自体树突状细胞体外增强肿瘤患者引流淋巴结细胞抗肿瘤活性的作用

目的：探讨自体树突状细胞(DC)体外对胃腺癌患者肿瘤引流区)细胞抗肿瘤活性的增强作用。方法：分离肿瘤患者的外周血单个核细胞(PBMC)经IL-4、GM-CSF和TNF-α诱导其成熟，并以自体肿瘤冻融抗原预致敏，诱导其中的DC。另外，分离胃癌患者的TDLN细胞，在含有IL-2的培养体系中培养，并将TDLN细胞分为3组：(1)第1组为肿瘤抗原致敏的DC加TDLN细胞(D组)；(2)第2组为冻融的肿瘤抗原加TDLN细胞(Ag组)；(3)第3组不加DC及肿瘤抗原作为对照组(L组)。比较3组TDLN细胞对胃腺癌细胞系KATO3和黑色素瘤细胞系A375的杀伤作用。结果：D组对KATO3细胞系的杀伤作用明显优于Ag组与L组；而对A375细胞，各组细胞的杀伤作用没有明显差异。结论：自体DC可明显增强胃癌患者TDLN细胞的杀伤作用。     

两种白血病细胞抗原负载DC的体外诱导特异性CTL应答的比较

目的: 比较树突状细胞 (DC)与白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC两种白血病DC疫苗诱导抗原特异性CTL应答的能力。方法: 采用羟乙基淀粉 Ficoll两步法分离外周血单个核细胞(PBMC), 通过贴壁 2h获得黏附的单核细胞, 用GM- CSF加IL- 4诱导培养 5d收获细胞。将细胞分为 4组: A组将K562细胞或原代慢性粒细胞白血病(CML)细胞在 500g/LPEG 100mL/LDMSO诱导下与DC融合; B组加入相应细胞数量的白血病细胞冻融抗原; C组将K562细胞或CML细胞与DC共培养; D组: 单独DC培养组。融合前以红色荧光染料PKH26标记K562细胞, 采用流式细胞仪(FCM)检测PKH26 /FITC 抗HLA ABC抗体双标细胞并评估融合率。培养的第 6天, 加入TNF -α诱导DC成熟, 然后分别与自体T细胞共培养, 用MTT比色法检测各组CTL对靶细胞的杀伤活性。结果: GM- CSF加IL -4和TNF- α依次诱导成熟的DC具有经典的DC的形态和表型特征, 在PEG -DMSO的介导下, DC与白血病细胞的融合率为 ( 17. 33 ~29. 94 )%。两种抗原负载方案激活的CTL均对表达K562抗原的细胞具有特异性的细胞毒作用。在效靶比相同时, 融合组诱导CTL的杀伤活性强于冻融抗原致敏DC组。结论: 与冻融抗原致敏的DC相比, DC与白血病细胞融合细胞递呈抗原的效率更高, 体外诱导的CTL特异性杀伤靶     

树突状细胞体外诱导抗肿瘤血管内皮细胞特异性免疫的研究

目的:探讨肿瘤内皮细胞抗原负载的树突状细胞(DC)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤效应。方法:采用肿瘤细胞的培养上清诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖,制备肿瘤血管衍生的内皮细胞(TdEC)。用RTPCR检测肿瘤内皮标志物(TEM)的表达。制备TdEC的冻融抗原,负载从外周血中扩增的DC,用MTS比色法检测DC刺激自体淋巴细胞增殖的效应;用LDH法检测DC诱导的CTL的特异性杀伤效应。结果:TdEC可表达TEM1和TEM8。负载TdEC抗原的DC,可显著刺激自体淋巴细胞增殖。由其诱导的CTL对TdEC具有特异性的杀伤作用。在效靶比为20∶1和10∶1时,杀伤率分别为33%和27%,高于对照组的14%和10%。结论:TdEC抗原负载的DC,在体外可有效地诱导CTL产生,并特异性地杀伤TdEC。     

