Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌第一磨牙自牙胚发育起始期至出生后2天不同发育阶段组织的Notch1分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育起始期和蕾状期牙板上皮上方或其包绕的口腔上皮中表达,在牙板上皮中没有表达。自帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中无表达。至牙釉质和牙本质分泌期,Notch1仍在颈环部位的中间层表达。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。     

Shh在鼠磨牙牙胚发育晚期的基因表达

目的：观察信号分子Sonic hedgehog(Shh)在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育晚期的基因表达，探讨其在成釉细胞、成牙本质细胞分化中的作用。方法：制备昆明小鼠磨牙牙胚发育晚期(E16．5—P1．5)标本，用原位杂交法分析Shh mRNA在牙胚中的表达和分布。结果：Shh mRNA在牙胚发育晚期的前成釉细胞和中间层细胞呈阳性表达，在成牙本质细胞层表达较弱。结论：在牙胚发育晚期，Shh可能通过自分泌途径和旁分泌途径，参与了成釉细胞和成牙本质细胞分化。     

Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达研究

目的:检测Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达分布及变化规律,初步揭示Ddit3在小鼠牙胚发育中的作用。方法:取不同胚胎时间点的ICR妊娠小鼠,制备牙胚发育标本,通过免疫荧光和免疫组化的方法显示Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时间点的表达分布。结果:Ddit3在牙胚发育的早期主要表达于胞浆中,从钟状期开始,Ddit3不仅在胞浆中有阳性表达,同时也微弱地表达于细胞核中。分布如下:在小鼠下颌第一磨牙发育的板状期,Ddit3几乎没有表达。在蕾状期,Ddit3主要表达于釉上皮的细胞质中,在牙外胚间充质细胞中几乎无表达。在帽状期,Ddit3的表达模式基本和蕾状期相同。在钟状期早期,Ddit3在成釉细胞、前成牙本质细胞和牙乳头胞质中呈阳性表达,在部分细胞核中也检测到了Ddit3的表达。钟状期晚期,Ddit3在新形成的硬组织周围的高柱状成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的胞浆中有阳性表达,在大多数成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的细胞核中也有表达。结论:Ddit3可能会调节成釉细胞和成牙本质细胞的分化及其硬组织的生物矿化。     

隐性TGF-β结合蛋白-3在小鼠下颌第一磨牙牙囊中的表达及意义

目的:研究小鼠牙萌出过程中隐性TGF-β结合蛋白-3(LTBP-3)在下颌第一磨牙牙囊中的表达情况,探讨其在牙萌出过程中的作用.方法:取不同天数的新生昆明小鼠下颌第一磨牙牙胚,剥离牙胚外层的牙囊组织,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,检测牙囊中LTBP-3 mRNA的表达,应用凝胶成像系统定量软件和SPSS13.0软件包,通过单因素方差分析,比较基因表达的差异.结果:LTBP-3 mRNA在牙囊组织中有表达,且表达随牙胚发育的时期不同而变化:随鼠龄增长,在牙囊中呈递增表达,其中出生后第9.5天和第7.5天表达量高于出生后第1.5天(P分别＜0.05和＜0.01),出生后第9.5天表达量高于第3.5天(P＜0.05),其余时间点问的表达水平无统计学差异.结论:LTBP-3参与了牙囊分化过程的调节,其mRNA在小鼠下颌第一磨牙牙囊中于出生后第1.5天至第9.5天呈递增表达,提示可能在小鼠牙萌出中发挥作用.     

半固态培养基法培养鼠磨牙牙胚的实验观察

目的：观察体外培养的鼠磨牙牙胚发育过程的组织学变化。方法：用１６ｄ胎龄的昆明小鼠下颌第一磨牙牙胚置于ＲＰＭＩ－１６４０半固态培养基上培养,常规组织学观察。结果：体外培养的牙胚可由帽状期进入钟状其,出现成牙本质细胞和成釉细胞的分化及前期牙本质的形成。结论：半固态培养基法培养牙胚可保持其发育过程。     

半固态培养基法培养鼠磨牙牙胚的实验观察

目的 :观察体外培养的鼠磨牙牙胚发育过程的组织学变化。方法 :用 16d胎龄的昆明小鼠下颌第一磨牙牙胚置于RPMI- 16 40半固态培养基上培养 ,常规组织学观察。结果 :体外培养的牙胚可由帽状期进入钟状期 ,出现成牙本质细胞和成釉细胞的分化及前期牙本质的形成。结论 :半固态培养基法培养牙胚可保持其发育过程。     

