普罗布考对缺血再灌注心肌细胞凋亡的作用

背景：已发现细胞凋亡在缺血再灌注损伤中起重要作用。普罗布考除可降低血清低和高密度脂蛋白胆固醇浓度，有效治疗高胆固醇血症外，还有抗氧化活性，抑制低密度脂蛋白胆固醇的氧化修饰，减少其在血管壁沉积的作用。还有研究证明普罗布考可改善左心室功能、防止左心室扩张和减少心肌纤维化。但普罗布考保护心肌作用的确切机制尚未清楚。目的：探讨普罗布考对新西兰白兔缺血再灌注心肌细胞凋亡的作用及其可能机制；并探讨其对血清超氧化物歧化酶(serum superoxide dismuase，SOD)和丙二醛水平的影响。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和干预：本实验在广西医科大学医学科学实验中心完成。实验选用30只雄性新西兰白兔，白兔被随机分成3组：假手术组、对照组和预治疗组，每组各10只。对照组(标准兔饲料饲养)和预治疗组(标准兔饲料饲养+普罗布考每日每只1000mg灌胃)各4周后建立缺血再灌注模型；假手术组(标准兔饲料饲养)4周后开胸用4-0号线穿过冠状动脉左前降支近端，但不予结扎。测定3组白兔心肌细胞凋亡指数、血清丙二醛、SOD水平。主要观察指标：①普罗布考对心肌细胞凋亡的影响。②普罗布考对血清SOD和丙二醛水平的影响。结果：对照组凋亡指数[(34．75&;#177;3．20)％]、血清丙二醛水平[(2．70&;#177;0．64)μmol／L]显著高于假手术组[(0．48&;#177;0．20)％，(1．06&;#177;0．46)μmol／L，q=18．42，6．29．P&;lt;0．01]。对照组血清SOD水平显著低于假手术组(q=8．78．P&;lt;0．01)。预治疗组凋亡指数和血清丙二醛水平明显低于对照组(q=9．17，4．68．P&;lt;0．01)；血清SOD水平高于与对照组(q=3．02，P&;lt;0．05)。结论：普罗布考降低缺血再灌注心肌细胞凋亡，这一保护作用可能部分是通过减少血清丙二醛水平和提高血清SOD水平来实现的。     

黄芪预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关基因的影响

背景黄芪具有保护缺血再灌注细胞损伤的作用,黄芪预处理是否对缺血再灌注心肌细胞凋亡有保护作用?目的探讨黄芪预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及其相关基因的影响.设计以Wistar实验大鼠为实验对象的随机分组对照.单位承德医学院基础医学部及附属医院老年病科.材料实验于2004-02/12在承德医学院基础医学研究所免疫组化实验室完成.选用雄性Wistar大鼠30只,将动物随机分为黄芪预处理组(黄芪组)、缺血再灌注组、假手术对照组(对照组),每组10只.方法黄芪组术前给予腹腔内注射黄芪注射液,缺血再灌注组、对照组术前给予等量生理盐水注射.1周后制备缺血再灌注模型,术后即取缺血再灌注边缘区的心肌,对照组取相对应部位心肌.应用脱氧尿嘧啶缺口末端标记法测定心肌凋亡细胞指数的改变,应用免疫组化ABC法检测心肌细胞bcl-2(抑凋亡基因)及box(促凋亡基因)基因的改变.主要观察指标①各组凋亡细胞数.②bcl-2和bax基因表达情况.结果①心肌凋亡细胞数黄芪组低于缺血再灌注组[(14.06±9.97)%,(19.34±12.30)%,t=1.863,P＜0.05].②bcL-2基因表达黄芪组与缺血再灌注组无明显差异[(9.14±4.46)%,(8.99±4.54)%,P＞0.05].③bax基因表达黄芪组低于缺血再灌注组[(12.65±7.23)%,(18.12±7.92)%,t=2.096,P＜0.05].结论黄芪预处理可使促凋亡基因bax的表达明显下凋,从而使心肌细胞凋亡减少,保护缺血再灌注心肌细胞.     

脑钠肽对高血脂大鼠缺血再灌注心肌的保护作用

目的探讨脑钠肽对高血脂大鼠缺血再灌注心肌的保护作用。方法高血脂SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血再灌注组和观察组各10只,缺血再灌注组和观察组大鼠制备心肌缺血再灌注模型,假手术组仅开胸不结扎冠状动脉;再灌注开始前5min观察组静脉注射0.01μg/(kg·min)脑钠肽,假手术组和缺血再灌注组静脉注射等量生理盐水。再灌注3h后观察3组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞凋亡情况,检测3组大鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。结果假手术组无明显心肌梗死区,缺血再灌注组心肌梗死面积[(38.45±2.20)%]和心肌细胞凋亡指数[(30.85±5.41)%]明显大于观察组[(24.16±3.51)%、(20.63±6.60)%]和假手术组[0、(2.20±0.61)%](P0.05),观察组大于假手术组(P0.05);缺血再灌注组和观察组大鼠血清CK[(810.06±37.64)、(743.21±41.73)u/L]、SOD[(53.05±11.59)、(70.13±13.20)ku/L]和MDA[(7.61±1.21)、(5.36±1.37)mol/L]水平均明显高于假手术组[(220.16±21.50)u/L、(20.51±6.71)ku/L、(0.91±0.13)mol/L](P0.05);观察组大鼠血清CK和MDA水平明显低于缺血再灌注组(P0.05),SOD水平明显高于缺血再灌注组(P0.05)。结论脑钠肽对高血脂大鼠缺血再灌注心肌有保护作用,可减少心肌细胞凋亡,缩小心肌梗死面积,降低大鼠血清CK、MDA水平,增高血清SOD水平。     

