三种标记法对脐血CD34+造血干细胞绝对计数的比较分析

CD34抗原的相对分子质量为105000～120000，选择性表达于早期造血干/祖细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面，该抗原在原始造血中表达最强，随着细胸分化、其表达水平逐渐减弱直至消失，因此一直作为干/祖细胞表面的一种特征性标志而广泛应用于造血干细胞基础研究和临床。脐带血中含有丰富的造血干/祖细胞，被认为是极具潜力的继骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源。     

外周血CD34+细胞绝对计数可靠预示自体外周血干细胞采集效果

目的　为确定外周血CD34+细胞绝对计数能否可靠预示自体外周血干细胞的采集效果。方法　用流式细胞仪ProCOUNT方法对采集的 2 5份次移植物和采集当天外周血行CD34+细胞绝对计数 ,同时做外周血常规检查和移植物集落形成单位 (CFU)计数 ,每份次移植物以CD34+/kg ,单个核细胞 (MNC) /kg,粒 巨噬细胞集落形成单位 (CFU GM) /kg ,红细胞集落形成单位 (CFU E) /kg等为指标 ,与患者采集当天的外周血CD34+细胞绝对计数、CD34+细胞百分比、WBC ,MNC ,中性粒细胞(NEU)或血小板 (PLT)等各项指标进行相关分析和逐步回归分析。结果　 ( 1)Spearman相关分析结果 :外周血CD34+细胞绝对计数与移植物CD34+/kg高度相关 (r=0 790 ,P <0 0 0 1) ,外周血CD34+细胞百分比与移植物CD34+/kg相关 (r=0 6 17,P <0 0 5 )。外周血WBC、MNC、NEU、PLT或RBC与移植物CD34+/kg无关。外周血CD34+细胞绝对计数与移植物CFU E相关 ,而与CFU GM无关。外周血MNC与移植物MNC/kg相关。 ( 2 )逐步回归分析结果 :移植物CD34+/kg只与外周血CD34+细胞绝对计数高度相关 (P <0 0 0 1) ,而与外周血CD34+细胞百分比无关。结论　移植物CD34+/kg只与外周血CD34+细胞绝对计数高度相关 ,外周血CD34+细胞绝对计数能够可靠预示自体外周血干细胞的采集效果     

外周血CD34+细胞计数预测造血干细胞收获量

目的了解外周血CD34+细胞计数与造血干细胞收获量的关系.方法用流式细胞仪Pro-COUNT方法检测了16例造血干细胞移植患者单采前外周血和采集物中CD34+细胞百分率、绝对数,用血细胞计数仪计数白细胞数.分析各项检测指标与CD34+细胞收获量(×106/kg体重)的相关性.结果外周血白细胞计数、CD34+百分率、CD34+细胞计数与CD34+细胞收获量的相关系数分别为-0.307,0.738,0.665.经相关系数t检验,单采前外周血白细胞计数与CD34+收获量无相关性(P＞0.05),而外周血CD34+百分率和绝对计数与CD34+收获量密切相关(P＜0.01).结论外周血CD34+计数可准确预测采集效果,确定干细胞采集时机.     

CD34—造血干细胞的研究进展

造血干细胞（ＨＳＣｓ）的表型一直是研究的重要课题。一般认为：ＣＤ３４＾＋是骨髓ＨＳＣｓ的标志之一,但近年研究发现：存在－ＣＤ３４＾－ＨＳＣｓ群,它能长期重建造血并可分化主国ＣＤ３４＾＋细胞,可能是ＣＤ３４＾＋细胞的前身细胞。本对ＣＤ３４＾－ＨＳＣｓ从发现、含量、表面分子表达、体外体内生物学特性及体外培养扩增条件方面的研究进展等作一综述。     

