吉非替尼通过调控hPTTG1表达抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡的机制研究

目的：吉非替尼和人垂体瘤转化基因1（hPTTG1）对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法：以不同浓度吉非替尼干预A2780细胞,MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪、qRT-PCR和Western blot实验检测20 μmol·L^-1吉非替尼对A2780细胞凋亡及细胞中hPTTG1表达的影响。敲减hPTTG1或过表达hPTTG1联合20 μmol·L^-1吉非替尼处理,qRT-PCR和Western blot、MTT和流式细胞术检测细胞中hPTTG1表达及细胞增殖、凋亡情况变化。结果：吉非替尼能够有效抑制A2780细胞增殖（P<0.05）,呈浓度依赖性。以20 μmol·L^-1吉非替尼干预A2780细胞,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中hPTTG1在mRNA和蛋白水平的表达显著下调（P<0.05）。将hPTTG1 siRNA转染至A2780细胞后,细胞hPTTG1表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖抑制率和凋亡率增大（P<0.05）;过表达hPTTG1可减弱吉非替尼对A2780细胞增殖的抑制及凋亡的促进作用。结论：吉非替尼可抑制A2780细胞增殖并诱导凋亡,这一结果可能是通过抑制hPTTG1表达来完成。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人脐带动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 考察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对体外培养的人脐带动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的抑制作用及作用机制,为临床治疗相关的心血管疾病提供参考。方法: 组织块贴壁法原代培养HUASMCs,选传至3代的细胞进行免疫组织化学染色法鉴定;MTT比色法,测定EGCG(109.08 μmol·L^-1)在不同作用时间(3~96 h)和不同作用浓度(1.09~1 090.75 μmol·L^-1)下对HUASMCs增殖的抑制作用;RT-PCR法,测定EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs表达IL-6 mRNA的影响;ELISA法,测定EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs分泌IL-6水平的影响。结果: EGCG在各个检测时间点均可抑制体外培养HUASMCs的增殖(P<0.01),3~48 h抑制作用随作用时间延长而增加,48 h增殖抑制最强,72 h,96 h与48 h增殖抑制作用相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EGCG各浓度对HUASMCs体外增殖均有抑制作用(P<0.05或P<0.01),EGCG呈剂量依赖性,IC₅₀为413.39 μmol·L^-1。EGCG(21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs表达IL-6 mRNA有抑制作用(P<0.01)。EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)可抑制HUASMCs分泌IL-6(P<0.05)。结论: EGCG对HUASMCs的体外增殖有抑制作用。EGCG可抑制HUASMCs IL-6 mRNA的表达和IL-6因子的分泌。     

吉西他滨诱导神经胶质瘤细胞凋亡及其对促凋亡因子Bax/Bak的影响

目的:研究抗癌药物吉西他滨(Gemcitabine, Gem)对人神经胶质瘤U87细胞的凋亡以及其对促凋亡因子Bax/Bak的影响。方法:MTT法检测0(对照组)、0.5,1,5,10μmol·L^-1的Gem对U87细胞增殖的影响以及5μmol·L^-1 Gem处理U87细胞12,24,36,48 h后的细胞活性。细胞核特异性染料DAPI核染后共聚焦显微镜下观察Gem处理的U87细胞核型的变化。流式细胞仪结合染色和免疫荧光技术检测细胞的凋亡情况、细胞周期分布以及Bax/Bak活化情况。Western blot检测shRNA基因沉默前后Gem引起的细胞内Bax/Bak蛋白的表达情况。MTT法检测沉默Bax/Bak后Gem对U87细胞活力的影响。结果:Gem对U87细胞活性的影响具有显著的浓度和时间依赖性。5μmol·L^-1的Gem处理细胞12,24,36,48 h后细胞活力分别(79±3.2)%、(41.2±2.6)%、(27.9±3.1)%、(20.4±1.7)%。Gem处理U87细胞后细胞核明显固缩并形成凋亡小体。Gem引起细胞凋亡,5μmol·L^-1Gem处理的细胞凋亡率为(45.9±2.6)%,显著高于对照组的(3.1±1.8)%。Gem能够显著将细胞阻滞在Sub-G1和S期(P<0.01),并明显引起细胞内Bak的活化而没有引起Bax的活化(P<0.01)。与对照组相比,5μmol·L^-1的Gem处理U87细胞后,沉默Bak基因很好的抑制了Bak蛋白的表达而没有抑制Bax蛋白的表达。最后发现,沉默Bak明显抑制了Gem对U87细胞的毒性(P<0.01),而沉默Bax相比Gem单独用药组没有明显变化。结论:Gem能够抑制U87细胞的增殖并引起细胞凋亡,在凋亡通路中引起细胞Sub-G1和S期的阻滞,并且导致细胞内Bak而非Bax的活化而促进凋亡。     