缺血后处理对大鼠缺血/再灌注心肌热休克蛋白的影响

目的:研究缺血后处理对大鼠缺血/再灌注心肌热休克蛋白(HSP70)的影响。方法:选择健康SD大鼠48只,随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组（对照组）和缺血后处理组,每组16只。制备大鼠心肌缺血/再灌注模型。缺血再灌注组,收紧结扎线缺血40 min, 放松结扎线再灌注240min;缺血后处理组,缺血40 min后, 再灌注10s,缺血10s,连续3个循环,然后再灌注240min;假手术组,开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线。免疫组织化学染色检测HSP70的表达,TUNEL 法检测心肌细胞凋亡指数,同时测定血清肌酸激酶活性。结果:①血清肌酸激酶活性测定：再灌注结束后缺血后处理组和缺血再灌注组肌酸激酶活性明显高于假手术组,分别为（712.13±42.77）,（935.17±57.99）,（282.74±29.54）U/L,P＜0.05,缺血后处理组明显低于对照组(P＜0.05)。②心肌凋亡细胞计数：再灌注结束后假手术组未见明显细胞凋亡（＜5%）,缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组,分别为（14.3±2.7）%,（22.3±3.6）%,（P＜0.05）。③心肌热休克蛋白表达：缺血后处理组较对照组心肌热休克蛋白表达增强（P＜0.05）。结论:缺血后处理可减轻缺血再灌注损伤,其机制可能与增强热休克蛋白表达,减少心肌细胞凋亡有关。     

钙预适应对缺血再灌注心肌细胞的保护作用

目的:从细胞水平研究钙预适应对培养心肌细胞的缺血再灌注损伤是否具有保护作用。方法:实验选用3日龄健康清洁级SD乳鼠15只,雌雄不限,体质量10～15g。体外分离培养SD乳鼠心肌细胞,以模拟缺血溶液和模拟再灌注溶液模拟体内缺血再灌注过程,将培养心肌细胞随机分别用正常对照组、缺血再灌注组、钙适应缺血再灌注组,实验结束后检测心肌细胞活性、培养基乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)水平和心肌细胞凋亡。结果:模拟缺血再灌注可引起明显的心肌细胞损伤,无钙复钙可明显减少模拟缺血再灌注对心肌细胞的损伤,钙适应缺血再灌注组细胞的台盼蓝摄取率、LDH活性、凋亡指数犤(6.2±1.2)%,(1592.0±111.7)μkat/L,(6.2±0.4)%犦均明显低于缺血再灌注组犤(24.6±1.8)%,(2873.9±43.3)μkat/L,(10.6±0.6)%犦(t=19.02,23.92,13.64,P<0.01)。结论:在细胞水平上证实了无钙复钙预适应对缺血再灌注心肌细胞有明显的保护作用。     

脊髓缺血再灌注损伤后神经元凋亡与热休克蛋白全部还是部分影响

目的诱导抗细胞凋亡的热休克蛋白大量表达,观察其对兔热休克模型脊髓缺血再灌注损伤神经元凋亡的影响.方法实验于2004-06/09在苏州大学附属第一医院骨科实验室完成.6～8个月新西兰大白兔66只,随机分为3组①热休克组30只,先制成兔热休克模型,24 h后再按脊髓缺血再灌注模型操作.②缺血组30只,单纯制成脊髓缺血再灌注模型.③假手术组6只.除不夹闭腹主动脉外,其余操作同缺血组.④实验过程于再灌注后8,16,24,48,72 h 5个时间点热休克组及缺血组各随机抽取6只兔(假手术组6只于8 h取出)后肢运动功能进行评分(0分为全瘫,5分为正常)采用Jacob法.后肢运动功能评分后,处死兔并取L2-5脊髓组织观察热休克蛋白70的表达量行免疫组织化学染色法,观察脊髓神经元凋亡情况采用原位缺口末端标记法染色法.计算脊髓前角神经元凋亡率[凋亡率=阳性神经元数/(阳性神经元数+阴性神经元数)×100%].结果66只白兔均进入结果分析.①兔后肢运动功能Jccob评分24,48,72 h热休克组明显优于缺血组(t=2.825～2.953,P＜0.05).②兔脊髓组织热休克蛋白表达情况8,16,24,48 h热休克组表达量显著高于缺血组(t=8.337～20.470,＜0.01).③兔脊髓灰质神经元凋亡结果8,16,24 h热休克组明显少于缺血组[(19.73±3.71)%比(20.87±3.33)%,(27.29±4.20)%比(36.05±5.20)%,(20.64±4.34)%比(35.28±4.27)%,(t=3.884～5.462,P＜0.05)].结论热休克蛋白可以明显抑制脊髓缺血再灌注损伤后的神经元凋亡,保护脊髓功能.同时提示热休克蛋白不能全方位地抑制神经元凋亡,部分神经元的凋亡对兔后肢运动不产生显著影响.     

