角膜内皮细胞高压力损伤机制的实验研究

目的探讨青光眼急性高眼压对角膜内皮细胞的损伤机制。设计实验性研究。研究对象体外培养的角膜内皮细胞。方法采用后弹力层撕除联合酶消化法获取角膜内皮细胞,免疫组化法鉴定细胞。实验分两组：A组：急性压力增高组,压力为6．67kPa;B组：压力仿生培养,压力为2．0kPa。倒置显微镜定期观察细胞形态及生长规律;HE染色观察细胞形态结构变化;台盼兰一茜素红染色观察高压对细胞的损伤作用;流式细胞术分析细胞活性;免疫荧光检测细胞胞浆中细胞色素C（CytC）的表达。主要指标角膜内皮细胞形态结构、凋亡率及胞浆中CytC的表达。结果获取的细胞经免疫法证实为角膜内皮细胞表型。两组细胞分别培养24hr后,流式细胞术分析显示,高压力组的早、晚期细胞凋亡率分别为（16．40±0．95）％和（41．37±1．29）％;而正常压力组早、晚期细胞凋亡率分别为（1．07±0．40）％和（0．70±0．00）％,差异有统计学意义（P=0．000）。免疫荧光检测到高压力组角膜内皮细胞胞浆CytC呈阳性表达。结论高压力对角膜内皮细胞损伤呈时间敏感性,细胞的凋亡启动是其角膜内皮细胞损伤的机制之一。f眼科,2011,20：155-159）     

高压力培养下角膜内皮细胞凋亡的启动机制

目的 探讨高压力培养下角膜内皮细胞凋亡的启动机制.方法 原代兔角膜内皮细胞经免疫组织化学鉴定后,在50mmHg(1 kPa =7.5 mmHg)压力条件下,培养lh、2h、24 h,另设正常压力(15 mmHg)作为正常压力组,培养24 h.第一代兔角膜内皮细胞融合达70％～80％后,细胞在加压前lh分别使用浓度均为10-6 mol·L-l抗Caspase-8和抗Caspase-9预处理,然后置于压力装置中,压力设定为50 mmHg,培养24h后检测蛋白Bcl-2和P53表达,并且以无抑制剂处理的50 mmHg压力培养的细胞为对照组.各组培养的细胞均经Western blot检测Bcl-2和P53的表达.免疫荧光染色检测兔角膜内皮细胞胞浆细胞色素C的含量.结果 50 mmHg压力组角膜内皮细胞,加压lh、2h、24 h P53的表达量分别为0.651±0.007、0.805±0.006、0.839±0.011,较正常压力组(0.033±0.004)升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.01);50 mmHg压力组随着加压时间的延长,角膜内皮细胞中P53蛋白表达量逐渐增加,各时间两两比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).50 mmHg压力组中加压lh、2h、24 h Bcl-2的表达量分别为0.590±0.009、0.724±0.005、0.314±0.016,较正常压力组(0.081±0.013)反应性升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.01);50 mmHg压力组各时间两两比较差异均有统计学意义(均为P＜0.01).实验发现正常压力组培养24h后,细胞核呈蓝色,胞浆中无细胞色素C释放;50 mmHg压力组培养lh可见部分细胞胞浆呈红色,提示细胞色素C释放进入到胞浆内,随着加压时间延长荧光强度增加,加压24 h见胞浆内出现广泛红色强荧光.抗Caspase-9和抗Caspase-8预处理组的角膜内皮细胞P53表达量分别为0.535±0.007、0.703±0.010,较对照组(0.727±0.021)下调,差异均有统计学意义(均为P＜0.0I);抗Caspase-9和抗Caspase-8预处理组中Bcl-2的表达量呈抑制性下降,分别为0.312±0.003、0.442±0.011,较对照组(0.501±0.011)下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).抗Caspase-9预处理组的角膜内皮细胞P53和Bcl-2表达量较抗Caspase-8预处理组下降,差异亦均有统计学意义(均为P＜0.01),表明抗Caspase-9对高压下角膜内皮细胞凋亡的抑制作用更显著.结论 Caspase-9抑制剂可有效阻断高压力对角膜内皮细胞的促凋亡作用,高压力对角膜内皮细胞的损伤主要是触发了线粒体细胞色素C的释放,激活了Caspase-9参与的内源性酶联反应性凋亡途径.     

Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞的保护作用

目的:研究Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞的保护作用。方法:采用4℃湿房保存方法保存离体兔眼球,设立房水对照组、Optisol中期保存液房水置换组,每组10只眼球。于低温保存开始前、保存后24,48及72h检测角膜厚度、角膜内皮细胞密度及形态,保存后72h取下角膜行胎盘蓝-茜素红染色,检测角膜内皮细胞存活率。结果:4℃湿房保存开始前两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异没有统计学意义(P>0.05)。保存后24h两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异没有统计学意义(P>0.05);保存后48h及72h两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异有统计学意义(P<0.05)。保存后72h房水对照组角膜内皮细胞存活率为(55±5.81)%,Optisol中期保存液房水置换组角膜内皮细胞存活率为(87.16±3.64)%,两组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论:Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞活性有保护作用,可以提高湿房保存法的效率,延长有效保存时间至72h。     

波动的压力对兔角膜内皮细胞的影响

目的　观察波动的压力对角膜内皮细胞的影响。方法　将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为两组:Ａ组为压力波动组（压力设置为:１５ｍｍＨｇ～２５ｍｍＨｇ～２０ｍｍＨｇ～１０ｍｍＨｇ,每个压力持续６ｈ;１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ）;Ｂ组为３０ｍｍＨｇ压力组;Ｃ组为无压力组。三组细胞分别培养２４ｈ。免疫细胞化学染色法鉴定原代角膜内皮细胞形态;台盼蓝-茜素红联合染色检测细胞活性,ＨＥ染色观察细胞形态;Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测细胞中Ｂｃｌ-２和Ｐ５３蛋白的表达水平。结果　获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。三组细胞分别培养２４ｈ后,经台盼蓝-茜素红染色和ＨＥ染色证实:两个压力培养组的细胞活性较无压力培养组明显下降,其中压力波动组的细胞活性低于３０ｍｍＨｇ压力组。同时无压力组、３０ｍｍＨｇ压力组和压力波动组细胞中Ｐ５３蛋白的相对表达量分别为０．１５０±０．００５、０．２５３±０．０１４、０．６７０±０．０１９,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　证实了高压力及非生理性波动的压力对角膜内皮细胞均具有损伤作用。     

不同染色剂对兔眼角膜内皮细胞影响的研究

目的 观察并比较荧光素钠、吲哚靛青绿，台盼蓝，亚甲蓝，龙胆紫5种不同的前囊膜染色剂对兔眼角膜内皮细胞的影响。方法 新鲜离体兔眼角膜内皮滴入各实验试剂，0.25%台盼蓝，0.2%茜素红双重染色，光镜下观察角膜内皮细胞的活性，计数内皮细胞的死亡数，透射电镜检查，观察角膜内皮细胞超微结构的变化。结果 1%亚甲蓝组角膜内皮细胞失去正常的六边形结构，可见较多着色死亡细胞，细胞的死亡率与对照组相比，有统计学差异（P〈0.01）。电镜下，1%亚甲蓝组可观察到内皮细胞的胞膜不完整，胞浆内有空泡形成等变化。结论 1%亚甲蓝溶液对兔眼角膜内皮细胞的损伤作用。     

剥脱性开角型青光眼与原发性开角型青光眼眼前节结构参数的比较

目的：比较剥脱性开角型青光眼（PXOAG）与原发性开角型青光眼（POAG）眼前节结构参数的差异。方法：病例对照研究。选取2012 年12 月至2016 年12 月住院治疗的连续PXOAG病例54 例（54 眼）作为PXOAG组,平均眼压为（28.8±7.9）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）。选取性别、年龄及眼压相匹配的POAG病例53 例（53 眼）作为POAG组,平均眼压为（26.3±7.4）mmHg。测定2 组患者角膜厚度、角膜内皮细胞密度、六角型细胞比例、前房深度及晶状体厚度等眼前节参数,并采用独立样本t 检验进行数据分析。结果：POAG组角膜厚度、角膜内皮细胞密度、六角型细胞比例、前房深度及晶状体厚度分别为（535±36）μm、 （2 538±356）/mm2、 （52±12）%、 （2.89±0.36）mm和（4.96±0.41）mm;PXOAG组相应参数分别为（523±41）μm、 （2 323±451）/mm2、 （52±14）%、 （2.79±0.60）mm和（4.98±0.42）mm。2 组患者角膜厚度、六角型细胞比例、前房深度及晶状体厚度比较差异无统计学意义（t =1.57、0.18、1.11、0.26,P ＞0.05）,而角膜内皮细胞密度比较差异有统计学意义（t =2.78,P =0.01）。结论：PXOAG与POAG相比,角膜内皮细胞密度较低,提示在临床治疗过程中应更加注意对角膜内皮的保护。     