辣椒素受体-5在头孢曲松结石大鼠模型肾脏中的表达及其意义

目的：通过构建头孢曲松钠结石大鼠模型,探讨TRPV5（辣椒素受体-5）在结石模型组大鼠肾脏中和正常对照组大鼠肾脏中的表达差异,分析其表达量与头孢曲松钠应用时间的关系,为研究头孢曲松钠相关肾结石的发生机制提供新的理论依据。方法：30只雄性SD大鼠随机分为3组,A组给予120 mg·kg^-1·d^-1纯化水灌胃4周,B组、C组分别以120 mg·kg^-1·d^-1头孢曲松钠灌胃2周和4周;试剂盒检测各组血、尿生化指标;用相差显微镜观察各组结石结晶形成情况;采用免疫组化、双抗体夹心法分别定性、定量大鼠肾组织TRPV5的表达。结果：3组血钙浓度无统计学差异（P>0.05）,C组与A组、B组比较血肌酐明显升高[（96.29±21.81）μmol·L^-1 vs（34.72±10.49）μmol·L^-1、（59.98±20.45）μmol·L^-1,P<0.05],C组尿钙浓度相比较A组明显升高[（0.72±0.25）mmol·L^-1 vs（0.46±0.23）mmol·L^-1,P<0.01],C组与A组、B组比较尿肌酐降低[（2 488.28±435.75）μmol·L^-1 vs（3 463.57±221.76）μmol·L^-1、（2 971.37±319.27）μmol·L^-1,P<0.01]。光镜下C组可见有大量结石结晶形成。TRPV5在3组血液中表达无明显差异（P>0.05）,C组中TRPV5在肾脏中表达明显低于A组、B组[（217.79±48.31）ng·L^-1 vs（395.66±74.69）ng·L^-1、（343.08±74.08）ng·L^-1,P<0.01]。结论：TRPV5在头孢曲松钠干预4周组大鼠肾组织中的表达降低,表达量且与头孢曲松钠干预时间呈负相关,可能由于头孢曲松钠抑制了钙离子通道蛋白TRPV5在肾脏的表达,增加肾小管尿钙排泄从而参与了头孢曲松结石的形成。     

银胶菊内酯对人皮肤癌细胞HaCaT和A375凋亡机制的研究

目的：研究银胶菊内酯对人皮肤癌细胞HaCaT和A375凋亡的影响。方法：XTT法检测银胶菊内酯对HaCaT和A375细胞的增殖抑制作用;荧光染色法检测细胞形态学变化;ELISA法检测细胞DNA断裂影响;流式细胞仪检测细胞周期。结果：银胶菊内酯明显抑制HaCaT和A375细胞的增殖,IC₅₀值分别为1.45 μmol·L^-1和2.9 μmol·L^-1;银胶菊内酯处理过的细胞中出现核碎裂现象,而在对照组细胞中则无此现象;银胶菊内酯诱导HaCaT和A375细胞DNA断裂的长度分别为1.41 nm和0.38 nm,当用银胶菊内酯对HaCaT细胞处理24 h后,S期的细胞比例明显增加（P<0.05）;当用银胶菊内酯对A375细胞处理24 h后,G0~G1期的细胞比例明显增加（P<0.05）。结论：低浓度的银胶菊内酯能通过分别阻滞HaCaT和A375细胞的S期和G0~G1期诱导细胞凋亡。     

姜黄素与MMC联用对胃癌MGC-803细胞存活率和凋亡率的影响

目的:探索姜黄素与低剂量或中剂量化疗药丝裂霉素C(MMC)联用对胃癌MGC-803细胞存活率和凋亡率的影响,为临床上应用姜黄素作为胃癌化疗药MMC的增效剂,以减少MMC使用剂量、降低其毒副作用提供实验依据.方法:将姜黄素和MMC作用于体外培养的胃癌MGC-803细胞24 h,采用MTT方法检测药物作用对MGC-803细胞存活率的影响;应用基于FITC-Annexin V/PI双染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞凋亡的影响.结果:姜黄素(25 μmol·L^-1)与低剂量MMC(5.98 μmol·L^-1)联用组的细胞存活率显著低于中剂量MMC(11.96 μmol·L^-1)单用组(P <0.05);姜黄素与中剂量MMC(11.96 μmol·L^-1)联用组的细胞存活率小于高剂量MMC(23.92 μmol·L^-1)单用组,差异具有显著性(P <0.05).而姜黄素与低剂量MMC联用组的细胞凋亡率显著高于中剂量MMC单用组(P <0.05);姜黄素与中剂量MMC联用组的凋亡率显著大于高剂量MMC单用组(P <0.05).结论:姜黄素与与较低剂量MMC联用对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用显著大于较高剂量MMC单独作用的效果,姜黄素对MMC抗胃癌细胞的作用具有增强效应.     

