ANXA1对口腔鳞癌TPF化疗敏感性的影响及作用机制探讨

目的 探讨ANXA1在口腔鳞癌TPF化疗中的作用机制。方法 构建ANXA1过表达及低表达细胞系,通过细胞增殖、细胞毒性实验、实时荧光定量PCR和Western免疫印迹方法,分析ANXA1在TPF化疗中的作用,并探讨ANXA1通过上皮-间质转化（EMT）通路在TPF化疗中的作用机制。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果 过表达口腔鳞癌细胞系ANXA1后,细胞生长速率降低,细胞周期减慢,对TPF诱导化药物敏感性降低,口腔鳞癌细胞出现EMT;低表达口腔鳞癌细胞系ANXA1后,细胞生长速率增快,细胞周期加快,对TPF化疗药物敏感性增加,口腔鳞癌细胞出现逆EMT。结论 在口腔鳞癌TPF化疗中,ANXA1过表达导致细胞出现EMT,对化疗敏感性降低。     

雷帕霉素抑制口腔鳞癌细胞增殖及其分子机制研究

目的 通过不同浓度雷帕霉素干预口腔鳞癌细胞系SCC-4的增殖情况，检测雷帕霉素干预后p-AKT、p-STAT3、p-S6K1及免疫因子在SCC-4中的表达，探讨雷帕霉素对口腔鳞癌细胞体外生长的抑制作用及其分子机制。方法 采用20、40、80μmol/L雷帕霉素分别干预体外培养的SCC-4，并设含0μmol/L雷帕霉素的培养液作为对照组，作用24h后，通过MTT检测不同浓度雷帕霉素对于SCC-4增殖的影响；使用Western blotting方法检测雷帕霉素对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关相关蛋白（AKT,STAT3,S6K1）磷酸化情况变化；通过酶联免疫吸附法检测雷帕霉素对PI3K/AKT/mTOR信号通路下游共刺激因子B7-H1表达的影响。结果 MTT结果显示雷帕霉素对于SCC-4细胞的抑制效应呈明显的浓度依赖关系；酶联免疫吸附法结果表明雷帕霉素能够降低PI3K/AKT/mTOR信号通路下游相关共刺激分子（B7-H1）的浓度；蛋白免疫印迹结果则表明在雷帕霉素干预下SCC-4细胞的PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白p-AKT,p-STAT3,p-S6K1表达水平明显降低...     

Garcinol对人口腔鳞癌细胞的抑制作用研究

目的 观察Garcinol对人口腔鳞癌细胞系SCC15增殖、细胞周期、凋亡和克隆形成能力的作用.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,采用不同浓度的Garcinol处理细胞后,通过MTT法检测对细胞增殖的影响,PI单染色法流式细胞仪检测对细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,克隆形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响.结果 Garcinol能显著抑制SCC15细胞增殖(P＜0.01),并呈浓度和时间依赖性.Garcinol能抑制SCC15细胞周期由G1期向S期转变(P＜0.01),并呈浓度依赖性.Garcinol还能够诱导SCC15细胞凋亡(P＜0.01),并呈浓度依赖性.同时,Garcinol能抑制SCC15细胞的克隆形成能力(P＜0.01),并呈浓度依赖性.结论 Garcinol作为一种化学预防制剂,对人口腔鳞癌细胞SCC15具有显著的抑制作用,其机制主要包括抑制SCC15细胞增殖、细胞周期和克隆形成能力,并诱导细胞凋亡.     

