不同来源的N-乙酰神经氨酸裂合酶的特性及在大肠埃希菌中的表达

综述了N-乙酰神经氨酸裂合酶的特性、应用及反应机理，对不同来源的N-乙酰神经氨酸裂合酶进行了比较。简要阐述N-乙酰神经氨酸裂合酶在大肠埃希菌中的克隆表达及其纯化。     

N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶的克隆、表达和活性测定

N-乙酰-D-神经氨酸是一类特殊的氨基糖的重要代表，有重要的医药应用价值。本文从大肠埃希氏菌中克隆N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因，并得到高效表达的醛缩酶。经纯化后催化活性实验结果表明，醛缩酶可将N-乙酰-D-甘露糖胺高效率地转化为N-乙酰-D-神经氨酸，表现出较高的催化活性。本工作为N-乙酰-D-神经氨酸酶的大规模催化合成奠定了基础。     

10-乙酰乙酰紫杉醇标准品的制备工艺研究

目的 研究半合成紫杉醇中工艺杂质10-乙酰乙酰紫杉醇的制备方法。方法 选择性地保护紫杉醇的2''位和7位羟基,然后在碱性条件下脱去10位乙酰基,未保护的10位羟基与2,2,6-三甲基-4H-1,3-二噁英-4-酮进行缩合,最后脱去7位和2''位的保护基,制备得到10-乙酰乙酰紫杉醇。结果 以紫杉醇为原料通过5步反应制备得到10-乙酰乙酰紫杉醇,总收率为27%,纯度高达95%。结论 为10-乙酰乙酰紫杉醇标准品的制备提供了简便易行的方法,有利于紫杉醇原料药的质量控制与评价。     

5—甲氧基乙酰胺基—2，4，6—三碘异酞酰氯的合成

以间苯二甲酸为原料,经硝化、还原、碘化、酰氯化、酰胺化制得碘普安中间体5－甲氧基乙酰胺基－2,4,6－三碘异酞酰氯,总收率为41．9％。     

4′—甲基—N—叔丁基—1′，2—联苯磺酰胺的合成

4′-甲基 - N-叔丁基 - 1′,2 -联苯磺酰胺 ( 1 )是合成血管紧张素 受体拮抗剂如 MK- 996的关键中间体 [1] ,可以对溴甲苯 ( 2 )为原料 ,按图 1所示方法合成。　　文献[2 ] 用中间体 3和 Sn( CH3 ) 3 Cl合成 4-三甲基锡甲苯以制备 1 ,本文改用价格、毒性均较低的Sn( n- Bu) 3 Cl,二者反应收率相当 ;文献 [3 ]由 5合成6,收率为 35 % ,以 6合成 7时 ,收率为 84% [2 ] ,分步操作反应总收率为 2 9% ,本文无需分离中间体 6,直接将反应混和物投入氯仿中 ,并与叔丁胺反应制得7,产率提高为 60 %。实验部分4-三正丁基锡甲苯 ( 4 )Mg( 0 .4g,1 6…     

鱼腥藻N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的从鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC 7120)中克隆N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶(N-acyl--Dglucosamine 2-epimerase,AGE)基因,并在大肠杆菌中表达。方法利用PCR技术从鱼腥藻染色体组扩增AGE基因,通过基因工程方法构建表达质粒pLY-11,在大肠杆菌中表达,并利用Ni-NTA柱分离纯化。利用柱前衍生化的方法,通过HPLC检测表达产物转化N-乙酰-D-甘露糖胺(N-acyl-D-mannosamine,ManNAc)的活性,并联合N-乙酰神经氨酸裂合酶(N-acetylneuraminatelyases,NAL),进行双酶转化生成N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)实验。结果AGE基因在大肠杆菌中表达,可溶性产物蛋白占总可溶性蛋白质量的18%,经纯化后得到1.6 g.L-1产物蛋白。双酶转化实验中,转化终产物Neu5Ac质量浓度为14.8 g.L-1。结论鱼腥藻7120 AGE基因在大肠杆菌中的表达产物具有活性,为双酶转化制备Neu5Ac进行了初步的探索。     

乙酰阿魏酰氯合成工艺的优化

目的优化乙酰阿魏酰氯的合成工艺。方法先以香草醛和乙酸酐等为原料,经Perkin反应合成乙酰阿魏酸,进一步制备乙酰阿魏酰氯。按正交表L9(34)表设计考察乙酰阿魏酸和乙酰阿魏酰氯合成的影响因素,对乙酰阿魏酸合成中反应时间、PEG-400用量及投料比等因素进行优选,同时也考察乙酰阿魏酰氯合成的反应时间、反应温度及乙酰阿魏酸与氯化亚砜的摩尔比等因素对吸收率的影响。结果前者最佳工艺为A1B2C1,后者最佳工艺为A1B2C2,两步总收率达65%。结论该最佳工艺可缩短反应时间,提高生产效率,适合工业生产。     