水飞蓟宾胶囊对行肝切除术后患者肝脏保护作用的临床评价

目的：研究水飞蓟宾对行肝切除术后患者的肝脏临床保护作用。方法：对某院行肝切除术的患者随机分为观察组和对照组,其中观察组患者于实验前一个星期给予水飞蓟宾胶囊,术后静脉滴注还原型谷胱甘肽和异甘草酸镁注射液治疗,对照组患者仅于术后静脉滴注还原型谷胱甘肽和异甘草酸镁注射液治疗,术后7 d内观察记录患者的肝衰竭和肝功能不足发生情况,于术前及术后1,3,5 d和7 d,测定患者血清中总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平,评估水飞蓟宾胶囊对术后患者肝脏保护作用。结果：观察组肝衰竭和肝功能不足发生率显著低于对照组（χ²=6.202,P=0.013< 0.05;χ²=4.579,P=0.032< 0.05）;术后1 d,观察组的ALT水平为（287.5±115.8）U·L^-1,AST水平为（215.7±121.4）U·L^-1,TBIL水平为（23.3±9.7）μmol·L^-1,DBIL水平为（8.6±5.1）μmol·L^-1,对照组的ALT（387.5±156.9）U·L^-1,AST水平为（316.8±176.4）U·L^-1,TBIL水平为（27.4±10.3）μmol·L^-1,DBIL水平为（13.2±5.3）μmol·L^-1,2组相比,差异有统计学意义（P< 0.05）。术后7 d,观察组患者的ALT水平为（41.4±11.5）U·L^-1,AST水平为（31.9±6.3）U·L^-1,TBIL水平为（5.5±5.4）μmol·L^-1,DBIL水平为（4.2±3.4）μmol·L^-1,对照组患者的ALT水平为（114.7±35.2）U·L^-1,AST水平为（98.5±13.7）U·L^-1,TBIL水平为（14.3±5.8）μmol·L^-1,DBIL水平为（7.2±3.5）μmol·L^-1,2组相比,差异有统计学意义（P< 0.05）。结论：术前应用水飞蓟宾胶囊,可有效减轻手术对肝功能的影响;术后应用水飞蓟宾胶囊治疗,可以显著恢复患者肝功能。     

莱菔硫烷促进KG1a细胞凋亡及其作用机制

目的：研究莱菔硫烷对急性髓系白血病细胞株KG1a细胞凋亡的影响及作用机制。方法：利用细胞增殖实验CCK-8试剂盒检测SFN对KG1a细胞增殖的抑制作用,利用流式细胞术检测SFN对KG1a细胞早期凋亡率的影响,进一步利用PCR、Western-blot技术研究SFN对KG1a细胞Bax和bcl2 mRNA和蛋白水平表达的影响。结果：（1）SFN可抑制KG1a细胞的增殖,且随SFN浓度增加和作用时间延长抑制率增加;（2）在0,4,8,12 μmol·L^-1SFN作用KG1a细胞后,其早期凋亡率呈浓度依赖性增加,早期凋亡率分别为0,3.12%,13.33%,28.18%;（3）SFN可增加KG1a细胞的Bax的mRNA和蛋白的表达,与对照组（0 μmol·L^-1浓度组）存在统计学差异（P<0.05）。SFN可降低bcl2 mRNA和蛋白表达水平,12 μmol·L^-1SFN浓度组的蛋白表达与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：SFN可通过调控Bax和bcl2基因促进KG1a细胞凋亡,抑制KG1a细胞增殖。     

橙皮苷对TGF-β1诱导的A549非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的影响

目的：探讨橙皮苷对转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的人非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化的影响。方法：以A549人非小细胞肺癌细胞系作为研究对象。用MTT法,分别检测橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激下细胞增殖的影响。应用2种方法评估橙皮苷对TGF-β1刺激条件下A549细胞的上皮间质转化：圆形度值定量评估细胞的形态变化;双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA）检测上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）、ɑ-平滑肌肌动蛋白（ɑ-smooth muscle actin,ɑ-SMA）、基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1）和基质金属蛋白酶-9（metallopreoteinases-9,MMP-9）水平。结果：0~40 μmol·L^-1的橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激后A549细胞的增殖没有显著影响。5 ng·mL^-1 TGF-β1能够诱导A549细胞的上皮间质转化：由上皮特征的铺路石状的细胞形态转化为梭形形态,圆形度值减少;E-cad分泌量减少和ɑ-SMA合成量增加。另外,MMP-9分泌量增加,MMP-9/TIMP-1比值增加。在细胞出现形态改变后,应用橙皮苷（20 μmol·L^-1或40 μmol·L^-1）能够降低ɑ-SMA、MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值,增加E-cad水平,对细胞的圆形度值没有影响。结论：橙皮苷减轻TGF-β1诱导的非小细胞肺癌细胞的上皮间质转化程度,对非小细胞肺癌的转移和扩散有一定的抑制作用。     