蛋白激酶D1在调节口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及药物敏感性中的作用

目的 探讨蛋白激酶D1（PKD1）在人口腔鳞癌细胞SCC-25生长、凋亡及化疗药物敏感性中的作用和机制。方法 转染control-shRNA和PKD1-shRNA质粒,建立PKD1基因沉默的SCC-25细胞系;CCK-8及流式细胞术检测PKD1基因沉默后细胞的增殖、凋亡及细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及多药耐药蛋白P-gp的表达变化。结果 PKD1在口腔肿瘤细胞SCC-25、CAL-27、SACC-83中呈现高表达;PKD1基因沉默后SCC-25细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低,细胞生长受到抑制,凋亡增加;多药耐药蛋白P-gp表达下调,紫杉醇半数抑制浓度及耐药指数明显降低。结论 PKD1通过调控SCC-25细胞内凋亡相关蛋白表达和多药耐药蛋白P-gp表达,调控SCC-25生长、凋亡和对药物敏感性,是口腔鳞癌细胞生物治疗潜在靶点。     

TRPM7离子通道在口腔鳞癌细胞增殖和迁移中的作用

目的:探讨TRPM7离子通道在口腔鳞癌细胞增殖和迁移中的作用.方法:Western blotting,RT-PCR和间接免疫荧光法检测口腔鳞癌细胞OC2中TRPM7的表达和细胞内定位.MTT法和Transwell试验分别检测抑制TRPM7通道(2-APB、siRNATRPM7)对OC2细胞增殖和迁移的影响.Western blotting检测2-APB或siRNA TRPM7阻断PI3K/AKT通路对OC2细胞中TR-PM7的表达影响.采用膜片钳技术初步探索干预TRPM7通道对OC2细胞阳离子通透的影响.结果:OC2细胞中TRPM7过表达,主要表达在细胞质中.阻断TRPM7通道后,OC2细胞增殖和迁移能力受抑制,且呈浓度依赖性和时间依赖性.阻断TR-PM7通道后,抑制OC2细胞TRPM7可下调磷酸化AKT以及磷酸化ERK的表达,而对组成性AKT以及ERK的表达无明显影响.膜片钳技术显示在TRPM7过表达的OC2细胞中TRPM7样电流激活,2-APB阻断TRPM7通道后电流明显减弱,而采用TRPM7通道活化剂Bradykinin后,电流明显增强.结论:TRPM7在口腔鳞癌细胞OC2中过表达,可能通过影响PI3 K/AKT和MAPK-ERK信号转导途径以及阳离子内流发挥对细胞增殖、迁移的调节作用.     

免疫化疗对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 评价白细胞介素—2(IL—2)局部注射联合化疗对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡特性的影响。方法 34例T3、T4期口腔鳞癌患者随机分2组接受术前治疗，其中23例行免疫化疗(IL—2局部注射合并PVP化疗)，11例行单纯PVP化疗。采用免疫组化和原位DNA末端标记法分别检测治疗前后肿瘤增殖细胞核抗原和细胞凋亡的表达情况，计算出增殖指数和凋亡指数。结果 免疫化疗组治疗后肿瘤细胞增殖指数明显低于单纯化疗组(P＜0．05)，细胞凋亡指数明显高于单纯化疗组(P＜0．05)。经过免疫化疗对抑制口腔鳞癌细胞增殖，诱导细胞凋亡具有重要意义。     

PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路在人舌鳞癌细胞耐药中的作用

目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamycin、p70S6K抑制剂LY2584702作用该通路各个环节。Western blot检测通路抑制剂作用后相关蛋白的变化。Cyto-ID荧光染色检测自噬体的形成。流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:Western blot结果显示加入抑制剂后舌鳞癌细胞Beclin1表达分别高于对照组,LC3II与LC3I以及Bax与Bcl-2的比值均升高,该通路的p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白均有下降(P<0.05)。流式结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞凋亡率分别较对照组升高(P<0.05)。Cyto-ID荧光染色后结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞自噬小体的数目明显高于对照组(P<0.05)。对比两组细胞显示加入抑制剂后的Cal27细胞发生凋亡与自噬的水平高于Cal27/CDDP(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路可诱导舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP发生凋亡与自噬,激活的PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路抑制细胞凋亡与自噬是Cal27/CDDP细胞产生顺铂耐药的原因之一。     