诱导型一氧化氮合酶在关节软骨缺血再灌注损伤及骨细胞凋亡中的作用

目的观察兔膝关节软骨缺血再灌注损伤过程中诱导型一氧化氮合酶的表达规律及软骨细胞的凋亡情况,探讨诱导型一氧化氮合酶在关节软骨缺血再灌注损伤中的作用.方法实验于2004-03/09在泰山医学院形态学研究室完成.①选择健康新西兰白兔45只,随机分为假手术组5只,暴露股动静脉但不阻断血运,术后4 h取材;缺血组5只,缺血4 h不恢复血运即取材;缺血再灌注组35只,阻断股动静脉4 h后恢复血运,于缺血再灌注2,4,8,24 h,3,7,14 d取材,每时点各5只.②采用免疫荧光法测定软骨内诱导型一氧化氮合酶的表达阳性细胞,染色成功后用激光共聚焦显微镜观察并扫描记录.阳性细胞标记为红色荧光.③采用原位末端标记法测定凋亡软骨细胞数目,染色成功后在显微镜下观察并记数.细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞,即凋亡细胞.结果纳入动物45只,均进入结果分析.①缺血再灌注组诱导型一氧化氮合酶阳性细胞数高于缺血组和假手术组[假手术组、缺血组、缺血再灌注2,4,8,24 h,3,7,14 d分别为0,(1.20±0.40),(22.20±1.30),(33.00±1.58),(40.00±1.58),(33.80±1.30),(18.20±1.48),(11.20±1.67),(3.00±1.00)个/mm2,P＜0.01].②缺血再灌注组软骨细胞凋亡数高于缺血组和假手术组[假手术组、缺血组、缺血再灌注2,4,8,24 h,3,7,14 d分别为[(0.50±0.40),(1.20±0.45),(7.80±1.30),(12.60±1.14),(16.60±1.12),(17.80±1.30),(15.20±0.87),(13.60±0.89),(4.40±1.67)个/mm2,P＜0.01].③诱导型一氧化氮合酶的表达与软骨细胞凋亡数高度相关(r=0.716,P=0.046).结论诱导型一氧化氮合酶参与了软骨缺血再灌注损伤,并可能是触发软骨细胞凋亡的重要因素.     

局部缺血预适应对兔短期缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:探讨局部缺血预适应对兔短期缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响。方法:实验于2006-06/07在石河子大学医学院中心实验室完成。18只新西兰白兔随机分成3组,每组6只:①假手术组:仅开胸暴露心脏,冠脉分支穿线,不结扎。②缺血再灌注组:冠脉分支阻断15min后开放再灌注30min。③局部缺血预适应组:在缺血再灌注前行冠脉分支阻断5min后开放再灌注5min(反复3次)。以DNA电泳和TUNEL分析检测兔短期缺血再灌注心肌组织的细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:18只兔全部进入结果分析。①缺血再灌注组缺血区心肌DNA电泳出现200bp,400bp2条条带,呈梯形,而局部缺血预适应组和假手术组未见梯形。②TUNEL检测结果显示局部缺血预适应组心肌细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组[(32.13±6.38)%,(55.7±13.96)%,P<0.05]。③Bcl-2蛋白表达组局部缺血预适应组高于缺血再灌注组(9.33±1.37,7.83±1.47,P<0.05)。④Bax蛋白表达量局部缺血预适应组低于缺血再灌注组(8.00±1.26,9.83±0.98,P<0.05)。结论:局部缺血预适应显著减少了兔短期缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡程度,可能与其上调Bcl-2基因的蛋白表达,下调Bax基因的蛋白表达有关。     

微量去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的　探讨微量去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响并与缺血预处理比较.方法　采用大鼠在体缺血再灌注(I/R)模型,分别以缺血前去甲肾上腺素预处理(NE-P),缺血预处理(IP),采用末端脱氧核苷酸转换酶介导的生物素平移缺口末端标记技术(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡情况;同时检测心肌梗死范围.结果　I/R组细胞凋亡率[(43.33±4.92)%]较高,NE-P组及IP组虽然也有一定的心肌细胞凋亡率[(25.24±1.56)%、(24.44±2.96)%],但较I/R组明显降低(P＜0.001).IP组及NE-P组心肌梗死范围较I/R组明显减少,IP组及NE-P组两项指标无显著差异.结论　心肌缺血再灌注损伤可诱发心肌细胞凋亡,NE-P能明显减少缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡的发生率,能明显减少心肌梗死范围,减轻缺血再灌注损伤;NE-P减少心肌梗死范围、减轻缺血再灌注损伤的机理可能与其能明显减少心肌细胞凋亡有关.     

健脑益智口服液在脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其机制

目的 探讨健脑益智口服液在反复脑缺血再灌注损伤中的神经保护机制. 方法 实验分为空白对照组、假手术组、模型组、中药组.实验期间空白对照组、假手术组、模型组以蒸馏水灌胃,中药组以健脑益智口服液灌胃,用药 5 d后实施脑缺血再灌注术.手术后第 1,10天,小鼠断头取脑以测定超氧化物歧化酶( SOD)的活性、丙二醛、肿瘤坏死因子α( TNF-α)以及白细胞介素 1β( IL-1β)的表达. 结果 与对照组 (26.82± 3.58) mg/g相比,模型组鼠脑缺血再灌注后 SOD活性第 1天 (13.95± 4.52) mg/g 和第 10天 (15.82± 4.39) mg/g 明显降低,丙二醛、 TNF-α ,IL-1β含量显著升高.与模型组相比,健脑益智口服液能显著提高 SOD[(21.35± 4.07) mg/g]的活性 (F=16.56, q=3.29,P< 0.05),并降低丙二醛的水平 (F=81.88,q=34.61,P< 0.01).健脑益智口服液能显著下调小鼠大脑皮质 TNF-α (F=96.44,q=35.11,P< 0.01)和 IL-1β (F=38.30,q=40.92,P< 0.01)的水平. 结论 健脑益智口服液通过降低脑缺血再灌注后脑氧化反应以及 TNF-α和 IL-1β表达而起到神经保护作用.     