醌茜素对人肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及初步机制研究

<正>醌茜素是一种具有高效性、高选择性和细胞能透性的药物。虽然醌茜素能够有效抑制前列腺癌细胞的增殖~[1],但醌茜素对肺癌细胞的作用机制尚不清楚。本文研究了醌茜素对人肺癌A549细胞周期及细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。1材料与方法1.1材料3种人肺癌A549、NCI-H23、NCI-H460细胞株及     

Mdivi-1减轻异丙酚诱导的发育期神经元凋亡

目的： 探讨mdivi-1对异丙酚诱导胎鼠海马神经元凋亡的影响。方法： 原代培养孕16~18 d SD大鼠胎鼠海马神经元5 d,采用随机数字表法,将神经元随机分为5组（n=6）：对照组（C组）、异丙酚组（P组）和不同浓度mdivi-1组（M1~M3组,浓度分别为1,2.5,5 μmol·L^-1,P组加入异丙酚（终浓度为30 μmol·L^-1）孵育3 h,M1~3组给予异丙酚前4 h加入mdivi-1,使各组mdivi-1浓度分别为1、2.5和5 μmol·L^-1,C组加入等量生理盐水。检测发育期神经元活性和caspase3活性;Western blot法测定线粒体p-drp1（ser616）、Bax表达;采用实时定量PCR检测BDNF及Bcl-2 mRNA的表达。结果： 与C组相比,P组神经元活性降低（P<0.05）,Caspase3活性增加（P<0.05）;与P组比较,M1~M3组神经元活性增高（P<0.05）、Caspase3活性降低（P<0.05）;与M1组比较,M2-3组神经活性增高（P<0.05）、Caspase3活性降低（P<0.05）;M2与M3比较,神经元活性及Caspase3活性差异无显著性（P>0.05）,因此后续实验选择M2浓度处理,称为M组。与C组比较,P组线粒体p-drp1（ser616）及Bax表达升高（P<0.05）、BDNF和Bcl-2 mRNA表达下调（P<0.05）;与P组比较,M组线粒体p-drp1（ser616）及Bax表达降低（P<0.05）, BDNF和Bcl-2 mRNA表达下调（P<0.05）。结论： Mdivi-1通过减少p-drp1（ser616）和Bax向神经元移位,抑制线粒体过度分裂及降低线粒体通透性并且上调BDNF和Bcl-2,从而减轻异丙酚诱导发育期海马神经元凋亡。     

扁塑藤素调控Notch信号通路诱导人肺癌条件重编程细胞死亡的作用机制研究

目的：应用条件性重编程细胞（conditionally reprogrammed cells，CRCs）技术建立人肺癌细胞体外长期培养体系，研究扁塑藤素对人肺癌CRCs增殖和迁移能力的影响，并探讨相关作用机制。方法：免疫组化法检测Notch 1、HES1和Cyclin D3在肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平；使用CRCs技术分离培养非小细胞肺癌原代细胞；使用2，4，8，16 μmol·L^-1的扁塑藤素处理人肺癌CRCs，MTS法检测细胞活力，Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell法检测细胞迁移能力，Western Blot检测细胞中Notch信号通路相关蛋白Notch 1、HES1和Cyclin D3的表达水平。结果：在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中Notch 1、HES1和Cyclin D3的表达水平高于癌旁组织；扁塑藤素能够诱导人肺癌CRCs死亡，并在一定范围内呈现时间和浓度依赖性（P<0.05）；随着扁塑藤素作用浓度的增高，人肺癌CRCs凋亡率明显增高（P<0.05），细胞迁移能力下降（P<0.05）；扁塑藤素能够下调人肺癌CRCs中Notch 1、HES1和Cyclin D3的蛋白表达水平。结论：扁塑藤素可能通过调控Notch信号通路相关蛋白的表达水平，抑制人肺癌CRCs的增殖和迁移，并诱导其凋亡，为肺癌的治疗提供新的实验数据和理论依据。