两种细胞因子受体在胰腺癌中的表达及临床应用价值

目的探讨胰腺癌组织中表皮生长因子受体（EGFR）和肝细胞生长因子受体（Met）基因和蛋白的表达情况，及其与胰腺癌临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组化法检测78例胰腺癌组织和23例正常胰腺组织中EGFR和Met蛋白的表达情况，采用实时定量聚合酶链反应（RT-RCR）法检测 EGFR和Met-DNA的相对拷贝数。结果78例胰腺癌组织中，EGFR和Met蛋白的阳性表达率明显高于正常胰腺组织，差异均有统计学意义（ P＜0．05）。肿瘤直径大于4 cm患者、胰腺癌组织高中分化患者、出现远处转移患者、淋巴转移患者、肠系膜上血管侵犯患者、T N M分期为Ⅲ和Ⅳ期患者中EG FR和M et蛋白的表达均明显高于肿瘤直径小于或等于4 cm患者，胰腺癌组织低分化患者，未出现远处转移患者、未有淋巴转移患者、未出现肠系膜上血管侵犯患者、TNM 分期为Ⅰ和Ⅱ期患者，差异具有统计学意义（P＜0．05）。胰腺癌患者中，EGFR和Met-DNA 相对拷贝数均明显高于正常胰腺组织中EGFR和Met-DNA相对拷贝数，差异具有统计学意义（P＜0．05）。高表达EGFR和Met胰腺癌患者的平均生存时间均显著低于Met及EGFR低表达患者，差异具有统计学意义（P＜0．05）。Met和EGFR均高表达的患者的平均生存时间较Met或 EGFR单一高表达者的短，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 EGFR和M et的表达与胰腺癌的临床病理相关指标密切相关，对二者的分析研究有助于对胰腺癌患者的预后作出预测，并对化疗药物新靶点筛选提供理论依据。     

慢性乙型肝炎患者血清转化生长因子β1、肝细胞生长因子的检测及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病理过程中血清转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)水平的变化及其临床意义。方法48例慢性乙型肝炎患者和20例健康人均于清晨空腹采血以双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测血清TGF-β1、HGF水平并同时检测肝功能和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)水平。结果慢性乙型肝炎患者轻度组、中度组、重度组血清TGF-β1、HGF水平均显著高于对照组,TGF-β1分别为(167.5±87.6)μg/L、(313.1±96.3)μg/L(、495.9±134.4)μg/L vs(81.4±40.7)μg/L,MGT分别为(1530.4±912.2)ng/L(、2461.5±1624.7)ng/L、(3805.2±2104.8)ng/L vs(270.3±123.5)ng/L(均P<0.05),且与丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBil)水平呈正相关(r=0.625,r=0.568,r=0.579,r=0.612);HBV DNA阳性组和阴性组血清TGF-β1、HGF水平比较差异无统计学意义。结论细胞因子TGF-β1、HGF参与了慢性乙型肝炎的病理生理过程,其水平变化与肝脏损伤程度密切相关。     

血小板源性生长因子和受体在皮肤溃疡中表达特征及其对溃疡形成影响的研究

目的观察血小板源性生长因子(PDGF)的两个亚基(A、B)和两种受体(PDGFR-α和PDGFR-β)在正常皮肤、溃疡边缘和溃疡组织中的分布、表达特征及其与溃疡形成的关系.方法24份被测标本来自8例不同类型的溃疡患者,取其溃疡皮肤组织8份、对应的溃疡边缘组织8份及正常皮肤组织8例.用常规病理技术和免疫组织化学方法确定这4种蛋白在不同组织中的定位和表达量的变化规律.结果在正常皮肤组织中,PDGF-A和PDGF-B的阳性颗粒主要见于表皮基底层细胞和内皮细胞中,两个亚基的阳性细胞率分别为(15.2±5.6)%和(22.4±7.4)%;PDGFR-α存在于表皮细胞和内皮细胞的细胞膜上,该受体表达较多,阳性表达率为(36.7±4.3)%;PDGFR-β在正常皮肤中表达较弱(15.3±4.8)%,蛋白颗粒主要集中于表皮基底层细胞膜上.从正常皮肤组织经溃疡边缘到溃疡中心,PDGF-A和PDGF-B的蛋白表达呈升高趋势.在溃疡组织中,PDGF-A和PDGF-B蛋白主要分布于角质形成细胞、单核细胞和巨噬细胞的胞质内,两者的阳性细胞率分别升至为正常皮肤的1.41倍和1.13倍.PDGFR-α主要分布于表皮基底层细胞和内皮细胞的细胞膜上,而含有PDGFR-β阳性颗粒的细胞主要为表皮生发层细胞.与正常皮肤组织相比,α和β型受体表达都显著下降,阳性表达率分别降低至(14.2±5.2)%和(9.2±3.1)%(P<0.01和P<0.05).结论在PDGF因子高浓度环境中,溃疡创面难愈性修复可能与PDGFR-α和PDGFR-β表达下降引起因子与受体结合发生障碍相关.     

