荷叶提取物对牙周主要致病菌的抑制作用

荷叶提取：干燥粉碎的荷叶水煎2次，合并水煎液，浓缩至适量，用正丁醇萃取2次，正丁醇萃取液减压浓缩至干，正丁醇提取后的水层浓缩干燥后用40％乙醇回流提取3次，过滤，滤液减压浓缩至干。正丁醇提取物、40％乙醇提取物和40％乙醇不溶物均在70℃真空干燥后供药理筛选。     

柠檬精油对牙周病主要致病菌粘附作用影响的体外研究

目的:研究柠檬精油(LEO)对牙周病主要致病菌黏附作用的影响,探讨其用于预防和治疗牙周病的可行性。方法:光滑聚苯乙烯表面黏附的影响:将菌液与实验分组中各组药液混合培养于96孔板48h,检测各孔内细菌附着情况;蛋白包被聚苯乙烯表面黏附的影响:将菌液与实验分组中各组药液混合培养于形成蛋白包被表面的96孔板48h,检测各孔内细菌附着情况。结果:光滑聚苯乙烯表面黏附的影响:Aa、Pi中LEO组与对照组比较差异无统计学意义,Pg、Fn中LEO组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);蛋白包被聚苯乙烯表面黏附的影响:Aa、Pg、Pi、Fn中LEO组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),LEO能抑制Aa、Pg、Pi、Fn在蛋白包被表面的黏附,对Pg、Fn在光滑聚苯乙烯表面的黏附也有抑制作用。结论:LEO能抑制病原菌对牙面的黏附,阻断牙菌斑的形成,具有预防牙周病的作用。     

1,8-桉叶油素对三种牙周致病菌的抑菌作用研究

目的:测定1,8-桉叶油素对几种常见的牙周致病菌包括牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌的抑菌效果。方法:采用二倍稀释法测定1,8-桉叶油素牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),利用BHI血平板稀释培养法测定最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration, MBC)。采用结晶紫染色法检测1,8-桉叶油素对牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌的生物膜形成的影响。结果:1,8-桉叶油素对牙龈卟啉单胞菌的MIC为31.25μL/mL,伴放线聚集杆菌MIC为15.63μL/mL,中间普氏菌MIC为7.81μL/mL;1,8-桉叶油素对3种牙周致病菌的MBC均为125μL/mL。1,8-桉叶油素能抑制牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌生物膜的形成。结论:1,8-桉叶油素在体外对3种牙周致病菌均具有较好的抑菌作用。     

壳聚糖基温敏水凝胶对牙周常见致病菌的抑制作用

目的:评价壳聚糖-壳聚糖季铵盐/甘油磷酸(CS-HTCC/GP)温敏水凝胶对3种牙周常见致病菌的体外抑菌活性。方法:采用琼脂扩散法测定CS-HTCC/GP温敏水凝胶对牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌和伴放线放线杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和抑菌环直径。采用SPSS13.0软件包对数据进行t检验。结果:CS-HTCC/GP温敏水凝胶对牙周常见致病菌—牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌和伴放线放线杆菌均有较强的抑菌活性。与抗菌剂联合后,无论是水凝胶基质还是抗菌剂,抑菌活性均明显增强。结论:CS-HTCC/GP温敏水凝胶不仅作为药物载体参与组成局部药物释放系统,同时作为活性因子参与抑菌过程。     

臭氧水溶液对牙周可疑致病菌作用的研究

目的：评价臭氧水溶液对常见牙周可疑致病菌的杀菌效果。方法：采用细菌悬液定量实验法,测定不同浓度的臭氧水溶液对牙龈卟啉单胞菌（P．g）ATCC33277、伴放线菌嗜血菌（H．a）ATCC29522、具核梭杆菌（F．n）ATCC10957和牙龈卟啉单胞菌临床分离株作用30、60、90、120 s 的杀菌率,阳性对照组采用不同浓度的过氧化氢溶液,阴性对照组采用蒸馏水。实验样本在厌氧培养72 h 后进行菌落计数并计算杀菌率。结果：臭氧水溶液对几种牙周可疑致病菌均有杀灭效果,且杀菌率随浓度的增加而提高（P ＜0．01）。对 P．g 标准株和临床分离株的杀菌率差异无统计学意义（P ＞0．05）。线性回归分析臭氧水溶液对3种细菌杀灭作用的浓度影响因素β值均大于0．95,时间影响因素β值均小于0．11。结论：臭氧水溶液对牙龈卟啉单胞菌、伴放线菌嗜血菌和具核梭杆菌具有浓度依赖性杀灭效果。     

