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1.
目的:探讨红芪多糖对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响。方法:体外分离培养人牙周膜细胞。实验分为3组,依次为对照组、脂多糖组和红芪多糖组。对照组细胞用正常的细胞培养液培养细胞;脂多糖组和红芪多糖组细胞用含有脂多糖浓度为10 mg/L的培养液培养细胞;红芪多糖组细胞培养液中加入红芪多糖终浓度为10 mg/L的培养液。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,探针法检测细胞内的活性氧(ROS)水平。试剂盒检测细胞中碱性磷酸酶活性和分泌的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。Western blot检测细胞中c-myc、β-连环蛋白(β-catenin)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)单克隆抗体、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平。结果:脂多糖组细胞存活率明显低于对照组( P<0.01)。脂多糖组细胞凋亡率和Bax水平、ROS水平明显高于对照组( P<0.01)。红芪多糖组细胞凋亡率和Bax水平、ROS水平明显低于脂多糖组( P<0.01)。脂多糖组细胞Bcl-2、c-myc、β-catenin水平和碱性磷酸酶活性明显低于对照组( P<0.01)。红芪多糖组细胞Bcl-2、c-myc、β-catenin水平和碱性磷酸酶活性明显高于脂多糖组( P<0.01)。脂多糖组细胞分泌的TNF-α水平明显高于对照组( P<0.01)。红芪多糖组细胞分泌的TNF-α水平明显低于脂多糖组( P<0.01)。结论:红芪多糖能够抑制脂多糖诱导的人牙周膜细胞凋亡,抑制细胞分泌TNF-α,作用机制可与Wnt信号通路、ROS水平有关。 相似文献
2.
目的:使用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)沉默人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cell, hPDLC) 肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)的基因,观察细胞的增殖情况及脂多糖刺激时增殖能力的变化。方法:酶消化联合组织块法体外培养原代hPDLC,并进行免疫组化鉴定,将细胞分为TRAF6 siRNA组、control siRNA组、NONE组,脂质体法将TRAF6 siRNA、control siRNA分别转染入对应组中,NONE组只加入等量的转染试剂,再使用10 mg/L LPS刺激细胞,RT-PCR检测TRAF6mRNA的表达情况,CCK-8检测沉默前后及LPS刺激时细胞增殖能力的改变。结果:免疫组化鉴定hPDLC培养成功;TRAF6 siRNA组的TRAF6 mRNA的表达水平与NONE、control siRNA组相比显著下降( P<0.001);TRAF6 siRNA组在转染后36、48、72 h的 A值均显著低于相同时间点的2个对照组( P<0.001);使用10 mg/L LPS刺激各组细胞24、48 h时,TRAF6 siRNA组细胞的A值显著低于相同时间点的2个对照组( P<0.001)。结论:沉默TRAF6基因能抑制LPS刺激时hPDLC的增殖,推测TRAF6可能影响牙周炎的发生发展进程,是牙周炎潜在的治疗靶点。 相似文献
3.
目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖( P<0.05或 P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶 相似文献
4.
目的 研究重组人乳铁蛋白(recombinate human lactoferrin,rhLF)对人口腔KB细胞增殖及凋亡的影响,为口腔癌患者提供新的有效治疗途径提供参考。方法 采用CCK-8法检测不同浓度(0、12.5、25、50、100、200 μg/mL)的rhLF分别处理KB细胞24、48、72 h后对细胞增殖的影响;Immunofluorescence及Western blotting方法检测rhLF处理前后DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达。并分别用0、50、200 μg/mL的rhLF处理KB细胞,14 d后观察其对集落克隆形成的影响;0、200 μg/mL rhLF处理KB细胞48 h后,收集细胞并使用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测rhLF处理前后线粒体膜电位的变化。Annexin V-PI染色检测rhLF对口腔癌KB细胞凋亡的影响;Western blotting检测0、50、200 μg/mL的rhLF处理口腔癌KB细胞48 h后Parp、Caspase-3的表达情况。结果 rhLF处理KB细胞的增殖有显著的抑制作用。Immunofluorescence结果显示rhLF处理后γ-H2AX的表达明显增加,Western blotting结果也显示rhLF处理后γ-H2AX的表达成浓度依赖性增加。rhLF抑制KB细胞集落克隆的形成;JC-1荧光检测结果表明红绿荧光的相对比例降低,这种红绿荧光的相对比例降低提示膜电位下降;0、50、200 μg/mL的rhLF处理口腔癌KB细胞48 h的凋亡率为2.02%、7.60%、48.07%;同时rhLF刺激口腔癌KB细胞能诱导Parp、Caspase-3的激活。结论 rhLF能显著抑制KB细胞的增殖并且诱导其细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡途径的激活应激有关。 相似文献
5.