小鼠牙胚裸鼠体内移植的形态学观察

目的:观察小鼠牙胚裸鼠体内移植后的形态学变化。方法:将出生后5天的小鼠的下颌第一磨牙牙胚异位移植到成年裸鼠背部肌层中,在移植后第7天和第14天分别取出植入的牙胚,常规制片,HE染色,显微镜下观察。另取出生后12天和19天的小鼠各1只,常规制片,HE染色,作移植后不同时间的对照。结果:肉眼观察发现,移植后牙胚生长于肌浅层,组织相容性好,表面有丰富的毛细血管;组织学观察表明:移植后的牙胚可继续发育,但比正常发育的牙胚速度减慢。牙本质层较薄,移植后形成大量牙本质小管、排列不规则的牙本质。虽然上皮根鞘位置变化不明显,但牙根可继续根向延伸。髓室底形成,髓腔缩小,根部钙化程度明显增强。移植后第7天,牙胚内外均有炎细胞浸润;但移植后第14天的牙胚,均未见明显的炎症现象。结论:小鼠牙胚裸鼠肌浅层移植后有一定的发育趋势,可以短期用于牙根发育的研究。     

Shh、Ptch1及Ptch2基因在小鼠磨牙发育过程中的表达

目的通过原位杂交的方法研究Sonic Hedgehog（Shh）、Patched1（Ptch1）及Patched2（Ptch2）在小鼠下颌磨牙发育过程中的表达，以探讨该信号通路在牙胚发育中的作用。方法制备小鼠下颌第一磨牙发育各期标本，原位杂交检测Shh、Ptch1及Ptch2的表达部位及强度。结果Shh在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期表达于成釉细胞；Ptch1在帽状期表达于牙囊、外釉上皮及星网状层，钟状早期表达于牙囊、外釉上皮及牙乳头，钟状晚期表达于成牙本质细胞及牙乳头；Ptch2在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期无表达。结论Shh信号系统在牙胚发育各期有各自的表达特点，提示可能在牙胚形态的调控，成釉细胞、成牙本质细胞分化的诱导中起重要作用。     

Lumican蛋白多糖在正常SD大鼠牙胚发育中时间和空间的表达

目的:观察SD大鼠牙胚发育过程中Lumican蛋白多糖在时间和空间上的表达。方法:分别取妊娠17.5、19.5 d的胎鼠和出生后1.5、3.5、5.5 d新生鼠的下颌第一磨牙牙胚,采用免疫组化染色的方法观察Lumican蛋白多糖在大鼠牙胚中的定位和表达。结果:正常大鼠牙胚发育过程中,帽状期牙胚中(E17)牙囊、牙板、内、外釉上皮的细胞中Lumican均有较强表达;钟状早期牙胚各细胞中Lumican的表达呈阳性;分泌期成釉细胞、成牙本质细胞中Lumican表达呈阳性,随着发育的进行,成釉细胞和成牙本质细胞中的表达逐渐减弱(P<0.05)。结论:正常大鼠牙胚发育过程中Lumican的表达呈一定的时间和空间分布,随着发育的不同阶段而有所改变。     

Differential expression of LAR tyrosine phosphatase in the rat developing molar tooth germ

OBJECTIVE: This study examined the molecules implicated in the cytodifferentiation of dental hard tissue cells. METHODS: Rat pups at postnatal days 4, 7 and 10 were used. Differential display-polymerase chain reaction (DD-PCR), Western blot and immunofluorescent localisation were performed to search differentially expressed genes in tooth development. RESULTS: Leukocyte-common antigen-related tyrosine phosphatase (lar-tp) was differentially detected between the rat maxillary 2nd and 3rd molar germs on postnatal day 10, which were at the dental hard tissue formation and cap/early bell developmental stages, respectively. Both the mRNA and protein expression levels of lar-tp were higher in the 3rd molar germs than in the 2nd. In addition, the levels in the 2nd molar germs at postnatal days 4, 7 and 10, which corresponded to the early/late bell, crown and root stages, respectively, decreased in a time dependent manner. The immunoreactivity against intracellular P-subunit of lar-tp was detected in the ameloblasts and odontoblasts as well as in the undifferentiated inner enamel epithelia and dental papilla cells. However, strong immunoreactivity against extracellular E-subunit was observed only in the undifferentiated inner enamel epithelia and dental papilla cells in the 3rd molar germs and in the stratum intermedium in the 2nd molar germs. CONCLUSION: This is the first identification of lar-tp in the molar tooth development and suggests that this molecule may be involved in the cytodifferentiation of dental hard tissue cells.     