Thermo-chemotherapy enhances the immunogenicity of oral squamous cell carcinoma cells by inducing the expression of damage-associated molecular patterns

目的 探讨热疗、化疗及热化疗联合能否诱导口腔鳞状细胞癌细胞表达损伤相关分子模式（DAMPs）增强口腔鳞状细胞癌细胞免疫原性。方法 采用CCK-8实验确定平阳霉素（PYM）工作浓度,选择温度39、42及45 ℃作用于口腔鳞状细胞癌CAL27、SCC-15和Tca8113细胞。膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙啶（PI）联合染色、流式细胞术以及酶联免疫吸附试验（ELISA）探究热疗、化疗及两者联合对3株口腔鳞状细胞癌细胞凋亡、钙网蛋白（CRT）膜表达以及高迁徙率族蛋白B1（HMGB1）分泌的影响。应用SPSS 20.0对数据进行统计学分析。结果 热疗及化疗均可诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡,并促进CRT的膜表达及HMGB1的胞外分泌;两者联合应用,细胞凋亡、CRT膜表达及HMGB1分泌均较单纯化疗组升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 热疗、化疗及热化疗联合均可在诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的同时,促使CRT在细胞膜表面表达,并促进HMGB1的分泌。热化疗联合应用在凋亡诱导以及诱导DAMPs表达方面效果优于单纯化疗。     

三氧化二砷纳米粒对舌鳞癌细胞PI3K/AKT通路的影响

目的：探讨三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用前后PI3K/AKT信号通路关键因子表达情况。方法：使用MTT的方法观察三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用后的存活率情况,并用使用Western blot检测方法检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白PI3K、p-AKT、AKT的表达和变化。结果：三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌细胞作用后,MTT显示舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制,且具有浓度依赖性,PI3K/AKT信号通路关键因子PI3K、p-AKT、AKT表达降低。结论：三氧化二砷纳米粒降低舌鳞癌细胞的PI3K/AKT通路信号传导。     

曲古抑菌素A与5-杂氮脱氧胞苷联用抑制口腔鳞癌生长的体外研究

目的：探索曲古抑菌素A（TSA）与5-杂氮脱氧胞苷（5-aza-2’）联用治疗口腔鳞癌的可能性。方法：采用MTT法研究TSA及5-aza-2’单独作用于口腔鳞癌细胞（Tca-8113）后,对其生长增殖的抑制作用;采用低剂量的TSA及5-aza-2’联用,运用MTT及克隆形成实验检测药物对口腔鳞癌细胞的毒性作用;采用TUNEL法检测低剂量的TSA与5-aza-2’配伍后是否能诱导口腔鳞癌细胞发生凋亡。结果：Tca-8113对TSA及5-aza-2’都呈现出较好的敏感性;与单独运用低剂量的两种药物比较,低剂量的TSA及5-aza-2’联用可以使两种药物的细胞毒性作用显著增强,并明显诱导口腔鳞癌细胞发生凋亡。结论：5-aza-2’可以有效增强口腔鳞癌细胞对低剂量TSA的敏感性,在体外实验中呈现了较好的抗癌效应,TSA与5-aza-2’的配伍可能成为口腔鳞癌治疗领域的新策略。     