目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中X盒结合蛋白1(XBP1)的表达及观察抑制其表达后对人口腔鳞状细胞癌Tca8113增殖凋亡的影响,并探讨其机制。方法:RT-PCR检测42例口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中XBP1基因的mRNA表达;NC-siRNA和XBP1-siRNA转染至Tca8113细胞内,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,CCK8实验、流式细胞仪分别检测XBP1基因转染对细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达的变化。结果:口腔鳞状细胞癌中XBP1基因的mRNA表达显著高于癌旁组织( P<0.01);转染XBP1-siRNA能够显著降低XBP1的蛋白表达,降低细胞的存活率,促进细胞的凋亡,上调Cleaved caspase3蛋白表达,下调β-catenin、Cyclin D1蛋白表达( P<0.01)。结论:RNA干扰沉默XBP1基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低Tca8113增殖及诱导细胞凋亡。 相似文献
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目的:初步研究模拟微重力(simulated microgravity,SMG)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)细胞骨架及迁移能力影响的信号通路机制。方法:采用酶消化法分离培养hDPSCs,并将其接种于PLGA支架上进行模拟微重力培养及普通重力培养。72 h后收集细胞,行Realtime-PCR检测LARG(leukemia-associated Rho GEF factor)基因的mRNA相对定量表达;拖拽实验检测RhoA-GTP表达情况;western blot检测RhoA及下游信号分子LIMK-P蛋白表达情况。结果:模拟微重力下培养的hDPSCs细胞LARG基因的mRNA表达下调( P<0.05);微重力下RhoA-GTP、RhoA及LIMK-P蛋白表达均较对照组下调( P<0.05)。结论:模拟微重力下人牙髓干细胞细胞骨架的重排,细胞迁移能力的改变可能与RhoA/ROCK信号通路有关。 相似文献
7.
目的:检测人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)诱导矿化过程中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)的表达变化,探讨HMGB1在人牙髓细胞损伤修复中的可能作用。方法:组织块法分离培养hDPCs,收集矿化诱导0、3、7、11、14d后hDPCs的mRNA、蛋白质及细胞爬片,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(western blot)分别检测HMGB1、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1, DMP1)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的mRNA及蛋白表达水平;并检测ALP活性,免疫荧光检测HMGB1在hDPCs矿化过程中的表达。结果:hDPCs矿化诱导后,DMP1、DSPP、ALP及HMGB1的mRNA表达显著性上调,DMP1、DSPP和ALP的mRNA以及碱性磷酸酶活性在诱导7 d、11 d和14 d后与对照组间差异有统计学意义( P<0.05),HMGB1mRNA在矿化诱导11d和14d后与对照组的差异具有统计学意义( P<0.05)。蛋白印迹法检测示细胞内各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调,而细胞内HMGB1的蛋白表达较对照组下调。免疫荧光结果显示hDPCs矿化过程中,HMGB1逐渐从胞核转移至胞浆。结论:在hDPCs诱导成牙本质细胞分化过程中,HMGB1在mRNA水平上与DMP1、DSPP和ALP的表达变化趋势相似,而细胞内HMGB1蛋白水平表达下调,且HMGB1在hDPCs细胞内出现转位,提示HMGB1与hDPCs的成牙本质分化有关,可能在牙髓细胞损伤修复中发挥作用。 相似文献
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目的 研究正常及炎症牙髓组织中巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration-inhibitory factors,MIF)的表达及其对人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)增殖的影响,以期探讨MIF在牙髓炎症中的可能作用.方法采用免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测健康及炎症牙髓组织中MIF的表达情况,并以不同质量浓度[0(对照组)、0.1、1.0、10.0 mg/L]脂多糖刺激HDPC 24 h,ELISA法检测HDPC培养上清液中MIF含量的变化;不同质量浓度(10、30、60 μg/L)的重组人MIF分别作用于HDPC 24和48 h,细胞计数试剂盒法检测细胞增殖率.结果 健康牙髓组织中MIF主要分布于成牙本质细胞层,炎症牙髓组织中MIF分布于成牙本质细胞、炎症细胞、牙髓成纤维细胞和血管内皮细胞中;MIF mRNA在正常牙髓组织和炎症牙髓组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);不同质量浓度脂多糖刺激HDPC后对照组MIF质量浓度为(1048.53±161.81) ng/L,0.1和1.0 mg/L组MIF分泌量[分别为(1772.58±495.05)、(1692.58±337.45) ng/L]与对照组相比均显著升高(P<0.05),约为对照组的1.5倍;10、30、60 μg /L 重组人MIF均可促进HDPC的增殖(P<0.05).结论 MIF在人牙髓组织中有表达且一定浓度脂多糖可促进HDPC MIF的分泌,重组人MIF可促进HDPC增殖,MIF可能在牙髓炎症发展过程中发挥一定作用. 相似文献