人角膜内皮细胞压力调节培养的初步研究

目的 探讨模拟前房压力对角膜内皮细胞形态及生物学功能的影响.方法 实验研究.采用后弹力层撕除联合酶消化法分离及纯化角膜内皮细胞,细胞悬液接种于培养板内,分为两组:A组采用常规的无压力培养;B组为压力仿生培养,压力设为2.0 kPa(14.66 mm Hg).倒置显微镜定期观察细胞形态及生长规律,神经元烯醇化酶免疫法鉴定细胞来源;苏木素-伊红染色及扫描和透射电镜分析细胞结构的变化,流式细胞术检测细胞活性.免疫荧光检测细胞间紧密连接蛋白(ZO-1)表达情况.结果 获取的细胞神经元烯醇化酶抗体表达阳性,证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染.两组细胞分别培养120～144 h后,压力仿生培养组见细胞扁平,胞质丰富,细胞排列紧密,呈铺路石状,六边形细胞居多;常规培养组细胞在形成单层的时间上与压力仿生培养组并无差异,但细胞以多角形为主,大小不一,细胞中颗粒样物质较多.扫描电镜下压力仿生培养组角膜内皮细胞形成连接紧密的单层,形态为多边形,表面微绒毛丰富,细胞间伸出足突相连,与底物贴附紧密,而常规培养组细胞脱片现象较明显.压力仿生培养组荧光标记的磷酯结合蛋白-碘化丙啶(Annexin V-FTTC/PI)细胞凋亡检测示细胞存活率为98.2%,早期凋亡率为0.7%,末期凋亡率为1.0%,死亡率为0.1%,而常规培养组细胞相对应上述检测值分别为92.2%,5.2%,2.3%及0.3%,经卡方检验两组比较差异存在统计学意义(x2=594.0,P＜0.01).培养96 h后压力培养组角膜内皮细胞间ZO-1蛋白表达明显高于对照组.结论 低压力对角膜内皮细胞生物学活性有正向调节作用,并且表现为时间敏感性,建立了全新的角膜内皮细胞压力仿生培养模式,为体外进行角膜内皮细胞的生理功能与损伤修复研究提供了新的平台.

Abstract：

Objective To investigate the effect of pressure bionic culture on the morphology and function of rabbit corneal endothelial cells. Methods Corneal endothelial cells were separated and purified by tearing apart the descemet and digesting with trypsin and EDTA, then cultured in the plate. The cells were divided into two groups: group A were cultured under atmosphere; cells exposed to 2 kPa( 14. 66 mm Hg) pressure in vitro was group B; the morphology and growth pattern of cells were observed by inverted microscope; cells origin were identified by neuron-specific enolase immunoassay. Cellular changes in the structure were observed by HE staining and scanning and transmission electron microscopy (SEM and TEM) analysis. Cells activity was detected by flow cytometry. Results NSE antibody of the primary corneal endothelial cells was positive without corneal epithelial cells and corneal stroma cells. Two groups of cells were cultured for 120-144 h respectively, the morphology was flat, polygon, most of cells were hexagon and abundant cytoplasms in group B (pressure bionic culture), but in group A, the cells size was not uniform and there were much granules in the cytoplasm. There was no difference in the time of formation of monolayer in two groups. SEM showed that cells exposed to pressure connected tightly and the surface was rich in microvilli, extended foot processes and attached to the substrate tightly, while cells cultured under atmosphere with more off-chip. In group B, Annexiv-FITC/PI detection of apoptosis showed cell survival rate was 98.2%, early apoptosis rate was 0.7%, late apoptosis rate was 1.0%, death rate was 0. 1%; the corresponding data were 92.2%, 5.2%, 2.3%, and 0.3% in group A, respectively; There was statistically significant difference between the two groups (x2 =594. 0,P ＜0. 01 ). After cultured for 96 h,the expression of ZO-1 protein in cells exposed to pressure was higher than those in control. Conclusions The biological activity of endothelial cells is regulated positively by bionic pressure. The establishment of a new biomimetic pressure model will help to investigate the physiological function and injury repair of corneal endothelial cells in vitro.     