Pretreatment with probucol attenuates cardiomyocyte apoptosis in a rabbit model of ischemia/reperfusion

OBJECTIVE: Apoptosis plays an important role in ischemic reperfusion injury. Probucol is a hypolipidemic agent and has antioxidant activity, which may inhibit the oxidative modification of low-density lipoprotein cholesterol. Studies have demonstrated that probucol improves left ventricular function, prevents left ventricular dilatation, and reduces cardiac fibrosis. However, the exact mechanism of probucol on the cardioprotective effect is not known. The objective of the present study was to examine the effect of probucol on ischemia/reperfusion-induced cardiomyocyte apoptosis. MATERIAL AND METHODS: Thirty male New Zealand White rabbits were randomly divided into sham, control, and treated groups, each group comprising 10 rabbits. Before establishment of the ischemia/reperfusion model, animals in the treated group were additionally fed daily with probucol (1000 mg per day) for 4 weeks. In the sham group, the heart was exposed after the chest had been opened, but the coronary artery was not ligated. The animals were killed 150 min after the procedure. In the other two groups, the rabbits were subjected to 30-min of coronary occlusion followed by a 2-h reperfusion. A blood sample was drawn from the right atrium before the animal was killed. The apoptotic myocytes were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labelling. Expression of caspase-3 and mitochondrial cytochrome c release was detected by immunohistochemical analysis and Western blot analysis. The level of serum superoxide dismutase (SOD) was tested using the xanthine oxidase method, and the content of serum malondialdehyde (MDA) was measured by colorimetry. RESULTS: As compared with the sham group, the control group had a significantly higher apoptotic index ((32.48 +/- 4.56) % versus (0.56 +/- 0.18) %, p < 0.01) and serum MDA concentration (2.70 +/- 0.64 versus 1.06 +/- 0.46 micromol/L, p < 0.01), and a significantly lower serum SOD level (144.27 +/- 21.69 versus 204.64 +/- 16.67 microU/L, p < 0.01). Probucol pretreatment apparently caused a decrease in the apoptotic index ((21.64 +/- 3.08) %, p < 0.01 versus the sham or control group) and serum MDA concentration (1.95 +/- 0.51 micromol/L, p < 0.01 versus the sham or control group), and increased the levels of serum SOD (162.61 +/- 16.13 microU/L, p < 0.01 versus the sham group; p < 0.05 versus the control group). The caspase-3 activation and mitochondrial cytochrome c release in the control group were also higher than those in the treated group (p < 0.01). CONCLUSIONS: The present study shows that probucol attenuates ischemia/reperfusion-induced cardiomyocyte apoptosis. The protective effect of probucol on the myocardium may be partly due to its antioxidant activity.     

Pretreatment with probucol attenuates cardiomyocyte apoptosis in a rabbit model of ischemia/reperfusion

Objective. Apoptosis plays an important role in ischemic reperfusion injury. Probucol is a hypolipidemic agent and has antioxidant activity, which may inhibit the oxidative modification of low‐density lipoprotein cholesterol. Studies have demonstrated that probucol improves left ventricular function, prevents left ventricular dilatation, and reduces cardiac fibrosis. However, the exact mechanism of probucol on the cardioprotective effect is not known. The objective of the present study was to examine the effect of probucol on ischemia/reperfusion‐induced cardiomyocyte apoptosis. Material and methods. Thirty male New Zealand White rabbits were randomly divided into sham, control, and treated groups, each group comprising 10 rabbits. Before establishment of the ischemia/reperfusion model, animals in the treated group were additionally fed daily with probucol (1000?mg per day) for 4 weeks. In the sham group, the heart was exposed after the chest had been opened, but the coronary artery was not ligated. The animals were killed 150?min after the procedure. In the other two groups, the rabbits were subjected to 30‐min of coronary occlusion followed by a 2‐h reperfusion. A blood sample was drawn from the right atrium before the animal was killed. The apoptotic myocytes were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase‐mediated dUTP nick‐end labelling. Expression of caspase‐3 and mitochondrial cytochrome c release was detected by immunohistochemical analysis and Western blot analysis. The level of serum superoxide dismutase (SOD) was tested using the xanthine oxidase method, and the content of serum malondialdehyde (MDA) was measured by colorimetry. Results. As compared with the sham group, the control group had a significantly higher apoptotic index ((32.48±4.56)?% versus (0.56±0.18)?%, p<0.01) and serum MDA concentration (2.70±0.64 versus 1.06±0.46?µmol/L, p<0.01), and a significantly lower serum SOD level (144.27±21.69 versus 204.64±16.67?µU/L, p<0.01). Probucol pretreatment apparently caused a decrease in the apoptotic index ((21.64±3.08)?%, p<0.01 versus the sham or control group) and serum MDA concentration (1.95±0.51?µmol/L, p<0.01 versus the sham or control group), and increased the levels of serum SOD (162.61±16.13?µU/L, p<0.01 versus the sham group; p<0.05 versus the control group). The caspase‐3 activation and mitochondrial cytochrome c release in the control group were also higher than those in the treated group (p<0.01). Conclusions. The present study shows that probucol attenuates ischemia/reperfusion‐induced cardiomyocyte apoptosis. The protective effect of probucol on the myocardium may be partly due to its antioxidant activity.     

三七皂甙对脑水肿大鼠保护作用的机制

背景脑水肿使颅内压明显增高和神志障碍,严重可导致脑疝,这些病理变化是造成脑功能障碍的主要原因.应用三七皂甙治疗脑水肿是目前国内外研究热点,具有重大理论意义.目的探讨三七皂甙对百日咳菌液致大鼠脑水肿的治疗作用及机制.设计随机对照研究.地点和对象实验地点中南大学湘雅医学院机能实验室.健康SD大鼠40只,随机分为生理盐水组、百日咳菌液组、三七皂甙组、甘露醇组4组.干预采用百日咳菌液注入左颈内动脉导致大鼠脑水肿.主要结局观察指标各组大鼠左脑组织含水量、伊文思蓝、丙二醛水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、肿瘤坏死因子α(tumor necrosisfactor-α,TNFα)水平.结果左脑组织TNFα水平,三七皂甙组(457.9±92.6)Pg/g明显低于百日咳菌液组(725.6±76.3)pg/g和甘露醇组(686.4±102.1)Pg/g(q=3.52～4.18,P＜0.05).左脑组织的含水量生理盐水组(78.8±0.3)%、三七皂甙组(79.8±0.4)%和甘露醇组(82.2±0.3)%均较百日咳菌液组(83.9±0.2)%为低(q=3.64～4.56,P＜0.05),三七皂甙组较甘露醇组低(q=3.38,P＜0.05).左脑组织的伊文思蓝含量生理盐水组(1.9±0.7)μg/g、三七皂甙组(5.2±0.9)μg/g和甘露醇组(8.4±0.6)μg/g均较百日咳菌液组(12.1±0.5)μg/g低(q=3.82～4.45,P＜0.05),三七皂甙组较甘露醇组为低(q=3.66,P＜0.05).治疗各组均能降低丙二醛水平,提高SOD活性(q=3.42～4.19,P＜0.05).结论三七皂甙对百日咳菌液致大鼠脑水肿具有治疗作用,其机制与抑制脂质过氧化和减少TNFα生成有关.     

