miR-140-5p通过NF-κB信号通路调控LPS诱导牙髓细胞炎症因子分泌的机制研究

目的:研究miR-140-5p对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导牙髓细胞炎症因子分泌的影响和机制。方法:分离培养人牙髓细胞,分为对照组、LPS组、miR-NC+LPS组、miR-140-5p+LPS组,Realtime PCR检测细胞中miR-140-5p表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α含量,Western Blot检测细胞中p-IκBα、IκBα、NF-κBp65蛋白表达水平。用NF-κB信号通路激活剂处理LPS条件下转染miR-140-5p mimics的人牙髓细胞,ELISA法检测培养液上清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量,Western Blot检测细胞中p-IκBα、IκBα、NF-κBp65蛋白表达。结果:与对照组比较,LPS组细胞中miR-140-5p水平下降,细胞培养液上清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高,细胞中p-IκBα、NF-κBp65蛋白表达增多,IκBα蛋白表达没有变化。与miR-NC+LPS组比较,miR-140-5p+LPS组细胞中miR-140-5p水平升高,细胞培养液...     

NF-κB在人牙周膜成纤维细胞凋亡中的作用

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的凋亡及NF-κB在细胞凋亡中的作用.方法:用倒置显微镜和Hochest 33258染色法,观察人牙周膜成纤维细胞在更换无血清培养液后6,12,24,36,48h的生长和凋亡变化;采用流式细胞仪检测无血清培养条件下不同时间对细胞凋亡的影响;利用RT-PCR半定量技术分析NF-...     

NFκB信号通路在炎症根尖牙乳头干细胞中的作用

目的研究NFκB信号通路在炎症条件下对根尖牙乳头干细胞的作用。方法利用TNFα和Ecoli.LPS刺激人根尖牙乳头干细胞。Western Blot检测IκBα的磷酸化及蛋白降解,采用Real-time PCR在mRNA水平检测IL6及IL8的表达。结果 10 ng/ml TNFα或500ng/ml Ecoli.LPS能诱导IκBα磷酸化及蛋白降解,并且促进NFκB的下游基因IL6及IL8的表达。结论在炎症根尖牙乳头干细胞,TNFα或LPS可以通过IκK复合体激活NFκB信号通路。NFκB信号通路的活化可能是导致炎症状态下根尖牙乳头干细胞功能损害的重要因素。     

NF-κB信号通路在紫草素诱导Tca8113细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨NF-κB信号转导通路在紫草素诱导Tca-8113细胞凋亡中的作用。方法:采用蛋白印迹法检测IκBa,磷酸化-IκBa、bcl-2及Bax蛋白的表达,采用EMSA方法检测NF-κB的DNA结合活性,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)分析Caspase 3、8、9的活性。采用SPSS12.0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果:经过紫草素作用的癌细胞,磷酸化-IκBa蛋白及NF-κB的DNA结合活性均明显降低,Bcl-2蛋白表达显著减少。Caspase 3、8、9在紫草素诱导的细胞凋亡过程中被激活,泛Caspase阻断剂Z-Asp-CH2-DCB可以明显抑制紫草素引起的细胞凋亡(P=0.02)。结论:紫草素诱导口腔鳞癌细胞的凋亡作用,至少部分通过抑制NF-κB信号通路活性,继而调节其下游调亡调控分子,包括bcl-2家族及Caspase家族等来实现。应用紫草素特异性抑制口腔鳞癌中高激活状态的NF-κB通路,可望成为口腔鳞癌防治的一条新的有效途径。     

牵张应力对人牙周膜细胞MMP-2表达的影响及相关信号通路的研究

目的：探讨NF-κB通路对牵张应力介导的人牙周膜细胞（HPDLCs）中MMP-2表达的影响.方法：按胶原酶消化法培养HPDLCs,分为5组：非加力对照组（A组）;12％形变率,3h组（B组）;12％形变率,6h组（C组）;12％形变率,12h组（D组）;12％形变率＋PDTC干预,12h组（E组）,通过细胞牵张应力加载系统施加机械牵张应力,结束后收集细胞提取蛋白,用蛋白印迹法检测MMP-2蛋白表达的变化.结果：B、C、D组MMP-2表达大于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着作用时间的延长蛋白表达增加;NF-κB通路抑制剂PDTC可抑制机械牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-2表达的增加.结论：持续机械牵张应力可诱导人牙周膜细胞MMP-2表达的增加,从而影响牙周组织细胞外基质代谢,机械牵张应力可通过NF-κB通路影响MMP-2蛋白的表达.     