压力对体外培养的牛角膜内皮细胞的影响

目的观察压力对体外培养的牛角膜内皮细胞形态结构及细胞活力的影响。方法对体外培养的牛眼角膜内皮细胞施以2.67kPa、5.33kPa及8.00kPa的压力各6、12、24、36、48h,以不加压组作为对照组。用倒置相差显微镜及电镜观察细胞形态结构,以台盼蓝染色观察比较48h时各组细胞活力的差别,用单因素方差分析比较不同压力下阳性细胞率。结果当作用于细胞的压力为2.67kPa(1kPa=7.5mmHg),作用时间为6、12、24、36、48h时,与对照组比较,细胞形态结构均无明显变化;48h时台盼蓝计数与对照组比较差异无统计学意义(P=0.776)。当压力为5.33kPa,作用时间为24h时,细胞形态结构出现轻度的损伤,在36、48h时加重;48h时台盼蓝计数与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.00)。当压力为8.00kPa时,6h时即出现明显细胞形态结构损害,随着压力和作用时间的进一步增加,细胞的损伤程度也进一步加重;48h时台盼蓝计数与对照组比较差异有统计学意义(P=0.000)。结论牛角膜内皮细胞在加压48h时只能承受2.67kPa的压力,当压力为5.33kPa及8.00kPa,施压48h时,将造成细胞...     

七种动物正常角膜组织结构的比较性研究

目的 比较7种实验动物（BALB/c小鼠、豚鼠、新西兰大白兔、猫、狗、猪和牛）角膜的光镜和电镜下结构,探讨不同动物作为各种角膜实验模型的形态学依据。设计 实验研究。研究对象 BALB/c小鼠（8~12周）、豚鼠(350~450 g)、新西兰大白兔（2.5~3.5 kg）和成年猫、狗、猪、牛7种动物,各6只新鲜眼球。方法 制作各种动物眼球的角膜光镜、电镜切片,分别对HE染色切片摄制成的彩色照片和电镜照片进行比较分析。主要指标 角膜各层结构形态、厚度,有无前后弹力层,基底膜及半桥粒的特点。结果 角膜厚度的变化趋势：兔、狗、猪、牛角膜是中央薄、边缘厚,与人相似;中央厚、周边薄者有豚鼠和猫;小鼠角膜中央到周边厚度变化不明显。中央角膜上皮层厚度：豚鼠与人最相似。角膜上皮层平均厚度、中央区全层厚度、角膜中央区及旁中央区基质层厚度：兔与人最接近。角膜缘厚度：牛与人最接近。角膜基质层平均厚度：狗与人最相近。角膜后弹力层厚度：牛与人最相近。角膜内皮层厚度、后弹力层与内皮层厚度比例：猪与人最接近。角膜内皮细胞直径：豚鼠与人最接近。光镜下,7种动物角膜上皮细胞形态：复层扁平细胞为长扁形,翼细胞为多角形,基底细胞为单层柱状细胞。光镜下均无法判断是否有前弹力层,基质层内胶原纤维排列整齐,无定型结构的后弹力层可辨认,内皮细胞为单层扁平细胞。电镜下,BALB/c小鼠和狗的角膜未见明确前弹力层,兔、猫、猪和牛角膜有前弹力层。豚鼠角膜因照片质量不佳,无法判断是否有前弹力层。BALB/c小鼠的后弹力层内可见条梭状特殊结构,牛的后弹力层呈条栅状条纹。各动物角膜的半桥粒平均直径（单位：μm）分别为小鼠0.16±0.01,兔0.18±0.02,猫0.27±0.06,狗0.19±0.08,猪1.72±0.08,牛1.13±0.82。半桥粒平均面积（单位：μm2）分别为小鼠0.03,兔0.04,猫0.09,狗0.05,猪3.76,牛2.09。BALB/c小鼠角膜半桥粒的直径和面积与人角膜最为接近。结论 兔角膜拥有最多的与人角膜相近的测量指标,故7种动物中兔角膜在做角膜模型方面更有优势。其他动物则各有所长。 （眼科, 2015, 24： 341-347）     

