人脑胶质瘤中RhoA的表达及其临床意义

目的研究RhoA在人脑胶质瘤组织中的表达情况及其与病理分级的相关性,探讨RhoA在胶质瘤的诊断、恶性程度及预后判断中的临床意义。方法采用SABC免疫组化法、RT-PCR法对53例不同病理级别的星形细胞瘤及9例正常脑组织标本,进行RhoA蛋白和RhoA mRNA的检测。结果 (1)免疫组化结果显示53例胶质瘤组织中RhoA蛋白表达全部呈阳性,对照组正常脑组织存在弱表达或不表达。(2)不同级别星形细胞瘤标本的RhoA阳性细胞率、RhoA mRNA与GAPDH mRNA灰度比值均存在差异;Ⅰ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ级RhoAmRNA表达均高于Ⅰ级;Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ级RhoAmRNA表达均高于Ⅱ级。(3)相关性分析:RhoA阳性细胞率和RhoA mRNA表达量与胶质瘤病理分级均呈正相关性(r=0.875,r=0.817,P<0.001)。结论 (1)RhoA在所有已检测的胶质瘤标本中均存在表达,且表达程度与胶质瘤病理分级呈正相关。检测RhoA的mRNA和(或)蛋白的表达,可以作为胶质瘤诊断、判断预后的一个可靠指标。(2)RhoA表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关,提示我们可以将其作为星形细胞瘤Ⅰ～Ⅳ级新的有效的诊断标记物,同时作为常规组织病理学的分级标准的补充。这将有助于描述肿瘤的生物学行为特征,选择术后进一步的治疗方案。     

神经胶质瘤中生长抑制因子基因的表达

目的：探讨ING4基因在神经胶质瘤发生发展过程中的作用。方法：采用RT-PCR方法扩增 34名神经胶质瘤患者手术标本和24例正常脑组织标本的ING4基因和内参照GAPDH基因，凝胶分析软件对RT-PCR产物进行半定量分析，比较ING4基因mRNA在神经胶质瘤和正常脑组织中的表达情况。结果：所有的标本均扩增出ING4基因的目的条带。神经胶质瘤中的ING4基因mRNA表达水平明显低于正常脑组织（P <0.05）。恶性度高的神经胶质瘤组明显低于低度恶性神经胶质瘤组（P <0.05）。结论：ING4基因在神经胶质瘤的发生发展过程中可能起一定的作用，且与恶性程度有一定相关性。     

Livin α,β在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的 探讨Livin α,β基因在脑胶质瘤中的表达及意义.方法 采用荧光实时定量PCR技术检测122例人脑胶质瘤组织及其33例邻近正常脑组织,10例良性脑肿瘤中的Livin α,βmRNA及内参Gapdh的表达水平.结果 Livin α在脑胶质瘤及其邻近正常脑组织,良性脑肿瘤中的表达无统计学意义;Livin β在高分化组(67例)的表达明显高于低分化组(55例)(P<0.05),两组分别与良性脑肿瘤组(10例)比较差异有统计学意义(P<0.05),其中33例胶质瘤与邻近正常脑组织比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 Livin βmRNA在胶质瘤的发生及发展中起重要作用.     

siRNA抑制人胶质瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖

目的研究siRNA对人胶质瘤U251细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入U251细胞;用半定量RT-PCR检测siRNA MDM2对MDM2基因表达的抑制作用;并用MTT法检测siRNA MDM2对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染siRNA MDM2的细胞的MDM2基因表达分别下调到对照组的31.61%和40.18%;转染阴性对照质粒的MDM2基因没有明显改变。MTT结果表明转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,与对照组比差异具有显著性（P〈0.5）;同时细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,转染siRNA MDM2-1,2的凋亡率分别为49.9%和40.0%,转染阴性对照质粒和对照组未检测出明显的增殖抑制和凋亡改变。结论 siRNA MDM2可以有效抑制U251细胞株中MDM2的表达,并抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

骨形态发生蛋白受体-ⅠB和-Ⅱ在人脑胶质瘤中表达及意义

目的探讨骨形态发生蛋白受体（bonemorphogenetieproteinreceptor,BMPR）-ⅠB和BMPR11在人脑胶质瘤发生、发展中的作用及其与临床病理分级间关系。方法20例正常脑组织（对照组）和40例不同级别人脑胶质瘤组织（胶质瘤组）,采用RT-PCR技术检测BMPR-ⅠB、BMPR-ⅡmRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测其蛋白质表达阳性率。结果胶质瘤组BMPRⅠBmRNA（0．332±0．102）、BMPR-ⅡmRNA（0．307±0．115）及其蛋白阳性率（32．50％、22．50％）较对照组（0．413±0．096、0．493±0．107、70．00％、60．00％）明显降低（P〈0．05）;Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤低于Ⅰ-Ⅱ级（P〈0．05）。结论BMPR-ⅠB、BMPR-Ⅱ表达与人脑胶质瘤的发生、发展密切相关,可能成为人脑胶质瘤分子诊断的指标和治疗靶点。     