糖尿病微血管病变与血清同型半胱氨酸、氧化应激反应的相关性

目的 探讨糖尿病微血管病变患者血清同型半胱氨酸与氧化应激反应的相关性.方法 测定80名健康人(对照组),100例无微血管病变2型糖尿病患者(DM组)、100例合并糖尿病肾病2型糖尿病患者(DN组)及100例合并DR2型糖尿病患者(DR组)血清同型半胱氨酸(Hcy)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及还原型谷胱甘肽(GSH)浓度.结果 DM组、DN组、DR组Hcy浓度分别为(98.86±21.46)、(198.95±19.35)、(138.65±15.25)ng/L,MDA浓度分别为(17.49±1.64)、(28.89±2.14)、(22.47±1.86)nmol/L,均明显高于对照组(62.48±15.36)ng/L,(11.86±0.48)nmol/L)(F值分别为7.95、6.89,P均＜0.01);DN组及DR组均较DM组明显升高(P均＜0.01),DM组、DN组、DR组血清SOD浓度分别为(107.80±15.62)、(79.86±14.63)、(89.34±12.75)mg/L,GSH浓度分别为(179.26±25.81)、(143.36±21.75)、(156.96±19.35)mg/L,均低于正常对照组(128.32±19.21)mg/L,(237.38±27.31)mg/L(F值分别为7.89、8.76,P均＜0.01);DN组及DR组均较DM组低(P均＜0.01);同时DN组又低于DR组(P＜0.01);血清Hcy与MDA浓度呈正相关(r=0.79,P＜0.05),与SOD、GSH浓度均呈负相关(r值分别为-0.71、-0.78,P均＜0.05).结论 糖尿病微血管病变患者血清同型半胱氨酸浓度升高,氧化应激反应增强,氧化应激与血清同型半胱氨酸浓度升高有关,血清同型半胱氨酸浓度升高,氧化应激促进糖尿病微血管病变发生发展.     

大蒜素对脓毒症大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的 研究大蒜素对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用,并初步探讨其机制.方法 24只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、脓毒症模型组、大蒜素治疗组,每组8只.脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔(cecum ligation and punctue,CLP),6h及12 h后用大蒜素(30 mg/kg,ip)干预,假手术组及模型组于同时间点给予等量生理盐水.24 h后处死大鼠检测血清D-乳酸、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性、荧光异硫氰酸盐葡聚糖(fluorescence isothiocyanate dextran,FITC-Dextran,FD-40)水平;检测肠组织肿瘤坏死因子[α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性,并取部分小肠组织进行组织病理学分析.统计方法采用单因素方差分析.结果 与假手术组比较,CLP组大鼠血清D[乳酸、DAO活性及FD40水平明显升高[D-乳酸(nmol/mL):(599.4±101.1) vs.(149.2±20.63),t=11.84,P＜0.01;DAO (ng/mL):(302.1±64.56)vs.(76.57±14.76),t=9.433,P＜0.01;FD-40 (ng/mL):(6664.0±1437.0)vs.(1446.0±205.0),t=9.704,P＜0.01];病理切片示CLP组大鼠肠道形态学损伤明显;肠组织中TNF-α、IL-6、MDA水平明显升高[TNF-α (pg/mL):(186.35±20.43)vs.(58.76±8.94),t=17.23,P＜0.01;IL-6 (pg/mL):(763.25±85.23)vs.(125.36±14.37),t=22.54,P＜0.01;MDA(nmol/mg prot):(29.36±3.27)vs.(7.24 ±0.85),t=16.61,P＜0.01],SOD活性降低[SOD(U/mg prot):(35.75 ±6.53)vs.(73.26±8.35),t=10.57,P＜0.01].大蒜素显著减少脓毒症诱导的血清中D哥酸、DAO活性及FD-40的升高[D-乳酸(nmol/mL):(330.1±81.77)vs.(599.4±101.1),t=7.086,P＜0.01;DAO (ng/mL):(171.8±49.70)vs.(302.1±64.56),t=5.45,P＜0.01;FD-40(ng/mL):(3349.0±1 167.0)vs.(6664.0±1437.0),t=6.165,P＜0.01];病理切片显示大蒜素减轻肠道形态学损伤;大蒜素明显抑制肠组织中TNF-α、IL-6、MDA水平[TNF-α (pg/mL):(95.37±12.68)vs.(186.35±20.43),t=12.29,P＜0.01;IL-6 (pg/mL):(354.27±46.27)vs.(763.25 ±85.23),t=14.45,P＜0.01;MDA (nmol/mgprot):(16.27±3.14)vs.(29.36±3.27),t=9.831,P＜0.01],增加SOD活性[SOD (U/mg prot):(55.35±6.23)vs.(35.75±6.53),t=5.522,P＜0.01].结论 大蒜素对CLP诱导的肠黏膜屏障功能具有保护作用,其机制可能与抑制炎症和氧化应激有关.     

