冷冻保存对软骨细胞存活率及代谢活性的影响

目的了解各种冷冻保存方法对软骨细胞的存活率和代谢活性的影响，寻找满意的软骨组织冻存方法。方法采用梯度慢速降温法和连续慢速降温法对兔关节软骨进行低温冷冻保存处理，通过荧光染色及^35SO4摄入率了解冻存后软骨细胞的存活率和代谢活性。结果采用梯度降温法的软骨细胞存活率为61％，显著高于连续降温法；冷冻保存对软骨细胞的代谢活性有一定的影响．但与对照组的差异并无统计学意义。结论梯度降温法较传统保存方法能显著提高冷冻保存后软骨细胞的存活率，并能维持软骨细胞的代谢活性，是理想的关节软骨冷冻保存方法。     

冷冻保存对软骨细胞活性及超微结构的影响

目的 观察梯度降温冷冻保存方法对关节软骨细胞存活率、代谢活性及软骨基质的影响。方法采用梯度降温技术对兔关节软骨进行低温冷冻保存处理,通过荧光染色、35SO4摄入率及电镜技术了解冻存后软骨细胞的存活率、代谢活性及软骨基质的冷冻损伤。结果采用梯度降温法的软骨细胞存活性率可以达到60％;冷冻保存对软骨细胞的代谢活性有一定的影响,但与对照组的差异无显著性(P>0.05);软骨基质也存在冷冻损伤,表现为基质的微小断裂。结论关节软骨的冷冻损伤不仅表现为软骨细胞活性降低,还存在软骨基质断裂。     

慢速梯度降温冷冻保存同种异体骨软骨移植治疗膝关节全层软骨缺损(附三例报告)

目的总结冷冻保存同种异体骨软骨移植物治疗3例膝关节全层骨软骨缺损的手术方法及疗效。方法应用梯度降温冷冻保存的6枚同种异体骨软骨移植物治疗3例膝关节全层骨软骨缺损,2例在关节镜下同种异体骨软骨移植,1例行关节切开移植。膝关节股骨髁关节软骨全层缺损平均面积2.16 cm2。所有患者在手术后第1个月、第3个月时进行膝关节MRI检查,了解移植物与周围骨软骨组织的愈合情况。并于门诊复查时进行Brittberg-Peterson膝关节功能评分,了解功能恢复情况。结果随访4～6个月,平均4.7个月。所有患者术后疼痛消失;无排异反应发生。术后3个月时,MRI检查示术后移植物与宿主软骨下骨整合良好,移植软骨组织结构与内部信号良好。Brittberg-Peterson评分术后6个月比手术前明显降低。结论经梯度降温冷冻保存的同种异体骨软骨移植治疗膝关节软骨缺损早期效果满意。     

人异体骨软骨移植物保存方法研究

[目的]探讨六种保存方法对人关节软骨组织结构和细胞活性的影响,寻求一种保存效果较好的方法,为临床提供一种有活性的异体骨软骨移植物.[方法]自捐献新鲜尸体膝关节利用专用手术器械获取4.5 mm ×4.5 mm大小的人骨软骨块,分别采用梯度降温法、Co60射线照射+梯度降温法、玻璃化法、连续降温法、直接液氮法和酒精浸泡法对软骨块进行保存处理,分别于保存第8、15、30、60d时,采用蕃红-O组织染色、扫描电镜、软骨细胞胎盼蓝染色、MTT法等,观察并比较以上6种方法保存后关节软骨细胞存活率及其代谢功能变化.[结果]除了酒精保存方法外,其余保存方法随着时间延长软骨组织的细胞成活率和细胞代谢活性逐渐降低;保存60d时,采用玻璃化法保存软骨组织的细胞存活率为62.47％,软骨基质成分丢失较少,胶原纤维断裂不明显;采用慢速梯度降温法保存软骨组织的细胞存活率为59.75％,软骨基质成分丢失较多,胶原纤维断裂明显;其他保存方法软骨细胞存活率不足40％,软骨基质成分大量丢失,胶原纤维杂乱.[结论]六种保存方法中,玻璃化保存法能够较好的保存关节软骨,活性最好,其次是梯度降温保存法,两者均具有一定临床价值.Co60射线照射对软骨细胞有一定的损伤作用;酒精浸泡不能保存软骨细胞活性.     

