左乙拉西坦及奥卡西平对癫痫患儿丙戊酸钠及其代谢产物2-丙基-2-戊烯酸血药浓度的影响

目的:探讨左乙拉西坦(Levetiracetam,LEV)、奥卡西平(Oxcarbazepine,OXC)对丙戊酸钠(VPA)及其代谢产物2-丙基-2-戊烯酸(2-ene-VPA)血药浓度的影响。方法:共纳入114例在我院门诊就诊的癫痫病患儿,根据治疗方案分为VPA组(n=71),VPA+LEV组(n=23)以及VPA+OXC组(n=20)。采用RP-HPLC法测定VPA代谢产物2-ene-VPA的血药浓度,并采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果:VPA+LEV组与VPA组相比,VPA血药浓度的差异无统计学意义(P=0.778);而VPA+OXC组中VPA的血药浓度较单独服用VPA组低,差异有统计学差异(P=0.004)。而在VPA组、VPA+LEV组、VPA+OXC组中,2-ene-VPA血药浓度的差异无统计学意义(P=0.082)。在VPA组中,VPA和2-ene-VPA血药浓度间的正相关关系具有统计学意义(R=0.278,P=0.019)。在VPA+LEV组及在VPA+OXC组中,VPA和2-ene-VPA血药浓度间的相关关系均没有统计学意义(P=0.138;P=0.334)。结论:VPA联合应用OXC时,需根据血药浓度监测结果调整VPA及OXC剂量,VPA联合应用LEV时无需调整VPA剂量;VPA与LEV或OXC合用时不会增加2-ene-VPA的中枢神经系统不良反应。     

丙戊酸钠代谢产物2-ene-VPA RP-HPLC分析方法的建立

目的: 建立癫痫患者血浆中丙戊酸钠(VPA)代谢产物2-丙基-2-戊烯酸(2-ene-VPA)的HPLC测定方法。方法: 血浆用乙酸乙酯提取,以2,4'-二溴苯乙酮作为内标,氮气挥干样品,色谱柱:ZORBAX SB-C₁₈柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(55:45);检测波长:217 nm;流速:1.0 ml·min^-1;柱温:35℃;进样温度:20℃。结果: 内标2,4'-二溴苯乙酮和2-ene-VPA的保留时间分别为11.2 min和5.1 min,2-ene-VPA的血浆浓度在0.5~16.0 μg·ml^-1范围内,2-ene-VPA与内标2,4'-二溴苯乙酮的峰面积比与浓度呈良好的线性关系(R>0.999),平均回收率为(96.85±0.33)%,日内RSD<5%,日间RSD<5%。结论: 本法经济、快速、简便,适用于临床上2-ene-VPA的测定及研究。     

丙戊酸钠代谢产物4-ene-VPA RP-HPLC分析方法的建立

丙戊酸（Valproic Acid ,VPA）是临床广泛使用的一线广谱抗癫痫药［1］。是治疗癲痫全身性强直和阵挛性发作的首选药物,对失神发作和肌阵挛性发作疗效较好也可用于治疗部分性发作。但VPA 的代谢个体差异大,治疗浓度范围较窄（50 ～100 μg／mL） ,目前临床通过血药浓度监测实现 VPA 个体化给药方案。自VPA 上市后,陆续有其引起急性致死性肝坏死报告。目前认为VPA 诱导的肝毒性与其自身代谢产物4‐ene‐VPA 有关,它被认为是引起其肝毒性的物质［2］,研究证实4‐ene‐ VPA 能显著抑制线粒体β‐氧化,谷胱甘肽减少导致脂质过氧化［3］ ,最终导致肝细胞坏死。4‐ene‐VPA 浓度与VPA 的浓度呈非线性关系［4］。因此建立4‐ ene‐VPA 的分析方法,为探讨其与不良反应的相关性打下基础。目前测定4‐ene‐VPA 仅有气质联用（GC‐MS）［4］ 和液质联用法（LC‐MS）进行浓度测定［5‐6］,上述方法虽然良好的重现性和准确度,但它却有一定的局限性。由于仪器价格昂贵,不利于方法的广泛开展。本文采用RP‐HPLC 测定人血浆中4‐ene‐VPA 的血药浓度,方法操作简单,且经济、快速,具有很高的实用价值。     

