马来酸罗格列酮抑制糖基化终产物诱导的人肾系膜细胞RANTES高表达

目的探讨马来酸罗格列酮对糖基化终产物（AGEs）诱导的人肾系膜细胞（HRMC）趋化因子RANTES高表达的影响,及其对糖尿病大鼠血清糖基化终产物-肽（AGE-P）及肾脏RANTES表达的影响。方法运用糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）与马来酸罗格列酮干预体外培养的HRMC,EusA法检测细胞培养上清中RANTEs蛋白水平,实时定量RT-PCR检测细胞中RANTES mRNA水平,Western blot检测RANTES蛋白表达。制备2型糖尿病大鼠模型,马来酸罗格列酮治疗10周。流动注射分析法测定血清AGEP,免疫组织化学检测肾皮质RANTES表达。结果马来酸罗格列酮干预组HRMC RANTES的mRNA和蛋白表达以及蛋白分泌明显低于AGE-BSA组;马来酸罗格列酮治疗组糖尿病大鼠血清AGE-P明显下降,肾皮质RANTES表达明显低于糖尿病非治疗组。结论马来酸罗格列酮可以抑制AGE-BSA诱导的HRMC RANTES的表达和分泌,还可降低糖尿病大鼠血清AGE-P及肾脏RANTES表达。     

罗格列酮对糖基化终产物干预的人肾系膜细胞fractalkine表达的影响

观察罗格列酮和糖基化终产物对人肾系膜细胞fractalkine(FKN)表达的影响.结果 显示糖基化终产物能上调人肾系膜细胞的FKN表达,而罗格列酮能抑制糖基化终产物引起的FKN表达增加.     

吡格列酮减少链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA的表达

为探讨吡格列酮对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体(RAGE)mRNA水平的影响,吡格列酮(20 mg·kg-1·d-1)灌胃8周后取肾皮质行RT-PCR半定量检测RAGE mRNA水平的变化,糖尿病吡格列酮治疗组、糖尿病对照组和正常对照组间RAGE表达差异有统计学意义(P＜0.01),结果表明吡格列酮能下调糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA的表达,减轻高血糖和糖基化终产物对肾脏的损害.     

氨基胍对糖基化终产物干预后人肾系膜细胞MMP-2表达的影响

目的观察盐酸氨基胍（AG）对糖基化终产物（AGEs）干预后人肾系膜细胞（HRMC）基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。方法运用糖基化终产物-牛血清白蛋白（AGE-BSA）干预HRMC,以及不同浓度AG单独或与AGE-BSA共同干预HRMC24小时;RT-PCR和Western blot分别检测HRMC MMP-2mRNA和蛋白表达。结果AGE-BSA明显降低HRMC MMP-2mRNA和蛋白表达（P〈0.05）,AG以浓度依赖的方式恢复AGE-BSA下调的HRMC MMP-2mRNA和蛋白表达（P〈0.05）。结论AG可能通过拮抗AGEs对MMP-2表达的抑制效应而发挥其肾脏保护作用。     

吡格列酮对大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的观察吡格列酮对大鼠肾小球系膜细胞(MCs)氧化应激的影响,探讨其肾脏保护机制。方法体外培养MCs,分为正常对照(NG)组,高糖(HG)组及不同剂量吡格列酮干预(P1、P2、P3)组。应用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,对上清液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)进行检测。结果与NG组比较,HG组细胞内ROS水平增加,T-SOD、CAT活力降低,MDA含量增高(P0.01)。吡格列酮各干预组上述变化均受到抑制(P0.05),且呈剂量依赖性。结论吡格列酮可剂量依赖性地抑制高糖诱导的MCs氧化应激水平。     

