齐墩果酸对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨齐墩果酸对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其作用机制。方法体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/CDDP,MTT比色法检测SGC-7901/CDDP细胞活力;适时荧光定量PCR分析凋亡相关基因Bcl-2及BaxmRNA的表达。结果MTT实验证明齐墩果酸对SGC-7901/CDDP细胞的生长有抑制作用,100μmol.L-1齐墩果酸作用72h对SGC-7901/CDDP细胞的抑制率达62%,并表现为时间和剂量依赖性;适时荧光定量PCR实验证明,SGC-7901/CDDP细胞经齐墩果酸处理后,促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调。结论齐墩果酸在体外能够抑制SGC-7901/CDDP细胞增殖,并使促凋亡基因Bax表达升高,抗凋亡基因Bcl-2表达降低,上调Bax和下调Bcl-2mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

miR-203和ZEB2直接相互作用逆转胃癌细胞顺铂耐药性的作用研究

目的探讨miR-203和E盒结合锌指蛋白(ZEB2)直接相互作用对胃癌顺铂(DDP)耐药细胞株SGC-7901/DDP增殖和凋亡活性的影响。方法体外培养SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞,将miR-203 mimics或siRNA ZEB2转染至SGC-7901/DDP细胞,分别为miR-203组和Si-ZEB2组。另外,沉默SGC-7901/DDP细胞ZEB2基因的表达,采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡活力的改变。采用双荧光素酶报告基因方法验证miR-203与ZEB2的靶向关系。采用Western blot法检测各组细胞中上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和Snail的表达。结果经MTT法检测,DDP对SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞的IC_(50)分别为18.37μmol/L和94.68μmol/L。SGC-7901/DDP的耐药指数为5.15±0.27。SGC-7901/DDP细胞中miR-203表达量低于SGC-7901细胞(P<0.05)。miR-203组细胞miR-203表达量较其他组明显升高(P<0.05)。另外,Si-ZEB2组细胞ZEB2 mRNA表达量降低,而miR-203表达量明显升高(P<0.05)。相同浓度条件下,DDP对miR-203组SGC-7901/DDP细胞增殖活性的抑制率明显高于SGC-7901/DDP组和NC组(P<0.05),同时,DDP对Si-ZEB2组细胞增殖活性的抑制率明显高于SGC-7901/DDP组和Si-NC组(P<0.05)。DDP(25μmol/L)对miR-203组细胞凋亡的促进作用明显高于SGC-7901/DDP组和NC组(P<0.05)。miR-203组细胞Snail蛋白表达量低于SGC-7901/DDP组和NC组,而E-cadherin蛋白表达量高于SGC-7901/DDP组和NC组(P<0.05)。另外,沉默SGC-7901/DDP细胞ZEB2基因表达后,E-cadherin蛋白表达量升高,而Snail蛋白的表达量降低(P<0.05)。结论 miR-203与ZEB2形成双向负反馈调节通路,通过上调E-cadherin的表达,抑制Snail的表达,阻止EMT进程,从而逆转胃癌细胞对顺铂的耐药性。     

5杂-氮-2′-脱氧胞苷对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞14-3-3σ基因甲基化的影响

目的观察5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞14-3-3σ基因甲基化的影响;探讨14-3-3σ基因甲基化与顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞耐药的关系。方法建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/CDDP,并用特异性甲基化抑制物5-Aza-CdR干预。MSP法检测14-3-3σ基因甲基化状态,蛋白质印迹法检测14-3-3σ蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期与凋亡。结果 SGC-7901/CDDP细胞的14-3-3σ基因高度甲基化并沉默,经过5、10μmol.L-15-Aza-CdR处理后,14-3-3σ蛋白重新表达,细胞发生顺铂耐药逆转,细胞活性抑制、在G0/G1期出现阻滞以及凋亡率明显增加。结论 5-Aza-CdR具有抑制顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞14-3-3σ基因甲基化的作用,同时,顺铂作用与耐药机制部分依赖于14-3-3σ基因。     

CIK细胞联合顺铂对胃癌SGC-7901/DDP细胞的体外杀伤作用

目的 探讨细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞联合顺铂(DDP)对胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP及亲代敏感细胞株SGC-7901的体外杀伤作用.方法 体外培养SGC-7901/DDP及SGC-7901细胞,分为对照(A)组、DDP作用(B)组、CIK细胞作用(C)组和CIK细胞联合DDP(D)组.MTT法、RT-PCR法和Western blot法分别检测肿瘤细胞增殖、mdr-1基因mRNA表达和P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达.结果 与SGC-7901细胞相比,DDP对SGC-7901/DDP细胞的杀伤率明显降低(P＜0.05),耐药指数为1.73.在SGC-7901/DDP细胞中,C、D组杀伤作用明显高于A组,且与SGC-7901细胞比较差异有统计学意义(P＜0.05).与B、C组相比,D组对SGC-7901/DDP细胞的体外杀伤活性明显升高,逆转倍数为1.41.C、D组SGC-7901/DDP细胞中mdr-1基因mRNA、P-gp蛋白表达均明显低于A组(P＜0.05).结论 CIK细胞与DDP的联合应用使SGC-7901/DDP细胞的生长受到明显抑制,其可能与CIK细胞下调mdr-1基因mRNA、P-gp蛋白表达及增加SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性有关.     