肝细胞生长因子在正常和轻型急性胰腺炎小鼠的药动学研究

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)在轻型急性胰腺炎(MAP)小鼠的药动学及胰腺分布。方法:于正常小鼠背部皮下注射125I-HGF80ng,注射后1、2、3、4、5、10、15、30、60、90、120、180、240、300min分别取血清及胰腺组织,测定HGF含量,计算HGF半减期;小鼠分为对照组和模型组,以雨蛙肽100μg/kg体重腹腔注射复制MAP模型,125I-HGF给药后30、60、120、180、360min测定血清及胰腺组织HGF含量,计算HGF半减期。结果:HGF在正常小鼠血液及胰腺组织中呈先快后慢的代谢特征,后期半减期约为130min;复制MAP后HGF在模型组小鼠血液中的后期半减期约为195min,较对照组延长(P<0.01);模型组胰腺HGF含量高于对照组(P<0.01)。结论:HGF在正常小鼠血液及胰腺中均呈先快后慢的代谢特征;MAP后HGF半减期延长,胰腺中的HGF含量增高。     

小鼠角质细胞生长因子重组腺病毒载体的构建

目的 探讨构建表达小鼠角质细胞生长因子(KGF)基因重组腺病毒载体的方法.方法 提取小鼠肺组织RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA后,PCR扩增目的基因片段.将获得的KGF基因插入载体质粒pShuttle-CMV,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-KGF(pKGF).线性化pKGF后,转化入含AdEasy-1病毒骨架的BJ5183细菌中.筛选正确的同源重组质粒pAdEasy-1-pShuttle-CMV-KGF(pAd-KGF),转染HEK293细胞,产生病毒颗粒AdEasy-1-pShuttle-CMV-KGF(Ad-KGF).进一步大量扩增病毒,氯化铯梯度离心纯化,测定病毒滴度.制备病毒Ad-GFP为对照,显微镜下观察转染率.结果 ①经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定,证实pKGF构建成功;②限制性内切酶酶切确定穿梭质粒重组于病毒骨架;显微镜下观察HEK293细胞形态,证实病毒包装复制成功;③病毒滴度3.0×1010 pfu/ml,达到进一步体内、外实验要求.结论 成功构建了重组腺病毒Ad-KGF,为了解KGF在肺部疾病中的作用以及进一步的基因治疗肺纤维化方法奠定了基础.     

正畸力作用下大鼠炎性牙周组织中肝细胞生长因子的表达

背景：细胞因子在牙周组织改建机制中具有重要的免疫调节和直接介导作用。目前肝细胞生长因子在正畸力作用后对牙周组织改建的作用及机制尚未见报道。 目的：探讨肝细胞生长因子在炎性牙周条件下参与牙移动及牙周改建的机制。 方法：选用30只8周龄雄性SD大鼠,建立牙周炎模型,随机分为2组,炎性对照组5只,炎性加力组25只。炎性加力组在上颌第一磨牙近中施加50 g的力值,分别在受力1,3,5,7,14 d处死,每次处死5只。采用苏木精-伊红染色、免疫组化方法分析牙齿受力移动不同阶段牙周组织中肝细胞生长因子表达和分布变化。 结果与结论：苏木精-伊红染色结果显示,受力牙齿与未受力牙齿牙周组织中都存在一定程度的改建。免疫组化结果显示,炎性对照组中可观察到肝细胞生长因子在牙周组织中呈阳性表达,分布较均匀。炎症加力组大鼠牙周组织内肝细胞生长因子受力后表达增高,在第5天达到高峰,之后开始下降;其中成骨细胞、成纤维细胞及破骨细胞均为强表达。提示肝细胞生长因子参与了正畸牙周组织的改建过程,其表达随时间呈现一定规律,炎症刺激可导致牙周组织中肝细胞生长因子的表达增高。     