骨化三醇通过NF-κB信号通路促进牙周膜成纤维细胞分化

从青少年正畸拔除的前磨牙牙周组织中培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs),不同浓度VD3处理后检测细胞增殖情况、免疫荧光染色细胞角蛋白、波形丝蛋白用于鉴定细胞.细胞培养中添加NF-κB抑制剂、NF-κB激活剂,检测ALP活性、细胞矿化、细胞中ALP、RUNX2、OCN mRNA水平、细胞胞核中NF-κB p65蛋白水平...     

NF-κB信号转导通路和肿瘤发生、转移关系的研究进展

大量研究表明,NF-κB信号转导通路可以促进肿瘤的发生.许多炎症因子、致癌剂、促癌剂和肿瘤微环境都可以激活NF-κB.NF-κB蛋白本身和其调控的蛋白与肿瘤的发生、增殖、抗凋亡、侵袭、血管生成和转移有关.在多种肿瘤中NF-κB都处于持续性激活状态.本文就NF-κB信号通路和肿瘤发生和转移之间关系的研究新进展做一综述.     

基于 NF-κB 信号通路倍半萜烯内脂化合物对牙周病破骨细胞活化因子作用的研究

目的：探究基于NF-κB信号通路倍半萜烯内脂化合物对牙周病破骨细胞活化因子作用的研究。方法：选取2周龄的牙周病大鼠动物模型15只为观察组,2周龄的健康大鼠6只为对照组。观察组实验大鼠随机分为3组：观察组1实验大鼠注射小白菊内酯（PAR）2．5 mg／kg／d;观察组2注射粘毛鼠尾草活性单体2 mg／kg／d;观察组3及对照组每天注射等量的生理盐水。通过荧光定量PCR技术、酶联免疫反应（ ELISA）等方法对观察组与对照组牙周膜成纤维细胞（ periodontal ligament fibroblasts,PDLF）中基于NF-κB信号通路的牙周病破骨细胞活化因子（ IL-1β） mRNA和蛋白表达进行测定,并观察实验动物模型牙周病的治疗状况。结果：与对照组（1．02±0．08,3．2±0．1） ng相比,观察组1（1．1±0．11,3．4±0．15）ng、观察组2（1．12±0．05,3．36±0．13）ng大鼠牙周组织中NF-κB以及IL-1β含量的差异均无统计学意义（P＞0．05）。 NF-κB以及IL-1β含量在观察组3（3．92±0．03,8．59±0．16）ng中与在观察组1、观察组2中的差异均有统计学意义（P＜0．05）,并且治疗2周后发现经倍半萜烯内脂化合物（小白菊内酯、粘毛鼠尾草活性单体）治疗的观察组1与观察组2中牙周状况均得以改善。结论：倍半萜烯内脂化合物可以通过NF-κB信号通路作用于牙周病破骨细胞活化因子（ IL-1β）进而改善牙周病状况。     

白藜芦醇减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤并抑制TLR4/NF-κB活化

目的:探究白藜芦醇(RES)对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞(hPDLCs)损伤的保护作用.方法:体外培养并鉴定hPDLCs,将培养的hPDLCs随机分为5组:对照组、LPS(10 μg/ml)+RES(0、30、60、90tμmol/L)组,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测各组细胞分泌TNF-α/IL-6水平,PCR和Western blot检测各组细胞TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达.结果:分离培养的hPDLCs抗波丝蛋白表达阳性,抗角蛋白表达阴性.与对照组比,LPS处理后细胞增殖能力明显降低,细胞分泌TNF-α/IL-6水平和TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达明显增加;30～90 μmol/L白藜芦醇预处理后,细胞增殖能力增加(P＜0.05),细胞分泌TNF-α/IL-6水平、TLR4/NF-κB mRNA以及蛋白表达则下调(P＜0.05),均呈现一定的浓度依赖性.结论:白藜芦醇可抑制TLR4/NF-κB活化并减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤.     