新型盐酸米诺环素缓释凝胶对牙周致病菌的缓释抑菌作用

目的:评价新型盐酸米诺环素缓释凝胶对牙周主要致病菌的体外缓释抑菌效果。方法:采用超声乳化法制备20 g/L盐酸米诺环素缓释凝胶及非缓释凝胶,以琼脂纸片扩散法检测二者在1、3、5 h和1、3、5、7 d七个时间点的释放液对Pg、Fn、Av、Pi.的抑菌活性,测量抑菌环直径。结果:缓释凝胶组对于Pg、Fn、Av、Pi抑菌作用均可持续到7 d;而非缓释凝胶组对Pg、Fn、Av的抑菌作用仅能维持到3 d,对Pi的抑菌作用可持续到5 d。结论:新型盐酸米诺环素纳米缓释凝胶对Pg、Fn、Av、Pi抑菌作用均可持续到7 d以上,具有较好的缓释抑菌效果。     

舌侧矫治器对牙周致病菌的影响

目的研究舌侧矫治器对患者牙周临床指标和牙周致病菌的影响。方法收集成年正畸治疗患者55例资料,28例使用颊侧矫治器作为对照组,27例使用舌侧矫治器作为试验组,于治疗前和治疗6个月后,分别记录菌斑指数、龈沟出血指数、探诊深度,PCR检测龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomtans,Aa)、福赛斯坦氏菌(Tannerella forsythensis,Tf)3种牙周致病菌的检出率。结果治疗6个月试验组菌斑指数、龈沟出血指数、探诊深度分别为2.36±0.71、2.05±0.49、(3.43±0.56)mm,对照组分别为1.86±0.44、1.67±0.25、(2.87±0.74)mm,2组间差异均有统计学意义(P<0.05);试验组Pg、Aa检出率分别为37.0%和22.2%,对照组的Pg、Aa检出率分别为14.3%和10.7%,试验组高于对照组(P<0.05)。结论舌侧矫治器,较颊侧矫治器,对牙周临床指标影响更大,可造成更多的牙周致病菌聚集。     

血链球菌对牙周可疑致病菌体外拮抗作用的研究

目的体外研究血链球菌与牙周可疑致病菌的相互关系,探讨血链球菌全菌细胞、培养上清液对牙周可疑致病菌的拮抗作用。方法分别采用交叉双层培养基法和微量琼脂糖弥散法测定血链球菌全菌细胞和培养上清液对牙龈卟啉单胞菌、中间普雷沃菌、具核梭杆菌的拮抗作用。结果血链球菌全菌细胞均能拮抗这3种牙周可疑致病菌的生长;而其培养上清液无拮抗作用。结论血链球菌在牙周微生态系中起有益菌的作用,同时交叉双层培养基法是一种简便易行的测定血链球菌抑菌活性的方法。     

牙周致病菌在动脉粥样硬化发生发展中的作用研究

牙周炎与全身健康特别是心血管疾病关系密切,牙周致病菌积极参与了动脉粥样硬化的形成与发展。目前已有研究证据表明,牙周致病菌感染是心血管事件的独立危险因素,其通过多种免疫炎症以及代谢相关分子机制促进动脉粥样硬化病变的发生发展。本文从牙周炎及牙周致病菌与心血管疾病的相关性、牙周致病菌影响动脉粥样硬化的机制等方面,对这一主题进...     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞产生sICAM-1的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对人类脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)的影响。方法：应用厌氧袋法培养P.gingivalis，并用其感染HUVECs，采和酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定培养上清中sICAM-1的含量，结果：HUVECs基础表达少量的sICAM-1;P.gingivalis剂量依赖性增强HUVECs产生sICAM-1蛋白的水平；紫外线、超声波和65℃的热处理都不能抑制P.gingivalis的作用；sICAM-1蛋白水平在P.gingivalis刺激后的4h未见改变，增高的作用从刺激后的8h开始，在12h,16h和20h继续增加。结论：活的和灭活的P.gingivalis都剂量依赖性和时间依赖性地增强HUVECs产生sICAM-1,P.gingivalis可能同样诱导牙龈血管内皮细胞表达sICAM-1，升高的sICAM-1可能参与调节牙周病炎症反应和免疫反应过程。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对牙周韧带细胞LIF mRNA表达的影响