自身骨髓瘤抗原致敏树突细胞介导特异性CTL反应的研究

目的：研究多发性骨髓瘤(MM)患者肿瘤冻融物致敏的树突细胞(DC)能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应。方法：用MM患者骨髓CD34^ 细胞诱生DC。将MM患者骨髓瘤冻融物冲击致敏DC。MTT法检测骨髓瘤抗原致敏及非致敏DC诱导的自身T细胞对不同靶细胞(患者骨髓瘤细胞、K562细胞)的杀伤率。结果：骨髓瘤冻融物致敏DC诱导的自身T细胞对患者骨髓瘤细胞的杀伤远大于对K562细胞的杀伤。结论：患者骨髓瘤冻融物致敏的DC能有效诱导自身T细胞特异性抗瘤免疫。     

WT1多肽致敏树突状细胞诱导杀伤K562细胞实验研究

目的：研究来自健康人外周血单个核细胞的树突状细胞（DC）负载WT1多肽抗原，体外诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对K562细胞的杀伤作用。 方法： 应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4（rhIL-4）、重组人肿瘤坏死因子α（TNF-α）等细胞因子，自外周血单个核细胞诱导扩增，培养出DC，使DC负载WT1多肽抗原。实验分3组，WT1多肽致敏DC为实验组A，未致敏DC为实验组B，单纯自体淋巴细胞未加DC激活为对照组C，观察CTL对K562细胞的杀伤作用。 结果： 培养出具有典型特征的DC，体外能诱导强烈的同种异体混合淋巴细胞增殖反应。在效靶比为20∶1时，实验组A诱导的CTL对K562细胞的杀伤率为86.1%±26.8%；实验组B为47.1%±20.8%；对照组C为27.7%±15.3% (P＜0.05)。 结论： WT1多肽抗原致敏DC能促使CD8阳性淋巴细胞扩增，并诱导激活特异性CTL，对K562靶细胞具有明显的杀伤作用。     

不同刺激诱导肺癌患者引流淋巴结细胞抗自体肿瘤的体外研究

目的：探索适合于临床大规模应用的有效刺激、活化肿瘤引流淋巴结（Tumor-draining lymph node，TDLN）细胞的方法。方法：对3种刺激剂（IL-2、IL-2＋自身肺癌细胞抗原和IL-2＋GM-CSF＋IL-4＋自身肺癌细胞抗原）诱导TDLN细胞体外抗自体肿瘤作用，通过乳酸脱氢酶法测定了CTL杀伤活性，观察了细胞形态学变化，通过流式细胞技术测定了细胞CD83的阳性表达率。结果：经MTT法检测，IL-2＋GM-CSF＋IL-4＋自身肺癌细胞抗原诱导的TDLN细胞的增殖程度明显高于IL-2＋自身肺癌细胞抗原刺激组和IL-2刺激组（P〈0．01）。IL-2＋GM-CSF＋IL-4＋自身肺癌细胞抗原诱导的肿瘤特异性CTL活性明显高于IL-2＋自身肺癌细胞抗原刺激组和IL-2刺激组，CD83阳性表达细胞率也明显高于IL-2＋自身肺癌细胞抗原刺激组和IL-2刺激组。结论：用IL-2＋GM-CSF＋IL-4＋自身肺癌细胞抗原刺激和活化TDLN，优于单独用IL-2刺激或IL-2＋自身肺癌细胞抗原刺激，该作用可能与其诱导TDLN细胞产生DC数量的增加有关。     

负载乳腺癌细胞冻融抗原的DC对CTL体外特异性杀伤活性的影响

目的：研究乳腺癌患者腋下淋巴结单个核细胞来源的DC,经自体肿瘤细胞冻融抗原刺激后,对CTL体外特异性杀伤活性的影响。方法：以细胞因子分别诱导、培养乳腺癌腋下淋巴结单个核细胞中的DC及TDLNC,用自体癌细胞冻融抗原刺激DC,并和TDLNC共培养,诱导成为肿瘤抗原特异性CTL;检测特异性CTL对自体乳腺癌细胞及MCF-7细胞的体外杀伤活性。结果：DC-Ag-TDLNC、DC-TDLNC和TDLNC对自体乳腺癌细胞的杀伤率分别为67.64%、31.25%和26.36%,P〈0.001;三种TDLNC细胞对MCF-7细胞的杀伤率无明显差异（P〉0.05）。结论：乳腺癌患者腋下引流淋巴结中的单个核细胞在细胞因子的诱导、活化及自体肿瘤抗原刺激下,可分化为成熟DC,DC可促进TDLNC增殖、分化为特异性CTL,后者对自体肿瘤细胞有较高的杀伤活性。     