贝科能对心肺复苏后大鼠心肌低氧诱导因子-1_α表达的影响

目的 研究贝科能(复合辅酶)对心肺复苏后大鼠心肌细胞低氧诱导因子1_α(hypoxia-inducible factor 1_α,HIF-1_α)蛋白表达影响及其对心脏损伤的保护作用.方法 实验在第二军医大学附属长征医院急救科实验室完成.SD大鼠72只,随机(随机数字法)分为3组:空白对照组、常规复苏组(包括0.5,2,4,6 h组)和贝科能治疗组(0.5,2,4,6 h组).采用窒息合并冰氯化钾(0.5 mol/L)停跳液致大鼠心跳骤停5 min后开始心肺复苏的动物模型,贝科能治疗组于心跳恢复时给予贝科能(按1支/10 kg)生理盐水稀释至0.3 mL后腹腔注入.采用Western blotting法测定各组大鼠心肌细胞低氧诱导因子1_α蛋白的表达;采用比色法测定心肌丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、Na~+-K~+-ATP酶活力.所得数据以均数±标准差(~(-)x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用q检验.结果 与对照组相比,常规复苏组各时间点HIF-1_α蛋白的表达均有增强(P＜0.05),2 h最高(空白对照组0.15±0.02,常规复苏组组0.57±0.06),MDA含量显著升高(P＜0.05),而SOD及Na~+-K~+-ATPase活力显著降低(P＜0.05).与常规复苏组相比,贝科能组各时间点心肌细胞HIF-1_α蛋白表达均减少(P＜0.05),其中2 h组差异最为显著[贝科能组(0.29±0.03),常规复苏组(0.57±0.06)];心肌MDA含量明显降低(P＜0.05),SOD及Na~+-K~+-ATP酶活力明显升高(P＜0.05).结论 HIF-1_α蛋白在心肺复苏后大鼠心肌细胞的表达增强;贝科能在提高Na~+-K~+-ATP酶活性的同时,下调HIF-1_α蛋白在心肌细胞的表达.贝科能可能是通过减轻缺血-再灌注损伤,对CPR后大鼠心肌细胞起到保护作用的.     

产兔与非孕兔休克复苏后肺损伤的比较研究

目的 探讨产兔和非孕兔失血性休克复苏后急性肺损伤的差异.方法 将18只新西兰兔按随机数字表法分为产兔组和非孕兔组,每组9只.采用颈动脉放血致失血性休克1h,乳酸林格液复苏持续3h建立失血性休克复苏模型.分别于产前期、产后期(休克前期,0h)、休克期末(1 h)、复苏期间(2.5 h)以及复苏期末(4 h)5个时间点采血测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10);复苏期持续3h后处死动物,取肺组织检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、干/湿重比值(D/W),以及核转录因子-κB(NF-κB)活性和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达.结果 产兔产前期血清TNF-α(ng/L)、IL-10(ng/L)含量与非孕兔差异无统计学意义(TNF-α:87.6±6.8比83.2±5.3;IL-10:44.9±3.9比42.7±3.4,均P＞0.05);休克前期TNF-α水平显著增高(102.5±8.1比87.6±6.8,P＜0.05).产兔与非孕兔休克1h后TNF-α、IL-10均升高;各复苏时期产兔TNF-α水平明显高于非孕兔(1 h:230.0±14.9比202.0±10.1,2.5 h:290.0±18.6比236.0±14.4,4 h:265.0±15.9比217.0±12.8,均P＜0.05),而IL-10水平明显低于非孕兔(1 h:104.3±6.9比135.0±7.8,2.5 h:146.8±9.4比178.3±11.7,4 h:126.0±7.9比165.8±9.6,均P＜0.05).休克复苏后产兔肺组织MDA、MPO、D/W比值、NF-κB活性和ICAM-1 mRNA表达均显著高于非孕兔[MDA(nmol/mg):52.6±5.9比39.4±4.7,MPO(U/mg):4.62±0.85比3.26±0.62,D/W比值:0.186±0.025比0.143±0.016,NF-κB(A值):0.89±0.27比0.46±0.15,ICAM-1mRNA:4.6±1.2比2.5±0.7,均P＜0.05];而SOD(U/mg)水平较低(47.8±6.7比63.5±8.2,P＜0.05).结论 分娩可致产兔血清炎症因子TNF-α显著升高,失血性休克复苏后产兔出现肺组织炎症损伤较非孕兔更为严重,炎症因子的差异可能是导致休克复苏后炎症应答差异的原因之一.     

南瓜提取物对小鼠铅诱导脂质过氧化及抗氧化酶活力的影响

背景铅是一种广泛存在的重金属毒物,可影响机体的抗氧化酶系统,降低超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性,造成肝、肾、脑等损害.南瓜在防治糖尿病、降脂、防癌、清除重金属毒物等方面具有广泛的应用价值.目的探讨染铅小鼠抗氧化系统的改变及南瓜提取物(pumpkin distillable subject,PKD)对抗氧化酶系统的影响.设计随机对照的实验研究.地点、材料和干预本实验在哈尔滨医科大学公共卫生学院动物室完成.选用纯种雄性健康昆明鼠60只,购自中国药品生物制品检定所实验动物中心.分为正常对照组、铅处理组和联合处理组,对照组小鼠饮正常水,联合处理组小鼠经饮水铅染毒,造成铅中毒模型后给予南瓜提取物,铅处理组不给南瓜提取物,4周后处死,取血清和肝脏并制备匀浆.测定血清和肝匀浆中SOD,GSH-Px活力及丙二醛含量.主要观察指标各组小鼠血清和肝匀浆中SOD,GSH-Px活力及丙二醛含量.结果联合处理组血清和肝匀浆中SOD活性明显高于铅处理组(q=7.83,6.01,P＜0.01),丙二醛含量明显低于铅处理组(q=6.75,6.51,P＜0.01).铅处理组小鼠血清和肝匀浆中GSH-Px含量[(3 746.42±669.30)μkat/L,(702.64±139.36)nkat/g]比正常对照组[(6242.92±940.02)μkat/L,(1 098.05±196.37)nkat/g]明显降低(q=7.90,5.59,P＜0.01).结论铅中毒可引起小鼠过氧化损伤,南瓜提取物可以减轻铅中毒引起的脂质过氧化,提高小鼠机体的抗氧化能力.     