胶原/羟基磷灰石支架负载软骨细胞修复兔膝关节骨软骨缺损

目的 探讨胶原复合梯度羟基磷灰石(Col/HA)双相支架负载软骨细胞修复兔膝关节骨软骨缺损的可行性及疗效.方法 构建Col/HA双相支架,将软骨细胞种植于支架培养1周,再将软骨细胞-支架复合体移植修复兔膝关节股骨髁的骨软骨缺损,并对骨软骨缺损的修复进行检测.结果 光镜及扫描电镜观察显示软骨细胞在Col/HA支架中贴附良好,表型维持稳定,分泌胞外基质.大体观察和组织学检测显示,植入体内16周后实验组软骨层呈透明软骨样修复,软骨下骨缺损有新骨构建;对照组骨软骨缺损修复不良,组织学检测以纤维性组织或纤维软骨组织形成.Wakitani评分显示实验组修复组织优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 双相Col/HA复合支架可作为骨软骨组织工程支架,负载软骨细胞可修复兔膝关节骨软骨缺损,重建关节软骨的结构和功能.     

筋膜软骨细胞修复关节软骨大面积缺损的实验研究

目的　探讨在筋膜上培养软骨细胞修复关节软骨大面积缺损的能力和生物特性。方法　将幼兔关节软骨消化、分离和传代后的软骨细胞在兔筋膜上培养 ,分别用培养后的新鲜、冻存筋膜软骨细胞和游离软骨细胞移植修复关节软骨大面积缺损。术后 6、12及 2 4周取材 ,通过大体标本、光学显微镜、扫描、透射电镜、放射自显影以及一氧化氮含量测定等方法进行观察。结果　分离后的关节软骨细胞在兔筋膜上生长代谢良好 ,冻存后的筋膜软骨细胞生物活性无损伤 ,移植后修复的关节软骨缺损在细胞形态、生物特性与正常关节软骨组织相同。结论　筋膜可以作为软骨细胞移植较为理想的载体 ,用其修复关节软骨大面积缺损是一种有效可行的方法。     

同种异体骨软骨移植修复关节软骨缺损研究现状

关节软骨缺损常因软骨再生能力低而难以自行修复.新鲜的同种异体骨软骨移植修复关节软骨缺损的疗效稳定,成功率逐渐提高.冷冻保存的同种异体骨软骨移植修复关节软骨缺损的成功率可与新鲜的同种异体骨软骨移植媲美,梯度降温法是目前保存软骨细胞存活率最好的冷冻方法.该文就同种异体骨软骨移植的实验和临床研究、免疫排斥问题及其相关研究动态作一综述.     

浸泡时间与关节软骨冷冻保存的关系

目的　寻求更佳的关节软骨冷冻保存方法。方法　设计两步冷冻法中的不同浸泡时间,对新西兰兔的关节软骨进行冷冻保存。软骨取材后,随机分成五组,Ⅰ组为新鲜对照组,Ⅱ～Ⅴ组为冷冻组,冷冻前先在4℃10%DMSO中浸泡30分钟（Ⅱ组）、1时（Ⅲ组）、2小时（Ⅳ组）及4小时（Ⅴ组）,然后均置超低温冰箱中以-1℃/min的速度降温至-60℃,维持1小时后,投入液氮中保存1周。复温后行透射电镜检查、台盼蓝染色、软骨细胞培养3HTdR掺入率测定。结果　①软骨组织冷冻后,软骨细胞均受到不同程度的损伤。Ⅰ组活细胞率96%,3HTdR掺入率为(4953.13±583.27)%,Ⅱ～Ⅴ组与之比较,有非常显著性差异(P＜0.01)。Ⅰ组超微结构完全正常,而Ⅱ～Ⅴ组均显示细胞器损伤。②Ⅳ组的细胞结构和功能最佳,电镜检查仅见轻度细胞器损伤,活细胞率为56%,3HTdR掺入率(1139.88±146.39)%;Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组与之比较,有非常显著性差异(P＜0.01)。结论　关节软骨在冷冻之前,先浸泡4℃10%DMSO中2小时,可提高软骨细胞的存活率。     