配戴夜戴型角膜塑形镜两年后角膜激光共聚焦显微镜观察

目的利用激光共聚焦显微镜观察配戴夜戴型角膜塑形镜2年以上患者的角膜组织有无变化。方法回顾性病例研究。选择2009年1月至2012年12月于南京军区总院眼科就诊且配戴夜戴型角膜塑形镜2年的患者30例（60眼）作为戴镜组,未配戴任何形式角膜接触镜的角膜正常患者30例（60眼）作为对照组。对2组对象进行角膜中央部激光共聚焦显微镜观察（观察组摘镜2～3 h后）。数据采用独立样本t检验进行分析。结果配戴角膜塑形镜后角膜形态可发生明显变化,上皮至前基质层可见皱褶,上皮下神经丛疏密不均、扭曲,基质神经及内皮细胞形态正常。上皮下神经丛的分布比对照组稀疏,戴镜组的上皮细胞计数为（4818±148）cells/mm2,前基质细胞计数为（1345±154）cells/mm2,后基质细胞计数为（799±76）cells/mm2,内皮细胞计数为（3025±193）cells/mm2,与对照组相比2组差异无统计学意义。结论长期配戴夜戴型角膜塑形镜对上皮下神经丛数量及眼表形态有影响,对内皮细胞及基质细胞无明显影响。     

Polysaccharide-based tissue adhesives for sealing corneal incisions

PURPOSE: To investigate the ability of a novel polysaccharide-based tissue adhesive to seal corneal incisions, and to determine the effect of the tissue adhesive on corneal endothelial cells. METHODS: A polysaccharide-based tissue adhesive composed of dextran aldehyde and star PEG amines was applied to a 5-mm corneal incision on an enucleated rabbit eye, and the leak pressure of the eye was measured. The tissue adhesive was additionally incubated in direct contact with bovine corneal endothelial cells to evaluate cytotoxicity. RESULTS: The polysaccharide-based tissue adhesive was successful in sealing corneal incisions to pressures of > 10 psi (500 mmHg). The tissue adhesive was non-cytotoxic to bovine corneal endothelial cells. CONCLUSIONS: Polysaccharide-based tissue adhesives are efficacious in sealing corneal wounds and are non-cytotoxic to corneal endothelial cells. Such adhesives represent a promising new technology for ophthalmic surgery.     

Morphometric analysis of corneal endothelial giant cells in normal and traumatized corneas

Corneal endothelial cells from normal and traumatized human, primate, cat and rabbit eyes were studied by specular microscopy. Morphometric analysis was performed on micrographs of corneal endothelium using a semi-automated image analysis system. The results showed that under normal conditions the corneal endothelium of all four species exhibit major morphological similarities (mean cell areas: human 317 ± 32 μm², primate 246 ± 22 μm², cat 357 ± 25 μm², rabbit 308 ± 35 μm²). The normal corneal endothelium in man was found to be more polymegethous than that of the other species. Trauma to cat, primate and human corneas resulted in a long-term reduction in endothelial cell density and enhanced polymegethism. In contrast, the reparative response of the rabbit ensured the reformation of an essentially normal monolayer following injury. Endothelial giant cells were a normal inclusion in the rabbit corneal endothelium but were only significant in cat, primate and man following trauma. The presence of corneal endothelial giant cells in amitotic corneas may therefore represent a compensatory response in the absence of mitotic potential.     