吡格列酮对大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的 观察吡格列酮对系膜细胞（MCs）氧化应激的影响,探讨其肾脏保护机制。方法 体外培养MCs,分为正常对照（NG）组,高糖（HG）组及吡格列酮干预 （P1、P2、P3）组。应用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,对上清液中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）进行检测。 结果 与NG组比较,HG组细胞内ROS水平增加,T-SOD、CAT活力降低,MDA含量增高（P〈0.01）;吡格列酮各干预组上述变化均受抑制（P〈0.05）,且呈剂量依赖性。结论 吡格列酮可剂量依赖性的抑制高糖诱导的MCs氧化应激水平。     

糖基化终产物对人肾小球系膜细胞β1整合素及黏着斑激酶表达的影响

目的观察糖基化终产物（AGEs）对人肾小球系膜细胞（HRMC）膜上β1整合素及其胞内靶点黏着斑激酶（FAK）表达的影响。方法用不同浓度的AGE-BSA干预培养的HRMC;RT-PCR法测定细胞81整合素和FAK的mRNA水平;Western Blot法检测β1整合素和FAK的蛋白表达。结果在50至400mg／L浓度范围内,AGE-BSA组B1整合素、FAK mRNA及蛋白表达均较对照组增加（P〈0．05）。结论一定范围内,AGEs呈浓度依赖性上调B1整合素及其下游信号分子FAKmRNA及蛋白表达,这可能是AGEs致糖尿病肾病的一个重要机制。     

玉葵清对糖基化终产物诱导的人肾系膜细胞趋化因子表达的影响

目的 探讨玉葵清对糖基化终产物（AGEs）诱导的人肾系膜细胞（HRMC）趋化因子表达及其趋化效应的影响. 方法 糖基化牛血清白蛋白（AGE-BSA）和玉葵清干预HRMC. 结果 AGE-BSA组较BSA组HRMC趋化单核细胞数增加,单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、Fractalkine（FKN）中和抗体组HRMC趋化单核细胞数较AGE-BSA组减少;玉葵清组MCP-1、Fractalkine基因表达、上清中的蛋白含量和趋化单核细胞较BSA组降低（P＜0.05）. 结论 玉葵清减弱AGE-BSA诱导的HRMC趋化因子表达及其趋化效应,可能改善DN肾脏炎症反应.     

色素上皮衍生因子抑制糖基化终产物介导人肾小球系膜细胞糖基化终产物受体表达的研究

目的 观察色素上皮衍生因子（PEDF）、晚期糖基化终产物受体（RAGE）的表达及重组PEDF对RAGE表达的抑制作用,探讨PEDF与DN的关系及对DN的保护作用. 方法 采用糖化小牛血清白蛋白（AGE-BSA）体外诱导人肾小球系膜细胞（HRMCs）,Western blot及RT-PCR法分别检测RAGE、PEDF蛋白和mRNA表达. 结果 （1） AGE-BSA（100～400 mg/L）呈浓度梯度减少HRMCsPEDF表达（P＜0.01）,升高RAGE表达（P＜0.01）;（2）重组PEDF蛋白（5～40 nmol/L）呈浓度依赖性抑制AGE-BSA介导RAGE蛋白在HRMCs的表达（P＜0.05）. 结论 AGEs通过降低PEDF表达,增加RAGE表达参与DN的发生,PEDF可能通过抑制AGE-RAGE轴对DN发挥保护作用.     

