γ射线照射后HeLa细胞端粒酶活性变化及机制探讨

[目的]观察射线照射后细胞端粒酶活性变化，并探讨其机制。[方法]HeLa细胞体外培养。照射2、4、8和20Gv后，分别于0、2、4、8、12、24、72和168h收集细胞．测定端粒酶活性、凋亡指数和’H掺人量。另取定量细胞照射0，1．2，3，4，6，8和10Gv．培养7d后。计算细胞存活率。[结果]2Gy和4Gy γ射线照射后．HeLa细胞端粒酶活性在短时间内上升，然后下降；8Gy和20Gy γ射线照射后酶活性迅速下降，并保持低水平。[结论]辐射后细胞端粒酶活性呈现规律性变化，这种变化是细胞死亡、亚致死损伤修复和存活细胞调节的综合结果。     

~(60)Co γ射线对HeLa细胞端粒酶活性的影响

 目的　探讨γ射线对人宫颈癌细胞系HeLa端粒酶活性的影响。方法　不同剂量的γ射线照射HeLa细胞后 2 4h、72h、12 0h ,用TRAP ELISA法检测端粒酶的活性。结果　γ射线照射细胞后 2 4h ,较低剂量 (0 .5～ 1.5 )Gy时 ,端粒酶的活性呈剂量依赖式增加 ;(2～ 3)Gy时增加的幅度减低 ;而较高剂量 (4～ 12 )Gyγ射线照射时 ,又呈剂量依赖式增加。与照射后 2 4h相比 ,在较高剂量 (4～ 12 )Gy照射后 72h及 12 0h ,酶的活性呈剂量依赖式减少。结论　HeLa细胞在较高剂量γ射线照射后 2 4h出现的端粒酶活性上调反应 ,可能是其组分从DNA释放增加或者与端粒酶的核内位置调节有关 ;较低剂量照射后的上调反应 ,可能与DNA的修复 ,稳定断裂的染色体有关。     

抗癌药物对宫颈癌细胞HeLa端粒酶活性的影响

目的：观察阿霉素、丝裂霉素、紫杉醇、顺铂和环磷酰胺五种抗癌药对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：运用MTT法测定24小时的药物IC50在此基础上，运用端粒重复序列扩增—酶联免疫吸附法测定细胞经过不同浓度的抗癌药作用不同时间后端粒酶活性的变化。结果：细胞对不同药物有不同敏感性。五种药物均能下调端粒酶活性，但只有阿霉素、紫杉醇和顺铂在作用24小时后迅速而明显地影响端粒酶活性。IC50／3浓度处理72小时的效果与IC50。浓度处理24小时的效果相当。结论：五种药物都能通过直接或间接的方式下调端粒酶活性，其机制可能与药物浓度及时间依赖有关。     

三氧化二砷诱导HeLa细胞凋亡与其抑制HPV18 E6表达和端粒酶活性有关

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡时,对14PV18 E6致瘤基因和端粒酶活性的影响。方法 用不同浓度的As2O3作用于HeLa细胞不同时间段后,光镜和电镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期改变,MTT法测定细胞生长抑制情况。RT-PCR方法检测HPV18 E6的表达,TRAP-ELISA方法测定细胞内端粒酶活性变化。结果 2μmol／L As2O3处理HeLa细胞48h后,可降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,抑制HPV18 E6的表达,细胞内端粒酶活性明显下降。As2O3对HeLd细胞的这种作用呈时间-剂量依赖关系。结论 As2O3诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制HPV18 E6致瘤基因的表达有关,细胞内端粒酶活性的抑制可能与这种E6致瘤基因的抑制有关。     

端粒酶抑制剂叠氮胸苷对HeLa细胞放射性DNA损伤修复的影响

背景与目的:研究端粒酶抑制剂叠氮胸苷(Azidothymidine,AZT)对人宫颈癌HeLa细胞DNA放射性损伤修复的影响,探讨端粒酶在放射诱导的DNA损伤修复中的作用.材料与方法:实验分为空白组,AZT组(400 μmol/L AZT处理HeLa细胞24 h),放射组(2 Gy 60Co γ射线照射),AZT放疗组(400 μmol/L AZT处理HeLa细胞24 h后,用2 Gy 60Co γ射线照射).照射后于0、5、10、30、60、180及360 min分别收集细胞,用端粒重复序列扩增法(PCR-based telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-联合酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)即TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性.用单细胞凝胶电泳法检测DNA单链断裂损伤,以彗尾DNA百分含量表示DNA单链断损伤量.结果:HeLa细胞受2 Gy 60Co γ射线照射后10 min,端粒酶活性即开始增加,60 min后增加明显,360 min时达到最高.AZT处理HeLa细胞后,能使端粒酶活性下降约50%,而且能抑制HeLa细胞照射后端粒酶活性的增加(P＜0.05).单细胞凝胶电泳实验表明,2 Gy 60Co γ射线照射HeLa细胞后0～10 min,AZT放疗组与放射组的彗尾DNA百分含量无明显差异(P＞0.05),照后30～360 min AZT放疗组彗尾DNA百分含量均高于放射组(P均＜0.05).结论:AZT能阻抑照射后30～360 min DNA单链断裂的修复,说明端粒酶可能在放射性DNA损伤修复中具有重要作用.     