目的观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS）对人牙周韧带细胞（human periodontal ligament cells,HPDLCs）白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）表达的影响,探讨LIF与牙周病发生发展的关系。方法体外分离培养鉴定HPDLCs,取第3~5代细胞用于实验,使用不同浓度（1μg/m L和10μg/m L）的Pg-LPS刺激HPDLCs24h,实时定量反转录-聚合酶链反应检测LIF mRNA的表达。结果 Pg-LPS组LIF mRNA表达均明显高于对照组（P〈0.01）,并且Pg-LPS浓度越高,LIF mRNA表达越强。结论 Pg-LPS能够诱导人牙周韧带细胞LIF表达上调,这一机制可能在牙周炎发生发展过程中发挥重要作用。     

牙周膜成纤维细胞对外周血单个核细胞分化的影响

目的：探讨牙周膜成纤维细胞在破骨细胞形成过程中作用;观察破骨样细胞的生长过程。方法：本实验以含有1α,25（OH）2D3和地塞米松的培养基将牙周膜成纤维细胞、单个核细胞分别进行单独或直接共培养,每3d对TRAP阳性多核破骨细胞的数量及牙本质磨片的吸收陷窝数目和面积分别进行记录、计算。结果：不同时间段间的TRAP阳性单个核细胞与TRAP阳性多核细胞数目相比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）;同时,不同组间的吸收陷窝数目和面积比较,差异具有显著性（P〈0.001）。牙周膜成纤维细胞明显增加了共培养组TRAP阳性多核细胞数量、吸收陷窝数目和面积。然而牙周膜成纤维细胞组与单个核细胞组之间的吸收陷窝数目与吸收陷窝面积差异无统计学意义。结论：末梢血单个核细胞需在牙周膜成纤维细胞存在的条件下,才能形成多核的破骨样细胞。同时,在共培养中,可以发现破骨样细胞在体外存活的时间短暂。     

Runx2、Osterix转录因子过表达驱动内皮细胞成骨分化的机制探讨

目的:探讨Runx2和Osterix (OSX)过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成骨分化的调控作用.方法:通过慢病毒载体,将Runx2和Osterix基因分别转染入HUVECs.通过碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量活性检测,探讨过表达Runx2和Osterix对HUVECs成骨分化的影响.通过RT-PCR、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色检测成骨相关标志物Runx2、OSX、ALP、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)在HUVECs中的表达.采用GraphPad Prism 6.01软件包对数据进行统计学分析.结果:Runx2过表达有利于HUVECs的成骨分化,而Osterix过表达则无此作用.HUVECs转染Runx2过表达慢病毒后,成骨相关基因Runx2、OSX、ALP、BSP、OPN及OCN的转录水平上调,同时Runx2、OSX、OPN及OCN的蛋白表达水平亦有所上调.结论:Runx2过表达可促进HUVECs的成骨分化.     

Effects of sub-minimum inhibitory concentrations of lemon essential oil on the acid tolerance and biofilm formation of Streptococcus mutans

ObjectivesLemon essential oil (LEO) is a kind of secondary metabolite from lemon peels and has been found to inhibit cariogenic bacteria for decades. However, its effects on main cariogenic virulence factors are rarely reported. The present study aimed to investigate the effects of sub-minimum inhibitory concentrations (sub-MICs) of LEO on the acid tolerance and biofilm formation of Streptococcus mutans (S. mutans) and preliminarily reveal the possible underlying mechanisms.DesignsEffects of LEO on the acid tolerance and biofilm formation of S. mutans were investigated by the broth dilution method and crystal violet staining method respectively. The expression of luxS, srtA and spaP gene was also determined to explore the underlying mechanism. In addition, Tea polyphenols (TP), a major natural inhibitor of cariogenic virulence factors, and limonene (LIM), the major component of LEO, were selected as comparisons to evaluate the effects of LEO.ResultsSub-MICs of LEO, LIM and TP exhibited a dose-dependent inhibition of growth of S. mutans at pH ranging from 4.0 to 7.0. The formation of S. mutans biofilm was remarkably inhibited and the inhibitory rates of LEO, LIM and TP were 97.87%, 94.88% and 96.01% respectively at 1/2 MIC. Similarly, a down-regulation was observed in the expression of luxS, srtA and spaP gene at sub-MIC levels.ConclusionsEffects of LEO were similar or slightly stronger than LIM and TP, suggesting that LEO might represent a novel, natural anticarious agent that inhibited the specific genes associated with bacterial acid tolerance and biofilm formation without necessarily affecting the growth of oral bacteria.     