LncTUG1通过靶向miR-212-3p对口腔鳞状细胞癌细胞NK细胞杀伤敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（Lnc）牛磺酸调节基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)对口腔鳞状细胞癌细胞自然杀伤细胞(nature killer cell, NK)杀伤敏感性的影响。方法 以口腔鳞状细胞癌细胞作为体外实验对象,转染TUG1 siRNA,利用qRT-PCR、MTT、流式细胞术、LDH方法,分别检测TUG1表达量、细胞增殖、细胞凋亡和NK细胞杀伤率。利用生物信息学软件预测TUG1与miR-212-3p靶向互补结合,构建荧光素酶报告载体,鉴定靶向关系。在口腔鳞状细胞癌细胞中共转染TUG1 siRNA和miR-212-3p 抑制剂,评估miR-212-3p 抑制剂对TUG1 siRNA影响口腔鳞状细胞癌细胞增殖凋亡和NK细胞杀伤敏感性的影响。采用SPSS 21.0软件包对实验数据进行统计学分析。结果 TUG1 siRNA可显著降低口腔鳞状细胞癌细胞中TUG1的表达水平（P=0.000）,降低细胞增殖能力（P=0.001）,促进细胞凋亡（P=0.000）,增加NK细胞杀伤率（P<0.01）。TUG1 siRNA靶向提高miR-212-3p表达量。miR-212-3p 抑制剂可逆转TUG1 siRNA对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和NK细胞杀伤率的影响。结论 下调TUG1可靶向负调控miR-212-3p,抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖并诱导凋亡,提高NK细胞杀伤敏感性。     

甘草苷调控PI3K/Akt/m-TOR信号通路对口腔鳞状细胞癌细胞及裸鼠移植瘤小鼠的作用研究

目的:目的探讨甘草苷(Liquiritin,LIQ)对人口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCs)的增殖抑制、凋亡诱导作用和分子机制并通过裸鼠模型进行验证。方法:CCK-8检测LIQ对口腔鳞状细胞癌细胞的增殖抑制作用;流式细胞术及TUNEL实验检测凋亡情况;Western blot检测蛋白表达变化;构建裸鼠瘤模型,连续给药20 d,绘制肿瘤生长曲线,并计算抑瘤率。结果:LIQ可以抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖及裸鼠瘤体积增长,并诱导细胞凋亡;LIQ抑制PI3K/Akt/m-TOR信号通路的过度激活。结论:LIQ能够在体内外对口腔鳞状细胞癌产生抗癌效果,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT/m-TOR信号通路的过度激活。     

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶通路介导的p53基因抑制口腔鳞状细胞癌增殖和侵袭的实验研究

目的 探讨人重组p53腺病毒（rAd-p53）注射液抑制口腔鳞状细胞癌增殖和侵袭的分子机制。方法 采用 rAd-p53注射液转染人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113,观察p53基因过表达对该细胞系增殖及侵袭能力的影响,并用蛋白免疫印迹的方法检测Ad-p53转染前后Tca8113细胞系内丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT）信号通路相关蛋白,细胞周期及凋亡调控蛋白细胞周期素D1（Cydin D1）、P21、Bcl-2的表达。结果 Ad-p53 转染后显著抑制Tca8113细胞系增殖和侵袭（P<0.01）,并促进细胞凋亡（P<0.001）。蛋白免疫印迹结果显示,rAd-p53 转染后显著提高了Tca8113细胞P53和P21蛋白的表达,同时显著下调了Cydin D1、Bcl-2蛋白的表达及AKT蛋白的磷酸化（P<0.01）。结论 AKT信号通路可能是p53引起的口腔鳞癌细胞增殖和侵袭抑制的关键分子机制,Cyclin D1、P21和Bcl-2蛋白可能是AKT信号通路的下游调控基因,AKT信号通路及下游调控基因有望成为肿瘤基因治疗靶点。     

采用RNA干扰技术沉默survivin基因对口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的影响

目的 应用RNA干扰（RNAi）技术抑制口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-3细胞凋亡抑制因子survivin基因的表达，促进HSC-3细胞的凋亡。方法 合成针对survivin基因的小干扰RNA（siRNA），转染对数生长期的HSC-3细胞。采用半定量逆转录聚合酶链反应检测HSC-3细胞中survivin mRNA的表达，MTT法测定细胞活性，tunnel分析和流式细胞术检测HSC-3细胞的凋亡，并设阴性对照组和空白对照组。结果 转染siRNA组survivin mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组；MTT法测定细胞活性，阴性对照组和空白对照组没有明显差别，但siRNA组的细胞活性明显下降；tunnel分析显示，转染siRNA组的凋亡细胞明显多于阴性对照组和空白对照组；流式细胞术分析，转染siRNA组的凋亡率（24.99％±1.33％）明显高于阴性对照组（1.24％±0.13％）和空白对照组（0.10％±0.02％）。结论 采用siRNA沉默survivin基因能促进口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡，survivin siRNA基因治疗有可能成为口腔鳞状细胞癌治疗的新技术。     