动员外周血CD34阳性细胞流式细胞术测定中的策略探讨

探索用流式细胞术测定动员外周血中CD34^ 细胞的简便有效的方法，以便在干细胞动员中进行有效的动态监测，及时收取干细胞，把握最佳移植效果，将经药物动员的移植供的外周血用CD34和CD45荧光抗体标记，用红细胞裂解液将红细胞裂解后经流式细胞仪检测，运用恰当的分析窗口，有效的设门分析结合干细胞的生物学特性，确定CD34^ 细胞在窗口中的确切位置，统计CD34^ 细胞在有核细胞中的比例，结果表明，通过本方法可有效地测定0.05%-0.1%的CD34^ 细胞的相对含量，在药物动员的第5或6天，多数患外周血中CD34^ 细胞达到峰值，某些患外周血中CD34^ 细胞可超过1%，结论：通过标记中的有效阻断和多参数分析，本方法可对动员外周血中微量的CD34^ 细胞进行有效的动态监测，对适时采集干细胞进行移植提供了重要的参考。     

3种流式细胞术计数脐血CD34+细胞方法的比较

目的　比较 3种流式细胞术 (FCM )计数CD34 + 细胞的方法。方法　对CD34 + cellquantitation (CCQ)和ISHAGE两种方法进行了改良 ,并与ProCOUNT方法比较。结果　改良CCQ(iCCQ)和改良ISHAGE(iISHAGE)避免了CD45 dim/SSClow细胞的损失 (11.0± 9.6 %) ;iCCQ计数值高于iISHAGE和ProCOUNT(均 0 .0 0 1

相似文献   

流式细胞仪ProCOUNT法计数CD34+细胞影响因素分析

目前外周血干细胞移植（PBSCT）已成为治疗恶性血液病、实体瘤及自身免疫病的重要手段之一，并在各学科有着越来越广泛的应用。对于有剂量要求的造血干细胞移植方案而言，精确的造血干细胞计数十分重要。精确计数CD34^＋的数量可判定动员方案是否成功。何时开始何时终止采集，并可用于比较多个移植中心的疗效。目前流式细胞术单平台法ProCOUNT计数CD34^＋细胞以其快速定量、精密度高等优点成为最受欢迎的一种计数方法，但用流式细胞仪ProCOUNT软件计数CD34^＋细胞时常会遇到各种问题，并可能影响检测结果。本文对我院利用ProCOUNT法计数干细胞动员后外周血及采集物CD34^＋细胞的实验过程中遇到的问题及处理方法进行总结，以不断提高检验技术水平。     

关于CD34^-造血干细胞的新观点

最近的研究表明CD34^-造血干细胞的存在，改变了传统的造血干细胞必须表达CD34抗原的观点。近来大量资料对其功能、与CD34^ 细胞的关系、表面标志以及基因表达等作了报道，现对此做一综述。     

高剂量化疗联合自体外周血造血干细胞移植时骨髓及外周血采集物中CD34+细胞黏附分子的表达

本研究的目的是应用免疫荧光直接三色标记和流式细胞术(FCM)，观测高剂量化疗(HDC)联合自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)时不同阶段的骨髓及外周血CD34^ 细胞，表达CD54、CD49d和CD62L的情况，探讨不同来源的CD34^ 细胞表达黏附分子的差异及其临床意义。将动员前、干细胞采集后和移植结束而骨髓重建后的骨髓样本及每次外周血单个核细胞样本，以CD34-PE和CD45-PerCP标记的同时，分别加CD54-FITC、CD49d—FITC、CD62L—FITC直接三色荧光标记．应用FACS测定CD34^ 细胞及各黏附分子表达情况，并比较不同时段骨髓中各类黏附分子表达的差异，以及外周血造血干细胞采集物与动员前骨髓中各类黏附分子表达的差异。结果表明．动员前、采集后及移植重建后骨髓中CD34^ 细胞对CD54、CD49d和CD62L表达的变化无统计学差异；造血干细胞第1和第2次采集物之间CD34^ 细胞对CD54、CD49d和CD62L的表达变化也无统计学差异；而造血干细胞采集物中CD34^ 、CD49^ 细胞较之动员前骨髓中CD34^ CD49d^ 细胞明显减少(P=0．001)。结论：化疗联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的动员方法，可使骨髓中CD34^ 细胞的CD49d表达下调，并使之动员而进入外周血，移植重建后骨髓中CD34^ 细胞的CD49d表达趋于正常，其进一步的临床意义有待更多的病例积累予以阐明。     

