变形链球菌葡萄糖基转移酶基因部分DNA克隆

根据变链菌ｇｔｆＢ基因序列设计一对引物，采用ＰＣＲ方法扩增其中的５３１ｂｐ的ＤＮＡ片段，纯化后通过质粒载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（一）转化大肠杆菌ＸＬ１Ｂｌｕｅ构建ｇｔｆＢ基因部分ＤＮＡ克隆，为变链菌基因检测做准备。     

变异链球菌毒力相关转录调节因子的研究进展

研究发现众多转录调节因子参与调节变异链球菌耐酸性等关键致龋毒力因子的表达,虽然仍有许多转录调节因子的作用靶点和调控机制尚不明确,但已有学者针对变异链球菌个别宏观转录调控因子进行单基因突变研究。本文就已发现的影响变异链球菌致龋毒力因子表达的调节因子及其功能和可能的作用机制进行综述。     

变形链球菌葡萄糖基转移酶基因片段的亚克隆序列测定

采用ＰＣＲ方法体外扩增变链菌ＮＧａｇｔｆＢ基因５３１ｂｐＤＮＡ片断，纯化后构建了含该片段的克隆并进行了ＤＮＡ序列进行了测定，为从分子水平揭示变链菌的致龋机制提供信息。     

氟化微量元素对变形链球菌葡萄糖基转移酶影响的比较研究

目的比较氟化微量元素制剂对变形链球菌葡萄糖基转移酶活性的抑制作用。方法含相同氟浓度的5种氟化微量元素制剂(氟化锌、氟化镧、氟化亚锡、氟化锶、氟钼酸铵)和氟化钠分别加入到含变形链球菌悬液的TYC培养基中,采用Ne-son-Somogyi法,观察变形链球菌葡萄糖基转移酶活性的变化。结果氟化钠、氟化锌、氟化锶、氟化亚锡、氟化镧、氟钼酸铵制剂均有抑制变形链球菌ATCC25175葡萄糖基转移酶活性的作用,其中尤以氟化亚锡抑制作用最强(P<0.05)。结论锡可提高氟化物的防龋生物活性,在抑菌防龋方面,氟化微量元素有广泛的应用前景。     

变异链球菌groE操纵子及其表达与调控

变异链球菌耐受口腔内多种环境的变化,主要依赖于多种热休克蛋白基因的表达。其中,groE操纵子表达的GroES-GroEL蛋白可辅助新合成的以及变性的蛋白质折叠、组装、转运和降解,从而影响细胞的代谢。变异链球菌groE操纵子位于1?834?692~1?832?649位点,包括σA型启动子、分子伴侣表达反向重复序列（CIRCE）、groES和groEL及终止子,在进化上高度保守,其表达受热、酸、乙醇和过氧化氢等多种应激环境的诱导,受CtsR和HrcA蛋白的双重负性调节。groE操纵子的调控有HrcA-CIRCE系统负调控假说和CtsR的负调控两种方式,但其具体调控机制尚未在变异链球菌中得到充分证实。从分子水平上研究变异链球菌groE操纵子的结构和调控机制,有助于进一步阐明细胞的生理过程,为了解细胞在应激和病变状态下的分子调节机制打下基础。     

变异链球菌gtfs在不同pH条件下表达的差异性

目的检测具有不同产胞外多糖（EPS）能力的变异链球菌菌株在不同pH条件下产EPS的能力及其与gtfA、gtfB、gtfC、gtfD表达变化的关系。方法选取变异链球菌（血清型c）临床分离株502（高产糖株）和参考株UA159（低产糖株）,以实时定量逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）方法检测在不同pH条件下与变异链球菌产糖能力密切相关的毒力因子gtfA、gtfB、gtfC、gtfD的表达变化。结果在pH5.5条件下,高产糖株和低产糖株gtfA、gtfB、gtfD的表达均有不同程度的升高,而gtfC略降低,高产糖株gtfB、gtfC的表达水平高于低产糖株。结论gtfs的表达水平与变异链球菌的致龋力密切相关。     

调控下颌骨发育的转录因子家族的研究进展

脊椎动物的下颌骨发育涉及一系列信号分子和转录因子,颅神经嵴细胞（CNCC）的迁移、定位和调控是下颌骨发育的关键。转录因子家族在颅面组织发育中有着重要的作用,其表达在某种程度上决定了CNCC的特异性。此文就DLX基因家族、MSX基因家族、OTX基因家族、GSC基因家族、PITX基因家族、PAX基因家族、PRX基因家族、BARX基因家族和HAND基因家族以及其他调控下颌骨发育转录因子家族的研究进展作一综述。     