维甲酸对小鼠牙胚冠部形态发生的影响

目的探讨维甲酸对早期牙胚形态发生的影响。方法利用体外鼠磨牙牙胚器官培养模型，观察不同剂量维甲酸对１４天胎龄的小鼠下颌第一磨牙牙胚形态发育的影响。结果培养６天后，在不含维甲酸的培养基中牙胚形成明显的牙乳头尖；当培养基中维甲酸的浓度为１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时，牙胚冠部仍形成明显的牙乳头尖；当培养基中维甲酸的浓度为１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ时，牙胚冠部无牙乳头尖形成。结论牙胚冠部形态发生与维甲酸剂量有密切关系，过量的维甲酸可抑制牙胚冠部牙乳头尖的形成。     

同源异型盒基因Msx-1,Msx-2在鼠牙发育中的表达

目的 观察和比较同源异型盒基因Msx-1,Msx-2 mRNA在牙齿硬组织形成过程中的表达特点,以探讨二者在该病过程中的作用与关系。方法 采用逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）技术,检测Msx-1,Msx-2mRNA在1、3、7和14d龄的昆明小鼠磨牙牙胚中的表达。结果 Msx-1,Msx-2在牙胚硬组织形成主要阶段均有表达,并随细胞分化、基质分泌和矿化的进展呈现规律性互补表达方式。Msx-1 mRNA在1d龄小鼠牙胚中已有微弱表达,经3、7d表达量逐渐增加,14d龄时表达最强,主要表达于基质分泌和矿化阶段;而Msx-2 mRNA在1d鼠牙胚中表达极弱,3d龄时表达最强,经7、14d表达逐渐减弱,主要表达于细胞分化和基质分泌阶段;二者在硬组织形成过程中存在表达量上的规律性互补现象。结论 同源异型盒基因Msx-1,Msx-2在小鼠牙胚硬组织形成过程中均发挥作用;并且其表达量随细胞分化、基质分泌和钙化过程的进展所呈现的规律性互补变化,提示它们之间可能存在功能冗余,即在该过程中二者之间的功能可以相互补充。     

牙囊在牙根发育中作用的实验研究

目的 研究牙囊在牙根发育中的作用。方法 8只出生5 d的Balb/c小鼠随机分为含牙囊组和去除牙囊组,取其双侧下颌第一磨牙牙胚分别异位移植到Balb/c成年裸鼠背部肌层中,移植后第7天和第14天分别取出植入的牙胚,常规制片,苏木精-伊红染色,观察牙胚发育情况。另取1只出生5 d的Balb/c小鼠的下颌第一磨牙牙胚作为对照。结果 肉眼观察发现移植后牙胚生长于肌肉浅层,组织相容性好,表面有丰富的毛细血管。组织学观察表明：移植后的两组牙胚牙冠均可部分继续发育并矿化,但含牙囊组牙胚比去除牙囊组发育更快,体积较大,钙化程度较高。虽然两组牙胚上皮根鞘根向延伸均不明显,但含牙囊组牙根有一定程度的发育,牙齿有根向生长的趋势,而去除牙囊组牙齿未见根向生长的趋势。移植后第7天两组牙胚均出现炎症反应,到移植后第14天则均未见明显的炎症。结论 牙囊在牙齿发育特别是牙根的形成中起重要作用,能够引导牙根向正常方向生长并形成牙根。     

The effect of mechanical trauma on the tooth germ of rat molars at various developmental stages: a histopathological study

Abstract— Intrusive trauma was experimentally applied to the tooth germ at different developmental stages in the rat first molar. The tooth germ at the earliest (postnatal day 1, initiating stage of enamel matrix formation) and the latest (postnatal day 10, calcifying stage of preformed enamcl matrix) developmental stages studied showed localized enamel hypoplasia as a direct sequela of trauma. Thc tooth germs in which enamel matrix was rapidly thickening (postnatal days 3, 5, 7) and had not yet started to calcify showed the most intense and extensive injuries to the formation and structural organization of both enamel and dentin. As for indirect effects secondary to trauma, tooth germ dislocation was observed chiefly in tooth germs at the same developmental stages, frequently resulting in ankylosis. The present experimental model may be helpful for clarifying thc histogenesis of traumatic changes in the developing tooth germ.