脐静脉内皮细胞外泌体和内皮祖细胞外泌体对hDPSCs增殖及迁移能力的比较研究

目的 将人脐静脉内皮细胞外泌体(human umbilical vein endothelial cells-derived exosome,HUVECs-exo)和内皮祖细胞外泌体(endothelial progenitor cells-derived exosome,EPCs-exo)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和迁移能力的影响进行比较研究,以期为外泌体在牙髓再生中的应用积累经验。方法 采用超速离心法分离提取外泌体,透射电镜观察外泌体形态,纳米粒子跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测外泌体粒径大小,Western blot蛋白印迹检测外泌体标志蛋白CD9、CD63、TSG101的表达。将两种外泌体按照5、10、20 μg/mL浓度梯度分别作用于hDPSCs,通过CCK-8实验检测hDPSCs增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验检测hDPSCs迁移能力。结果 透射电镜下观察两种外泌体均呈圆盘状,粒径集中在30～150 nm,阳性表达CD9、CD63、TSG101三种标志蛋白。与对照组(Control组)相比,两种外泌体在不同浓度下均对hDPSCs增殖能力无显著促进作用,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕实验和Transwell实验表明,与对照组相比,两种外泌体均可促进hDPSCs迁移,差异有统计学意义(P<0.05),其中10 μg/mL外泌体浓度作用效果最明显(P<0.01)。相同浓度的两种外泌体组间作用效果差异无统计学意义(P>0.05)。结论 本实验成功分离提取到两种细胞来源的外泌体并进行鉴定,将不同浓度的两种细胞来源的外泌体作用于hDPSCs,发现对其增殖能力无明显促进作用,但可以促进其迁移,尤以10 μg/mL外泌体浓度促进迁移效果最为明显。     

内皮素-1对牙周膜干细胞肿瘤坏死因子表达的影响

目的:探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)表达的影响。方法:体外培养鉴定牙周膜干细胞,加入不同浓度(1,10,100 nmol/L)的ET-1培养12、24、72 h,以未作任何处理的牙周膜干细胞为对照,采用ELISA及Western blot检测ET-1作用下牙周膜干细胞TNF-α分泌及蛋白表达的改变。结果:与对照组相比,ET-1对牙周膜干细胞TNF-α分泌及蛋白表达具有显著促进作用,且促进作用具有剂量依赖性及时间依赖性。结论:内皮素-1可以诱导牙周膜干细胞分泌TNF-α,而且这种促进作用呈浓度依赖性及时间依赖性。     

浓缩生长因子促人脐静脉血管内皮细胞成血管化作用研究

目的 研究浓缩生长因子（CGF）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的增殖、迁移和分化的作用。方法 取健康志愿者静脉血制成CGF,再用CGF制备浓缩生长因子提取液（CGFe）。体外培养细胞分为2%CGFe组、5%CGFe组、10%CGFe组和对照组。CCK-8和细胞周期实验检测各组细胞增殖活性;划痕实验检测内皮细胞迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞血管内皮生长因子（VEGF）、趋化因子受体4（CXCR4）、血小板衍生因子（PDGF）mRNA表达量。结果 CCK-8法和细胞周期结果显示CGFe明显促进细胞增殖（P<0.05）,且增殖效应呈CGFe浓度依赖性,各组间均有统计学差异（P<0.05）;划痕实验中12 h时实验组划痕愈合效率明显高于对照组,且愈合效率与CGFe浓度呈正比（P<0.05）;CGFe明显促进VEGF、CXCR4、PDGF的mRNA表达量,促进效应与浓度呈正比（P<0.05）。结论 CGFe能有效促进HUVECs的增殖、迁移和成血管分化。