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目的:检测牙龈卟啉单胞菌感染对人胎盘滋养层细胞(HTR-8细胞)增殖以及凋亡的影响。方法:用不同感染复数(MOI)的牙龈卟啉单胞菌体标准菌ATCC 33277体外感染HTR-8细胞,未感染牙龈卟啉单胞菌的HTR-8细胞作为空白对照组。感染后,用Cell Counting Kit(cck-8)检测HTR-8细胞增殖情况,用线粒体膜电位凋亡检测试剂(JC-1)检测HTR-8细胞凋亡情况。结果:MOI=10组,感染72 h内,HTR-8细胞增殖未受抑制( P>0.05)。而MOI=100组和MOI=200组,感染24 h开始,HTR-8细胞增殖受到明显抑制( P<0.01)。并且与MOI=100组相比,MOI=200组在感染48 h( P<0.05)和72 h( P<0.01)时,HTR-8细胞增殖明显降低。牙龈卟啉单胞菌感染24 h,MOI=200组HTR-8细胞凋亡率显著高于空白对照组( P<0.01)。感染48 h,MOI=100组HTR-8细胞凋亡率显著高于对照组( P<0.01)。MOI=10组在感染24 h和48 h时细胞凋亡率与空白对照组相比差异无统计学意义。结论:在体外感染模型中,牙龈卟啉单胞菌标准菌ATCC 33277感染可抑制滋养层细胞增殖,且促进其凋亡。提示早产低体重儿与牙龈卟啉单胞菌感染引起滋养层细胞增殖和凋亡失衡有关。 相似文献
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目的研究不同状态人牙髓组织中碱性成纤维细胞因子(b FGF)的表达特点,以及大肠杆菌脂多糖(LPS)刺激后人牙髓细胞(h DPC)中b FGF的表达水平,探讨b FGF在牙髓损伤修复过程中的可能作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫蛋白印迹方法(Western blot)分别检测正常、深龋及牙髓炎牙髓组织中b FGF m RNA和蛋白表达情况。实时荧光定量PCR测定1 mg/L LPS刺激h DPC 6、12、24、48 h后b FGF和热休克蛋白70(HSP70)表达水平的变化;Western blot和细胞免疫荧光染色检测LPS刺激h DPC后b FGF蛋白表达变化。结果实时荧光定量PCR和Western blot结果表明,深龋牙髓组织中b FGF水平显著上调,而正常和牙髓炎牙髓组织中b FGF表达无差异。实时荧光定量PCR检测到LPS刺激h DPC后,b FGF和HSP70 m RNA水平同步上调,在12 h达峰值;Western blot显示,LPS刺激h DPCs 12、24、48 h后b FGF蛋白表达水平均高于正常h DPC;细胞免疫荧光染色证实,LPS刺激12 h后h DPC中b FGF呈强阳性表达,而正常h DPC中b FGF呈弱阳性表达。结论 b FGF在深龋牙髓组织中高表达,且LPS刺激早期可上调h DPC内b FGF表达,推测b FGF可能参与牙髓组织防御修复反应,可能是细胞抗损伤的重要调节机制之一。 相似文献
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ObjectivesTo explore whether a computed tomography (CT) examination of the head and neck region induces biological damage and whether the damage was correlated with the radiation dose. Materials and methodsPeripheral blood was taken from 33 individuals who received head and neck CT examinations. Blood samples were divided into three groups: the control group and the in vivo and in vitro irradiation groups. The number of DNA double-strand breaks was estimated by comparing the changes in the rates of γ-H2AX foci formation in the peripheral blood before and after CT examination. The absorbed dose and effective dose were calculated with the software VirtualDose based on the Monte Carlo method, and the absorbed doses in blood were estimated accordingly. ResultsThe γ-H2AX foci rates were increased in the in vivo (p < 0.001) and in vitro irradiation groups (p < 0.001) after CT examination when compared with those in the control group. The rate of γ-H2AX foci formation showed linear dose–responses for the CT dose index volume (CTDIvol), dose–length product (DLP), and blood dose after CT examination. ConclusionsA CT examination of the head and neck region provides a high enough radiation dose to induce DNA double-strand breaks in cells in the peripheral blood. There was a linear correlation between the formation of DNA double-strand breaks and radiation doses after CT examination. Clinical relevanceIn addition to ensuring image quality, in a real clinical situation, the scanning area should be strictly administered, and repeated operations should be avoided to minimise the patient’s radiation dose. 相似文献