神经钙黏素表达下调对舌鳞状细胞癌细胞生物学能力的影响

目的 研究神经钙黏素(N-cadherin)表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期、凋亡以及迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 利用LipofectamineTM2000将神经钙黏素siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,将细胞分为3组:①未处理组;②对照siRNA组;③神经钙黏素siRNA组.分别收集转染后48 h的细胞,采用新型的细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)8试剂分析转染神经钙黏素siRNA后对细胞增殖能力的影响;运用流式细胞术检测下调神经钙黏素表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响;采用Boyden 小室实验分析下调神经钙黏素对舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞迁移能力的影响;进一步采用蛋白质印迹法检测神经钙黏素表达下调对细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移相关基因表达的影响.结果 神经钙黏素siRNA能明显下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中神经钙黏素蛋白的表达,并显著抑制Tca8113细胞的增殖(P<0.05).细胞周期结果显示,神经钙黏素siRNA组中在G0/G1的细胞比率[(65.41±0.92)%]明显高于未处理组[(41.59±1.43)%]和对照siRNA组[(43.70±2.08)%],差异有统计学意义(F=216.839,P＝0.000).神经钙黏素siRNA组中细胞凋亡的比率[(25.66±1.36)%]明显高于未处理组[(2.38±0.14)%]和对照siRNA组[(2.81±0.12)%],差异有统计学意义(F=850.364,P=0.000).Boyden 小室体外侵袭实验结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,差异有统计学意义(F=140.858,P=0.000).蛋白质印迹法结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)2和MMP-9明显下调,而p21明显上调,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 神经钙黏素在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of downregulation of N-cadherin expression on cell proliferation, cell cycle, cell apoptosis and cell migration in tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 cells. Methods N-cadherin siRNA was transfected into tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 cells and Tca8113 cells were divided into three groups: untreated group, control siRNA group and N-cadherin siRNA group. The cells were harvested 48 h after transfection with N-cadherin siRNA. Cell proliferation of Tca8113 cells was examined by cell counting kit(CCK)-8 after transfection with N-cadherin, and the effects of downregulation of N-cadherin on cell cycle and cell apoptosis of Tca8113 cells were investigated by flow cytometry.The effect of downregulation of N-cadherin expression on cell migration of Tca8113 cells was observed by Boyden chamber experiment, and further expression changes of gene-related cell proliferation, cell cycle and cell migration were detected by Western blotting. Results N-cadherin siRNA downregulated the N-cadherin expression and significantly inhibited cell proliferation of Tca8113 cells (P<0.05). The results of cell cycle revealed that the percentage of G0/G1 phase in N-cadherin group [(65.41±0.92) %] was significantly higher than that in untreated group [(41.59±1.43)%] or control siRNA group [(43.70±2.08)%], and there was significant difference among the three groups (F=216.839,P＝0.000).The percentage of cell apoptosis in N-cadherin group [(25.66±1.36)%] was significantly higher than that in untreated group [(2.38±0.14)%] or control siRNA group [(2.81±0.12)%], and there was significant difference among the three groups (F=850.364,P=0.000). The cell number migrated into memebrane in N-cadherin group was significantly lower than that in untreated group and control siRNA group, and there was significant difference among the three groups (F=140.858,P=0.000). Further, compared with untreated group and control siRNA group, the expressions of matrix metalloproteinase(MMP)-2 and MMP-9 proteins were significantly downregulated and expression of p21 protein was significantly upregulated (P<0.05). Conclusions N-cadherin may play a role in occurrence and development of tongue squamous cell carcinoma.