原花青素B2对炎症状态牙周膜干细胞成骨分化及NF-κB信号通路的影响

目的:研究原花青素B2对炎症状态牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法:原代培养PDLSCs并分为不含药物培养基处理的对照组、含有10 ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)培养基处理的TNF-α 组、含有1...     

周期性张应力作用下Hippo-YAP信号通路调控人牙周膜细胞自噬

目的 探究周期性张应力（CTS）作用下人牙周膜细胞（hPDLCs）自噬激活的分子机制。方法 分离培养正常牙周组织的hPDLCs,利用Forcel四点弯曲细胞加力仪对hPDLCs加载张应力模拟正畸牙移动过程中正畸力诱导的张力侧hPDLCs自噬,利用XMU-MP-1抑制Hippo信号通路探究Hippo-YAP信号通路在张应力激活hPDLCs自噬中的作用。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测hPDLCs自噬相关基因（Beclin-1、LC3、p62）的表达;采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测hPDLCs自噬相关蛋白（Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62）及Hippo-YAP通路相关蛋白（active-YAP、p-YAP）的表达;采用免疫荧光染色定位hPDLCs自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ、p62）及Hippo-YAP通路相关蛋白（active-YAP）。结果 CTS激活hPDLCs的自噬,自噬相关因子表达随加力时间的延长呈先升高后降低的趋势,30 min自噬开始,3 h达到高峰,随后出现下调（P<0.05）;CTS促进active-YAP蛋白表达增加...     

理中汤加味对大鼠复发性口腔溃疡黏膜的修复作用及对NF-κB炎症通路的影响

目的:探究理中汤加味对大鼠复发性口腔溃疡(ROU)黏膜的修复作用及机制.方法:60只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(醋酸泼尼松龙,1 mg/mL,20 mL/kg)、理中汤高(40 g/kg)、中(20 g/kg)、低剂量组(10 g/kg),每组10只.除正常组外其余5组建立ROU模型,建模8周后...     

间歇力引起人体牙周膜细胞核因子κB受体活化因子配体高表达

正畸治疗中,间歇力因提供了牙周组织重建的调整时间而有利于牙齿的移动。为了明确间断力的作用机制,本研究观察了牙周膜细胞在间歇力和持续力作用下核因子κB受体活化因子配体(receptor activatator of NF-κB ligand,RANKL)、骨保护因子和IL-1β mRNA的表达,并通过IL-1β信号传导途径研究了压力大小与RANKL表达之间的联系。     

经典Wnt信号通路在牙周膜细胞成骨分化过程中的调控

目的: 探讨经典Wnt/β-catenin信号通路对牙周膜混合细胞群成骨分化过程中的调控作用。方法: 体外组织块结合酶消化法培养牙周膜混合细胞群,通过RT-PCR、real-time PCR证实经典Wnt信号通路在牙周膜细胞中的表达,并运用细胞免疫荧光分析检测了β-catenin的表达位置及表达量;通过不同浓度的Licl激活牙周膜细胞中经典Wnt信号通路,并进行相应的诱导培养。培养14 d后,茜素红染色观察矿化结节形成情况,碱性磷酸酶活性检测ALP活性;通过CCK-8检测Licl刺激24 h、48 h、72 h后经典Wnt信号通路对牙周膜细胞增殖的影响。以单因素重复测量方差分析比较差异。结果: 经典Wnt/β-catenin信号通路在牙周膜混合细胞群中明显表达,可以通过Licl激活该信号通路,使β-catenin在细胞中累积引起下游变化;与对照组相比较,经典Wnt/β-catenin信号通路的激活引起牙周膜细胞矿化过程中矿化结节的减少,显著降低了ALP活性(P<0.01);经典Wnt通路对牙周膜混合细胞群增殖表现为显著的抑制作用(P<0.01)。结论: 经典Wnt/β-catenin信号通路抑制了牙周膜混合细胞群的矿化成骨过程,并抑制该细胞群的增殖。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对泡沫细胞中NF-κB信号通路的影响