双相支架负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损

目的研究自固化磷酸钙/纤维蛋白凝胶(CPC/FG)双相支架负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损的可行性和有效性.方法将分离培养的第3代软骨细胞包埋在CPC/FG双相支架的FG中,体外培养1周后,将软骨细胞-支架复合体移植修复兔膝关节股骨髁的软骨缺损(φ4 mm,深3.5 mm,达软骨下骨质).然后对软骨缺损的修复情况进行大体、光镜和电镜观察.同时对移植后第12周的修复软骨进行胶原含量测定,并与正常的关节软骨细胞胶原含量进行比较.结果移植的软骨细胞能在双相支架上良好地生长,软骨缺损以透明软骨的形式被修复,而对照组为纤维组织修复.多孔自固化磷酸钙在软骨修复过程中能起软骨下骨的临时替代作用.胶原含量测定显示:移植术后12周的修复软骨胶原含量为(43.25±0.85)%;正常的关节软骨胶原含量为(55.69±0.76)%,两者差异有显著性(P<0.01).结论 CPC/FG双相支架负载软骨细胞能以透明软骨的形式修复兔关节软骨缺损.新环境中移植的软骨细胞生长的不适应和FG降解过快,可能是导致新生修复软骨与自身正常关节软骨胶原含量有差异的原因.     

玻璃化冻存对兔关节软骨细胞存活率及代谢活性的影响

目的探索理想的关节软骨细胞低温保存方法。方法分别采用玻璃化冻存法、程序性降温法及梯度降温法对兔关节软骨细胞进行低温保存,通过流式细胞仪计数及阿尔新蓝染色等方法了解复苏后软骨细胞的存活率、凋亡率及生物活性。结果采用玻璃化冻存法保存的软骨细胞存活率为(86.57±1.67)%,明显高于传统的程序性降温法及梯度降温法;玻璃化冻存对软骨细胞合成糖胺多糖的能力有一定影响,但与新鲜未冷冻组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冻存法较传统的保存方法能显著提高冷冻保存后兔关节软骨细胞的存活率,并能维持细胞的生物活性,是一种理想的软骨细胞低温保存方法。     

活动对自体骨膜游离移植修复关节软骨缺损的影响实验研究

为了探索活动对骨膜游离移植修复关节软骨缺损的影响，选用成年健康家兔６０只，随机分三组：笼外活动组，笼内活动组及制动组。手术造成双后肢骨宾股关节股骨关节面０．５ｃｍ×１ｃｍ全层软骨缺损各一处，将自体胫骨骨膜游离移植于左侧软骨缺损处，右侧作为对照。分别于术后第４，８和１２周处死动物，取关节软骨标本。通过大体组织学、组织化学及电镜观察软骨再生情况，并比较活动量的多少对骨膜化生软骨的影响。结果表明，游离骨膜产生类透明软骨能有效地修复全层关节软骨缺损；统计学分析，笼外活动组与笼内活动组差异显著（Ｐ＜０．０５），笼内活动组与制动组差异显著（Ｐ＜０．０５），笼外活动组与制动组差异高度显著（Ｐ＜０．０１）。证明，活动量的大小对骨膜化生软骨有着重要的影响     

胫骨平台骨折与创伤性关节炎的防治

目的探讨胫骨平台骨折受损关节面软骨的早期修复和严重晚期创伤性关节炎关节面的重建。方法对４２例胫骨平台骨折除重视骨折复位外,对部分剥脱、掀起的关节软骨予以复位并采用丝线或细钢丝抽出缝合修复,对缺如软骨裸露关节面,根据其大小、深浅分别用骨形成蛋白－纤维蛋白粘合剂（ＢＭＰ－ＦＳ）复合片或附以带蒂骨膜瓣翻转修复。结果本组有９例发生创伤性关节炎包括３例严重的晚期创伤性关节炎。对此３例严重晚期创伤性关节炎采用ＢＭＰ－ＦＳ覆盖,术后随访６～２４个月,关节面及关节间隙恢复正常,疼痛消除,膝关节屈伸增加３０°。结论ＢＭＰ－ＦＳ可用于修复早期关节面软骨缺损和晚期严重创伤性关节炎关节面的重建     

Surgical technique for articular cartilage transplantation to full-thickness cartilage defects in the knee joint

Focal arthritic defects in the knee lead to pain, swelling, and dysfunction. Treatment of the defects has includeddrilling, abrasion, and grafting. This report describes our surgical technique of autogenous articular cartilage grafting of arthritic and traumatic articular cartilage lesions. Articular cartilage grafting can be performed as a single arthroscopic outpatient procedure. The mixture of articular cartilage and cancellous bone appears to provide a supportive matrix for cartilage formation. Pain relief is excellent if careful surgical technique and a defined rehabilitation program is followed. Further collagen typing data and additional biopsies will reveal more about the durability of the newly formed cartilage.     