液相色谱-质谱联用法测定癫痫患者血浆中丙戊酸及其代谢产物2-丙基-4-戊烯酸浓度

目的建立液相色谱-质谱联用法同时测定丙戊酸(VPA)及其毒性代谢产物2-丙基-4-戊烯酸(4-ene-VPA)浓度。方法人血浆样品用乙腈直接沉淀蛋白后,色谱柱:Agilent Eclipse Plus-C₁₈(2. 1 mm×10. 0 mm,3. 5μm),流动相:乙腈-10 mmol·L^-1醋酸铵水溶液(均含0. 1%甲酸),梯度洗脱,用电喷雾离子化源,负离子方式,扫描方式为多反应监测(MRM),用于监测的离子反应分别为m/z 143. 2→143. 2(丙戊酸)、m/z 140. 8→140. 8(2-丙基-4-戊烯酸)和m/z 373. 0→329. 1(内标银杏酸(C17:1))。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果 VPA和4-eneVPA分别在0. 50～200. 00μg·m L^-1和0. 05～12. 50μg·m L^-1内线性关系良好(r分别为0. 998 4和0. 997 5),定量下限分别为0. 50和0. 05μg·m L^-1批内、批间RSD均小于8. 59%,提取回收率分别为76. 45%～86. 78%和78. 44%～83. 46%,内标归一化基质效应因子分别为93. 67%～97. 82%和92. 04%～104. 35%。结论本方法简洁、灵敏、专属性好,适用于人血浆中同时测定VPA和4-eneVPA浓度,可用于丙戊酸钠的血药浓度监测。     

丙戊酸钠及其代谢产物的体外肝毒性研究

目的 研究丙戊酸钠及3个代谢产物（2-丙基-4-五烯酸、3-羟基丙戊酸、5-羟基丙戊酸）对体外人正常肝细胞L02增殖活性及对肝细胞损伤相关指标的影响。方法 实验分为对照组和实验组,对照组细胞常规培养,实验组加入丙戊酸钠及3个代谢产物,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,PCR法检测CYP1A1、CYP1A2、PCNA、Bax及Bcl-2的mRNA相对含量,Western Blotting法检测蛋白表达,同时检测细胞上清液中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量。结果 与对照组相比,随着丙戊酸钠及3个代谢产物浓度和时间的增加,对 L02细胞增殖活性的抑制逐渐增强,CYP1A1、CYP1A2及Bax的mRNA相对含量和蛋白表达量升高,PCNA及Bcl-2的 mRNA相对含量和蛋白表达量均有下降,AST、ALT、LDH含量升高。结论 丙戊酸钠及3个代谢产物与肝毒性有关。     

丙戊酸肝毒性的早期预警及预防研究状况

丙戊酸是临床上主要的一线抗癫痫药,还广泛用于其他神经疾病的治疗,治疗范围广,但肝毒性是丙戊酸较严重的不良反应,2岁以下且联合用药的癫痫患者肝毒性风险显著增大,严重时甚至发生致死性、急性肝坏死。因此,临床上选择合适的生物标志物预警丙戊酸肝毒性的发生以及早期实施药物干预进行预防显得尤为重要。本文就近几年丙戊酸肝毒性的预警和预防方面的研究进展做一综述。     

丙戊酸钠及其代谢产物与肝损伤的相关性分析

目的研究丙戊酸钠及3个代谢产物(2-丙基-4-五烯酸、3-羟基丙戊酸、5-羟基丙戊酸)对肝损伤参考指标的相关性分析。方法共收集328例癫痫患者血样,其中,123例肝功能异常癫痫患者血样为试验组,205例肝功能正常癫痫患者血样为对照组,采用LC-MS/MS方法测定两组血样(丙戊酸钠及代谢产物)的血药浓度,通过ROC曲线分析丙戊酸及其代谢产物浓度对肝功能异常的诊断价值。结果肝功能异常组患者丙戊酸钠及其3个代谢产物平均血药浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。丙戊酸钠及其代谢产物的血药浓度均可作为诊断肝损伤的参考指标,5-羟基丙戊酸比丙戊酸钠有更好的诊断价值。结论丙戊酸钠代谢产物与肝毒性有关,能够作为肝损伤的诊断指标,可将其应用于临床,为丙戊酸钠有效给药提供参考。     