fibulin-5基因在人脑胶质瘤中的表达

【目的】初步探讨fibulin-5基因在胶质瘤中的表达情况及其与胶质瘤发生、发展的关系。【方法】检测fibulin-5 mRNA在正常脑组织（7例）和低分级胶质瘤组（22例）和高分级胶质瘤组（15例）脑组织中的表达情况。【结果】fibulin-5 mRNA在对照组正常脑组织中,所有7例标本均检测到表达;在低分级胶质瘤组中,22例标本有14例检测到表达;在高分级组中,15例标本有3例检测到表达。正常脑组织标本的fibulin-5 mRNA表达阳性率以及平均IOD值和低分级组相比无统计学差异（P〉0．05）;高分级胶质瘤组的fibulin-5 mRNA表达阳性率以及平均IOD值均低于正常脑组织和低分级胶质瘤组的表达（P〈0．05）。【结论】fibulin-5在正常脑组织中表达。其在胶质瘤组织中表达的变化可能与胶质瘤的进展和血管生成存在联系。     

MDR1基因在胃癌组织中的表达及意义

目的 探讨多药耐药基因MDR1在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 收集2009年12月～2010年8月胃癌新鲜癌组织标本53例(实验组)、15例正常胃黏膜组织(对照组),采用逆转录-聚合酶链反应技术检测胃癌组织和正常胃组织中MDR1基因的表达,并分析与临床病理特征之间的关系及对化疗的指导意义.结果 MDR1基因在正常胃组织及胃癌组织中的表达分别为0.57±0.27和0.20±0.10(t=8.13,P＜0.001).MDR1基因的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移之间差异具有统计学意义(t=2.83,3.47;P=0.007,0.002),而与患者性别、肿瘤部位、大小之间差异无统计学显著性意义(t=1.41,0.54,1.16;P=0.16,0.60,0.25).结论 MDR1基因的高表达可能是胃癌多药耐药产生的基础,MDR1基因的检测对制定化疗方案和选择化疗药物有一定的指导意义.     

PTEN基因在人脑胶质瘤中的表达

研究表明 ,PTEN( phosphatase andtensin hom ology deleted on chromosometen,PTEN)基因是肿瘤抑制基因家族的新成员 ,具有蛋白质酪氨酸磷酸酶催化区域 ,并与张力蛋白、辅助蛋白同源 ;PTEN可以调节侵袭性肿瘤中的许多生物学行为〔1〕,与肿瘤的发生发展密切相关。为了进一步探讨该基因与胶质瘤恶性程度的相关性 ,本研究采用免疫组化方法对 2 4份人脑胶质瘤标本中 PTEN蛋白的表达进行了研究。1　材料和方法1.1　材料 :人脑胶质瘤标本 2 4份 ,瘤旁脑组织 5份 (天津市第一中心医院病理科 1993— 2 0 0 3年存档的手术标本 ) ,年龄 6～ 75…     

MMP2 mRNA在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

【目的】探讨基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinases 2,MMP2） mRNA在人脑胶质瘤中的表达及意义。【方法】用RT-PCR方法检测38例人脑胶质瘤组织和7例正常人脑组织中MMP2 mRNA的表达。【结果】7例正常脑组织中均未检测到MMP2 mRNA表达;38例胶质瘤中,18例低度恶性胶质瘤组织中有10例检测到MMP2 mRNA表达,其阳性表达率为55．6％（10/18）;20例高度恶性胶质瘤组织中17例表达MMP2 mRNA ,其阳性表达率为85％（17/20）;高度恶性胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）中MMP2 mRNA的阳性表达率显著高于低级别胶质瘤组织（Ⅰ～Ⅱ级）,且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．05）。【结论】MMP2在恶性胶质瘤组织中高表达,其表达与胶质瘤的恶性程度正相关。     

脑缺血后髓鞘基因表达变化的规律

目的 从髓鞘碱性蛋白（MBP）mRNA、髓鞘少突胶质糖蛋白（MOG）mRNA等髓鞘基因表达的角度,探讨脑缺血大鼠髓鞘损伤的变化规律。方法 采用SD大鼠四血管闭塞急性全脑缺血模型,随机分为2d、4d、7d、14d和28d五个时间点及假手术组,每组8只;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）观察海马组织中MBPmRNA、MOGmRNA表达的变化。结果 脑缺血后2d海马组织中MBPmRNA、MOGmRNA表达水平即已降低,至7d时降低显著,并持续至28d时达到高峰。与假手术组比较,大鼠海马组织内MBPmRNA、MOGmRNA表达于再灌流后7d、14d、28d差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论 随着脑缺血-再灌流时间延长,大鼠海马组织MBPmRNA、MOGmRNA表达逐渐降低,呈现时间依赖性。     