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目的研究人牙髓组织和牙髓成纤维细胞中脂多糖(LPS)信号受体CD14、TLR4的表达特点,探讨牙髓炎症组织中LPS的信号转导途径.方法采用免疫组化染色法观察健康和炎症牙髓组织中CD14、TLR4的表达情况;应用直接免疫荧光标记法,采用流式细胞术检测体外培养人牙髓成纤维细胞在LPS刺激前后的CD14、TLR4阳性细胞率和细胞表面平均荧光强度.结果正常牙髓组织中未见CD14、TLR4阳性细胞;炎症牙髓组织中可见大量CD14、TLR4阳性细胞,CD14、TLR4阳性细胞率差异无统计学意义(P>0.05).牙髓成纤维细胞经LPS刺激后,TLR4平均荧光表达强度和TLR4阳性细胞率均显著增高(P<0.05),而CD14在LPS刺激前、后均无表达.结论炎症牙髓组织中CD14、TLR4的阳性表达,提示LPS可能通过CD14、TLR4信号受体在牙髓炎症组织中发挥作用,而牙髓成纤维细胞在LPS刺激后仅表达TLR4,表明LPS可能通过TLR4对牙髓成纤维细胞发挥作用. 相似文献
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目的:研究DKK1对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)感染人牙髓细胞生物学行为的影响.方法:使用改良酶组织块法分离培养人牙髓细胞并通过免疫荧光染色鉴定细胞来源;通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验、茜素红染色、荧光定量PCR等实验检测DKK1对LPS感染人牙髓细胞的生物学行为的变... 相似文献
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目的 研究体外培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)上CXCR4的表达情况,检测大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激后HDPC培养上清液中基质细胞衍生因子1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)的表达水平,探讨人工重组SDF-1α(recombinant human SDF-1α,rhSDF-1α)对HDPC增殖及迁移的影响.方法 采用免疫细胞化学及间接免疫荧光技术检测HDPC上CXCR4的表达.用不同浓度LPS(0.1、1、10、100 mg/L)和TNF-α(1、10、100μg/L)刺激HDPC 48 h后,ELISA法检测HDPC培养上清液中SDF-1α含量的变化.同时甲基噻唑基四唑(MTT)法及体外趋化实验观察不同浓度rhSDF-1α对HDPC增殖及迁移的影响.结果 正常HDPC胞膜表达CXCR4且其培养上清液分泌SDF-1α,浓度约为(4513.55±962.92)ng/L.在用LPS和TNF-α刺激HDPC后,SDF-1α的表达水平均显著降低(P<0.05).50、100和200μg/L的rhSDF-1α可促进HDPC的增殖(P<0.05),50和100μg/L rhSDF-1α作用9 h可显著趋化HDPC的迁移(P<0.01).结论 CXCR4在HDPC上表达且SDF-1α能促进HDPC的增殖及迁移;SDF-1-CXCR4轴可能在牙髓组织损伤修复中发挥重要作用. 相似文献
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OBJECTIVE: To investigate the expression of CXCR4 in cultured human dental pulp cells (HDPC) in vitro and the corresponding ligand SDF-1alpha level of HDPC supenatants stimulated by lipopolysaccharide (LPS) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), and to explore the role of SDF-1alpha on the proliferation and the migration of HDPC. METHODS: The expression of CXCR4 in HDPC was detected by immunocytochemistry technique and indirect immunofluorescence technique. The culture supernatants of HDPC were collected after HDPC had been simulated by LPS and TNF-alpha of different concentrations for 48h and then the SDF-1alpha level was assayed by quantitative sandwich ELISA. Meanwhile, the effects of recombinant human SDF-1alpha (rhSDF-1alpha) on the proliferation and the migration of HDPC at different concentrations were observed by MTT and Boyden Chamber Assay. RESULTS: CXCR4 was expressed in cytomembrane of HDPC and SDF-1alpha was secreted into their normal cell supernatants with a concentration of (4513.55 +/- 962.92) ng/L. The secretion of SDF-1alpha was both significantly decreased by stimulation with LPS and TNF-alpha (P < 0.05). In addition, rhSDF-1alpha stimulated the HDPC proliferation at the concentrations of 50, 100, 200 microg/L (P < 0.01) and increased the chemotactic migration of HDPC significantly after 9h's incubation with the concentrations of 50, 100 microg/L (P < 0.05). CONCLUSIONS: SDF-1alpha accelerated the proliferation and the migration of HDPC which expressed CXCR4. SDF-1-CXCR4 axis may play a role in repair of pulp injury. 相似文献