目的:研究牙龈卟咻单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P. gingivalis LPS)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞过程中和形成泡沫细胞后对NF-κB信号通路的影响.方法:用oxLDL诱导THP-1人单核细胞源性巨噬细胞形成泡沫细胞,在巨噬细胞和泡沫细胞中加入P. gingivalis LPS和oxLDL,利用免疫细胞化学技术检测NF-κB p65亚单位核转位情况,Western blot检测细胞质内IκB-α变化.结果:P. gingivalis LPS能促进巨噬细胞和泡沫细胞中p65亚单位核转位,在2 h时达到最高水平;也能降低细胞质内IκB-α水平,在2 h时达到最低水平;在2 h时,10 μg/ml比10、100 ng/ml、1μg/ml P. gingivalis LPS更能提高p65核转位率.结论:P. gingivalis LPS可以促进泡沫细胞形成过程中和形成后NF-κB信号通路的激活,促进动脉粥样硬化进展.     

NF-κB分子生物学特性及其在牙周炎等炎症性疾病中的作用

核转录因子-kappaB(NF-κB)是细胞中重要的调节因子,静息状态下与一组抑制蛋白ΙκB家族成员结合形成复合体,以无活性状态存在于细胞质中。当细胞受到外界刺激时,IκB磷酸化,使NF-κB暴露出核定位信号,进入细胞核结合DNA,调节基因的表达。本文对NF-κB家族、分子生物学特性及在炎症性疾病和牙周炎发生和治疗中分子机制进行探讨,为用NF-κB抑制剂治疗开辟新途径。     

硒代蛋氨酸通过NF-κB和MAPK通路抑制P.g-LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2表达

目的:探讨硒代蛋氨酸(Selenomethionine, SeMet)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导的RAW264.7细胞的作用和机制。方法:使用P.g-LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7体外构建炎症细胞模型,CCK-8法检测不同浓度SeMet对RAW264.7细胞活性的影响。以不同浓度的SeMet(10、25、50μmol/L)干预细胞1 h后,再使用P.g-LPS诱导细胞24 h。RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)相关基因表达,ELISA法检测iNOS和COX-2相关蛋白分泌情况。Western blot检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白表达情况。结果:浓度低于50μmol/L的SeMet对RAW264.7细胞活性没有显著影响。对RAW264.7使用SeMet预处理后,SeMet明显抑制P.g-LPS诱导的iNOS和COX-2相关基因...     

p38信号通路在牙周膜细胞成骨分化中的调控作用

目的 研究p38信号通路在人牙周膜细胞成骨分化中的调控作用。 方法 体外培养人牙周膜细胞,取第三代细胞进行成骨诱导培养,实验组加入p38信号通路抑制剂(SB203580),诱导培养4周后通过定量PCR和茜素红染色检测其成骨能力。 结果 成骨诱导可促进牙周膜细胞中p38的磷酸化（p-p38）。抑制p38的磷酸化可降低成骨标记物Runx相关基因（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达,减少钙结节形成。 结论 p38信号通路在体外培养的牙周膜细胞成骨分化中具有重要的调控作用。     

Rho信号通路在周期性张应力诱导人牙周膜细胞骨架重排中的作用

目的探讨周期性张应力对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）骨架重排的影响及Rho信号通路在其中的作用。方法应用FX-5000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLCs施加周期性张应力,幅度为10%,频率为0.1 Hz,加载时间为6 h和24 h。以未加载的细胞作为对照组。应用倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞免疫荧光染色和共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-actin的变化,并应用Western blot检测Rho通路相关蛋白的表达变化。用Rock的特异性抑制剂Y-27632预处理细胞后,在0.1 Hz,10%幅度条件下,加载6 h和24 h,检测细胞骨架蛋白F-actin的变化和Rho信号通路相关蛋白的表达变化。结果与静态组相比,周期性张应力诱导hPDLCs细胞骨架重排差异有统计学意义,Rho信号通路Rock和p-cofilin蛋白表达增加（P〈0.05）。Rock的特异性抑制剂Y-27632可以降低Rock（P〈0.05）和p-cofilin蛋白表达和细胞骨架重排。结论周期性张应力可促进体外培养的hPDLCs细胞骨架重排,Rho信号通路参与了此过程。