酚性2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成 及抗抑郁活性

目的 设计合成酚性2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷并研究其抗抑郁活性。方法 以N-乙酰氨基葡萄糖为起始原料经多步反应合成目标化合物,化合物结构经1H-NMR、13C-NMR、IR、高分辨质谱确证;选择经典的抗抑郁动物模型—小鼠悬尾、强迫小鼠游泳、利血平拮抗、小鼠5-HTP增强实验等对部分化合物进行抗抑郁活性的筛选。结果与结论 设计合成了12个化合物,其中有8个是未见文献报道的新化合物。对所合成的5个化合物进行抗抑郁活性筛选,发现有3个表现出明显的抗抑郁活性,有进一步研究开发的价值。     

DCC/DMAP催化制备乙酰阿魏酸苯丙醇酯

目的改进乙酰阿魏酸苯丙醇酯的合成工艺。方法以N,N-二环己基碳二亚胺（DCC）和4-二甲胺基吡啶（DMAP）为催化剂,以乙酰阿魏酸和1-苯丙醇（又名利胆醇）在室温下制备乙酰阿魏酸苯丙醇酯。结果该方法反应条件比较温和,均可合成乙酰阿魏酸苯丙醇酯,DCC/DMAP法反应3h,产率73.4%。结论以DCC/DMAP法合成乙酰阿魏酸苯丙醇酯,反应时间更短、收率更高。     

3—氨基吡咯烷及其N—乙酰物的合成

３－苄胺基丙酸乙酯（４）经Ｎ－烷基化、Ｄｉｅｃｋｍａｎｎ环合、脱羧、成肟与催化氢化５步反应得到３－氨基－１－苄基吡咯烷（９），收率３７．５％。由９分别合成了３－乙酰胺基吡咯烷（２），总收率从丙烯酸乙酯计分别为３０％与２０％。     

2-乙酰噻吩吖嗪及其过渡金属配合物的合成与活性

目的 研究2-乙酰噻吩吖嗪及其过渡金属Cu^2 ，Fe^3 配合物的合成与生物活性。方法 从2-乙酰噻吩和水合肼出发合成2-乙酰噻吩吖嗪，进而合成了其过渡金属Cu^2 ，Fe^3 的配合物。用MS，^1H—NMR对配体进行了确认。通过元素分析、摩尔电导率、红外光谱、紫外光谱等手段对配合物进行了表征。用NBT法研究了配合物对超氧阴离子自由基的抑制作用；并利用MTT法和SRB法对其进行了抗肿瘤活性体外筛选实验。结果 发现配体和配合物都具有一定的生物活性，且Cu配合物活性较好。结论 配合物的生物活性可能与中心离子的最外层d轨道的电子结构有关。     

1—（4—甲氧基）苯基—2—丙胺的合成

以对羟基苯乙酸为原料,采用了一条新路线合成了平喘药福莫特罗重要中间体1-（4-甲氧基）苯基-2-丙胺,反应总收率38%。方法操作简单、可行,适于实验室合成。     

复合氨基酸注射液（17AA）中N—乙酰—L—酪氨本通讯N—乙酰—L—半胱氨酸的HPLC测定

对复合氨基酸注射液（17AA）中含量较低的N-乙酰-L-酪氨酸及N-乙酰-L-半胱氨酸用HPLC法进行测定,采用阳离子交换色谱柱,以水（取0.05mol/L硫酸1ml置1000ml量瓶中以水定容,调节pH至3.0)为流动相,检测波长为210nm。该方法在10-100ug/ml范围呈良好的线性,相关系数分别为0.9996和0.9999,平均回收率分别为99.94%和99.72%,RSD分别为0.42%及1.19%。     

环氧酶—2抑制剂美洛昔康的合成

报道新型抗炎药物美洛昔康（1）的合成方法。以市售糖精钠为起始原料,通过缩合、扩环、甲基化等三步反应制备关键中间体（4）。采用丙酣为原料经过溴代、缩醛和硫脲环合后得到了关键试剂2-氨基-5-甲基噻唑（7）。（4）和（7）进行胺解反应合成得到目的的产物（1）。该药的化学结构通过元素分析、红外光谱和核磁共振氢谱得到证实。以糖精钠计算产品总收率为45.6%。该方法可适用于工业规模化生产。     