变形链球菌中葡萄糖基转移酶的研究进展

1 前言龋病是发生于牙齿硬组织的感染性疾病 ,为最常见的口腔疾病。龋病的发生主要与变形链球菌有关 ,这主要是因为它具有产酸和耐酸性 ,能够合成细胞内多糖 (intracellularpolysaccharide,ICP)与细胞外多糖 (extracellularpolysaccha ride ,ECP) ,其中细胞外多糖特别是水不溶性葡聚糖 (waterinsolubalglucan ,WIG)与合成葡聚糖的葡萄糖基转移酶 (glu cosyltransferase ,GTF)已被广大学者公认为致龋的主要因子。变形链球菌有不同的血清型 ,其中变形链球菌 (Streptococcusmutans)c型在人类中的检出率最高 ,高达 80 % ,其次为远缘链球菌…     

变形链球菌Ⅰ型和Ⅲ型合成葡聚糖的研究

目的 通过对Ⅰ型ＪＢＰ（ｃ型）和Ⅲ型６７１５（ｇ型）变链菌在不同状态葡糖基转移酶（ＧＴＦ）所合成的水不溶性和葡聚糖（ＩＧ）和水溶性葡聚糖（ＳＧ）的测定来研究两种变链菌的ＧＴＦ－Ⅰ和ＧＴＦ－Ｓ是否存在差异。方法 制备ＪＢＰ和６７１５的含酶上清液（ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｅｎｚｙｍｅ）及含酶提取液（ｃｅｌｌ－ｂｏｕｎｄ ｅｎｚｙｍｅ）,以蔗糖为底物,恒温培养后分别收集ＩＧ和ＳＧ。     

甜茶甙对变形链球菌葡糖基转移酶的影响

目的研究甜茶甙对变形链球菌葡糖基转移酶的影响。方法实验组采用二倍稀释法,用胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物液体培养基（tryptone-tryptose-yeast extract medium,TTY）将甜茶甙配制成50.00g/L、25.00g/L、12.50g/L、6.25g/L、3.13g/L的溶液。对照组采用不含甜茶甙的TTY培养基。各组分别加入变形链球菌液,厌氧培养24h后离心、盐析得胞外葡糖基转移酶的粗酶,采用考马斯亮蓝法和Somogyi法分别测定总蛋白和还原糖含量,计算酶活力和比活力。结果50.00g/L、25.00g/L、12.50g/L、6.25g/L、3.13g/L甜茶甙溶液和对照组的酶活力分别为0.4775、1.1271、1.4193、6.6998、12.3490、13.9679mU。酶活力和比活力在各浓度组间差异均有统计学意义（P〈0.05）;除3.13g/L浓度组外,甜茶甙各浓度组与对照组酶活力、比活力、总蛋白含量之间差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论甜茶甙对变形链球菌葡糖基转移酶有明显抑制作用。     

随意引物PCR法鉴别口腔变形链球菌的初步研究

目的 :探讨口腔变形链球菌族细菌中各个种和血清型的关系。方法 :采用随意引物PCR法对变形链球菌 (血清型c ,d ,f)及与其同源性相近的血链球菌标准菌株进行PCR扩增 ,建立口腔变形链球菌基因图谱。结果 :变形链球菌与血链球菌基因图谱差异较大 ;变形链球菌各个种基因图谱有差异 ;属于同一个种的变形链球菌不同血清型的菌株基因图谱虽相似但有差异。结论 :运用随意引物PCR法可鉴别不同种或同一种中血清型不同的变形链球菌。提示 :随意引物PCR法是一种鉴别口腔变形链球菌比较简便、准确的方法。     

变形链球菌葡糖基转移酶过表达株粘附模式的扫描电镜观察

通过对变形链球菌野生ＭＴ８１４８及其ＧＴＦＩ过度表达株作蔗糖依赖性粘附实验，发现其起始接种菌量的增，所构建的变链ＧＴＦＩ过度表达株蔗糖依赖性粘附能力明显下降，而ＭＴ８１４８无显著变化。扫描电镜揭示，这是由于ＧＴＦＩ过表达株的粘附模式发生了改变，即由错落有序的立体网状结构转变成片层状结构所致。作者推测这可能与葡聚合成的增加有关。     