肝细胞生长因子和血管内皮生长因子在急性髓系白血病中的表达以及与血管新生的关系

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子(VEGF)在急性髓系白血病(AML)中的表达及与AML血管新生的关系.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定AML 25例初发未治、17例完全缓解、16例未缓解、12例复发患者血清中HGF和VEGF的浓度,并与正常对照组比较.结果 血清HGF的浓度:AML初发未治组[(1357.29±358.64) ng/L]、未缓解组[(1175.93±306.71)ng/L]、复发组[(1261.21±340.83) ng/L]患者均明显高于正常对照组[(232.62±99.13) ng/L]和缓解组[ (256.65 ±94.32) ng/L](F=78.35,P＜0.01);血清VEGF的浓度:AML初发未治组[(253.84±49.14) ng/L]、未缓解组[(245.87±54.68) ng/L]、复发组[(264.75 ±62.52) ng/L]患者均明显高于正常对照组[ (97.61±16.19) ng/L]和缓解组[(99.76±15.93) ng/L](F=68.65,P＜0.01);缓解组患者血清HGF和VEGF的浓度与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05).HGF和VEGF在AML中呈正相关(r=0.49,P＜0.05).结论 HGF和VEGF与AML的发生、发展密切相关,通过阻抗HGF治疗白血病有望成为新的治疗方法.     

Stability of faecal hepatocyte growth factor determination

In order to evaluate the accuracy and reproducibility of determination of hepatocyte growth factor (HGF) levels in faeces, the stability of HGF in samples processed in different ways was investigated. An ELISA method was used for determination of HGF concentrations. Faeces samples from healthy controls and patients with infectious diarrhoea were studied. It was found that faeces HGF concentration remained stable irrespective of whether samples were freeze‐thawed several times, kept for 6, 12 or 24?h at room temperature or refrigerated for 6, 12, 24 or 36?h; the levels of HGF did not change significantly when samples were freeze‐dried. Adding protease inhibitor to the faeces samples did not affect the HGF levels. There were no significant differences between HGF levels using phosphate buffered saline (PBS) (pH?7.4) or NaCL as buffer, but it was observed that levels of HGF were significantly lower in the samples that were diluted in distilled water. Although both HGF and albumin through various mechanisms may increase in faeces during infectious diarrhoea, there was no significant correlation between faeces HGF levels and albumin levels, which might indicate local production of HGF in the bowel in response to infection. It is concluded that determination of faeces HGF levels is feasible with a high degree of stability. Increased HGF levels in faeces might represent a local production of HGF during bowel injury and might be of use as a diagnostic and monitoring assay.     

HGF、C-Met在子宫内膜异位症患者在位子宫内膜的表达及意义

目的:探讨肝细胞生长因子(H G F)及其受体(C-M et)与子宫内膜异位症发病机制的关系。方法:采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法检测45例(增生期20例,分泌期25例)盆腔子宫内膜异位症及30例(增生期12例,分泌期18例非子宫内膜异位症妇女的在位子宫内膜的H G F与C-M et的免疫表达水平。结果:(1)盆腔子)宫内膜异位症的在位子宫内膜的H G F、C-M et表达水平显著增高P=0.006,P=0.001)。(2)H G F与C-M et呈正相(关(异位症及对照组r均为0.945)。(3)H G F与C-M et均随月经发生周期性变化(分泌期高于增生期,对照组H G F、C-M et分别为P=0.015、P=0.023;内异症组H G F、C-M et分别为P=0.003、P=0.015)。结论:类似肿瘤转移和浸润机制,H G F/C-M et系统可能参与了子宫内膜异位症的发病。     

急性白血病患者肝细胞生长因子及血管内皮生长因子血清水平检测及临床意义

目的 检测急性白血病(AL)患者治疗前后外周血血清肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的水平,探讨血清HGF和VEGF与急性白血病的发生、发展及预后等方面的关系.方法 应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELSIA)法动态检测并分析患者疾病不同时期血清HGF和VEGF的水平.结果 急性非淋巴细胞白血病(ANLL)组血清HGF水平(1 196.86±282.31)ng/L明显高于正常对照组(332.55±65.16)ng/L(P<0.01);急性淋巴细胞白血病(ALL)组血清HGF水平(1 224.53±283.19)ng/L明显高于正常对照组水平(332.55±65.16)ng/L(P<0.01);ANLL患者CR组治疗前后血清HGF水平分别为(1 140.31±266.23)ng/L,(478.50±183.75)ng/L(P<0.01),NR组治疗前后血清HGF水平分别为(1 432.51±235.30)ng/L,(1 386.63±197.95)ng/L(P>0.05).结论 AL患者血清HGF及VEGF水平均较正常对照组HGF水平及VEGF水平升高.血清HGF及VEGF水平可作为监测AL的疗效指标.血清VEGF水平可作为AL的预后判断指标,血清HGF水平对白血病的预后判断有一定意义.     