Clini MACS纯化自体外周血CD34+造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤1例

多发性骨髓瘤（ＭＭ）在自体造血于细胞移植（ＡＳＣＴ）后复发的主要原因,除骨髓清除治疗后患者体内存有残留的肿瘤细胞外,还与干细胞采集物中的肿瘤细胞污染有关［１］。移植动员治疗及细胞因子应用后,伴随ＣＤ３４＋造血干细胞的增加循环中肿瘤细胞也增加。分选外周血干细胞（ＰＢＳＣ）,即可富集ＣＤ３４＋造血干细胞,又可清除骨髓瘤细胞的污染［２］。我们利用此技术,对多发性骨髓瘤病人的自体外周血干细胞移植物进行了体外净化。１ 资料与方法１．１病人情况 中年男性,有左肩胛骨及胸骨上段隆起约３ｃｍ,质硬有压病;骨扫描示…     

CD34-细胞是否为更原始的造血干细胞

造血干细胞（ＨＳＣ）凭借其强大的自我更新和多系分化的能力而维持机体造血处于一相对恒定的状态,并持续一生。因此,ＨＳＣ被认为是进行造血组织移植后重建长期造血和免疫功能的关键成分,而且在某些疾病的基因治疗中是最理想的靶细胞。因而,如何有效地分离纯化造血干细胞始终是血液学研究领域的热点问题,这使得造血干细胞表型的研究显得尤为重要。目前,普遍认为人ＨＳＣ的表型为ＣＤ３４＋ＣＤ３８－Ｌｉｎ－ＨＬＡＤＲ－Ｔｈｙ１＋ｃｋｉｔ＋ＬＦＡ１－ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ７１－Ｒｈｏｄｕｌｌ。其中ＣＤ３４是早期造血细胞…     

流式细胞仪ProCOUNT方法计数CD34^＋细胞

目的：评价流式细胞仪ProCOUNT方法计数CD34^ 细胞的方法及其临床应用，方法：用核酸染料设阈值，根据已知的干／祖细胞特点，表达CD34抗，CD45弱阳性或阴性，核酸染料着色强及侧向散射光低表达，用多参数设门策略精确识别干／祖细胞，结果：ProCOUNT方法批内精密度为15．8％（CD34^ ／有核细胞＝0．035％）和9．3％（CD34^ ／有核细胞＝2．785），平均回收率91．8％，12例标本中CD34^ 细胞平均为1．99％，结果为7511／μl。结论：ProCOUNT法操作简便，精密度高，能准确计数CD34^ 细胞，适合临床常规应用。     

中剂量rhG-CSF对正常供者外周血CD34+细胞动员效果

本研究探讨中等剂量600μg/d粒细胞集落刺激因子(GCSF)对正常供者CD34 细胞的动员效果及动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化。对2002-2004年我科31例健康供者给予rhGCSF600μg/d,在动员的第4天开始采集外周血干细胞(PBSC),并检测动员前后白细胞总数、动员后的有核细胞(NC)数、单个核细胞(MNC)数、CD34 细胞数及粒巨噬细胞集落形成单位(CFUGM),同时观察动员及采集过程中的不良反应。对12例供者GCSF动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化进行了观察。结果显示:600μg/d组与既往使用的300μg/d组相比,rhGCSF动员后的外周血细胞中NC、MNC和CD34 细胞及CFUGM显著增加(P<0.05),受者造血重建时间缩短(P<0.05),动员和采集过程中的不良反应发生率无明显上升(P>0.05),无严重不良反应发生。动员后CD3 细胞在PBMNC中的比例较动员前下降(15.05±3.3)%,(P<0.05)。动员前后CD4 /CD8 淋巴细胞的比值无明显变化(P>0.05)。结论:600μg/d的GCSF对正常供者的动员效果好,受者造血重建快,无严重不良反应发生。动员后PBMNC中CD3 细胞的下降及CD4 /CD8 淋巴细胞比值无明显变化,从而使得移植后急性GVHD的发生率无明显上升。     