沉默ciRS-7通过靶向miR-944逆转胃癌细胞顺铂耐药性机制

目的 探讨沉默环状RNA(circRNA)ciRS-7对胃癌细胞顺铂耐药性的影响及相关机制。方法 构建顺铂耐药胃癌细胞HGC-27/DDP,沉默ciRS-7并用顺铂处理HGC-27/DDP细胞后，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ciRS-7、微小RNA-944(miR-944)表达水平，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率、克隆形成实验检测克隆形成数，蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡率，原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数，双荧光素酶实验验证ciRS-7与miR-944的靶向关系。结果 ciRS-7在顺铂耐药胃癌组织和细胞中高表达，miR-944在顺铂耐药胃癌组织和细胞中低表达，沉默ciRS-7明显降低顺铂处理的HGC-27/DDP细胞存活率、克隆形成数、cyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平...     

姜黄素与顺铂联合应用对胃癌SGC-7901的体外抑制作用

目的观察姜黄素、顺铂对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用,并探究其机制。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,姜黄素、顺铂分别单独应用及联合应用后,采用MTT法检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测T-Akt、p-Akt、p53 mRNA表达水平的变化;Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平变化。结果 MTT结果显示,姜黄素、顺铂均可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05),且联合组肿瘤细胞的凋亡率明显高于单药组(P<0.01);RT-PCR检测显示,与单独给药组相比,联合用药在显著上调T-Akt和p53 mRNA表达的同时,降低p-Akt mRNA的表达(P<0.01)。Western blot结果显示,单独给药、联合用药均能降低SGC-7901细胞中Bcl-2蛋白的表达。结论姜黄素与顺铂均能通过诱导细胞凋亡,抑制胃癌SGC-7901细胞生长,联合用药抑制SGC-7901细胞的增殖可能是通过抑制p-Akt基因、Bcl-2蛋白表达,同时上调T-Akt和p53基因的表达来实现的。     

抗癌多肽A38对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响

目的:探讨经计算机辅助药物设计的抗癌多肽A38,或与顺铂联合应用对人胃癌细胞株SGC-7901的体外生长抑制作用及对肿瘤细胞早期凋亡的影响。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901与不同浓度的A38、顺铂及A38+顺铂(DDP)分别进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的A38、顺铂及联合用药组在作用24,48,72 h后对SGC-7901细胞的生长抑制率;流式细胞仪分析细胞的凋亡率。结果:不同浓度A38、顺铂及联合用药后,SGC-7901细胞生长抑制率在不同浓度不同时段较对照组均显著增加(P均<0.01),联合用药组细胞生长抑制率较两单药组也明显增强(P均<0.01),呈现明显时效和量效关系。流式细胞仪检测凋亡结果显示:A38、顺铂及联合用药后,SGC-7901细胞的凋亡率在不同浓度不同时段较对照组均显著增加(P均<0.01),联合用药组细胞的凋亡率较两单药组也明显增加(P均<0.01)。结论:A38能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞生长,诱导肿瘤细胞早期凋亡,小剂量顺铂与A38联用具有协同抑制作用,且效果比高浓度下的单用A38或单用顺铂的抑制作用明显。     

瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株耐药及凋亡的影响

目的探讨瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株A549和耐药细胞株A549/DDP细胞凋亡率及耐药基因表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物、顺铂分别及联合处理人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP,用MTT法检测肺癌细胞凋亡率、实时荧光定量PCR检测多药耐药(multidrug resistance protein1,MRP1)基因mRNA水平以及用Westernblot检测多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein1,MRP1)的表达水平。结果不同浓度瑞香狼毒水提取物作用相同时间或相同浓度作用不同时间对A549和A549/DDP的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);瑞香狼毒处理前后A549/DDP细胞株与A549细胞株相比,对顺铂的敏感性差异有统计学意义(P<0.05);同时两细胞株与瑞香狼毒和顺铂联合孵育后MRP1mRNA水平及MRP1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞香狼毒水提取物有明显抗肿瘤作用,能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性,对肺癌耐药具有一定的逆转作用。     