基因多态性对丙戊酸钠及代谢物血药浓度的影响及其与不良反应的相关性研究

目的：研究细胞色素P450 2C9（CYP2C9）、尿苷葡萄糖醛酸转移酶（UGTs）、氨甲酰磷酸合酶1（CPS1）、线粒体聚合酶（POLG）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶2（SOD2）基因多态性与丙戊酸钠(VPA)及其代谢物2-丙基-4-戊烯酸（４-ene-VPA）、2-丙基-2-戊烯酸（2-ene-VPA）的关系,探索代谢物浓度与肝功能损伤的相关性,为临床治疗提供依据。方法：收集99例癫痫患者共144份血液样本,记录患者肝功能指标,采用LC-MS/MS法检测VPA及其代谢物血药浓度,采用Snapshot技术检测UGT2B7（rs12233719、rs7668258）、UGT1A6（rs2070959、rs1105879、rs89910）、CAT rs1001179、SOD2 rs4880、CPS1 rs1047891、POLG rs3087374、CYP2C9 rs1057910基因型,比较不同基因型患者的VPA、４-ene-VPA及2-ene-VPA校正血药浓度差异,探索血药浓度与肝功能指标间的相关性。结果：UGT1A6 rs89910 CT型患者VPA、2-ene-VPA校正血药浓度高于CC型患者（P ＜ 0.05）;UGT2B7 rs7668258 TT型患者2-ene-VPA校正血药浓度低于CC/CT型（P ＜ 0.05）。同时发现VPA与4-ene-VPA血药浓度与肝功能指标相关,而CPS1 rs1047891 CC型患者丙氨酸氨基转移酶与碱性磷酸酶均低于AA/AC型患者（P ＜ 0.05）。结论：UGT1A6 rs89910、UGT2B7 rs7668258基因多态性与2-ene-VPA校正血药浓度相关。VPA及其代谢物４-ene-VPA可以引起肝功能损伤,CPS1 rs1047891 CC型患者比AA/AC型患者服用VPA后肝脏解毒能力更强。     

丙戊酸钠与双丙戊酸钠的毒性比较

目的 比较丙戊酸钠与双丙戊酸钠2种供试品毒性的大小.方法 采用大鼠和小鼠2种动物,分别灌胃给予不同剂量的丙戊酸钠和双丙戊酸钠,观察大鼠和小鼠的毒性反应症状、死亡情况、病理变化,并计算出供试品对2种动物的LD50值.结果 2种供试品对大鼠和小鼠的毒性反应症状及病理变化基本一致,但是在剂量相当的情况下丙戊酸钠的毒性反应症状比双丙戊酸钠的严重,死亡的动物数更多,LD50值更小.结论 丙戊酸钠的毒性比双丙戊酸钠的毒性大.     

丙戊酸钠的肝脏毒性及防治

本文介绍了丙戊酸钠肝毒性的临床表现为肝酶增加、血氨升高、抑制凝血、低血糖和酸中毒、微囊状脂肪变性及抑制β氧化;并对其提出了预防和治疗措施.     

Lack of relationship between sodium valproate-induced adverse effects and the plasma concentration of its metabolite 2-propylpenten-4-oic acid

Summary The concentrations of valproic acid (VPA) and of its metabolites 3-oxo-VPA and 4-en-VPA were measured in the plasma of 12 selected epileptic patients 1,2,3, and 4 h after administration of a loading dose of VPA. Four of the patients, all on polytherapy, had had short-term adverse effects during chronic VPA treatment, and in them there has been abnormal NH₃-values after a test doese of VPA. Eight patients (4 on monotherapy and 4 on polytherapy) had been free from adverse effects. No significant difference in the VPA, 3-oxo-VPA and 4-en-VPA concentrations was found between the three groups of patients. Accumulation of 4-en-VPA is not involved in the short-term adverse effects and hyperammonaemia induced by VPA.     