端粒酶活性与肾细胞癌发生发展的关系

目的：研究端粒酶与肾细胞癌发生发展的关系。方法：应用ＴＲＡＰ（ｔｅｌｏｍｅｒｉｃ ｒｅｐｅａｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）方法,对２０例肾细胞癌病人术后标本中的肾病组织及癌旁正常肾组织进行研究。结果：２０例肾癌组织中有１４例癌组织（７０．０％）端粒酶表达阳性,２０例癌旁正常组织无一例组织端粒酶表达阳性。２０例肾癌样本中,９例Ｔ１期中有４例（４４．４％）端粒酶表达阳性;１１例Ｔ２     

低剂量γ射线诱导的家兔细胞遗传学适应性反应

用６０Ｃｏ－γ射线对家兔进行全身慢性均匀照射（０．０５ＧＹ／α），当累积剂量分别达到０．０５；０．１０，０．１５，０．２０．０．２５，０．３ＯＧＹ时，静脉取血，常规条件下培养，分别在淋巴细胞的Ｃ０（培养前）和Ｇ２期（培养４８ｈ）以１．５ＧｙＹχ射线一次照射。培养至５２ｈ制备染色体标本，观察家兔接受不同低剂量γ射线（Ｄ１）全身照射后，对相继较大剂量χ射线（Ｄ２）所诱导的细胞遗传学损伤的抗性，结果表明在Ｇ０期和Ｇ２期受大剂量γ射线照射后，Ｄ１分别在０．１５Ｇｙ和０．２０ＧＹ上可诱导出明显的适应性反应（Ｐ＜０．０５），而在０，１０或０．１５ＧＹ以下则不能诱导出适应性反应，从而为能诱导出适应性反应的最低Ｄ１剂量提供了参考。     

胆汁脱落细胞端粒酶活性检测在胆道恶性肿瘤诊断中的价值

背景与目的：已有学者对尿液,胰液,肠腔冲洗液,胸水等脱落细胞端粒酶活性进行了检测,探索其对恶性肿瘤的诊断价值。而胆汁脱落细胞端粒酶活性的检测尚少见报道。本文的目的是探讨胆汁脱落细胞端粒酶活性检测及其对胆道恶性梗阻的诊断价值。方法：应用TRAP银染法检测胆汁脱落细胞的端粒酶活性。结果：44例恶性肿瘤胆道梗阻病人获得的胆汁中有33例检测到端粒酶活性阳性,阳性率75．0％,而良性梗阻组19例中只有1例检测到端粒酶弱阳性,阳性率5．3％。胆汁脱落细胞端粒酶活性阳性率与淋巴结转移,远处转移以及分化程度等肿瘤临床病理学特征无关,但胰腺癌和胆管癌病人胆汁中端粒酶活性检测阳性率高。端粒酶活性检测与脱落细胞学检查对比结果显示：44例胆道恶性梗阻的病人中31例进行了胆汁脱落细胞学检查,结果只有3例癌细胞阳性,阳性率9．7％,这3例脱落细胞学检查阳性的胆汁脱落细胞端粒酶活性检测均为阳性。结论：TRAP银染法可有效检测到胆汁脱落癌细胞的端粒酶活性。端粒酶可以作为诊断恶性胆道疾病的分子标志物。胆汁中脱落细胞端粒酶活性检测可作为细胞学检查的补充诊断手段。     

siRNA抑制survivin基因周期的影响表达对HeLa细胞

目的设计靶向survivin基因的干涉片段,构建真核表达载体pSUPER／survivin并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨siRNA抑制survivin表达对联合1射线宫颈癌HeLa细胞周期的影响。方法化学合成干涉引物,退火获得survivin基因的干涉片段,连入pSUPER载体并测序。将测序正确的pSUPER／survivin载体转染HeLa细胞株,RT—PCR法和流式细胞术检测HeLa细胞中survivin基因的表达,流式细胞术检测转染联合＇射线照射后各组细胞的细胞周期数据。结果本实验成功的构建了pSUPER／survivin载体。转染pSUPER／survivin的HeLa细胞其survivin基因表达水平明显低于未转染的HeLa细胞及转染空载体pSUPER的HeLa细胞。1射线照射后,转染pSUPER／survivin的HeLa细胞发生了S期细胞比例下降,及G2／M期阻滞。结论成功的构建了pSUPER／survivin载体,siRNA干涉survivin可以作为提高放射敏感性的潜在分子靶点,通过减少S期细胞比例,促进肿瘤细胞凋亡,通过增加G2／M期阻滞增加放射线的杀伤。     