冻融抗原负载树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞特异性杀伤急性白血病细胞的实验研究

我们应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 ) ,基因重组人粒 /单细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)联合培养体系自健康志愿者骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载急性髓系白血病 (AML)细胞冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,观察负载AML细胞冻融抗原后DC的状态对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对AML细胞特异性杀伤活性。我们发现负载AML冻融抗原后DC的CD1a、CD83、CD86、CD11C、HLA DR表达率为较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,且负载AML冻融抗原的DC诱导的CTL中CD3 CD8 T细胞比例 ,较诱导前明显增高 (P <0 .0 1) ,而负载AML细胞冻融抗原的DC诱导CTL对AML细胞有较强的杀伤作用 ,明显强于加或不加IL 2培养的T细胞对照组 (P <0 .0 1) ,而对K5 6 2细胞无明显的杀伤活性。通过以上实验我们认为经rhGM CSF ,rhIL 4培养产生的DC为CD14CD1a DC ,能诱导CTL对AML细胞产生明显的特异性杀伤作用 ,另外 ,负载AML细胞冻融抗原DC诱导的CTL中CD3 CD8 T细胞比例明显增高 ,提示CD8 T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。     

转染自体胃癌细胞总RNA的树突状细胞诱导个体化免疫治疗的体外实验

目的探讨转染自体胃癌细胞总RNA的树突状细胞(DC)体外介导抗胃癌的免疫效应。方法制备短期培养的原代胃癌细胞。用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α体外诱导胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中DC的发育和成熟,并转染自体肿瘤细胞总RNA,激活自体T细胞产生CTL,用CCK-8试剂盒检测CTL的杀伤活性。应用流式细胞术及混合淋巴细胞培养技术检测DC的免疫功能状态。用ELISA法测定IL-12和INF-γ的水平。结果转染自体肿瘤细胞总RNA的成熟DC,不仅可高表达MHC-I、II类分子及CD80、CD83和CD86协同刺激分子,并可获得高效刺激自体或异体T细胞增殖的能力。转染RNA的成熟DC,分泌IL-12的水平及其刺激产生的CTL培养上清液中INF-γ的水平显著高于单纯成熟DC及未成熟DC;且CTL对自体胃癌细胞的杀伤率显著高于异体组。结论转染自体胃癌细胞总RNA的成熟DC能够体外诱导产生对自体肿瘤细胞具有高度抗原特异性杀伤活性的CTL。     

超抗原SEB和SEC诱导的树突状细胞对T细胞的影响

目的：阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B（SEB）和葡萄球菌肠毒素C（SEC）诱导树突状细胞(dendritic cells，DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。 方法： 以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞，免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白；流式细胞术检测DC表达I-Eκ和CD80分子水平，检测T细胞受刺激后CD69的表达、IL-2和TNF-α的生成；用MTT法检测T细胞增殖及其对HcaF细胞的杀伤效应。 结果： 体外试验表明，DC高表达S-100蛋白，SEB或SEC诱导的DC高表达I-Eκ和CD80分子；SEB或SEC能诱导DC促进T细胞活化，其浓度以100 μg/L时作用最强；SEB或SEC能诱导DC促进T细胞增殖、大量分泌IL-2和TNF-α, 被激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤率高达83.2%±12.8%，明显优于肿瘤抗原诱导的DC所激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤作用；SEB与SEC的诱导作用无明显差异。 结论： 超抗原SEB或SEC能诱导DC显著增强T细胞活化、增殖、分泌和杀伤肿瘤细胞，并优于肿瘤抗原的诱导作用，SEB和SEC的作用相似，为超抗原SEB或SEC与DC联合应用于临床肿瘤的治疗提供了证据。     