罗格列酮对高脂血症大鼠拮抗胰岛素抵抗及脂肪性肝损伤作用

背景:有实验表明在胰岛素缺乏的糖尿病动物应用罗格列酮并未发现明显的增加胰岛素和降血糖作用,说明该药不刺激胰岛素分泌,其改善胰岛素抵抗的作用及对肝、肾脏功能的影响有待研究。目的:观察罗格列酮对高脂血症大鼠胰岛素抵抗是否有改善作用并分析其可能的作用机制。单位:广州市中医医院,广州市中医中药研究所。设计:分层随机对照动物实验。材料:选用64只SD大鼠,鼠龄6-8周,雌雄各半,体质量150-180g,均购自广东省医用实验动物中心;基础饲料:总热量6.9kJ/g(其中蛋白质占23%,碳水化合物占53%,脂肪占5%)。高脂乳液:猪油200g/L,胆固醇200g/L,牛胆盐10g/L,丙二醇200g/L,吐温-80200g/L,总热量15.5kJ/g。高脂肪-高糖-高热量饲料:基础饲料加100g/L葡萄糖、200g/L猪油和100g/L蛋黄粉充分混匀后,制成饼块,烘干后用,总热量21.3kJ/g(其中蛋白质占15%,碳水化合物占51%,脂肪占30%);罗格列酮片:葛兰素史克(天津)有限公司生产(5mg/tab,批号:02110012);格列齐特片:法国施维雅药厂天津华津制药厂合作生产(100mg/tab,批号:00232)。方法:实验于2003-04/07在广州中医药大学完成。①按性别、体质量随机抽取16只大鼠作为空白对照组,喂饲普通饲料,共6周。其余大鼠按照参照文献方法灌服高脂乳液,取空腹血糖≥6.1mmol/L或2h血糖≥7.8mmol/L的大鼠,按体质量和血糖值将大鼠分成3组:模型组、罗格列酮组和格列齐特组,每组16只。空白对照组大鼠不给予处理。罗格列酮组及格列齐特组大鼠分别灌胃给予罗格列酮(5mg/kg)及格列齐特(100mg/kg),模型组灌胃蒸馏水,同时分别继续喂饲高脂饲料,1次/d,共28d,第21天开始同时灌服高脂乳液,1次/d,共7d,末次给药后,禁食18h,第29天采用血糖仪检测各组大鼠空腹血糖,按体质量分别灌胃2.78mol/10mL·kg葡萄糖溶液或葡萄糖-药物混合液10mL/kg,2h后测2h血糖。②全部大鼠眼眶放血并分离血清,分别测定空腹血清血糖、胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、血清尿素氮、肌酐、肿瘤坏死因子α及胰岛素含量,同时按李光伟方法计算胰岛素敏感指数:胰岛素敏感指数=In[1/(空腹胰岛素浓度×空腹血糖浓度)]。处死大鼠,制肝匀浆,测肝三酰甘油,超氧化物歧化酶,还原型谷胱甘肽和丙二醛水平。主要观察指标:①大鼠空腹血糖及2h血糖检测结果。②大鼠血清大鼠血糖、血脂、肿瘤坏死因子α、胰岛素含量及胰岛素敏感指数检测结果。③大鼠肝细胞三酰甘油含量、还原型谷胱甘肽贮量、超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量检测结果。④大鼠血清丙氨酸氨基转移酶,天冬氨酸氨基转移酶,血清尿素氮及肌酐检测结果。结果:①大鼠空腹血糖及2h血糖检测结果:罗格列酮组大鼠空腹血糖及2h血糖分别为(3.2±0.3),(6.3±1.2),mmol/L,低于模型对照组[(3.8±0.5),(8.1±2.1)mmol/L,P<0.01]。格列齐特组大鼠空腹血糖为(3.3±0.7)mmol/L,低于模型对照组。②大鼠血清血糖、血脂、肿瘤坏死因子α、胰岛素含量及胰岛素敏感指数检测结果:罗格列酮组大鼠空腹血糖、肿瘤坏死因子α及空腹胰岛素浓度分别为(4.2±1.2)mmol/L,(246±45)μg/L,(133±45)pmol/L,低于模型对照组[(6.6±1.5)mmol/L,(294±65)μg/L,(264±76)pmol/L,P<0.05-0.01],胰岛素敏感指数高于模型对照组(-6.33±0.46,-7.46±0.95,P<0.01)。格列齐特组大鼠空腹血糖及肿瘤坏死因子α浓度分别为(4.1±1.1)mmol/L,(251±62)μg/L,低于模型对照组(P<0.05-0.01)。③大鼠肝细胞三酰甘油含量、还原型谷胱甘肽贮量、超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量检测结果:罗格列酮组大鼠肝细胞三酰甘油、丙二醛含量分别为(1.00±0.38),(40±17)mmol/g,低于模型对照组[(2.40±0.60),(171±63)mmol/g,P<0.01],还原型谷胱甘肽贮量、超氧化物歧化酶活性分别为(51±14)mg/g,(583.45±50.01)nkat/g,高于模型对照组[(2.40±0.60)mg/g,(450.09±66.68)nkat/g,P<0.05-0.01]。格列齐特组大鼠肝细胞三酰甘油、丙二醛含量分别为(1.20±0.38),(100±30)mmol/g,低于模型对照组,还原型谷胱甘肽贮量(46±15)mg/g,高于模型对照组。④大鼠血清丙氨酸氨基转移酶,天冬氨酸氨基转移酶,血清尿素氮及肌酐检测结果:罗格列酮组大鼠血清尿素氮,肌酐含量分别为(14.3±3.8)mmol/L,(33±9)μmol/L,低于模型对照组[(19.2±5.6)mmol/L,(45±13)μmol/L,P<0.05]。结论:罗格列酮和格列齐特均能改善高脂饲养引发的胰岛素抵抗,罗格列酮在降低高脂病鼠高胰岛水平、降低血清尿素氮及肌酐含量、提高还原型谷胱甘肽贮量作用和增强超氧化物歧化酶活性的趋势方面优于格列齐特。     