靶向Survivin基因siRNA对HeLa细胞放射敏感性的影响

目的:探讨si RNA抑制Survivin表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响。方法:设计并合成si RNA,构建si R-NA真核表达载体的。将测序正确的pSU-PER/Survivin载体转染HeLa细胞,应用RT-PCR和流式细胞仪检测HeLa细胞中Survivin基因在mRNA和蛋白表达水平的改变。流式细胞仪检测各组HeLa细胞的凋亡率差异。结果:成功构建了pSUPER/Survivin载体。转染pSUPER/Survivin的HeLa细胞其Survivin基因表达水平明显低于未转染及转染空载体pSUPER的HeLa细胞。γ射线照射后,转染pSUPER/Sur-vivin的HeLa细胞凋亡细胞率显著高于其他两种细胞。应用χ2检验比较3种细胞的早期凋亡细胞率:转染pSUPER/Survivin与未转染(χ2=14.88,P=0.00);转染pSU-PER/Survivin与转染空载体pSUPER(χ2=13.10,P=0.00);未转染与转染空载体pSUPER(χ2=0.082,P=1.00)。结论:在HeLa细胞中抑制Survivin基因的表达能够提高其对γ射线的敏感性,增加细胞凋亡。     

白花蛇舌草对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性及hTERT基因表达的影响

目的 探讨白花蛇舌草(HD)对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响,分析HD抗肿瘤机制.方法 分别以不同浓度的HD作用于体外培养的Hela细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用PCR-TRAP-ELISA方法 定量检测HD处理后Hela细胞端粒酶活性,用RT-PCR法测定hTERT mRNA的表达水平.结果 一定浓度的HD作用于Hela细胞一定时间后可诱导Hela细胞凋亡,端粒酶活性明显降低,hTERT mRNA的表达水平下降.结论 HD可能通过下调hTERT基因表达来降低端粒酶活性,进而诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

瘦素上调乳腺癌细胞端粒酶的活性及其分子机制研究

  目的  观察瘦素(leptin)对乳腺癌细胞端粒酶的活性影响, 并探讨其可能的分子机制。  方法  采用ELISA检测瘦素对人乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性的影响。应用实时荧光定量PCR和Western blot法测定瘦素对MCF-7细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)及STAT3 mRNA和蛋白表达水平的影响。  结果  瘦素可增加MCF-7端粒酶的活性, 且呈剂量依赖性, 当浓度是10 nmol/L时, 活性增加2.8倍; 而采用瘦素受体单克隆抗体ZMC-2时则可明显抑制端粒酶的活性; 端粒酶的活性与hTERT紧密相关, 瘦素不仅增强了端粒酶的活性, 同时也增加了hTERTmRNA的表达水平, 且呈剂量依赖性, 经瘦素10 nmol/L处理后, hTERT蛋白表达水平增加2.9倍; 在瘦素处理MCF-7细胞后, hTERT的表达水平与磷酸化STAT3的水平呈现相关性上升, 提示STAT3途径可能参与了瘦素诱导hTERT的表达。  结论  在乳腺癌MCF-7细胞中, 瘦素可能通过STAT3途径促进hTERT的表达, 并最终上调端粒酶的活性。      

端粒酶活性与白血病细胞系的分化

为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法采用ＰＣＲ－ＬＩＳＡ方法检测白血病细胞株Ｋ－５６２和ＨＬ－６０诱导分化前后的端粒酶活性。结论分化是细胞自身调控的过程,端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。     

食管癌组织中端粒酶活性的检测

引言食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,其发生不仅与原癌基因激活和抑癌基因突变或缺乏有关,而且与细胞端粒酶的活化也密切相关。本实验用PCR-TRAP法对食管癌组织中的端粒酶活性进行了检测,报道如下:1资料和方法1.1临床资料本组36例,其中男19例,女17例。年龄46~68岁,平均60.2岁。术前均经病理确诊。术中将肿瘤组织及距肿瘤边缘10cm以上的正常食管粘膜组织快速取材,超低温保存备用。1.2检测方法将食管癌组织及正常食管粘膜组织各取100mg研磨成匀浆,加入200μl预冷的裂解液,经离心后提取2.0μl上清液加入反应液中,进行PCR循环35次后,取15μl反应产物进行电泳。电泳结束后,经固定、浸胶、银染、显色等步骤,获得检测结果。2结果端粒酶阳性表达者为50个核苷酸以上位置出现间隔为6bp的等距离梯形产物。分别与阳性对照和阴性对照作比较,36例食管癌中检出端粒酶阳性者30例,占83.3%(30/36),24例正常食管粘膜组织的阳性率为12.5%(3/24),其差别有统计学意义(P<0.05)。3讨论端粒是真核细胞染色体末端特殊的DNA多个重复序列,含有大量的5′TTAGGG3′结构,其功能是防止染色体...     