人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞

目的：探讨树突状细胞—肿瘤细胞融合细胞的形态特性，为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法：将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合，瑞氏—姬姆萨染色观察；扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果：树突状细胞与MCF细胞按10：1比例融合后，一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合；扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起，树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论：树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。     

小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合的研究

目的 使肺癌细胞表达共刺激分子,探讨其作为疫苗的可能性。方法 小鼠骨髓细胞在体外经GM－CSF和TNF－α诱导,使之成为成熟树突状细胞（BmDC)。将其与小鼠Lewis肺癌细胞AL9901融合,并以S－P免疫细胞化学染色法检测融合细胞和BmDC上有关分子的表达。结果 通过GM－CSF和TNF－α诱导获得BmDC,以诱导5d时收获为佳。获得的BmDC能高表达B7－1和CD40分子,与肺癌细胞融合后,获得的融合细胞仍能高表达B7－1和CD40分子。结论 通过将小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合,使肺癌细胞获得了BmDC表达的B7－1和CD40分子,从而提高了其免疫原性,为制备肺癌疫苗奠定了基础。     

人脐血单个核细胞向神经细胞分化

目的：观察培养前后人脐血单个核细胞(MNCs)的形态学及免疫反应性变化,探讨其能否向神经细胞的分化及机制。方法：密度梯度离心脐血中单个核细胞,接种并用。EGF和bFGF刺激细胞生长,倒置显微镜下观察培养前后细胞形态变化,并行免疫细胞化学鉴定。结果：培养前脐血MNCs胞体小呈圆形,nestin阳性细胞、AP2阳性细胞散在分布(阳性率为1．5％和3．4％)无GFAP阳性细胞着色。培养14d后,细胞群中相邻细胞突起连成网状;AP2、GFAP染色阳性细胞成片状分布(阳性率33．5％和24．6％),未见nestin阳性细胞。结论：脐血细胞中可能有多能干细胞,经体外培养后能分化为具有一定形态的神经细胞。     

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨人羊膜上皮细胞(h AECs)上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组,其中对照组不加h AECs上清液,其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的h AECs上清液作用24 h后,通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 h AECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡(P0.05);25%和50%h AECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组(P0.05)。结论 h AECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。     

Diversity of tissue-resident NK cells

Although natural killer (NK) cells were initially named for their spontaneous tumor-killing capacity, their concept has been greatly expanded with more than 40 years of extensive investigation. Currently, NK cells are known as a heterogeneous population of innate lymphoid cell (ILC) family, consisting of different subsets with unique phenotypic and functional features. Recent studies have shown that tissue-resident NK (trNK) cells, which are distinct from conventional NK (cNK) cells, preferentially distribute in non-lymphoid tissues, such as the liver, uterus, salivary gland, and adipose. In this review, we provide a comprehensive overview of the current knowledge about the phenotype, function and development of trNK cells across different tissues and describe the similarities and differences between diverse trNK cells and cNK cells, with a particular focus on the tissue-specific characteristics of different trNK cells.     

组织工程中的新型种子细胞--胚胎干细胞

种子细胞的老化是组织工程中的一大难题.胚胎干细胞因其具有全能性和无限增殖的能力而有望成为组织工程中的种子细胞新来源.本文介绍了胚胎干细胞的建系和分化研究,并展望胚胎干细胞作为组织工程的种子细胞的前景和面临的困难.     

A new fate for old cells: brush cells and related elements

Over the past 50 years, hundreds of studies have described those cells that are characterized by a brush of rigid apical microvilli with long rootlets, and which are found in the digestive and respiratory apparatuses. These cells have been given names such as brush cells, tuft cells, fibrillovesicular cells, multivesicular cells and caveolated cells. More recently, it has been realized that all these elements may represent a single cell type, probably with a chemosensory role, even if other functions (e.g. secretory or absorptive) seem to be possible. Very recent developments have permitted a partial definition of the chemical code characterizing these elements, revealing the presence of molecules involved in chemoreceptorial cell signalling. A molecular cascade, similar to those characterizing the gustatory epithelium, seems to be present in these elements. These new data suggest that these elements can be considered solitary chemosensory cells with the presence of the apical 'brush' as an inconsistent feature. They seem to comprise a diffuse chemosensory system that covers large areas (probably the whole digestive and respiratory apparatuses) with analogies to chemosensory systems described in aquatic vertebrates.     