Influence of CYP2C9 polymorphism on metabolism of valproate and its hepatotoxin metabolite in Iranian patients

Sodium valproate (VPA) has 16 known metabolites in humans. The 2-ene-VPA has anti-convulsant efficacy and 4-ene-VPA is reported to contribute in VPA hepatotoxicity. The formation of 4-ene-VPA is catalyzed by cytochrome P450 2C9 (CYP2C9). CYP2C9 allele mutation is closely related to the attenuation of the enzymatic activity and 4-ene-VPA production. In the present work, VPA, 2-ene-VPA, and 4-ene-VPA in serum of patients receiving VPA were determined and the correlation between CYP2C9 polymorphism and 4-ene-VPA concentration was examined. Blood samplings in 68 patients were performed at two time-points (peak and trough) and one sample blood obtained from 50 healthy volunteers for genotype evaluation. Patients were divided into three groups (22 cases of monotherapy, 19 cases of enzyme inducer therapy, and 27 cases of polytherapy). There was a significant reduction in concentration of VPA and 4-ene-VPA between peak and trough time. In peak concentration, there was a significant correlation between 2-ene-VPA and VPA in all groups. The concentration of 4-ene-VPA in the enzyme inducer and polytherapy group was significantly higher than that of the monotherapy group. The allele frequencies of CYP2C9*1, CYP2C9*2, and CYP2C9*3 were 88.97%, 8.09%, and 2.94% in the patient group and 91%, 6%, and 3% in the normal group, respectively. There was no significant difference in allele frequency in two groups. Mutated alleles didn’t have any significant effect on 4-ene-VPA production. No patient showed toxic level of 4-ene-VPA or saturation of ß-oxidation pathway. In conclusion, the role of CYP2C9*2 and CYP2C9*3 in attenuation of 4-ene-VPA formation cannot be confirmed.     

4-Acetaminophenoxyacetic acid,a new urinary metabolite of phenacetin

Summary It is shown that 4-acetaminophenoxyacetic acid (APOA) is an urinary metabolite of phenacetin. APOA was isolated by means of silica gel TLC in various solvent systems from the urine of rats, dogs, and humans, collected 24 h after p.o. treatment with phenacetin (rats and dogs: 200 mg/kg; humans: three single doses of 0.5 g). Expressed as a percentage of the dose, APOA was detected at levels of 1% in rats, 0.13% in dogs and 0.04% in humans. 4-Acetaminophenoxyacetic acid was identified as its methylester—synthetized in the reaction of APOA and diazomethene—by thin layer chromatography, UV absorbance, melting point, and mass spectroscopy.     

4-氨基水杨酸钠结肠定位片的研究

目的制备一种新型口服结肠定位制剂，并考察其体外释药行为与犬体内的结肠定位特性。方法本试验选择4-氨基水杨酸钠作为模型药物，应用丙烯酸树脂Eudragit RL30D，RS30D和Eudragit FS30D分别作为缓释和肠溶层包衣材料，制得包衣片剂，使系统可依赖pH和时间双重机制释药。在体外释放试验中，系统在0.1 mol·L^-1盐酸溶液中运转2 h后，分别在pH为6.5，7.0或7.4的磷酸盐缓冲液中继续运转12 h。体内验证以放射性同位素锝（^99mTc）做标记，用γ-射线显影法来确定系统在胃肠道内的释药时间和位置。结果体外实验中，系统在0.1 mol·L^-1盐酸溶液中运转2 h后无药物释放，在pH高于6.5的介质中缓慢释药，介质的pH越高，药物释放越快。体内实验中， 包衣片在胃肠道上半部无药物释放， 到达结肠后开始释药； 而非包衣片在犬胃部即迅速崩解。结论本文采用的包衣材料使包衣片到达升结肠时开始释放药物，药物释放时间可达10 h以上。     