CyFlow Space流式细胞仪CD34+细胞绝对计数分析

目的 比较在Partec CyFlow Space流式细胞仪上采用不同设门方法计数CD34+造血干细胞结果的差异.方法 采集经骨髓动员的患者外周静脉血标本30例,在分别采用同型对照设门法和国际血液治疗与移植工程协会(ISHAGE)推荐设门法设置流式细胞仪后进行标本测定.结果 两种设门法标本计数结果具有相关性(r=0.9...     

CD34~-造血干细胞的研究进展

造血干细胞(HSCs)的表型一直是研究的重要课题。一般认为:CD34~ 是骨髓HSCs的标志之一。但近年研究发现:存在一CD34~- HSCs群,它能长期重建造血并可分化为CD34~ 细胞,可能是CD34~ 细胞的前身细胞。本文对CD34~- HSCs从发现、含量、表面分子表达、体外体内生物学特性及体外培养扩增条件方面的研究进展等作一综述。     

CD34抗原阴性的造血干细胞

即往研究表明造血干细胞(HSC)存在于CD34~ 的细胞组群中,但最近研究发现在鼠和人体内存在有CD34~-的HSC。本文对CD34~-HSC的认识现况作了一简要的概述。     

CD34定量分析外周血干细胞的研究

目的定量检测外周血干细胞(PBSC).方法以藻红蛋白(PE)标记的CD34单克隆抗体,用流式细胞术(FCM)对34例白血病患者与33例健康成人外周血表达CD34抗原(CD34+)的细胞进行定量分析,并以普通光学显微镜(LM)、透射电子显微镜(TEM)、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)分别对CD34+/CD34-细胞进行观察.结果经LSCM证实,FCM定量检测CD34+细胞特异性强,CD34+细胞在0%～16.1%范围内线性良好(r=0.9947),当CD34+细胞为91.0%、38.3%时,CV＜3%.CD34+/CDD34-细胞在LM、TEM下形态与结构相似,但CD34+细胞在LSCM下显示圆环状橙红色荧光.结论FCM检测外周血干细胞灵敏、特异、快速,但其方法学待进一步标准化.     

流式细胞检测术分析胎肝CD34^＋细胞成分

目的了解胎肝中CD34+CD38+和CD34+CD38-细胞数量组成.方法从胎肝中分离细胞,制成细胞悬液;经淋巴细胞分离液密度梯度离心,收集单个核细胞;洗涤两次,制备细胞母液;取约1×106细胞经CD34CD38荧光抗体标记,流式细胞仪检测CD34+CD38+和CD34+CD38-细胞含量;用红细胞裂解液裂解残留在MNCs中的红细胞,统计肝细胞中MNCs的相对总数,最终统计出胎肝中CD34+和CD34+CD38-细胞的相对数量.结果 22～30W胎龄胎肝MNC中CD34+细胞平均为12.02%±4.00%,CD34+CD38-细胞平均为6.17%±5.08%,CD34+CD38-细胞在CD34+细胞中约占51.00%±32.56%;该期胎肝组织中CD34+细胞和CD34+CD38-细胞相对总数和胎龄有一定的相关性,30W时明显高于22W.结论 22～30W胎龄胎肝中的CD34+细胞和CD34+CD38-细胞相对百分率都高于胎儿脐血、新生儿脐血、成人骨髓和外周血的百分率;CD34+CD38-细胞在CD34+细胞中的比例也远高于上述四种组织中的比例.