格列喹酮可促进成肌细胞葡萄糖摄取

目的 观察格列喹酮对小鼠成肌细胞(C2C12)葡萄糖摄取及葡萄糖转运相关蛋白葡萄糖转运体4表达的影响.方法 采用格列喹酮干预体外培养的C2C12细胞,将细胞分为空白组、胰岛素组(1×10-7mol/L胰岛素)、格列喹酮组(1×10-5mol/L格列喹酮)、格列喹酮+胰岛素组(1×10-5mol/L格列喹酮+1×10-7mol/L胰岛素).应用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基中葡萄糖水平,DMEM组葡萄糖含量平均值减去其余各孔葡萄糖含量算得各孔细胞葡萄糖消耗量;用MTT法检测细胞活力;利用液闪计数法检测C2C12细胞葡萄糖摄取量;采用半定量实时聚合酶链反应(RTPCR)检测细胞中葡萄糖转运体4 mRNA水平.应用单因素方差分析进行数据统计.结果 与空白组相比,格列喹酮组C2C12细胞葡萄糖消耗量明显增加[(11.0±0.5)vs(7.9±0.6)mmol/L,q=0.36,P＜0.01];格列喹酮+胰岛素组C2C12细胞葡萄糖消耗量较胰岛素组增多[(13.8±0.7)vs(12.3±0.6)mmol/L,q=0.72,P＜0.01].胰岛素组、格列喹酮组C2C12细胞对葡萄糖的摄取均增加,分别为空白组的(1.68±0.09)、(1.52±0.23)、(1.23±0.16)倍(q值分别为14.78、11.30、5.00,均P＜0.01);格列喹酮组C2C12细胞葡萄糖摄取增加较格列苯脲组明显(q=6.30,P＜0.01),格列喹酮+胰岛素组C2C12细胞葡萄糖摄取为空白组的(1.93±0.12)倍(q=13.04,P＜0.01),且明显高于胰岛素组(q=5.43,P＜0.01).格列喹酮组C2C12细胞葡萄糖转运体4 mRNA水平与空白组比较无明显差异.结论 格列喹酮可促进C2C12细胞对葡萄糖的摄取,增加胰岛素刺激的葡萄糖摄取,并未增加C2C12细胞葡萄糖转运体4基因表达.     

糖尿病肾病肾脏组织糖化终末产物的沉积及其与细胞表型转化的关系

目的观察糖基化终产物（AGEs）在肾脏组织中的沉积及其与肾脏固有细胞表型转化的关系。方法采用免疫组化染色法观察AGEs：羧甲基赖氨酸（CML）、吡咯素、戊糖苷素和细胞骨架蛋白：α-肌动蛋白（α-SMA）、L-收缩平滑肌蛋白（L-CLD）在28例2型糖尿病肾病（DN）患者肾活检组织（疾病组）的沉积，分析二者间及其与肾脏病理改变和临床表现的关系。4例增生硬化型IgA肾病及4例轻微病变型和2例正常肾组织作为对照组。结果（1）四组均可见CMI、吡咯素分别沉积在系膜区和肾间质，但对照组明硅弱于DN组；戊糖苷素只沉积在DN肾小球基底膜（GBM）。（2）系膜区α-SMA、LCLD的表达与戊糖苷素呈正相关，吡咯素的沉积与间质L-CLD有关。（3）α-SMA和L—CLD及戊糖苷素的沉积与肾小球硬化指数、间质纤维化百分数及蛋白尿、Scr正相关。结论戊糖苷素在GBM的沉积足糖尿病肾小球硬化的重要原因；AGEs对肾脏的影响部分可能是通过引起肾脏固有细胞的表型转化而起作用的。     

糖基化终末产物对人脐静脉内皮细胞凋亡及其受体表达的影响

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡及其受体(RAGE)表达的影响。方法 采用流式细胞仪技术，荧光显微镜，电镜观察AGEs对培养的HUVEC凋亡的影响，同时用RT-PCR方法检测RAGE的mRNA的表达。结果 AGEs加入细胞培养中，可明显诱导HUVEC凋亡，并呈剂量依赖效应关系。在发生凋亡的同时有RAGE mRNA表达的增强。结论 AGEs对HUVEC有诱导凋亡的作用，该作用可能通过RAGE介导。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞黏附分子表达和黏附功能的影响及其机制