SCN2A基因多态性与丙戊酸钠治疗壮族癫痫患者疗效的相关性

目的：研究SCN2A基因多态性与丙戊酸钠治疗壮族癫痫患者疗效的相关性。方法：收集224例广西百色地区丙戊酸钠（VPA）规范治疗的壮族癫痫患者（有效组85例,无效组139例）为研究对象,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）技术和直接测序法检测患者外周血SCN2A位点rs17183814和rs1864885基因多态性,利用LC-MS色谱法测定VPA血药浓度,利用SHEsis软件对rs17183814和rs1864885进行连锁不平衡分析。结果：无效组与有效组相比,rs17183814位点等位基因分布（χ²=9.707,P=0.002）和基因型分布（χ²=11.202,P=0.004）的差异均有统计学意义,而rs1864885位点等位基因分布（χ²=0.792,P=0.374）和基因型分布（χ²=0.763,P=0.683）的差异均无统计学意义。与GG+GA基因型相比,rs17183814的AA基因型显著降低VPA疗效,OR值（95%可信之间）为2.925（1.373~6.233）。有效组中rs17183814的GG、GA和AA基因型患者VPA血药浓度差异（F=5.016,P=0.368）和rs1864885的AA、AG和GG基因型患者VPA血药浓度差异（F=3.215,P=0.102）均无统计学意义。rs17183814和rs1864885没有连锁不平衡性。结论：SCN2A基因位点rs17183814单核苷酸多态性可能与壮族癫痫丙戊酸钠抵抗性形成有关。     

双丙戊酸钠和丙戊酸钠对HepG2细胞的毒性作用及机制

目的探讨双丙戊酸钠和丙戊酸钠对肝细胞的毒性作用及其可能的作用机制。方法肝癌细胞株HepG2加入双丙戊酸钠和丙戊酸钠0.1,0.3,1和3mmo.lL-1,培养24h后,MTT法测定HepG2的细胞存活;双丙戊酸钠和丙戊酸钠0.3,0.5和1.0mmol.L-1作用HepG2细胞24h,丙酮酸法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,赖氏法测定培养液中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性;双丙戊酸钠和丙戊酸钠62.5,125,250,500和1000μmol.L-1作用24h,实时定量逆转录聚合酶链反应RT-PCR测定细胞色素P450家族中CYP1A1mRNA和CYP1A2mRNA表达的变化。结果与溶剂对照组比较,双丙戊酸钠和丙戊酸钠0.1,0.3,1和3mmo.lL-1均显著抑制细胞的存活(P<0.05,P<0.01),且存在浓度依赖关系。双丙戊酸钠与丙戊酸钠0.3,0.5和1mmol.L-1使HepG2细胞培养液中GPT,GOT和LDH的活性明显升高(P<0.05,P<0.01),且随浓度升高,肝酶活性进一步升高。双丙戊酸钠与丙戊酸钠62.5,125,250,500和1000μmol.L-1使HepG2细胞中CYP1A1mRNA和CYP1A2mRNA的表达水平亦逐渐升高。结论双丙戊酸钠和丙戊酸钠对HepG2细胞都有明显的毒性作用,CYP1A1mRNA和CYP1A2mRNA表达水平的升高可能是丙戊酸类药物诱发肝毒性的机制之一。     

头孢地嗪钠的合成

为了简化头孢地嗪钠的合成路线,以乙酰丙酸为起始原料,经氯化、环合、酸析、缩合、成盐等反应,制备头孢地嗪钠,该合成路线工艺简单,反应条件要求低,适合工业化生产。     

PFIA法测定450例癫痫患者丙戊酸钠的血药浓度

目的通过PFIA法(荧光偏振免疫分析法)测定丙戊酸钠的血药浓度,探讨丙戊酸钠临床上的合理应用。方法以PFIA法测定450例癫痫患者的丙戊酸钠的血药浓度。结果450例丙戊酸钠血药浓度的监测结果中,在50~100μg.mL-1治疗窗口的有266例(59.11%),<50μg.mL-1有150例(33.33%),>100μg.mL-1有34例(7.55%);丙戊酸钠治疗的总有效率为80.00%。结论丙戊酸钠的血药浓度存在个体差异大,用药期间定期监测血药浓度对提高疗效以及确保患者用药安全具有重要意义。