小鼠睾丸支持细胞对大脑皮质细胞的体外营养作用

目的通过观察睾丸支持细胞(SCs)对大脑皮质细胞体外的营养作用,探讨移植的SCs在体内对神经组织营养作用的方式。方法将原代分离的小鼠大脑皮质细胞单独培养(对照组)或与小鼠SCs共培养(实验组),比较两组中神经元、神经干细胞(NSC)及神经胶质细胞的生长情况。结果实验组的神经元数及其突起数、神经元特异性烯醇化酶光密度(P<0.01)和神经胶质细胞数均较对照组高,两组各时期的神经元胞体面积也不相同(P<0.05),实验组于第3天出现NSC的集落形成。结论SCs在体外对大脑皮质的神经元、NSC和神经胶质细胞均有较强的营养作用,在中枢神经系统疾病的细胞移植治疗中将具有很大的应用价值。     

胚胎干细胞来源的巢蛋白阳性细胞向胰岛素分泌细胞分化的实验研究

目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的诱导，为糖尿病患者实施细胞移植治疗建立基础。方法将胚胎干细胞（ESC）在成纤维细胞（MEF）饲养层上扩增后脱离饲养层，让ESC自发分化成拟胚体（EB），再将EB诱导为巢蛋白（nestin）阳性的神经前体细胞（NPC），最后将NPC诱导成胰岛素分泌细胞（IPC）。结果ESC在MEF饲养层上扩增4d后，在悬浮培养状态下自发分化为EB。将EB在NPC选择性培养基中做贴壁培养后，ESC先分化为上皮样细胞，再分化为神经细胞样细胞。经过nestin免疫组化检测，在经过NPC培养基诱导4d的细胞，nestin阳性细胞占86．5％。nestin阳性细胞在IPC选择性培养基中诱导5～6d后，可分化成胰岛素分泌细胞。结论ESC来源的nestin阳性细胞既可以分化为NPC，也可以分化为IPC。     

Hepatic progenitor cells, stem cells, and AFP expression in models of liver injury

Adult hepatocytes and liver-cell progenitors play a role in restoring liver tissue after injury. For the study of progenitor cells in liver repair, experimental models included (a) surgical removal of liver tissue by partial hepatectomy; (b) acute injury by carbontetrachloride; (c) acute injury by d-galactosamine (GalN) and N-nitrosomorpholine (NNM); and (d) chemical hepatocarcinogenesis by feeding NNM in low and high doses. Serological and immunohistological detection of alpha-fetoprotein gene expression served to follow pathways of cellular differentiation. Stem cells were not required in models of surgical removal of parenchyma and in carbon tetrachloride intoxication of adult hepatocytes. In contrast, regeneration of liver occurred through biliary epithelial cells in injuries induced by GalN and NNM. These biliary epithelial cells, collectively called oval cells, are most probably derived from the canals of Hering. Proliferating bile duct cells reached a level of differentiation with reactivation of foetal genes and significant alpha-1-fetoprotein (AFP) synthesis signalling a certain degree of retrodifferentiation with potential stemness. Due to the same embryonic origin of bile ducts and hepatocytes, biliary epithelium and its proliferating progeny (oval cells) have a defined role in liver regeneration as a transit and amplification compartment. In their early proliferation stage, oval cells were heavily engaged in DNA synthesis ([3H]thymidine labelling). Pulse-chase experiments during experimental hepatocarcinogenesis exhibited their development into hepatocytes with high risk for transformation and leading to foci of altered hepatocytes. Hepatocellular carcinomas may arise either from proliferating/differentiating oval cells or from adult hepatocytes; both cell types have stem-like properties. AFP-positive and AFP-negative carcinomas occurred in the same liver. They may represent random clonal origin. The heterogeneity of phenotypic marker (AFP) correlated with a process of retrodifferentiation.