目的探讨糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达和黏附功能的影响及其机制。方法以D-葡萄糖和牛血清白蛋白在37℃条件下制备AGEs。胶原酶法分离HUVECs并加以培养。用流式细胞术测定HUVECs受AGEs干预后VCAM-1表达水平。按Esposito’s法进行HUVECs外周血单核细胞（PBMCs）黏附试验，Chen氏法计算HUVECs—PBMCs黏附率。用[γ-32P]ATP液闪计数技术测定受AGEs干预后HUVECs PKC活性的变化。结果AGEs可明显诱导HUVECs VCAM-1表达，呈剂量、时效依赖关系。HU—VECs—PBMCs黏附率的变化与VCAM-1的表达水平平行。蛋白激酶C（PKC）抑制剂可明显降低AGEs所致的VCAM-1表达增加及HUVECs—PBMCs黏附率增加。HUVECs受AGEs干预后其PKC活性明显升高。结论AGEs能使人血管内皮细胞VCAM-1表达增加和黏附功能增强，其机制是部分通过增加细胞内PKC的活性来实现。     

糖基化终末产物对大鼠肾皮质PAI-1表达和活性的影响

目的观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾皮质纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）表达和活性的影响。方法大鼠尾静脉注射AGE修饰大鼠血清蛋白（AGEs）6周，其中部分大鼠同时腹腔注射AGE形成抑制剂氨基胍（AG），以注射天然大鼠血清蛋白（RSP）和正常大鼠（Con）作为对照。免疫组织化学、Western blot、RT—PCR检测PAI-1表达水平，酶谱法分析纤溶酶原激活物（PA）活性，PAS染色评估细胞外基质（ECM）含量。结果与Con组及RSP组比较，AGEs组大鼠肾皮质ECM含量、PAI-1蛋白及mRNA表达水平均明显增高，PA活性明显降低（PAI-1 mRNAP〈0．01，其余P〈20．05），而同时注射AG的大鼠上述变化明显减轻。结论AGEs上调大鼠肾皮质PAI-1的表达，抑制PA活性，可能是糖尿病肾病ECM积聚的原因之一。     

糖基化终末产物对人外周血内皮祖细胞数量及功能的影响

目的观察糖基化终末产物(AGEs)对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响。方法体外培养的人外周血EPCs根据不同AGEs-人血白蛋白(HSA)浓度分为对照纽、正常组(终浓度7.5 mg/L)、干预1组(终浓度1 5 mg/L)干预2组(终浓度30 mg/L)和干预3组(终浓度60 mg/L)。采用密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞;激光共聚焦显微镜检测其对FITC标记荆豆凝集素-1的吸附和Dil-标记乙酰化低密度脂蛋白进行细胞功能鉴定;加入AGEs后,分别采用MTT法、Boyden小室测定EPCs的增殖、迁移能力;人纤维连接蛋白检测EPCs的黏附能力;用体外血管生成分析试剂盒检测不同浓度AGEs HSA作用后的EPCs成血管能力。结果高浓度AGEs可减少EPCs贴壁细胞数量(P<0.01),减弱EPCs的黏附(P<0.01)、增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)和成血管能力(P<0.01)。结论 AGEs可减少人外周血EPCs的数量并使用其功能受损。     

Effects of different LDL particles on inflammatory molecules in human mesangial cells