K-ras and B-raf gene mutations are not associated with gastrin- and CCK2-receptor mRNA expression in human colorectal tumour tissues

BACKGROUND: Colorectal cancer is a multistep process caused by genetic alterations in cell growth regulatory genes such as K-ras and B-raf. It has been assumed that mutations in the K-ras gene induce gastrin gene expression and that gastrin stimulates the growth of colorectal cancer in an autocrine fashion by coexpressing gastrin and cholecystokinin (CCK)2 receptors. The aim of this study was to examine a possible association of K-ras and B-raf gene mutations with gastrin and CCK2 receptor mRNA expression in human colon and rectum tumour biopsy specimens. METHODS: K-ras and B-raf gene mutations as well as gastrin and CCK2 receptor mRNA expression in 50 colon and 46 rectum biopsies, respectively, were determined using molecular biology methods. RESULTS: K-ras mutations occurred in 44% colon and 30% rectum and B-raf mutations in 16% colon and 4% rectum tumours, respectively. Gastrin mRNA was expressed in 64% colon and 61% rectum tumours, whereas CCK2 receptor mRNAs was expressed in 32% colon and 13% rectum tumours. K-ras or B-raf gene mutations and simultaneous gastrin mRNA expression was observed in 40% colon and 17% rectum tumours, respectively. Co-expression of gastrin and CCK2 receptor mRNA occurred in 20% colon and 9% rectal tumours. CONCLUSIONS: The results do not support the hypothesis that K-ras and B-raf gene mutations have an impact on gastrin- and CCK-receptor mRNA expression in colorectal tumour tissues.     

慢性淋巴细胞白血病bcl-2基因表达与重排的研究

人类恶性肿瘤常伴有非随机性染色体异常,并由于使调控细胞生长的基因表达失控而在肿瘤的发生中发挥十分关键的作用。bcl-2基因由于t(14,18)染色体易位而激活在低恶度的非霍奇金淋巴瘤的发生和演变中的作用已举世公认。类似的重排和非重排引起的bcl-2过度表达也见于慢性淋巴细胞白血病。我们应用免疫组化染色和聚合酶链反应检测了11例慢性淋巴细胞白血病bcl-2基因表达和重排,结果发现所有病例均高度表达Bcl-2蛋白,1例有t(14,18)(q32,q21)染色体易位。结论提示慢性淋巴细胞白血病普遍存在bcl-2基因高表达,bcl-2基因在慢性淋巴细胞白血病的发生和发展中发挥着十分重要的作用。     

肺癌组织中FHIT和TPX2基因的表达及临床意义的研究

目的探讨FHIT和TPX2基因在肺癌中的表达与临床病理因素的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）法,检测FHIT和TPX2基因在肺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达。结果FHIT基因的表达水平在肺癌组织中的水平比正常肺组织低,差异有统计学意义（P〈0．05）,失表达率达74．2％。TPX2基因的表达水平在肺癌组织中的水平比正常肺组织高,差异有统计学意义（P〈0．05）,高表达率达64．5％。FHIT的表达异常与吸烟存在相关（P〈0．05）,TPX2的表达异常与临床病理因素均无关,两者之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论FHIT基因的失表达和TPX2基因的过表达在肺癌的发生发展中起重要作用,吸烟可能导致FHIT基因表达下降诱发肺癌。     

实时荧光定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株PAX5 mRNA表达

目的　建立实时定量逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测6个血液肿瘤细胞株中PAX5和CD19的 mRNA相对表达量。方法　一系列稀释的反转录自NAMALWA细胞株总RNA的cDNA被用于构建PAX5、CD19 和GAPDH扩增的标准曲线。实验证实靶基因(PAX5和CD19)与管家基因(GAPDH)的扩增效率一致,因此可 以用比较循环数(Ct)法对PAX5和CD19的表达进行相对定量。结果　在NAMALWA(B细胞系)细胞株中, PAX5和CD19mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在其他T细胞和髓系细胞株中几乎不表达。结论 　本研究中所建立的实时定量RT PCR能简单、快速、方便地对PAX5和CD19mRNA表达水平进行定量,且适 用于对大量、不同种血液恶性肿瘤患者进行观察研究。     