Protein C inhibitor directly and potently inhibits activated hepatocyte growth factor activator

Background:  Hepatocyte growth factor (HGF) plays an important role in tissue repair and regeneration. HGF activator (HGFA), a factor XIIa-like serine protease, activates HGF precursor to HGF. The precursor of HGFA, proHGFA, is activated by thrombin generated at sites of tissue injury. It is known that protein C inhibitor (PCI), an inhibitor of activated protein C (APC), also inhibits thrombin–thrombomodulin (TM) complex. Objectives:  In the present study we evaluated the effect of PCI on thrombin-catalyzed proHGFA activation in the presence of TM, and on HGFA activity. Results:  PCI did not inhibit thrombin-TM-mediated proHGFA activation, but it directly inhibited activated HGFA by forming an enzyme inhibitor complex. The second-order rate constants ( m ⁻¹ min⁻¹) of the reaction between HGFA and PCI in the presence or absence of heparin (10 U mL⁻¹) were 4.3 × 10⁶ and 4.0 × 10⁶, respectively. The inhibition of HGFA by PCI resulted in a significant decrease of HGFA-catalyzed activation of HGF precursor. Exogenous HGFA added to normal human plasma formed a complex with plasma PCI, and this complex formation was competitively inhibited by APC in the presence of heparin, but very weakly in the absence of heparin. We also demonstrated using recombinant R362A-PCI that Arg362 residue of PCI is important for HGFA inhibition by PCI as judged from the three-dimensional structures constructed using docking models of PCI and HGFA or APC. Conclusion:  These observations indicate that PCI is a potent inhibitor of activated HGFA, suggesting a novel function for PCI in the regulation of tissue repair and regeneration.     

多发性骨髓瘤患者骨损害与肝细胞生长因子血清浓度关系的探讨

目的　探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨损害程度与肝细胞生长因子(HGF)血清浓度的关系。方法　采 用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测32例MM患者的HGF血清浓度,观察其与多发性骨髓瘤骨损害的关系。结果　 不同程度骨损害的MM患者,其血清HGF浓度的差异有统计学意义(P<0.01);MM骨损害越严重,其血清HGF 浓度增高越显著。结论　MM患者HGF血清浓度与骨损害程度有关,骨损害程度严重者,HGF血清浓度明显增高。     

表皮细胞生长因子及其受体在难愈性溃疡组织中的表达特征

目的 :探讨表皮细胞生长因子 (EGF)及其受体 (EGFR)在正常皮肤、溃疡边缘和溃疡组织中的分布、表达特征及其与溃疡形成的关系。方法 :采用常规病理技术和免疫组织化学方法鉴定这两种蛋白在 8例难治性皮肤溃疡患者 8份不同类型的皮肤溃疡组织及其对应溃疡边缘和周围正常皮肤组织中的定位及表达量的变化规律。结果 :在正常皮肤中 ,EGF主要存在于表皮细胞、真皮成纤维细胞、毛囊上皮细胞和内皮细胞的胞浆和胞外基质中 ;而 EGFR的阳性信号则分布于这些细胞的细胞膜和胞浆中。从正常皮肤经溃疡边缘到溃疡中心 ,EGF及其受体的蛋白表达呈降低趋势 ,在溃疡组织中 ,EGF和 EGFR呈弱阳性表达 ,两种蛋白的阳性表达率分别降低至正常皮肤的 (7.1± 5 .2 ) %和 (8.8± 5 .5 ) % ,呈非常显著性差异 (P均 <0 .0 1)。结论 :溃疡创面难愈性修复可能与 EGF及其受体蛋白表达下降 ,细胞因子与受体结合发生障碍 ,修复信号不能正常传递有关。     