斑蝥酸钠对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其机制的研究

目的观察斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞凋亡相关基因表达的影响。方法用斑蝥酸钠处理SGC-7901细胞,分别应用MTT、RT-PCR法和Western blot法检测斑蝥酸钠对细胞的生长抑制率,以及Bcl-2和Bax基因在mRNA和蛋白质水平的表达。结果斑蝥酸钠在2～8 mg.L-1范围内能抑制SGC-7901细胞增殖,抑制作用呈剂量-时间效应关系,8 mg.L-1斑蝥酸钠处理48 h后的细胞增殖抑制率可达66.3%;斑蝥酸钠能下调凋亡抑制基因Bcl-2的转录和翻译水平,并上调凋亡诱导基因Bax的转录和翻译水平。结论斑蝥酸钠能抑制胃癌SGC-7901细胞生长,其机制可能与调节控制Bcl-2细胞凋亡相关基因家族表达有关。     

人胃癌顺铂耐药细胞系的建立及其生物学特征

目的:国内外普遍应用体外建立的耐药细胞系作为研究模型。为探讨胃癌对顺铂耐药的机理,本研究首次建立人胃癌顺铂耐药细胞系并且研究其生物学特性。方法:采用逐步递增顺铂浓度,间歇作用体外诱导法建立人胃癌顺铂耐药细胞系SGC 7901/DDP;M TT法测定药物敏感性;光镜、电镜、M TT法活细胞计数、流式细胞仪及其相关P-糖蛋白的表达等方法观察其生物学特征的改变。结果:历时5个月建成人胃癌顺铂耐药细胞系SGC 7901/DDP,其对顺铂的耐药指数为14.68,并且与5-氟尿嘧啶、丝裂霉素等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性;SGC 7901/DDP的细胞形态及其P-糖蛋白的表达;体外群体倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期分析发现其S期与G2/M期细胞减少、G0/G1期细胞增多。结论:SGC 7901/DDP细胞具有耐药特征,耐药性能稳定,与P-糖蛋白的表达有关。     

白术内酯Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡的影响

目的：研究白术内酯Ⅰ（atractylenolide Ⅰ）对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、p53、Bcl-2表达的影响。方法：建立SGC-7901裸鼠移植瘤模型,观察白术内酯Ⅰ对肿瘤生长的影响;TUNEL法检测移植瘤组织中的细胞凋亡;Western blotting检测瘤组织中Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及p53蛋白表达。结果：白术内酯Ⅰ不同程度抑制裸鼠SGC-7901移植瘤的生长,与对照组比较,给药后肿瘤体积（TV,tumor volume）、相对肿瘤体积（RTV,relative tumor volume）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）,T_RTV/C_RTV]明显下降;移植瘤组织中凋亡细胞明显增多;白术内酯Ⅰ上调移植瘤组织中Bax、cleaved caspase-3及p53的蛋白表达,下调Bcl-2 的蛋白表达。结论：白术内酯Ⅰ能明显抑制人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的生长,分子机制主要包括增加Bax、cleaved caspase-3、p53蛋白表达,减少Bcl-2蛋白表达,最终导致肿瘤细胞凋亡。     

荜茇酰胺对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用

目的:研究荜茇酰胺对人肺癌A549/顺铂(DDP)细胞耐药性的逆转作用。方法:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,用MTS法检测肿瘤细胞抑制率;流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、细胞周期、P-糖蛋白(P-gp)表达和肿瘤细胞内罗丹明Rht123含量的变化;Western blotting法检测多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1、DNA拓扑异构酶(Top)Ⅱ、谷胱甘肽S-转移酶(GST)-π、凋亡抑制蛋白Survivin、周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)1和蛋白激酶(PK)Cζ蛋白表达;实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin和CDK1 m RNA表达;酶标仪检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8活性。结果:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP对肿瘤细胞增殖的抑制率明显升高;与0μmol/L比较,20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP导致的细胞凋亡率和G2期/M期明显升高,P-gp表达明显减弱,Rh-123浓度明显增加,MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin、CDK1和PKCζ蛋白表达明显减弱,MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin、CDK m RNA表达明显减弱,Caspase-3、8的活性明显增强。结论:荜茇酰胺可逆转人肺癌A549/DDP细胞DDP耐药性,可能与其调节多药耐药相关基因表达有关。     

告达庭对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖和凋亡的调节作用

目的研究告达庭(caudatin)对SGC-7901胃癌细胞增殖与凋亡的调节作用及可能的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析SGC-7901细胞周期的变化;细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳及FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测对胃癌细胞凋亡的影响,免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;SGC-7901细胞经告达庭作用24h后,处于G1期的细胞数目增加,而G2期和S期的细胞数目明显减少,并发生明显的凋亡;调节Bcl-2家族相关因子的表达水平和活化caspase-9、caspase-3与告达庭诱导SGC-7901细胞凋亡相关。结论告达庭可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖并诱发凋亡,其分子机制可能与调节Bcl-2与Bax的平衡以及释放CytC,进而促进caspase-9、caspase-3和PARP的降解密切相关。     