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目的 探讨天然免疫受体核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(nucleotide-binding oligomerization domain-2,NOD-2)在深龋牙髓组织中的表达及NOD-2特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)对人牙髓细胞分化的影响.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测深龋及健康人牙髓组织中NOD-2表达差异;1 mg/L MDP刺激体外培养的人牙髓细胞0、2、6、12、24 h,实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹法及免疫荧光检测NOD-2基因及蛋白表达;不同质量浓度MDP刺激人牙髓细胞24 h,蛋白质免疫印迹法检测24 h后牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)的表达;0.1 mg/L MDP 作用于人牙髓细胞0、2、6、12、24 h,检测不同时间点牙本质涎磷蛋白(sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙蛋白mRNA及骨桥蛋白的表达.结果深龋牙髓组织中NOD-2 mRNA相对表达量为(0.2610±0.0824),较健康牙髓组织(0.0024±0.0002)显著增高(P<0.05).实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法结果显示NOD-2表达随时间上调,免疫荧光检测证实NOD-2蛋白表达于胞质.MDP质量浓度为0.1 mg/L时DSP蛋白表达量最大(0.3782±0.0564),并随MDP质量浓度增加而下降;DSPP、骨钙蛋白mRNA表达呈时间依赖性,12 h达最大值,24 h后有所下降;骨桥蛋白表达量随时间上调.结论深龋牙髓组织中NOD-2表达升高,MDP与人牙髓细胞的分化相关. Abstract:Objective To investigate the nucleotide-binding oligomerization domain-2(NOD-2)gene expression in deep caries and the effects of NOD-2 agonist muramyl dipeptide(MDP)on the differentiation of human dental pulp cells(hDPC). Methods NOD-2 gene level in deep caries and healthy pulp tissue was determined by real-time quantitative polymerase chain reaction(realtime-PCR). Realtime-PCR,Western blotting and immunofluorescence were performed to evaluate NOD-2 gene and protein expression. Dentin sialoprotein(DSP)protein level was assessed when hDPC were challenged by different concentrations of MDP for 24 hours, and sialophosphoprotein(DSPP), osteocalcin(OCN)mRNA and osteopontin(OPN)protein level were detected at different time points after incubation with 0.1 mg/L MDP. Results NOD-2 mRNA level was higher in pulp tissue of deep caries(0.2610±0.0824) than that in healthy controls(0.0024±0.0002),P<0.05.The expression of NOD-2 gene and protein increased in a time denpendent manner upon stimulation with MDP. Immunofluorescence confirmed that NOD-2 protein was located in cytoplasm. Moreover, 0.1 mg/L MDP augmented DSP protein level. DSPP and OCN mRNA were elevated with time and reached the peak at 12 h and down-regulated. OPN protein level also increased with time. Conclusions Dental pulp NOD-2 expression are up-regulated in pulp tissue of deep caries. MDP may be related to the differentiation of hDPC. 相似文献
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