急性白血病骨髓细胞的端粒酶活性研究

目的：研究初治急性白血病患者骨髓细胞的端粒酶活性,并与正常骨髓、白血病细胞株进行比较,探讨其临床意义。方法：运用PCR-ELISA法半定量检测20例正常骨髓、5种白血病细胞株和32例初治急性白血病患者骨髓单个核细胞的端粒酶活性,将其中9例急性白血病缓解后与缓解前端粒酶水平作比较。结果：正常骨髓单个核细胞端粒酶表达范围为0～0.30 U,平均（0.11±0.08）U,其中仅有3例阳性,阳性率15％;5种白血病细胞株均为阳性,表达范围在0.92～1.00 U之间,平均端粒酶活性（0.96±0.02）U;急性白血病骨髓单个核细胞端粒酶表达范围为0～0.96 U,平均（0.42±0.26）U,阳性率78.1％,与正常骨髓相比,差异有显著性（P< 0.001）。初治急性白血病端粒酶活性高低与首次缓解率无关。9例初治白血病患者缓解后,其中2例急性早幼粒细胞白血病M3端粒酶表达转阴,进行自体外周血干细胞移植后持续阴性,其余患者较初诊时端粒酶水平有所下降,但仍高于正常。1例急性淋巴细胞白血病经过大剂量巩固治疗后端粒酶水平进一步下降,在自体外周血干细胞移植后6个月仍表达阳性,移植后9个月复发。结论：正常骨髓细胞中端粒酶活性很低,急性白血病骨髓细胞端粒酶活性明显高于正常,联合化疗缓解后端粒酶活性下降但仍高于正常。端粒酶     

Telomerase Activity and Metastasis: Expansion of Cells Having Higher Telomerase Activity within Culture Lines and Tumor Tissues

Tumor cells with metastatie potential may have a high telomerase activity that augments telomeric DNA repeats, allowing the cells to escape from the inhibition of cell proliferation due to shortened telomeres. We examined the expression level of telomerase activity using the telomeric repeat amplification protocol among a series of cell lines obtained by repeated transplantation of a mouse fibrosarcoma. The lines could be grouped into three; one has no metastatic potential, and the other two show metastatic abilities after intravenous or subcutaneous injection. Comparison of their telomerase activity indicated that more malignant lines had higher activity. A similar relation was seen in metastatic nodules formed through clonal expansion from the heterogeneous population of inoculated cells; clonality was monitored in terms of variable patterns of subtelomeric repeats. The results suggest that a high level of telomerase activity may not be requisite for metastasis, but may confer a propensity to dominate in a tumor tissue.     

反义端粒酶RNA对人胃癌细胞端粒长度及端粒酶活性调控的研究

 目的　探讨反义端粒酶RNA(hTR)对人胃癌细胞 端粒长度(TRF)及端粒酶活性的调控作 用。方法　应用反义hTR真核表达载体经脂质体介导转染胃癌细胞SGC7901 ,通过分子杂交及端粒重复扩增PCR方法检测hTR表达及端粒、端粒酶活性变化。结 果　经HYR筛选,转染细胞形成稳定克隆,反义hTR表达增强、正义hTR表达下调,平 均TRF缩短、端粒酶活性受抑。结论　反义hTR对胃癌细胞TRF及端粒酶活性 的调控可能是通过其对hTR模板的“封闭”而发挥作用的,反义hTR可以作为胃癌基因治疗的 一种新靶点。     

白血病细胞端粒酶活性的研究

目的：研究白血病细胞端粒酶活性表达及其意义。方法：采用PCR-ELISA半定量方法测定端粒酶活性。结果：68.6％(59／86)急性白血病(AL)患者和80％(12／15)慢性粒细胞白血病急性变(CML-BP)患者表达高端粒酶活性；而慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)患者，无一例表达高端粒酶活性。急性淋巴细胞白血病患者端粒酶活性高于急性髓性白血病患者，CML-BP端粒酶活性高于CML-CP，而CML-CP端粒酶活性则低于正常对照组。AL端粒酶活性水平与患者的性别、年龄无关，也与治疗后缓解率无关。结论：激活或上调端粒酶活性在大多数AL发生和慢性粒细胞白血病急性变过程中起着重要作用；端粒酶活性测定可鉴别CML-BP与CML-CP；端粒酶可能是一潜在的治疗白血病的新靶点。