Injury and repair of articular cartilage: Related scientific issues

Articular cartilage (AC) is the soft tissue lining the ends of bones in diarthrodial joints. It is responsible for providinglubrication and compressive stiffness to the joint during articulation while responding viscoelastically to mechanical loading. Injury of the tissue caused by trauma or disease can be devastating to joint function as these mechanisms fail. Because of this, it is essential to review the basic science underlying the mechanical roles AC plays while healthy, the biomechanical and biological perspectives of the injury and repair processes, and the current repair techniques available for injured AC. This is done in an effort to further our understanding of the healing capacity of AC and facilitate new efforts into AC repair.     

The Role of Histamine and Serotonin in the Inflammatory Reaction in an Experimental Model of Open Wounds in the Rat

The role of histamine and serotonin in the inflammatory reaction in the granulation tissue of open wounds in the rat was studied. The model involved plastic chambers attached to the edges of two open circular full-thickness skin wounds. Five days post-wounding, agonists or antagonists were applied in one of the two chambers, the adjacent wound serving as control. Thereafter blood flow and albumin extravasation were measured. Application of histamine (100 µM) caused an increase in granulation tissue blood flow by 36%, but left albumin extravasation unaffected. Treatment with mepyramine (H₁ antagonist, 20 µM), cimetidine (H₂ antagonist, 20 µM) or methysergide (serotonin antagonist, 20 µM) did not influence the level of either blood flow or albumin extravasation. It is suggested that endogeneous histamine and serotonin play a minor role in the inflammatory process in the granulation tissue of this model of healing wounds.     

带血管蒂髌骨移位修复胫骨内侧髁上关节面缺损的应用解剖

为探索用带血管蒂髌骨移位的方法，修复肛骨内侧髁上关节在缺损，采用经动脉灌注的成人下肢标本３７侧，经解剖，厚切片或铸型研究髌骨的血管。观察３０块髌骨和胫骨内侧髁上关面的形态和面积。供应髌骨血液的各支动脉先有髌骨周围吻合成髌动脉环，再由该环发支进入髌骨，膝下内动脉和膝降动脉关节支的髌下支在髌骨内下方合并与参与形成髌周动脉环。髌骨的关节面与胫骨内侧髁上关节形态大小相似，根据研究结果，提出用带血管蒂髌骨移     

关节软骨缺损修复研究进展

关节软骨是滑膜关节重要的结构和功能单位,一旦关节软骨发生损伤,由于软骨组织本身缺乏血管,缺乏修复损伤和缺损的未分化细胞,软骨细胞包埋于致密的胶原一蛋白多糖基质中,限制了细胞的增殖和迁移能力,所以自身修复能力非常有限,若治疗不及时或不恰当,难以形成正常的关节软骨,因而无法满足正常关节的功能需求,将会导致严重的关节功能障碍。     

关节镜下应用微骨折方法修复关节软骨缺损的实验研究及临床初步应用

目的探讨应用微骨折技术对全层关节软骨缺损修复的效果。方法20只大白兔随机分为两组,在其右股骨内髁先建立全层软骨缺损模型,实验组进行微骨折处理,对照组则不予特殊处理。分别在4周和8周各处死10只实验兔,作大体观察、病理学检查和修复组织厚度测量。临床上对68例全层关节软骨缺损进行随机分组：实验组35例,关节清理后应用微骨折技术进行处理;对照组33例,仅作关节清理术。结果对照组只有肉芽组织和瘢痕组织生长,仅边缘有少量软骨组织生长,实验组在4周时大部分为软骨组织生长,8周已全部被软骨组织修复。术后平均随访8．6个月,Lysholm评分实验组明显优于对照组。结论微骨折技术是一种有效的修复全层关节软骨缺损方法。     

Imaging of chondral defects

Because of its superior soft tissue contrast, magnetic resonance imaging (MRI) has replaced conventional techniques in the evaluation of articular cartilage. Various MR pulse sequences exist that provide accurate, reproducible evaluation of articular cartilage, obviating the need for intraarticular contrast injection. In the preoperative setting, such imaging helps to identify those patients with chondral lesions suitable for arthroscopic treatment. Following therapeutic intervention, MRI is an effective medium to assess long-term follow-up of the individual treatment regimen.