小檗碱对D-半乳糖诱导糖基化模型大鼠脑损害的干预作用

背景:蛋白糖基化反应是糖尿病的发生机制之一,探讨小檗碱对体内蛋白糖基化反应的抑制作用以及对蛋白糖基化造成脑细胞损害的保护作用将有助于糖尿病相关疾病的治疗。目的:观察小檗碱对D-半乳糖诱导的糖基化模型大鼠并发脑损害的干预作用。设计:随机分组设计、对照动物实验。单位:厦门中医院眼科。材料:实验于2005-06/10在暨南大学药学院药理实验室完成。选择6周龄SD大鼠90只。按随机数字表法分为4组,正常对照组、模型组、盐酸氨基胍组和小檗碱高(300mg/kg)、中(150mg/kg)、低(75mg/kg)剂量组,每组15只。采用腹腔注射D-半乳糖诱导糖基化模型。实验用药:小檗碱(广东万基药业有限公司);D-半乳糖(上海源聚生物科技有限公司)。方法:正常对照组腹腔注射生理盐水,持续8周;其他组动物每天腹腔注射5%D-半乳糖(150mg/kg),持续8周。第3周开始,盐酸氨基胍组开始灌胃盐酸氨基胍(150mg/kg),小檗碱组分别灌胃相应剂量的小檗碱,正常对照组和模型组动物均灌胃蒸馏水,连续给药6周。灌胃容积为10mL/kg。第8周末采用考马斯亮蓝法测定红细胞醛糖还原酶活性,采用硫代巴比妥酸比色法测定糖化血红蛋白含量,采用硝基四氮唑蓝比色法测定血清果糖胺。测定血清中晚期糖基化终末产物含量及脑组织中晚期糖基化终末产物、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性及脑神经细胞内钙离子水平,并以透射电镜观察脑内海马神经元线粒体的变化。主要观察指标:①血清中晚期糖基化终末产物、糖化血红蛋白、果糖胺含量,红细胞醛糖还原酶活性。②脑组织中晚期糖基化终末产物含量。③脑神经细胞内钙离子水平。④脑组织中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性。⑤脑内海马神经元线粒体结构变化。结果:纳入动物90只,均进入结果分析。①血清中红细胞醛糖还原酶活性和糖化产物含量:D-半乳糖处理8周后,模型组大鼠红细胞醛糖还原酶活性和果糖胺、糖化血红蛋白、晚期糖基化终末产物水平高于正常对照组(P<0.01);小檗碱高、中剂量组处理6周后,红细胞醛糖还原酶活性和果糖胺、糖化血红蛋白(每10g血红蛋白的吸光度值)、晚期糖基化终末产物水平均低于模型组[分别为(1.07±0.39),(1.22±0.47),(1.76±0.30)nkat/g,t=5.052,5.484,P<0.01;(0.740±0.142),(0.862±0.131),(0.958±0.083)mmol/L,t=7.829,P<0.01,t=2.404,P<0.05;58.434±12.135,64.614±13.418,83.747±7.990,t=4.922,6.748,P<0.01;(3.104±0.814),(2.937±0.514),(4.156±0.860)U/mg,t=4.104,3.440,P<0.05];小檗碱低剂量组红细胞醛糖还原酶活性低于模型组(P<0.05),对糖化产物未见明显影响。②脑组织内晚期糖基化终末产物含量:盐酸氨基胍组、小檗碱高、中剂量组大鼠脑组织内晚期糖基化终末产物含量低于模型组[分别为(10.52±1.22),(10.95±1.75),(11.95±2.27),(14.26±3.51)U/mg,t=-3.892,-3.263,P<0.01,t=-2.139,P<0.05],小檗碱低剂量处理影响不明显(P>0.05)。③脑神经细胞内钙离子水平:盐酸氨基胍组、小檗碱高剂量组大鼠脑组织内脑神经细胞内钙离子水平低于模型组[分别为(271.52±32.71),(293.84±31.58),(337.15±58.49)nmol/L,t=-3.421,P<0.01,t=-2.275,P<0.05],小檗碱低剂量处理影响不明显(P>0.05)。④脑组织内丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性:盐酸氨基胍组、小檗碱高、中剂量组脑组织内丙二醛含量显著低于模型组,超氧化物歧化酶活性显著高于模型组[分别为(2.09±0.16),(2.12±0.22),(2.41±0.12),(2.54±0.21)μmol/g,t=6.601,5.348,P<0.01,t=2.082,P<0.05;(8.79±1.09),(8.80±1.52),(7.90±1.48),(6.48±1.34)mkat/g,t=4.571,4.254,P<0.01,t=2.226,P<0.05]。⑤脑内海马神经元线粒体结构:透射电镜显示,模型组大鼠脑海马细胞线粒体出现明显肿胀,线粒体嵴断裂,结构紊乱,甚至出现明显的大空泡。盐酸氨基胍组和小檗碱高、中剂量组线粒体肿胀不明显,仅有少量线粒体出现小空泡,小檗碱低剂量组线粒体肿胀明显,嵴断裂,结构紊乱,并有空泡出现。结论:D-半乳糖诱导的糖基化模型大鼠脑线粒体损害可能与脑组织中晚期糖基化终末产物形成、脑细胞内钙稳态失调以及氧化应激有关,小檗碱具有抑制D-半乳糖诱导的蛋白糖基化反应,并对糖基化状态并发的脑神经细胞损害具有保护作用。