2，4—二氟苯甲酸合成的改进

2,4-二氟苯甲酸 ( 1 )是抗真菌药氟康唑的重要中间体 ,一般以间二硝基苯 [1]为原料 ,经还原、重氮化、氟代、酰化、氧化等 5步反应制备。此法反应步骤较长 ,重氮化反应需低温控制 ,操作难度大。我们以2 ,4-二硝基甲苯为原料 ,经高锰酸钾氧化得 2 ,4-二硝基苯甲酸 ( 2 ) ,氟代后制得 1 (图 1 )。本法操作简便 ,成本低廉 ,收率较好 (总收率 49% ) ,是一条较好的工艺路线。图 1　 1的合成路线实验部分2 ,4-二硝基苯甲酸 ( 2 ) [2 ]装有电动搅拌器、球型冷凝管和温度计的三颈瓶中加入 2 ,4-二硝基甲苯 ( 5 .5 g,0 .0 3mol)、吡啶( 30 ml)和水 ( …     

乙酰乙基次卟啉IX的合成

随着新药卟吩姆钠 (profimersodium)批准用于治疗复发性浅表乳头状膀胱癌、某些肺癌及食管癌 [1] ,以及国内独立研制的血啉甲醚已用于临床治疗某些实体瘤[2 ] ,卟啉类化合物的光动力治癌效果已引人瞩目。在卟啉类化合物的合成研究中 ,我们试图以三氧化铬氧化羟乙基 -乙烯基次卟啉 IX(1或2 ) [3 ] 来合成乙酰乙烯基次卟啉 IX(3或 4) ,但波谱鉴定表明 ,生成的产物是乙酰乙基次卟啉 IX(5或6) ,羟基氧化的同时双键被还原。这种在氧化环境下意外发生双键还原的类似反应未见文献报道 ,通过这种方法首次合成这类化合物。实验部分3-乙酰 - 8-乙基…     

固体超强酸SO4^2-/ZrO2催化合成乙酰水杨酸

以水杨酸和乙酸酐为反应原料,采用固体超强酸SO42-/ZrO2为催化剂合成了乙酰水杨酸,考察了超强酸的焙烧温度,反应温度,反应时间,原料摩尔比,以及催化剂用量对反应的影响.结果 表明,当焙烧温度为650℃,反应温度80℃,反应时间30 min,水杨酸与乙酸酐摩尔比为1:2.0,催化剂用量为0.8 g时,乙酰水杨酸收率可达82.4%.重复使用6次仍具有良好催化活性.     

7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)的合成研究Ⅱ.7-苯乙酰氨基去乙酰氧基头孢烷酸的合成

本文在制得青霉素G亚砜的基础上,完成了重排酸的扩环反应,重点探讨了扩环反应的最优化条件.青霉素G亚砜与N,N′-双(三甲基甲硅基)脲(BSU)在55℃下反应,得到亚砜的酯化物.加入催化剂吡啶乙酰溴,回流条件下发生扩环反应.最后加水脱去酯基,加酸析出产物重排酸.通过正交实验可得出以下结论:当N,N′-双(三甲基甲硅基)脲-亚砜为2.5∶1,乙酰溴-亚砜为0.4∶1,吡啶-乙酰溴为1.5∶1,回流时间为3.5h,酸化pH值为1.8时,扩环反应结果最好,总收率可达76%,纯度97%以上.     

高纯度土霉素碱制备工艺研究Ⅱ．土霉素新产品中2—乙酰—2—去酰胺土霉素的去除

2－乙酰－2－去酰胺土霉素（ADOTC）是土霉素发酵过程中产生的共生物杂质,母环结构与土霉素（OTC）相同,所以很难去除。本文提出的沉淀分离方法,根据A酸能与ADOTC和OTC形成不同溶解度的络合物的性质,使沉淀和溶液分开,因而能有效地把OTC中的ADOTC分离出来,且加入K4Fe(CN)6-ZnSO4净化超滤后使OTC的HPLC测定纯度由96．14％提高到98．72％,ADOTC含量由1．89％下降到0．37％。     

RP—HPLC法测定17种复方氨基酸注射液中的N—乙酰—L—半胱氨酸和N—乙酰—L—酪氨酸

复方氨基酸注射液(17AA)是用于手术、严重创伤、大面积烧伤引起的严重氨基酸缺乏以及各种疾病引起的低蛋白血症的氨基酸类药。其中N-乙酰-L-半胱氨酸(以下简称AC)和N-乙酰-L-酪氨酸(以下简称AT)的含量测定,部颁标准采用阳离子交换树脂为填充剂。本文采用C_(18)柱同时测定AC及AT。方法简便,有较好的精密度和准确度。