PCR同时检测变形链球菌和远缘链球菌

目的:建立一种快速、简便地同时检测变形链球菌和远缘链球菌的方法。方法:以变形链球菌Dextranase基因设计引物,用PCR检测变形链球菌群细菌。结果:变形链球菌(血清型c、e、f)的PCR扩增产物为720 bp;远缘链球菌(血清型d、g)的PCR扩增产物为460 bp;道勒链球菌(血清型h)910 bp;仓鼠链球菌(血清型a),鼠链球菌(血清型b)均为1 270 bp。其它异种菌均不能扩增出产物,因此该PCR检测具有高度的特异性。从细菌纯培养物中PCR检测的敏感性为105菌落形成单位(colony-form ing un its,CFU)。结论:PCR能同时检测变形链球菌和远缘链球菌。该检测方法具有较高的敏感性和特异性,有望运用于临床检测。     

高果糖玉米糖浆对变形链球菌粘附能力的影响

目的：以目前食品加工业中广泛使用的高果糖玉米糖浆（HFCS）为研究对象,通过与蔗糖、葡萄糖和果糖的比较,研究高果糖玉米糖浆对变形链球菌粘附能力的影响。方法：将变形链球菌uA159分别接种于0．25％、0．5％、1％、3％、5％五组不同浓度TSB糖培养基培养18h后,用磷酸盐缓冲液洗脱2次并采用紫外分光光度计540nm检测各试管中的A值,计算粘附比,行方差分析,比较粘附力。结果：4种饮食糖培养基的粘附比存在统计学差异（P〈0．01）,HFCS组的变形链球菌粘附比显著低于蔗糖组,与葡萄糖和果糖组之间无显著差异;5组浓度糖培养基的变形链球菌粘附比之间的差异也具有统计学意义（P〈0．01）。结论：HFCS对变形链球菌粘附力的促进弱于蔗糖,与葡萄糖和果糖无明显差异。     

变形链球菌对牙科合金耐蚀性的影响

目的：探讨变形链球菌对镍铬合金、钴铬合金和金合金腐蚀性能的影响。方法：将3种牙科合金与变形链球菌在液体培养基中共同培养,以单纯培养基和空白组作为对照,8周后,进行电化学实验和扫描电镜观察。结果：电化学实验结果显示,镍铬、钴铬合金的自腐蚀电位绝对值及自腐蚀电流密度值均为培养基对照组低于变形链球菌组及空白对照组,且在变形链球菌组的合金表面不规则破裂孔明显增多。金合金各组自腐蚀电位和电流密度无统计学差异,金合金表面形貌无明显变化。结论：变形链球菌能增加口腔镍铬、钴铬合金的腐蚀倾向与腐蚀速率,但对金合金的影响不明显。     

葡糖基转移酶多肽疫苗HDS免疫大鼠的实验研究

目的　动物体内研究葡糖基转移酶多肽疫苗HDS免疫原性和防龋效果。方法　构建大鼠人工龋模型,分别用人工抗原HDS-KLH,多肽抗原HDS,葡糖基转移酶(GTF)免疫大鼠,酶联免疫吸附法检测大鼠血清和唾液中抗HDS、GTF抗体;体视显微镜下观察各组大鼠磨牙龋坏情况,并用Keyes计分法计分。结果　HDS-KLH免疫组大鼠唾液、血清中抗HDS IgG和IgA水平均高于对照组(P<0·05);HDS-KLH,HDS,GTF免疫组大鼠龋Keyes计分均低于对照组(P<0·01),光滑面防龋效果最为显著。结论　人工抗原HDS-KLH能刺激机体产生针对GTF的保护性免疫,并减少实验大鼠龋齿发生。     

乳清抗体对变形链球菌粘附能力的影响

采用ＥＬＩＳＡ法检测重组乳链球菌ＨＬ１０７免疫后孕兔乳清特异性抗体水平，用＾３Ｈ－胸腺嘧啶同位素标记技术观察特异性抗体变形链球菌粘附能力的影响，结果表明，免疫后孕兔乳清中有高水平的特异性抗体产生，并且明显减少了变形链菌对唾液色被的羟基磷灰石的粘附，提示携带有变形链球菌表面蛋白抗原基因的重组乳链球菌ＨＬ１０７具有良好的免疫原性，乳清抗表面蛋白抗体降低了变形链球菌的粘附能力。     

变形链球菌和远缘链球菌的可溶性多糖和不溶性多糖的测定

目的 :对变形链球菌和远缘链球菌产生的可溶性多糖和不溶性多糖进行测定。方法 :酚硫酸法。结果 :发现变形链球菌产生的可溶性多糖显著高于远缘链球菌 ,而远缘链球菌产生的不溶性多糖高于变形链球菌。结论 :表明在对牙面的粘附作用中远缘链球菌更依赖于蔗糖及其产生的不溶性葡聚糖 ,而变链菌则较少依赖于葡聚糖 ,而可能主要依赖于唾液的介导。