脱细胞猪角膜基质作为植片的深板层角膜移植治疗感染性角膜溃疡的临床观察

目的 比较脱细胞猪角膜基质与新鲜角膜组织作为植片的深板层角膜移植手术治疗感染性角膜溃疡的临床疗效。设计 回顾性病例系列。研究对象 2015年11月~2016年9月在北京佑安医院就诊的10例病变深度未累及后弹力层的感染性角膜溃疡患者。方法 回顾性分析气泡辅助下的深板层角膜移植手术资料,其中使用脱细胞猪角膜基质材料和新鲜角膜组织材料治疗的患者各5例。比较两组患者术后1年最佳矫正视力（LogMAR）、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。主要指标 术后1年患者的最佳矫正视力（LogMAR）、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。结果 在随访期间,两组所有植片均保持透明,植片生存率为100%。术后1年,脱细胞角膜基质组和新鲜角膜组的视力分别为0.53±0.21和0.33±0.06（P=0.184）,眼压分别为（8.00±2.00）mmHg和（10.33±0.58）mmHg（P=0.124）,球镜度分别为（-4.50±4.21）D和（-1.25±0.75）D（P=0.258）,角膜平均曲率分别为（47.59±5.40）D和（44.51±1.87）D（P=0.403）,散光度分别为（-5.52±1.97）D和（-5.14±1.66）D（P=0.812）,内皮细胞数分别为（1272.67±387.63）个/mm2和（1550.33±232.69）个/mm2（P=0.347）,角膜厚度分别为（439.33±67.86）μm和（534.00±14.42）μm（P=0.077）,眼轴长度分别为（23.53±0.91）mm和（23.55±1.56）mm（P=0.981）。角膜共聚焦显微镜显示,脱细胞猪角膜基质组的角膜上皮细胞可以完全覆盖植片,基底细胞和翼状细胞形态和密度与新鲜角膜组织接近,但在基底细胞下方可见高反光的沉着物,基质层细胞的密度明显低于新鲜角膜组织,并且在内皮细胞与深基质层之间仍可见脱细胞纤维排列。结论 脱细胞猪角膜基质具有良好的生物相容性,当缺乏新鲜角膜材料时,用于替代治疗感染性角膜溃疡可以取得满意的效果。     

人表皮生长因子对体外培养兔角膜内皮细胞影响的实验研究

目的：明确人表皮生长因子（ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ,ｈＥＧＦ）对角膜内皮细胞的影响。方法：采用体外培养的兔角膜内皮细胞,观察接种后不同时点ｈＥＧＦ对其生长状态的影响;兔角膜片内皮损伤模型,离体培养后行Ｈ－Ｅ染色和Ｈ＾３－ＴｄＲ掺入放射自显影,观察ｈＥＧＦ对其修复的影响。结果：兔角膜内皮细胞体外培养ｈＥＧＦ组细胞数高于对照组,并使细胞形态产生纺锤形改变;角膜内皮细胞     

瞳孔扩张器在小瞳孔白内障超声乳化手术中的应用及比较

目的 比较小瞳孔白内障超声乳化手术中应用OASIS和Malyugin Ring两种瞳孔扩张器的手术效果。设计 前瞻性比较性病例系列。研究对象 在北京同仁医院确诊并拟行小瞳孔白内障手术患者20例（20眼）。方法 小瞳孔白内障患者20例（20眼）随机分为两组,其中术中采用Malyugin Ring瞳孔扩张器扩张瞳孔者11眼（1组）,采用OASIS瞳孔扩张器扩张瞳孔者9眼（2组）。所有患者均施行3.2 mm透明角膜切口超声乳化吸除,术后1周,1、3、6个月随访复查,比较两组间手术前后最佳矫正视力、眼压、角膜内皮细胞计数、瞳孔大小等。主要指标 最佳矫正视力、眼压、角膜内皮细胞计数、瞳孔大小。结果 所有手术均由同一医师顺利完成,人工晶状体全部囊袋内植入,无术中并发症发生。手术前第1组和第2组的最佳矫正视力,分别为0.18±0.16和0.16±0.14（P=0.836）;术后6个月第1组和第2组的最佳矫正视力分别为0.53±0.4和0.77±0.23（P=0.124）。术后6个月,第1组和第2组的眼压分别为（12.4±2.2） mmHg和（12.7±6.4） mmHg（P=0.364）;角膜内皮细胞计数分别为（2089±729）个/mm2和（1246±516）个/mm2（P=0.007）;瞳孔直径分别为（3.50±1.24） mm和（4.70±1.57）mm,均较术前瞳孔直径（分别为2.23±0.85 mm和1.94±0.50 mm）大（P=0.042,0.049）。结论 小瞳孔白内障超声乳化手术时应用OASIS和Malyugin Ring两种瞳孔扩张器辅助均能在术中有效扩大并维持瞳孔扩张状态;术后瞳孔均较术前扩大;两组间术后视力恢复和眼压无明显差异, Malyugin Ring较OASIS瞳孔扩张器更有助于减少术中角膜内皮细胞丢失。     