秦皮乙素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制的研究

目的:研究秦皮乙素对SGC-7901细胞的作用及其作用机制。方法:首先通过MTT法考察秦皮乙素对胃癌SGC-7901细胞体外抑瘤作用,并用电镜法观察经不同浓度的秦皮乙素作用的SGC-7901细胞的形态特征,最后用流式细胞仪法检测bcl-2、bax蛋白的表达。结果:秦皮乙素具有一定的抗肿瘤作用,随着给药浓度的增加,SGC-7901细胞的生长率也随之降低,且有明显的凋亡形态学特征。药物作用24h后,用FCM法检测到bcl-2的表达随给药浓度的增加而降低,而bax表达呈上升趋势。结论:秦皮乙素对SGC-7901细胞有显著的抑制作用且诱导其凋亡。     

奥曲肽联合奥美拉唑体外对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的探讨联合奥曲肽与奥美拉唑在体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响及其可能的作用机制。方法采用MTT法检测奥曲肽和奥美拉唑对SGC-7901细胞生长的影响,根据中效原理判断联合用药的效果;流式细胞仪检测联合用药对SGC-7901细胞的细胞周期、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果奥曲肽联合奥美拉唑在体外能显著抑制SGC-7901细胞的生长,联合用药对SGC-7901细胞的抑制作用强于单独用药,两药联合应用在高水平效应合用指数小于1,具有明显的协同作用;联合用药能使SGC-7901细胞周期停滞于G0/G1期,下调Bcl-2且上调Bax蛋白的表达。结论奥曲肽联合奥美拉唑在体外可以抑制SGC-7901细胞的生长,具有协同效应,其机制可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达有关。     

川芎嗪对小鼠颅脑损伤后大脑组织细胞凋亡相关因子的影响

目的:研究川芎嗪对小鼠颅脑损伤(CI)后的细胞凋亡通路中相关蛋白及其mRNA的影响,揭示川芎嗪治疗颅脑损伤的可能作用机制。方法:将50只昆明种小鼠,随机分成假手术组、模型组、川芎嗪治疗组(40,80,160 mg·kg^-1)五组,采用改良的Feeney自由落体损伤装置建立小鼠CI模型。造模3 d后开始灌胃治疗,每日1次,其他各组给予等量生理盐水,连续用药20 d;蛋白免疫印迹和RT-PCR技术分别检测小鼠大脑组织中凋亡相关蛋白及其mRNA(Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3)的表达量。结果:与假手术组相比,模型组小鼠大脑的凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,治疗组大脑凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达降低,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01)。结论:川芎嗪可能通过上调Bcl-2蛋白及其mRNA的表达,抑制Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白及其mRNA的表达,减少大脑组织细胞凋亡,保护大脑组织。     

微小RNA-588靶向调控脾酪氨酸激酶的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的作用

目的 探讨微小RNA-588(miR-588)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响以及潜在的作用机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-588的表达水平;将胃癌细胞SGC-7901、BGC-823分为anti-miR-NC组...     

α-硫辛酸对百草枯中毒大鼠胸腺Bax、Bcl-2表达及SOD活力、MDA水平的影响

目的:研究α-硫辛酸(α-lipoic acid, LA)对百草枯(paraquat, PQ)中毒大鼠胸腺Bax、Bcl-2表达及SOD活力、MDA水平的影响。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为4组,分为正常组、模型组、α-硫辛酸低剂量组和α-硫辛酸高剂量组。实验结束后,取大鼠胸腺组织进行HE染色,观察大鼠胸腺组织结构的变化。采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定SOD活力、MDA水平,SABC免疫组化试剂盒检测胸腺组织Bcl-2相关X蛋白(Human Bcl-2 associated X protein, Bax)和重组人B细胞淋巴瘤因子2(B-Cell lymphoma-2, Bcl-2)的表达。结果:模型组胸腺皮质区淋巴细胞呈松散状分布,皮髓质分界较模糊。与正常组比较,模型组大鼠胸腺组织SOD活力显著下降(P<0.01),MDA水平显著升高(P<0.01); Bax和Bcl-2蛋白表达量有所增加(P<0.01)。与模型组比较,LA低剂量组和高剂量组大鼠胸腺组织SOD活力均明显升高(P<0.01),MDA水平明显下降(P<0.01);Bax和Bcl-2蛋白表达量明显减少,Bcl-2/Bax比值明显提高(P<0.01)。结论:LA可能通过增高Bcl-2/Bax比值而抑制胸腺淋巴细胞的凋亡,从而为LA抗氧化损伤治疗PQ中毒的实验方法提供依据。