EGFR和PDGFR在慢性前列腺炎中的表达及其意义

目的检测Wistar大鼠慢性前列腺炎动物模型的表皮生长因子受体（EGFR）和血小板衍生的生长因子受体（PDGFRl的表达,为慢性前列腺芡和前列腺癌的的关联性提供理论依据。方法实验组和对照组各采用50只Wistar大鼠慢性细菌性前列腺炎组织和正常前列腺组织．应用免疫组化方法分别检测两组大鼠前列腺组织的EGFR和PDGFR的表达情况。结果实验组大鼠慢性前列腺炎组织EGFR和PDGFR表达均较对照组明显增加,差异均有统计学意义（u分别=3．35、9．05,P均〈0．05）。结论慢性细菌性前列腺炎组织中EGFR和PDGFR的表达高于正常组织,可能与前列腺癌存在一定关联。     

糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化与肝细胞生长因子和Smad7蛋白的表达

目的探讨糖尿病肾病（DN）时肾小管上皮细胞转化以及肝细胞生长因子（HGF）、Smad7蛋白在其中可能发挥的作用。方法60只Wistar大鼠均行右肾切除术，伤口愈合后随机分为右肾切除对照组和糖尿病组。腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型。采用免疫组化法检测角蛋白18（CK18）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、HGF和Smad7蛋白的表达；流式细胞术检测α-SMA和HGF的表达；蛋白质免疫印迹法检测Smad7蛋白的表达。结果糖尿病组较对照组CKl8的表达降低，α-SMA的表达上升，HGF和Smad7蛋白的表达表现为先上升后下降。结论糖尿病时，肾小管上皮细胞可发生表型转化，转化为肌成纤维细胞。HGF和Smad7蛋白表达下降可能与该模型中肾小管上皮细胞转化有关。     

脑出血对肝脏的影响及其临床意义的探讨

目的探讨脑出血患者血清中肝细胞再生因子的变化及其意义。方法应用组织细胞培养法及同位素标记技术对60例脑出血患者和30例健康对照组血清中肝细胞再生因子水平进行测定。结果≥30ml的脑出血的患者血清中肝细胞再生因子高于<30ml的脑出血的患者(P<0.05),并显著高于正常对照组(P<0.01)。结论为研究脑出血患者对肝脏的影响及其防治提供参考。     

肝细胞生长因子对慢性肝损伤时肝部分切除术后肝再生和肝功能的影响

目的研究肝细胞生长因子对慢性肝损伤时肝部分切除术后肝再生和肝功能的影响。方法对慢性肝损伤模型SD大鼠行30%肝部分切除术,术后10d,经腹腔注射肝细胞生长因子,同时建立正常对照组。观察不同剂量肝细胞生长因子对肝再生,肝功能和肝储备功能的影响。结果实验组与对照组相比,AST,ALT,总胆固醇、动脉血酮体比具有显著的统计学意义(P<0.01)。结论应用外源性肝细胞生长因子可明显改善肝功能和肝储备功能,促进肝细胞再生。     

基于间质表皮转化因子/肝细胞生长因子信号通路靶向分子成像探针研究进展

间质表皮转化因子(c-Met)/肝细胞生长因子(HGF)信号通路在肿瘤发生、发展中起重要作用.分子成像可准确、无创地评价关键分子靶点在体表达水平和活化状态.基于c-M et的肿瘤靶向分子成像不仅可检测c-M et表达状态以筛选受益患者,还能监测治疗效果、评估预后,提高靶向治疗效果.本文就基于c-Met/HGF信号通路的...     

黄芪对内毒素性急性肺损伤大鼠肝细胞生长因子表达的影响

目的：探讨黄芪在急性肺损伤（ALI）时对肝细胞生长因子（HGF）表达的影响，评价黄芪在ALI中的治疗机制。方法：制备内毒素（LPS）性ALI模型。设正常对照组（生理盐水1ml／kg）、模型组（LPS5mg／kg）、黄芪治疗组（黄芪8mg／kg）。用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组大鼠肺组织匀浆中HGFmRNA表达的变化；用免疫组化法检测各组大鼠肺组织中HGF阳性细胞数的变化。结果：RT—PCR检测结果显示，ALl时HGF mRNA表达明显增加（P〈0．05），黄芪能促使HGFmRNA表达进一步升高（P〈0．05）。免疫组化显示，ALI时HGF阳性细胞表达产物增加（P〈0．01），黄芪能促进HGF的表达（P〈0．05）。结论：黄芪通过促进HGF的表达来促进ALI的修复。