建立在体角膜内皮细胞损伤后再生动物模型的实验研究

目的探讨建立在体角膜内皮损伤动物模型的方法及其损伤后再生的潜能。 方法选取2周龄的正常六角龙鱼30只。采用数字表法随机分为正常观察组、NaOH损伤组及机械损伤组,各10只。采用活体共聚焦显微镜检查、组织病理学检查、茜素红-曲利苯蓝内皮染色和氯化金角膜神经染色等方法观察。对正常观察组六角龙鱼,观察其眼球和角膜正常结构;通过NaoH溶液和器械两种方法损伤角膜内皮层,建立角膜内皮细胞损伤模型,观察其角膜内皮细胞再生的情况。对4个时间点角膜内皮细胞的密度进行正态性检验和方差齐性检验,使用重复测量方差分析对不同组别、不同时间点角膜内皮细胞密度的均值进行比较,事前进行Mauchly球形检验,如果检验结果显著,采用多元方差分析,否则选用校正自由的F检验。 结果六角龙鱼角膜厚度约为(75.75±7.51)μm,角膜上皮细胞层较厚,约占角膜厚度的一半。经NaoH溶液和器械两种方法损伤其角膜内皮细胞后,六角龙鱼角膜内皮细胞密度明显降低。NaoH损伤组和机械损伤组在不同时间点,六角龙鱼角膜内皮细胞密度的比较,具有统计学意义(F＝31.38,51.77;P<0.05)。而各个时间点间的差异,两组均无统计学意义(F＝1.37,2.67,0.70,4.14;P>0.05)。在损伤后3 d时,NaoH损伤组六角龙鱼角膜内皮细胞的密度为(128±14)个/mm²,机械损伤组为(113±11)个/mm²。与损伤前比较,其角膜内皮细胞密度的差异均有统计学意义(t＝19.39,8.78;P<0.05);在损伤后7 d时,NaoH损伤组六角龙鱼角膜内皮细胞的密度为(157±20)个/mm²,机械损伤组为(169±19)个/mm²。与损伤后3 d时比较,其角膜内皮细胞密度均有所恢复,差异均有统计学意义(t＝3.75,8.07;P<0.05);在损伤后14 d时,可见NaoH损伤组六角龙鱼角膜内皮细胞的密度为(198±17)个/mm²,机械损伤组为(223±17)个/mm²。与损伤后3 d时和7 d时比较,均有明显恢复,差异均有统计学意义(t＝10.05,8.07;P<0.05)和(t＝4.94,6.70;P<0.05)。随着时间延长,两组六角龙鱼角膜内皮细胞的密度均逐渐恢复。在伤后14 d时,其角膜内皮细胞形态、大小和密度均基本恢复正常状态。 结论使用NaoH溶液和器械两种方法均可成功建立六角龙鱼角膜内皮细胞损伤的动物模型。初步观察结果表明,其角膜内皮细胞具有一定的再生潜能。此方法可为角膜内皮细胞损伤后再生研究提供一种新的动物模型。     

组织块联合胰酶消化法培养兔角膜缘干细胞的初步探索

目的：建立一种简便、高效的兔角膜缘干细胞原代培养方法。

方法：获取兔角膜缘组织,采用组织块联合胰蛋白酶消化法进行兔角膜缘干细胞体外培养,倒置显微镜下观察细胞生长情况,HE染色观察细胞形态和结构特点,并运用免疫组织化学技术进行细胞鉴定。

结果：采用组织块联合胰蛋白酶消化法可以简便、快速地培养出兔角膜缘干细胞,显微镜下动态观察细胞生长良好,有较高的增殖能力; HE染色证实细胞形态和结构正常; AE5及P63免疫组织化学鉴定呈阳性。

结论：采用组织块联合胰蛋白酶消化共同培养的方法,建立了一种简便、高效的兔角膜缘干细胞原代培养模式。