Aims/hypothesis  Inflammation is a mechanism of glomerular damage in chronic glomerulopathies. LDL may increase the production of inflammatory cytokines in renal tissues. However, the relative role of native, oxidised and glycated LDL in promoting this process has been only partially elucidated. Methods  We tested the inflammatory and proapoptotic effects of native, oxidised and glycated LDL in human mesangial cells (HMCs) by measuring levels of IL6, CD40 and macrophage migration inhibitory factor (MIF) genes, MIF protein, release of IL6, soluble CD40, fibronectin and laminin, early and late apoptosis, and extracellular regulated kinases (ERK) 1/2 and c-Jun N-terminal kinase (JNK) activation. Results   IL6 and CD40 mRNA were dose-dependently upregulated by all three species; this was closely paralleled by their increased release. MIF mRNA was potently stimulated by modified LDL, as confirmed by immunostaining. Fibronectin and laminin release was stimulated by both oxidised and glycated, but not native, LDL. All LDL species induced some increase in late, but not early, apoptosis, and similarly activated JNK2/3 phosphorylation; in contrast, ERK1/2 phosphorylation was more strongly upregulated by oxidised than either native or glycated LDL. Conclusions  In HMCs, the production and release of IL6 and CD40 is stimulated by both native and modified LDL, while MIF is more strongly stimulated by oxidised LDL. Regarding the pattern of mesangial expansion, fibronectin and laminin are upregulated by oxidised and glycated LDL. Apoptosis, if modest, is induced by all species. Intracellular signalling of native and modified LDL involves JNK2/3 and, perhaps more specifically, ERK1/2. Tight control of the lipid profile may be useful in preserving kidney function in patients with metabolic alterations.     

阿托伐他汀对糖基化白蛋白诱导的大鼠肾脏病变的保护作用

目的观察阿托伐他汀能否改善牛血清糖基化白蛋白（GBA）诱导的肾脏病变。方法健康雄性SD大鼠40只（体重230～250g）,采用随机数字表法分为正常对照组（给予普通饲料）、高脂组（仅给予高脂饲料）、GBA组（腹腔注射GBA40mg·kg-1·d-1,并给予高脂饲料）、GBA＋阿托伐他汀组（腹腔注射GBA40mg·kg-1·d-1,阿托伐他汀20mg·kg-1·d-1灌胃,并给予高脂饲料）,每组各10只。24周后酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清糖基化终末产物水平,采用实时定量聚合酶链反应（PCR）法测定大鼠肾组织糖基化终末产物受体（RAGE）mRNA表达,采用免疫组化法检测大鼠肾组织中S100（一种糖基化终末产物）、RAGE蛋白的表达,采用HE染色进行肾脏病理观察,同时测量肾小球及系膜区面积。应用t检验和方差分析进行数据分析。结果实验24周4组大鼠之间血糖、血清胆固醇和血肌酐水平差异均无统计学意义（F=1．780、2．012、2．075,均P〉0．05）。与高脂组比较,GBA组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显升高[（72±4）比（50±5）μg／L,t=3．445,P〈0．05],肾脏中肾小球肥大,系膜区基质增生明显[肾小球面积分别为（9505±326）、（7920±518）μm2,t=2．587,P〈0．05;系膜区面积分别为（5752±316）、（1898±259）μm2,t=9．435,P〈0．05],肾脏RAGEmRNA表达明显升高（9．7±1．0比2．4±0．5,t：6．629,P〈0．05）,同时肾脏S100、RAGE蛋白表达增加。与GBA组比较,GBA＋阿托伐他汀组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显降低[（53±3）比（72±4）μg／L,t=3．298,P〈0．05],肾脏中肾小球肥大明显好转、系膜基质增生程度减轻[肾小球面积分别为（7276±326）、（9505±326）μm2,t=4．834,P〈0．05;系膜区面积分别为（2436±316）、（5752±316）μm2,t=7．418,P〈0．05],肾脏RAGEmRNA表达水平下降（3．3±0．8比9．7±1．0,t=4．978,P〈0．05）,同时肾脏S100、RAGE蛋白表达减少。结论阿托伐他汀可通过降低血清糖基化终末产物水平、下调肾脏RAGE的表达来减轻糖基化终末产物诱导的肾脏病变。     

内皮素对肾小球系膜细胞炎症效应的作用

本文从三个方面观察了内皮素-1(ET-1)对系膜细胞炎症效应的作用,结果表明:①可刺激系膜细胞收缩;②对系膜细胞合成DNA具有刺激作用,而且此作用具有剂量与时间依赖性;③可刺激系膜细胞分泌肿瘤坏死样因子。ET-1对系膜细胞的上述作用,提示它在肾炎发病中可能具有重要意义。