLUSION: Nonsteroidal anti-inflammatory drug-inhibited cyclooxygenase is not the only or even the most important mechanism of inhibition. Our study presents evidences that activation of p53 signalling involved in apoptosis induced by ASA. Furthermore, the apoptotic effect was enhanced by blocking the activation of p42/p44 MAPK in response to treatment with ASA, thus indicating a negative role for p42/p44 MAPK.     

NSCLC术后病人外周血MUC1 mRNA和CK19 mRNA表达及其意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）术后外周血微转移的基因诊断方法，并分析黏蛋白1（MUC1）mRNA、角蛋白19（CK19）mRNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR），对60例NSCLC病人（肺癌组）的外周血MUC1 mRNA、CK19 mRNA表达情况进行检测；以10例肺良性病变病人及15例健康人的外周血标本作对照。结果肺癌组外周血MUC1 mRNA阳性表达21例（35%），CK19 mRNA阳性表达18例（30％）；对照组MUC1 mRNA和CK19 mRNA表达均为阴性，两组比较差异均有显著性（x^2=7．292、5．921，P〈0．01、0．05）。结论MUC1、CK19基因均可作为RT—PCR法检测NSCLC病人淋巴结微转移的分子标志物，两者联合检测可能有助于肺癌转移早期诊断。