多发性骨髓瘤中p16、p15基因甲基化及其mRNA表达的研究

目的 探讨p16、p15基因的高甲基化及其mRNA转录阻抑与多发性骨髓瘸的发病和进展之间的关系。方法 采用甲基化敏感的限制性内切酶联合聚合酶链反应方法（REP法）,检测了28例多发性骨髓瘸患者骨髓细胞p16、p15基因5端启动子区的甲基化状态,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测多发性骨髓瘸患者p16、p15基因mRNA表达情况。结果 p16、p15基因启动子区过度甲基化率分别为57．14％（16／28）、64．28％（18／28）,53．57％（15／28）患者同时存在p16、p15基因启动子区过度甲基化。大多数存在甲基化的患者不表达p16、p15基因mRNA。结论 p16、p15基因的高甲基化与多发性骨髓瘸的发病有关,p16、p15基因甲基化与其转录阻抑高度相关。     

苯乙酸对胶质瘤细胞C6中同源盒基因表达的影响

目的　观察诱导分化剂苯乙酸 (PA)抑制胶质瘤细胞C6增殖过程中 ,生物发育调节的主控基因———同源盒基因 (Hox基因 )表达的变化。方法　根据引物的不同 ,将已知的 2 2种HOX基因分为 3组 (P1,P2 ,P3)。用逆转录PCR(RT PCR)及图像分析法检测应用PA前后 ,Hox基因组在胶质瘤细胞C6中表达的变化。针对应用PA前后表达显著不同的Hox基因组 ,用组内包含的特异Hox基因的引物 ,重复上述实验 ,检测特异Hox基因的表达。Hox基因 (组 )表达水平用基因 (组 ) β 肌动蛋白 (β actin)灰度比值表示。结果　胶质瘤细胞C6中 ,P2组Hox基因表达明显弱于P1、P3组(0 6 82 5± 0 0 987<0 8817± 0 0 731,0 86 0 8± 0 0 881,P <0 0 0 1)。应用PA后 ,P2组Hox基因表达 (0 8386± 0 0 811)显著增强 ,与用药前比较 ,差异显著 (P <0 0 0 1)。P2组中 ,HoxB2基因应用PA后比未用药组表达显著增强 (0 7763± 0 12 4 1>0 4 839± 0 1343,P <0 0 0 1)。HoxB4基因在应用PA前后于胶质瘤细胞C6中均未见表达。结论　胶质瘤的发生可能与HoxB2基因表达减弱有关。PA在分化诱导胶质瘤过程中 ,对HoxB2基因mRNA水平的表达有明显的上调作用 ,PA的作用机理与调节胶质瘤细胞转录过程有关。     

乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系

目的 探讨乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系.方法 取经病理确诊的52例乳腺癌组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应( MSP)、免疫组织化学法(IHC)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测C-erbB-2启动子CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平和C-er6B-...     

c-fos基因在急性视网膜缺血大鼠模型中的表达

目的 探讨c-fos基因在急性视网膜缺血大鼠模型中的表达。方法 SD大鼠采用前房加压灌注升高眼压的方法做成急性视网膜缺血模型，依照缺血后存活时间不同分为15min、30min、1h、2h、4h、6h、12h等七个组，每只鼠右眼为缺血眼，左眼做自身对照组，另设正常对照组。用RT-PCR方法研究缺血诱导的大鼠视网膜内c-fos基因的表达情况。结果 正常条件下在大鼠视网膜c-fos有少量的表达，缺血可诱导c-fos mRNA的表达，缺血15min后c-fos mRNA的表达水平即开始增加．在1小时左右达到最高，然后逐渐减少，12h后恢复到正常水平。结论 利用前房加压灌注建立的急性视网膜缺血动物模型具有可行性；在急性视网膜缺血动物模型中，c-fos基因的表达类型属于快速一过性表达。     

2′,5′-寡腺苷酸合成酶的表达及其单克隆抗体的制备与应用

目的用基因工程技术表达2′，5′腺苷酸酶（2-5AS）蛋白为抗原制备单克隆抗体，供荧光素标记抗体流式细胞术检测细胞内2-5AS应用。方法将2-5AS基因片段插入到带有His．Tag的pET-30a（＋）质粒，并转化到宿主菌E．coli．BL21（DE3），ITPG诱导表达，Ni柱纯化，获得2-5AS蛋白后制备单克隆抗体。结果插入片段酶切测序证实，插入的片段与目的片段序列相符；Ni柱纯化过程中可见目的蛋白的洗脱峰；经Trieine-SDS-PAGE电泳，Western Blotting鉴定，得到表达蛋白；用该蛋白制备了2-5AS单克隆抗体。结论基因工程技术表达2-5AS获得成功，制备了单克隆抗体，为进一步应用流式细胞术检测细胞内2-5AS提供保证。